基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

摘要： 目的探究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术在临床分离丝状真菌鉴定中的应用。方法收集2019年1-12月该院临床标本中分离培养的230株常见丝状真菌,行MALDI-TOF-MS技术鉴定,并与传统形态学及DNA基因测序结果进行综合对比,评价MALDI-TOF-MS技术在丝状真菌鉴定中的能力。结果临床分离230株丝状真菌包括曲霉菌属183株(79.6%)、青霉菌属23株(10.0%)、镰刀菌属13株(5.7%)、石膏样小孢子菌6株(2.6%)、根毛霉3株(1.3%)、米根霉2株(0.9%);主要来源于痰液及肺泡灌洗液,其次为角膜分泌物和耳道分泌物。传统形态学鉴定到种水平的准确率为69.1%,主要为烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉等常见曲霉菌,其余均鉴定到属水平。DNA基因测序分析鉴定到种水平的准确率为100.0%。MALDI-TOF-MS技术鉴定丝状真菌到种水平的准确率为88.7%,主要为曲霉菌属和镰刀菌属;其鉴定丝状真菌曲霉菌属中烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉及镰刀菌属到种水平的准确率为100.0%,与DNA测序方法结果符合一致。以DNA测序结果为准,MALDI-TOF-MS技术鉴定丝状真菌到种水平的准确率显著高于传统形态学鉴定(χ^(2)=26.455,P<0.001)。结论MALDI-TOF-MS技术鉴定临床丝状真菌符合率高,快速、准确且操作便捷,可作为临床真菌实验室鉴定的有效补充手段,为真菌鉴定提供了新的选择。

摘要： 本试验通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对临床分离的1株羊源多杀性巴氏杆菌进行了快速鉴定,取得了与VITEK2 Compact传统生化方法和16S rRNA测序方法一致的结果。MALDI-TOF MS对分离菌株的鉴定分数为2.371,达到了种水平的鉴定。从分离到纯菌落到获得有效的鉴定结果,MALDI-TOF MS仅需要约30 min,而VITEK2需要约4 h,16S rRNA测序方法需要至少2 d。因此,MALDI-TOF MS可以实现对临床分离的多杀性巴氏杆菌菌株的快速、准确鉴定,对进一步改善动物巴氏杆菌病的临床诊治具有重要意义。

摘要： 目的以脉冲场凝胶电泳(PFGE)为金标准,评价临床实验室应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌(CRECL)进行同源性分析的可行性。方法收集2018年8月至2019年6月从粤北人民医院住院患者中分离的非重复CRECL菌株10株,编号YG1~YG10。利用Biotyper 3.1软件对CRECL蛋白图谱进行主成分分析(PCA)和核心图谱(MSP)聚类分析,同时进行PFGE同源性分析,并将2种质谱分型方法所得的结果与金标准对比分析。编号为YG10的菌株无法进行PFGE分型被排除。结果PFGE同源性分析结果与MALDI-TOF MS同源性分析结果有较大差异,PFGE分型结果显示9株CRECL为不同型;MSP聚类分析将9株CRECL分为3型(A型4株,B型4株,C型1株),其中A型的YG3和YG7,以及B型的YG2和YG5水平线距离均为0;PCA聚类分析同样将9株CRECL分为3型(A型2株,B型4株,C型3株)。2种质谱聚类分析都将YG3和YG6分到同一型中,而YG2、YG4及YG8分到另外的同一型中。结论MALDI-TOF MS有一定的同源性分型能力,但与PFGE同源性分型结果相比较,MALDI-TOF MS的2种同源性分型结果都还有待进一步研究。

