外毛细胞

摘要： 从1961年Békésy揭示耳蜗内行波现象,开创实验听力学而获得诺贝尔生理学奖以来,耳蜗力学研究已取得了一系列重要成果和进展,尤其是外毛细胞主动响应机制和耳声发射现象的发现,并在临床中得以广泛应用,使得耳蜗微观力学领域成为持续研究的热点。随着“内耳振动测量技术”的不断创新迭代,Corti器微米级分辨率振动测量技术持续进步与成熟。

摘要： 耳蜗是听觉系统实现感音换能的核心器官,可对声音信息进行频率分离、主动放大等预处理,兼具宽频率和强度范围声音感知、高灵敏低耗能的优点。耳蜗精巧的结构、特殊的组织材料特性是其功能实现的基础。基底膜的行波现象是耳蜗进行实时频率分离的载体;外毛细胞电致运动则主动放大行波响应,是提高耳蜗敏感性的关键。

摘要： 目的·探索B细胞淋巴瘤/白血病11B(B-cell leukemia/lymphoma 11B,BCL11B)在小鼠耳蜗螺旋器(organ of Corti)发育过程中的表达。方法·选择出生前后不同时期/年龄[胚胎期14.5 d(E14.5)、E15.5、E16.5、E18.5,出生后0日龄(P0)、P2、P4、P7]、随机性别的野生型C57BL/6J小鼠24只,每个年龄3只。将其处死后,取出小鼠双侧耳蜗并固定,对左侧耳蜗解剖获得完整基底膜,右侧耳蜗经蔗糖脱水后进行包埋并制作冰冻切片。采用BCL11B抗体与肌球蛋白6(MYOSIN 6)抗体对小鼠耳蜗基底膜解剖样品、冰冻切片耳蜗样品进行免疫组化分析。采用共聚焦荧光显微镜对上述染色后的不同年龄点的组织样品进行观察,并对BCL11B阳性表达的毛细胞的计数及百分比进行统计。结果·成功制备了8个年龄点的小鼠耳蜗基底膜解剖样品及冰冻切片耳蜗样品。共聚焦荧光显微镜下显示,最先于E15.5胎鼠耳蜗螺旋器底中圈发现BCL11B的表达,其表达特异性出现在MYOSIN6阳性的外侧3排外毛细胞中;随着耳蜗发育,BCL11B在外毛细胞内的表达逐渐增强,至P2时达到顶峰,于P4时逐渐减弱,直至P7时已无法检测到。在BCL11B于外毛细胞表达的整个时期内,螺旋器中的其他细胞均未有BCL11B的表达。分别对BCL11B阳性表达毛细胞计数及百分比进行统计分析,结果显示E16.5、P0和P4这3个年龄点间的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论·通过免疫组化共染BCL11B与MYOSIN6证实,BCL11B是一个在耳蜗螺旋器中外毛细胞发育早期的特异性表达蛋白。

摘要： 目的 探讨神经生长因子(NGF)联合盐酸氟桂利嗪对突发性耳聋(SSNHL)模型的治疗效果及作用机制.方法 选用24只C57BL/6J小鼠建立SSNHL模型,根据随机数字表法分为3组:对照组(n=8)、模型组(n=8)和联合治疗组(n=8).对照组:正常小鼠+等量0.9％氯化钠溶液干预;模型组:SSNHL模型小鼠+等量0.9％氯化钠溶液干预;联合治疗组:SSNHL模型小鼠+皮下注射0.8μg NGF联合10 mg/kg盐酸氟桂利嗪胶囊治疗.通过组织学检测小鼠外毛细胞的凋亡和活力.通过荧光强度分析小鼠外毛细胞胞间通讯的完整度.通过HE染色评估各组螺旋神经节神经元.通过听性脑干反应(ABR)检测实验小鼠的听力损失.通过逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实时分析小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达.通过蛋白质印迹分析各组小鼠中凋亡相关蛋白细胞色素c(Cyt-c)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达.结果 与对照组相比,模型组外毛细胞活力、荧光强度、神经元数量、Bcl-2蛋白表达均降低,外毛细胞凋亡、TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达、Cyt-c、Caspase-3蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,联合治疗组外毛细胞活力、荧光强度、神经元数量、Bcl-2蛋白表达均升高,外毛细胞凋亡、TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达、Cyt-c、Caspase-3蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05).在8、16、32和48 kHz音调爆发时模型组较对照组的ABR阈值升高,联合治疗组较模型组的的ABR阈值降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 NGF注射联合盐酸氟桂利嗪灌胃可抑制SSNHL模型小鼠外毛细胞的凋亡、保护外毛细胞胞间通讯完整性并维持神经元数量,从而改善小鼠听力损失,其作用机制可能与抑制耳蜗组织炎症水平和细胞凋亡有关.

