SELEX

摘要： 仪表着陆系统(ILS)俗称盲降系统,是为进近着陆的航空器提供精密进近和着陆引导的一种导航设备。近年来,随着航班量不断增长,“高密度、大流量”在部分大型机场高位运行,“多跑道、多模式、窄距平行运行”对ILS的依赖程度越来越高,因此ILS对保障飞机精密进近和安全着陆起着至关重要的作用,加之“独立无冗余配置”的运行特点使其面临着越来越严重的安全态势。一旦ILS导航设备发生故障,对航空器的安全、高效、顺畅的运行将造成更为直接的影响。文章分析检修的SELEX2110型下滑设备RMS远程维护系统处理器组件雷击故障发生在云南机场集团宁蒗泸沽湖机场,本内容涉及PMDT软件的使用、故障的分析判断、具体的维修方法及该设备使用的注意事项,可以为各机场SELEX型号的RMS组件故障排查及维修提供参考。

摘要： 目的 利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选与大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)特异性结合的核酸适配子,并对核酸适配子与大鼠BMSCs的结合方式及能力进行鉴定.方法 利用SELEX技术,以分离获取的大鼠BMSCs为靶点,从构建的核酸文库中最大程度富集与BMSCs特异性结合的核酸序列,流式细胞术检测文库富集的特异程度,荧光共聚焦实验观察文库与BM SCs的结合能力.对富集程度最高的文库进行克隆、序列测定及序列分析,获得候选适配子.使用RNA structure软件对候选适配子的二级结构进行预测,流式细胞术测定不同浓度候选适配子与BM-SCs结合后的平均荧光强度,使用SigmaPlot软件按公式Y=Bmax X/(X+Kd)获得每个候选适配子与BMSCs的结合曲线及平衡解离常数(Kd).挑选与BMSCs结合力最高的适配子,流式细胞术检测其与不同来源BMSCs的结合能力.结果 流式细胞术与荧光共聚焦实验表明SELEX筛选第9轮文库与BMSCs结合能力最高.经序列分析获得8个大鼠BMSCs特异性候选适配子,均能与BMSCs高亲和力结合,其中适配子apt7的亲和力最高,Kd值为(11.79±0.72)nmol/L.细胞选择性实验表明apt7仅与大鼠来源的BMSCs高亲和力结合,而不能结合小鼠及人来源的BMSCs.结论 通过SELEX技术成功筛选出能高亲和力、高特异性结合大鼠BMSCs的适配子apt7,此方法为BMSCs的鉴定提供了新思路和方法,同时为适配子应用于组织工程支架表面招募循环干细胞提供了实验依据.

摘要： 目的 获取活性的PD-L1胞外域蛋白.方法 本研究基于大肠杆菌的原核表达系统,通过稀有密码子优化,将PD-L1胞外域优化后的基因序列转入pET-28a(+)载体中,诱导其以可溶性状态在细菌上清裂解液中表达,再通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色对所得蛋白进行检测分析.结果 在密码子优化前,改变温度或者IPTG浓度等诱导条件,目的蛋白始终在包涵体中表达,无法得到保持生物活性、可溶性的PD-L1胞外域蛋白;密码子优化后,通过摸索诱导条件,发现在16°C,0.1mmol/L IPTG的诱导条件下,诱导12h,成功在细菌上清裂解液中得到可溶性的PD-L1胞外域目的蛋白,经镍离子螯合纯化树脂纯化后,获得了保持生物活性及结构的PD-L1胞外域目的蛋白.结论 成功获取活性的PD-L1胞外域蛋白为SELEX筛选识别PD-L1胞外域特异性DNA/RNA适体提供实验基础,为通过DNA/RNA适体与PD-L1结合从而阻断PD-1/PD-L1信号通路导致的肿瘤的免疫逃逸提供了新的临床思路.

摘要： 基于SELEX技术筛选P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)的特异性核酸适配体(aptamer,Apt),并用酶联免疫吸附测定(ELISA)法、表面等离子体共振(SPR)法表征了Apt与P-gp的结合能力,采用与P-gp结合能力最强的Apt5在人结直肠腺癌细胞(Caco-2)、人脑微管内皮细胞(hCMEC/D3)两种细胞系上考察了对P-gp外排功能的抑制效果.筛选得到10条长度为81 bp的P-gp核酸适配体,结合能力大小顺序为:Apt5>Apt8>Apt1>Apt4>Apt6>Apt10>Apt7>Apt2>Apt9>Apt3.Apt5使hCMEC/D3及Caco-2细胞内罗丹明123的蓄积量分别增加了40.77%(P<0.01),32.39%(P<0.05),能潜在抑制P-gp的外排功能.本研究首次报道了P-gp的多条核酸适配体,与P-gp有较强的结合能力,并能抑制P-gp的外排功能,有望成为P-gp的潜在新型抑制剂.