摘要： 本研究重点考察应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合同位素稀释质谱(IDMS)对牛奶、鸡蛋复杂样品中恩诺沙星(ENR)小分子进行定量分析的可行性。研究中,探讨了同位素稀释剂的适用性,通过采用Beta沸石负载的α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)为基质,以恩诺沙星-D5为同位素稀释剂,将添加恩诺沙星药物的牛奶、鸡蛋等阳性样品经前处理后采用MALDI-TOF-MS进行定量测定。结果表明,恩诺沙星在0.5~8.0 mg/kg范围内线性关系良好,阳性蛋液、牛奶样品测量回收率分别在96.7%~100.0%和97.4%~99.2%之间,方法的重复性与精密度符合定量要求。结果证明,MALDI-TOF-MS结合IDMS技术可用于复杂样品目标物的定量分析,且同位素稀释法是提升MALDITOF-MS定量分析能力的重要手段之一。

摘要： 1,1-二苯乙烯(DPE)及其衍生物是常用的活性阴离子聚合功能性封端剂或共聚单体,含有二甲硅烷基的DPE衍生物常与苯乙烯反应,得到有一定序列结构的功能化聚合物主链。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)表征含有二甲硅烷基的聚苯乙烯样品时,常用的阳离子试剂银盐可能会使Si-H氧化为Si-OH,在谱图中出现氧化物峰。对比了样品制备时分别使用银盐和钠盐的MALDI-TOF测试结果。二者所得分子量分布相近,但银盐方法所得谱图中除了目标聚合物峰外,有非常明显的氧化物峰;钠盐方法所得谱图中可见目标聚合物峰,无氧化物峰。用MALDI-TOF表征含二甲硅烷基的聚苯乙烯样品时,应避免使用银盐作为阳离子试剂。

摘要： 为对乳酸菌食品中的污染菌进行计数和鉴定,采用MRS琼脂对6种乳酸菌粉和12种市售乳酸菌食品中的乳酸菌进行计数,同时用平板计数琼脂(plate count agar,PCA)、不含糖的计数琼脂(count agar sugar free,CASF)对上述样品中的菌落总数和非乳酸菌进行计数。对PCA和CASF平板上的菌落,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)进行鉴定。数据显示,乳酸菌粉的乳酸菌计数结果为3.2×10^(10)~4.7×10^(10)CFU/g,PCA和CASF平板上没有菌落生长。12种市售乳酸菌食品的乳酸菌计数结果均高于10^(6)CFU/g。MALDI-TOF MS鉴定发现,PCA上的菌落既有乳酸菌,又有非乳酸菌;乳酸菌不能在CASF平板上形成菌落,在CASF平板上生长的菌落,经鉴定均为非乳酸菌,属于乳酸菌食品中的污染菌。采用不含糖的计数琼脂CASF结合MALDI-TOF MS鉴定技术,可迅速准确对乳酸菌食品中污染菌进行计数和鉴定。

摘要： 目的 评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在高原地区对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)同源性的分析能力。方法 收集2020年1月于青海大学附属医院重症医学科分离的5株碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌和其他科室的6株碳青霉烯敏感的肺炎克雷伯菌进行回顾性分析,采用多位点序列分型(MLST)和MALDI-TOF MS技术进行同源性分析。结果 两种方法进行同源性分析的结果基本一致,MLST分析显示5株碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌均为ST11型,6株碳青霉烯敏感的肺炎克雷伯菌中3株为ST147型,2株为ST340型,1株为ST1724型。MALDI-TOF MS将11株肺炎克雷伯菌分为两大类,其中来自重症医学科的5株为Ⅰ类,来自其他科室的6株为Ⅱ类。结论 MALDI-TOF MS技术相比MLST能更快地对CRE同源性分析,能更快对CRE院内感染暴发进行诊断。