摘要： 据科学新闻EurekA lert报道,约翰·霍普金斯医学院的研究人员在小鼠身上使用遗传工具鉴定出一对非常重要的蛋白质,它可能是未来让不可逆耳聋患者恢复听力的关键。耳蜗内衬有两种类型的声音检测细胞,即内毛细胞和外毛细胞,它们负责将声音信息传递给大脑。据估计,90%的遗传性听力损失是由毛细胞的问题引起的,或者是将毛细胞连接到大脑的听觉神经受损造成的。由于噪音或某些病毒感染引起的耳聋是由毛细胞受损引起的,人类的毛细胞不能再生,一旦毛细胞受损,听力损失很可能是永久性的。

摘要： 耳蜗内的外毛细胞在电激励下的力电耦合运动是耳蜗放大主动机制的重要基础.以耳蜗外毛细胞为研究对象,基于外毛细胞侧壁的特殊膜结构,推导膜曲率变化、轴向伸缩与跨膜电位差之间的相互关系,建立外毛细胞挠曲电-压电线性等效模型,进而获得整体的等效压电系数.建立外加电激励下细胞轴向振动的动力学控制方程和动态电学方程,并结合相应的力学和电学边界条件进行分析,从频域上讨论细胞材料参数和流体阻力对外毛细胞电动性机制的影响.计算结果表明:在高频区域随着激励频率的增加,流体阻力限制机械功的输出;机械功输出大小和峰值所对应的激励频率与细胞长度、外膜挠曲电系数和细胞基部电阻抗有关,当细胞越长、挠曲电系数或细胞基部电阻抗越大时,机械功输出越大,其对应峰值的激励频率越小.

摘要： 隐性听力损失是一种症状十分隐匿的阈上听觉感知功能缺陷,仅表现为噪声环境中言语识别率下降,临床上常规听力阈值检查正常.目前对于隐性听力损失的研究还不够深入.本文着重就噪声致隐性听力损失所得的启发对耳蜗内外毛细胞之间的关系进行阐述,从而为临床早期诊断隐性听力损失提供参考依据.

摘要： 目的:评价氯胺酮对SD鼠耳蜗外毛细胞(OHCs)电生理特性影响并分析其机制.方法:自身前后对照.18～21 d龄健康SD鼠20只,急性分离OHCs,随机选取活力高OHCs,应用膜片钳全细胞记录模式记录:(1)钳制电压(Vh)-70 mV,比较7个OHCs在给药正常细胞外液L15(C组)、100μmol/L氯胺酮(K组)时的电流-电压(I-V)曲线;(2)Vh=3mV,记录7个OHCs在浴液先后灌流L15(K1组)、100 μmol/L氯胺酮(K2组)、L15(K3组)中给药100 μmol/L乙酰胆碱(ACh)触发的ACh电流(IACh).(2)Vh=3 mV,记录7个OHCs在先后灌流L15(S1组)、0.1μmol/L士的宁(S2组)、L15(S3组)时给药100 μmol/L氯胺酮触发的氯胺酮敏感性电流.结果:(1)与C组相比,K组在大于-36 mV电位上膜电流明显减小,但两组反转电位无明显差异;(2)3组IACh幅度差异不显著;(3)3组氯胺酮敏感性电流幅度差异不显著.结论:氯胺酮可抑制OHCs生理感受器电位范围(-100 mV ～-30 mV)外全细胞电流,该作用与乙酰胆碱类神经无关.