摘要： 核酸适配体是可以识别并与靶标分子结合的单链DNA或RNA分子.由于适配体具有良好的特异性、稳定性、选择性、易于修饰和亲和力高等特点,在病原检测和其他小分子识别方面具有很大的潜力.综述了适配体的筛选技术以及适配体应用技术,包括比色法、可见光谱法、荧光法、电化学法、表面增强拉曼法和胶体金试纸条法等在食源性致病菌检测中的应用.目前适配体传感器在检测食品致病菌领域取得了显著进展.然而核酸适配体应用方面的挑战和缺陷仍需克服.

摘要： 为探究核酸适配体技术在食源性致病菌检测和鉴定方面的应用,以福氏志贺菌为研究对象,采用全细胞SELEX技术筛选与其特异性结合的适配体。经多轮正筛和反筛,共克隆得到17条序列,4条高频适配体(F-1、F-3、F-9和F-16)对福氏志贺菌有较高的亲和力,其中F-1和F-9与福氏志贺菌的亲和力较高,相应的亲和常数Kd值分别为(51.3±3.25) nmol/L和(42.6±7.11) nmol/L。软件模拟F1和F9的二级结构,其最小自由能分别为-7.39 kcal/mol和-6.98 kcal/mol。本文首次筛选出对福氏志贺菌具有较高亲和特异性的适配体,为后续利用适配体进行食源性致病菌快速检测奠定了基础。

摘要： 食品安全是如今大众关注的焦点,而食源性致病细菌是导致食品安全问题事件频发的主要原因之一,因此需要开发一种快速灵敏便宜的检测方法,对食源性致病细菌进行监督检测.适配体是在体外基于SELEX技术,从单链寡核苷酸随机文库中筛选出的对靶标具有高亲和性、特异性的寡核苷酸(DNA或RNA)片段.由于食源性致病细菌的表面结构物质复杂,基于SELEX技术的适配体筛选方式被不断改良.本文介绍了几种SELEX改良技术,同时对适配体结合力的十种表征方法进行了比较,并对几种常见食源性致病细菌重要的(DNA、RNA、劈裂)适配体进行总结.由于适配体具有众多优于抗体的特性,用于食源性致病细菌检测的适配体生物传感器得到快速发展,其中电化学传感器及光学传感器应用最为广泛.对食源性致病细菌的光学适配体传感器与电化学适配体传感器的最新研究进展进行重点综述,并提出了未来适配体传感器的发展趋势,旨在为微生物检测技术开拓新领域,指引新方向.

摘要： 在雷达项目中,工程的重要性不言而喻,从环境到条件,从硬件到软件,每一步都十分重要,他们决定着安装能否顺畅,运行能否正常,信号能够良好.说道雷达,核心的功能就是给相关部门提供信号,确保航班,飞行器等能够被探测到,能够使系统正常的运行.而信号的正常与否,将决定了整个设备的可靠性与重要性.本文介绍了此次技术改造实现了在本地通过WIRESHARK来查看传输信号这一方法,大大增加了技术人员判断传输与信号问题的保障,提供了便捷.这便是SELEX雷达传输信号改造的目的.

摘要： 本公开涉及一种筛选跨膜靶蛋白适配体的GAIN‑LOSS细胞SELEX方法及跨膜靶蛋白适配体及其应用，该方法包括以下步骤：S1.采用具有跨膜靶蛋白的表达的初始细胞系构建所述跨膜靶蛋白过表达的GAIN正选细胞系和所述跨膜靶蛋白敲除的LOSS反选细胞系；S2.将所述GAIN正选细胞系作为目标靶分子，将所述LOSS反选细胞系作为消减靶分子进行GAIN‑LOSS细胞SELEX筛选。该方法能够有效地在活细胞状态下针对各种跨膜靶蛋白筛选出具有高特异性和亲和力的活性适配体。

摘要： 本发明公开了一种基于反SELEX法的原发性肝癌体外诊断试剂，包括由下列独立包装的组分组成：肝癌核酸适配子溶液；聚丙烯酰胺凝胶母液；过硫酸铵；四甲基二乙胺；甘油溶液I；甘油溶液II；氯化钠溶液；GelRed染料溶液；阳性对照血清；阴性对照血清，本发明属于涉及肝癌诊断试剂技术领域，该基于反SELEX法的原发性肝癌体外诊断试剂，高特异性和高亲和力核酸适配子能够分辨出靶分子结构上的细微差别，亲和力可强于天然配体，靶标广泛从有机小分子、生物大分子到病毒颗粒、完整细胞等均可作为筛选核酸适配子的靶标；稳定性好核酸适配子可长期保存，人工合成而无批间差异，可在常温下运输。