摘要： Objective In this study ,we investigated the apoptosis of hair cell in the cochlea of age -related hearing loss(AHL) generated by ENU mutagenesis ,and to study a pan caspase inhibitor (z-VAD -FMK) which is to protect the cochlea hair cells from hearing loss induced by age-related hearing loss(AHL) .Methods Through z-VAD-FMK intraperitoneal injection and round window membrane (RWM) drug were delivered into the Cdh23 nmf308 nmfmf mice 5(postnatal days 2 -32) inner ear .ResuIts The results showed that the nmf308 mice with progressive hair cell loss along a base to apex gradient with age-related hearing loss .The cochlear OHCs reduced from 5% ~10% at 1 month to 100% at 3 month in the basal region .Substantial amounts of TUNEL -positive OHCs nuclei appeared at 1 month age ,and activated caspase-3 labeling demonstrated that most OHCs appeared at 2 months age .These suggested that DNA single strand break was attributed primarily to apoptosis of cochlear le_sions ,whereas in the later stage of lesion ,the expansion led to activation of caspase-3 activity reduced with further progression of nuclear condensation in age-related hearing loss .ConcIusion The addition of a pan caspase inhibitor (z -VAD -FMK ) significantly protected the cochlea against the hair cell loss induced by apoptosis .Our study showed that aspase inhibitor ,Z-VAD-FMK appeared to play a prominent role in age-related hearing loss media_ted hair cell death loss induced by apoptosis .Our study showed that aspase inhibitor ,Z-VAD -FMK appeared to play a prominent role in age-related hearing loss mediated hair cell death .%目的：了解年龄相关性听力损失小鼠耳蜗毛细胞的凋亡方式，探讨半胱氨酸蛋白酶（caspase）抑制剂z－VAD－FMK [z － Val － Ala － Asp （Ome）－ fluoromethylketone]防治老年性聋的效果。方法选用新生NMF308nmf／nmf小鼠14只和成年同窝NMF308nmf／nmf小鼠32只，分为新生小鼠腹腔注射组（14只）、成年小鼠腹腔注射组（14只）和成年小鼠圆窗膜注射组（18只），各组又分为治疗组（注射z－VAD －FM K ）和对照组[注射二甲基亚枫（dimethylsulfoxide ，DMSO）]，采用圆窗膜局部和腹腔注射两种方法给药，给药前后行ABR检测，用免疫荧光染色化学技术TUNEL、caspase－3和PI（碘化丙啶）染色标记耳蜗毛细胞，观察各组耳蜗毛细胞的凋亡和存活状况。结果NMF308nmf／nmf小鼠从1月龄开始发生听力减退和毛细胞功能改变，到2月龄时，caspase－3激活表达的毛细胞凋亡现象是毛细胞凋亡出现的最早表现；TUNEL阳性标记特征稍晚出现；PI标记可见毛细胞细胞核固缩和碎片出现的时间从2月龄开始；到3月龄时该种小鼠听力基本丧失，耳蜗毛细胞严重缺失；而应用z－VAD －FM K治疗后，各治疗组小鼠ABR反应阈明显好于对照组；耳蜗毛细胞凋亡数目较对照组减少，存活数明显较对照组多，尤以圆窗膜注射组明显。结论 NMF308nmf／nmf小鼠耳蜗毛细胞的死亡方式以caspase－3凋亡途径为主，应用caspase－3抑制剂z－VAD －FM K定向内耳给药，可以阻断caspase－3信号途径激活所导致的毛细胞凋亡，从而有效防治老年性聋。

摘要： Objective To study the effects of hydrogen dioxide (oxygen free radical donator) and vitamin C (oxygen free radical scavenger) on the electric current of large conductance calcium -activated potassium channels (BKCa channels) in isolated outer hair cells in aging guinea pigs .Methods Acute enzyme was used to isolat outer hair cells of aging guinea pigs ,in which of BKCa channel's electric current was observed and recorded by whole-cell recording mode of patch -clamp .After recording the stable and normal electric current of BKCa channels ,added H2 O2 dilution (0 .2 mmol/L) 40 μl in the 2 ml chambers within freshly isolated outer hair cells so that the concen‐tration of H2 O2 in the balneum would be 4 μmol /L .The groups(n=5) received individually vitamin C solution (5 mg/ml) 0 ,10 ,20 ,40μl in the 2 ml chambers within freshly isolated outer hair cells so that the concentration of vi‐tamin C in the balneum would be 0 ,25 ,50 ,100 μg /ml ,observing and recording the effects of different concentration of vitamin C to electric current of BKCa channels .Results ①In the w hole-cell mode of patch -clamp ,the rapid activation and non-deactivation electric current with a string of large amplitude was recorded ,above -40~ -30 mV activation voltage .The electric current increased with the increasing membrane potential .The amplitude in‐creased continuously and performed characteristics of outward rectification .When the concentration of IbTX was 100 nmol /L ,the activity of the channel was completely blocked and confirmed BKCa channel's electric current .②Medication within three minutes ,when VT was +50 mV ,the BKCa channels'the maximum peak current densities of 4 μmol /L H2 O2 group rose from 22 .09 ± 0 .27 PA /PF to 43 .53 ± 1 .09 PA/PF ,amplification was 97 .06% .In H2 O2 4 μmol /L + vitamin C with different concentrations as 25 ,50 ,100 μg/ml groups ,the BKCa channels'elec‐tric current performed about concentration-dependent inhibition ,and electric current's amplitude and peak current density decreased with the increasing concentration of vitamin C ,the I-V curves were reduced .However ,this still could not be recovered to the normal levels .Conclusion The oxygen free radical /BKCa exists in the process .The vitamin C as oxygen free radical scavenger can reverse the process to a large extent .%目的：研究过氧化氢（H2 O2）及维生素C对老年豚鼠耳蜗外毛细胞大电导钙激活钾通道（large con‐ductance Ca2＋－activated potassium channels ，BKCa channels）电流的影响及其机制。方法采用急性酶分离方法分离25只老年豚鼠耳蜗外毛细胞，以膜片钳全细胞记录方式观察BKCa通道电流（5只豚鼠）；记录到稳定、正常的BKCa通道电流后，向新鲜分离贴壁外毛细胞的2 ml浴槽的浴液中加入H2 O2稀释液40μl ，使浴液中H2 O2浓度为4μmol／L ，观察H2 O2对BKCa通道电流的影响（5只豚鼠）；再分组加入维生素C溶液10、20、40μl （各组5只豚鼠），使浴液中维生素C终浓度分别为25、50、100μg／ml ，观察 H2 O2和维生素C联合作用对BKCa通道电流的影响。结果①膜片钳全细胞记录模式下，记录到一串幅值较大、快速激活、几乎不失活的电流，激活电压大于－40～－30 mV ，电流随膜电位的增加而增强，并表现出外向整流的特性；加入BKCa通道特异性阻断剂伊比利亚毒素（iberiotoxin ，IbTX）100 nmol／L后，通道活动完全阻断，证实为BKCa通道电流。②加入 H2 O2后，用药3分钟内，当VT为＋50 mV时，BKCa通道峰值电流密度最大值从22．09±0．27 pA／pF升至43．53±1．09 pA／pF ，增幅97．06％。H2 O2 4μmol／L＋25、50、100μg／ml维生素C时，BKCa通道电流表现浓度依赖性抑制，电流幅值和峰值电流密度随着维生素C浓度增加而减小，I－V曲线下降，洗脱后仍不能恢复至加药前正常水平。结论老年豚鼠耳蜗外毛细胞存在氧自由基／BKCa途径，而维生素C可减轻氧自由基对外毛细胞BKCa通道的影响。

摘要： 本文基于耳蜗线性主动模型。该模型是在基底膜振动的条件下加入了外毛细胞的静纤毛倾斜作用，并结合了与静纤毛同样位于网状板上的Deiters细胞的指突的运动，组成了这样一个在基底膜上有前馈和反馈效果的双向主动耦合振动模型。在此基础上，本文研究了耳蜗中基底膜运动对不同频率和强度分辨能力的影响。针对原有的基底膜振动模型没有考虑外毛细胞在运动过程中由于自身运动所具有的不同速度对基底膜频率响应的影响，使得原有模型无法全面阐述外毛细胞的主动共振作用，我们引入了外毛细胞在增加基底膜频率选择性的机械过程中的延时特性。仿真计算结果表明，修正后的模型完全符合外毛细胞自身作用机制的生理特征。从一个新的角度诠释了外毛细胞运动对基底膜振动作用的贡献。

摘要： 本属于涉及医药生物技术领域，尤其涉及一种外泌体仿生修饰氧化铈纳米颗粒的递送体系及其在毛细胞中的应用。所述递送体系的组分包括：氧化铈纳米颗粒、神经干细胞外泌体，所述神经干细胞外泌体包括表面蛋白，用于抑制细胞凋亡，所述氧化铈纳米颗粒具有过氧化物酶活性；以解决现有技术中无法高效清除细胞ROS的技术问题。

摘要： 本属于涉及医药生物技术领域，尤其涉及一种外泌体仿生修饰氧化铈纳米颗粒的递送体系及其在毛细胞中的应用。所述递送体系的组分包括：氧化铈纳米颗粒、神经干细胞外泌体，所述神经干细胞外泌体包括表面蛋白，用于抑制细胞凋亡，所述氧化铈纳米颗粒具有过氧化物酶活性；以解决现有技术中无法高效清除细胞ROS的技术问题。

摘要： 本发明涉及一种细胞外囊泡捕获或细胞外囊泡定量分析或细胞外囊泡内含物定量分析的试剂盒及方法，属于细胞外囊泡分离和检测技术领域。本发明所述试剂盒包括磁珠和与磁珠结合的第一探针，所述第一探针修饰有与磁珠结合的基团和胆固醇。本发明所述试剂盒能够实现细胞外囊泡的富集，进而进一步实现细胞外囊泡的定量分析或细胞外囊泡内含物的定量分析。