摘要： 本发明公开一种双向热循环消减SELEX快速筛选方法及试剂盒，该方法将纳米（琼脂）磁珠材料、SELEX技术和高通量核酸测序有机结合，建立针对（复合）靶标分子的快速高效核酸适配体筛选技术体系及相应试剂盒。该试剂盒可快速筛选出特异性强、亲和力高的核酸适配体。该方法具有快速、高效、成本低、操作简单、可机械化完成等优点。

摘要： 本发明属于生物医学技术领域，公开了一种与硼砂特异性结合的核酸适配体及利用SELEX筛选方法和应用，所述的核酸适配体是单链DNA，由82个核苷酸组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；其二级结构含有突出的环和茎，其中Bor‑B02吉布斯自由能DG＝‑11.90。基于酶联寡核苷酸吸附测定法进行核酸适配体特异性、亲和力和灵敏度等一系列性质评估，显示Bor‑B02解离常数Kd＝21.64±2.732nM，且能特异性与硼砂结合，因此该核酸适配体具有高特异性、高亲和力的特点，可用于后续对硼砂的快速检测试剂盒的应用中。

摘要： 本发明为一种链霉素适配体的Non‑SELEX筛选方法。对链霉素与随机单链寡核苷酸文库混合孵育后的溶液进行毛细管电泳分离，利用单链寡核苷酸与链霉素结合后与游离单链寡核苷酸的质荷比差异可使二者分离。将电泳开始后的0‑17min作为收集时间窗口，可以有效收集与链霉素结合的单链寡核苷酸。将其作为次级文库再次筛选，经过仅4轮筛选即可得到对链霉素具有高亲和力适配体。

摘要： 本发明涉及利用金属亲和法快速进行液相靶标SELEX筛选的方法。现有SELEX筛选技术存在分离时间长、步骤繁琐的缺陷。本发明人工合成单链DNA文库和相应引物；建立融合表达组氨酸标签的重组蛋白基因工程菌株；在表达融合蛋白时利用镍离子或钴离子两种金属螯合物对组氨酸标签蛋白的亲和作用使与特异性靶蛋白结合的ssDNA进行筛选；经过多轮的筛选使与靶蛋白结合的适配子得到富集，对富集的寡核苷酸进行鉴定、测序后，选择高亲和力的核酸适配子成为待选适配子。本发明简单高效快速，明显改善了蛋白质需要包被过夜的过程，设备简单，能够从复杂液相标本中筛选针对差异成分的寡核苷酸适配子，也可利用富集的文库对差异成分进行钓取鉴定。

摘要： 本发明属于食品免疫检测领域，主要涉及局域表面等离子体共振技术筛选到一条特异结合SA的核酸适配体及其应用。所述的核酸适配体序列如SEQ ID NO.3所示。本发明借助LSPR‑SELEX技术，经过两轮对靶标物的核酸适配体筛选，得到可特异结合SA靶标物的多克隆株。挑选其克隆株进行序列测定，其适配体序列的总长度为114bp；结合CE实验进行亲和力表征，结果证明，此序列可与SA靶标物有很好的结合。与传统的核酸适配体筛选方法相比，本发明创建的LSPR‑SELEX传感技术操作简单、灵敏度高、耗时短(15min)、响应速度快，最大的优势在于相互作用数据实时在线的呈现，能快速准确地获悉每一轮分子间的亲和力。

摘要： 本发明涉及一种针对液相非纯化复合靶标的电泳凝胶阻滞-SELEX技术方法的建立和应用。具体是将非纯化的靶标与单链寡核苷酸文库在液相中孵育，利用电泳凝胶阻滞的原理，通过消减筛选，获得针对筛选样品与消减样品中差异成分的特异寡核苷酸适配子，用作靶标的检测与功能抑制等。获得的寡核苷酸适配子还可用于鉴定和发现疾病相关的分子标志物。

摘要： 本发明为临床肿瘤病理组织切片－SELEX技术方法的建立和应用，属于生物技术领域，涉及病理组织切片消减SELEX筛选方法，以及其在疾病分子探针的制备和生物标志物的筛选方面的应用。本发明通过建立的石蜡包埋病理组织切片的消减SELEX筛选方法，获得该病理组织特异的单链DNA寡核苷酸配基，可以作为探针用于特定疾病包括肿瘤的检测与辅助诊断等。获得的寡核苷酸配基还可亲和纯化靶分子，用于分离、鉴定疾病状态相关的分子标志物，如肿瘤标志物。