摘要： 本发明提供一种将诱导多能干细胞定向分化为内耳毛细胞样细胞的方法。主要是利用化学成分明确的培养基，适时添加小分子化合物将iPSC诱导分化为内耳祖细胞，再经鸡胚椭圆囊细胞与内耳祖细胞共培养，从而获得内耳毛细胞样细胞。本发明所述方法能够有效地将诱导多能干细胞定向分化为内耳毛细胞样细胞，分化获得的内耳毛细胞样细胞具有纤毛毛束结构，表达内耳毛细胞特异蛋白，具有毛细胞电生理功能。

摘要： 本发明涉及一种对总的细胞外囊泡和/或其中含有特异性基因的细胞外囊泡进行绝对定量的方法。具体而言，本发明涉及一种对样品中总的细胞外囊泡和/或其中含有特异性基因的细胞外囊泡进行定量的方法，其包括以下步骤：a)任选地对所述样品进行预处理；b)将所述样品用稀释液稀释；c)将稀释的样品与反应体系混合；d)生成液滴，使得大多数液滴，优选每个液滴包含不多于一个细胞外囊泡；e)裂解液滴中的细胞外囊泡；f)进行数字液滴PCR（ddPCR）的反应；和g)进行ddPCR检测。

摘要： 目的在于提供：简便且精度良好地检测细胞外囊泡内部所包含的特定蛋白质的方法和能用于该方法的膜渗透处理剂。通过如下方法来解决上述课题，一种检测细胞外囊泡内部所包含的特定蛋白质的方法，其包括如下工序：(A)使用能与存在于细胞外囊泡的表面的细胞外囊泡特异性标记物结合的载体捕捉细胞外囊泡的工序；(B)使用膜渗透处理剂，对被前述载体捕捉的细胞外囊泡进行膜渗透处理的工序；及，(C)将能检测细胞外囊泡内部所包含的特定蛋白质的试剂导入经膜渗透处理的细胞外囊泡中的工序，实施前述工序(B)，使得前述特定蛋白质不会漏到前述细胞外囊泡的外部且能将前述试剂导入该细胞外囊泡的内部。

摘要： 本公开涉及一种用于分离细胞外囊泡的离心管和提取细胞外囊泡的试剂盒，所述细胞外囊泡的提取方法试剂盒借助于二氧化钛微球特异性富集体液、组织中细胞外囊泡。所述细胞外囊泡的囊泡膜的磷脂层中含有磷酸根基团，二氧化钛微球能够与磷酸根之间形成双配位键，从而特异性地与之结合以达到富集的效果，再通过碱性洗脱液将目的外囊泡从二氧化钛微球上洗脱下来。该离心管提取得到的囊泡纯度高，无其他蛋白和细胞器干扰。本公开的提取方法简单，损耗低，对生产设备要求低，适于科研实验室多样本生产。

摘要： 本发明公开了一种耳蜗外毛细胞特异性顺式调节元件及其用途。具体地，本发明公开了一种耳蜗外毛细胞特异性顺式调节元件，所述顺式调节元件包含如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，可用于驱动效应基因特异性在耳蜗外毛细胞中表达。本发明的耳蜗外毛细胞特异性顺式调节元件可驱动Prestin特异性在耳蜗外毛细胞中表达，从而治疗因Prestin突变导致的听力受损。使用本发明的顺式调控元件构建的AAV病毒有望成为临床治疗听力受损的新方法。

摘要： 本发明提供了异位联合过表达Atoh1和Ikzf2再生耳蜗外毛细胞及其应用。具体地，本发明提供了一种可用于再生耳蜗外毛细胞的活性成分组合及其用途，所述活性成分组合包含Ikzf2蛋白和Atoh1蛋白，将所述活性成分组合施用于具有与耳蜗外毛细胞(OHC)变性和/或损伤相关的听力受损的受试者后，可通过再生OHC样细胞缓解听力受损，为临床上治疗听力受损提供了新方法。

摘要： 本公开提供了含有外毛细胞特异性启动子的多核苷酸，以及含有所述多核苷酸的载体，所述多核苷酸能够用于促进转基因在外毛细胞中的特异性表达。本文所述的多核苷酸可以可操作地连接至转基因，诸如编码治疗性蛋白质的转基因，以便促进所述转基因的外毛细胞特异性表达。本文所述的多核苷酸可以可操作地连接至治疗性转基因，并且用于治疗患有听力损失或有此风险的受试者。