摘要： 病原菌能够入侵宿主体内并产生致病物质造成宿主感染,耐药菌的出现更是严重影响了患者的生活质量和临床微生物的检验、治疗进程。本文就基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在常规标本病原菌鉴定和耐药菌检测中的应用及进展进行总结,概述了MALDI-TOF MS对血培养阳性标本、尿路感染标本和呼吸道感染标本中病原菌的鉴定,并将耐药菌的检测按是否借助抗菌药物分为直接检测和间接检测两方面,检测耐药菌的特征峰、所产酶和细胞组分的方法为直接检测,通过加入抗菌药物以检测耐药菌的方法为间接检测。MALDI-TOF MS在病原菌鉴定和耐药菌检测方面有良好的效果,凭借其操作简便、省时、精确、高通量、低成本等优势,在未来同样具备很大的潜力。各实验室应建立符合自己实验室的MALDI-TOF MS检测体系,规范标本前处理、基质选择等,缩短检测周转时间,为临床提供准确的检验报告,指导感染患者的救治。

摘要： 运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术快速鉴定食品中空肠弯曲菌。通过对该方法的样品前处理的选择、稳定性、特异性等方面进行研究,确定了方法的可行性。结果表明,MALDI-TOF-MS鉴定方法准确,快速,稳定性好,能够准确快速地区分弯曲菌近缘菌株,并与VITEK生化鉴定结果高度一致,在准确性和时效性上均有较大提高。MALDI-TOF-MS方法适用于食品中空肠弯曲菌的快速筛检。

摘要： 目的构建基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)非结核分枝杆菌(NTM)鉴定数据库并评价其应用价值。方法收集2018年1月—2021年5月临床分离NTM菌株72株,分别采用直接同源序列比对法和MALDI-TOF MS法进行菌种鉴定,MALDI-TOF MS以“自建数据库+MBT DB5989数据库”鉴定菌株为实验组,以“MBT DB5989数据库”鉴定菌株为对照组,比对分析两组鉴定符合率,评估MALDI-TOF MS自建数据库对NTM鉴定的应用效能。结果以分子鉴定结果为金标准,对照组鉴定符合率为51.61%(32/62),实验组鉴定符合率为95.16%(59/62),联合使用自建数据库鉴定符合率明显增高(χ^(2)=30.102,P<0.001);剔除MBT DB5989数据库缺失NTM菌株后,对照组鉴定符合率为86.48%(32/37),实验组鉴定符合率为97.30%(36/37),差异无统计学意义(χ^(2)=2.902,P=0.088);实验组1株类戈登分枝杆菌错误鉴定为戈登分枝杆菌。结论MALDI-TOF MS数据库选择直接影响NTM鉴定结果,自建数据库可提升MBT DB5989数据库对NTM的鉴定效能。

摘要： 利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和亲和层析技术建立了一种新的牛乳中明胶快速检测方法。基于纤维连接蛋白(FN)可与明胶多肽特异性结合的性质，采用自制偶联FN的亲和柱分离出了牛乳中的明胶多肽，依据明胶多肽与乳中的其他主要蛋白质分子量存在差别以及明胶多肽分子量分布范围的特性，利用MALDI-TOF MS检测了明胶多肽分子量主要分布在2000-8500 Da之间，为了进一步验证此方法的准确性和可行性，利用DNFB柱前衍生和高效液相色谱法(HPIX2)分析了其脯氨酸和羟脯氨酸，确定为明胶多肽，从而实现了快速准确的检测。这种方法具有快速准确、检测限低、样品用量少和处理量大等优点，可作为食品检测机构的快速检测方法。

摘要： 目的:制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(human carboxylesterases-Ⅱ, hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定.方法:以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb.用间接ELISA法测定mAb效价、Western blot鉴定抗体特异性、免疫组化染色法对抗体相应的抗原进行组织定位.用免疫沉淀及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF),搜索数据库鉴定mAb对应的抗原.结果: 获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系.杂交瘤细胞分泌的mAb Ig亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7.Western blot分析显示,在Mr为62 000处有1条清晰的条带.免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内蛋白结合.该mAb免疫沉淀物的Mr为62 000,与hCE-Ⅱ的Mr相符.对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ.结论: 制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具.

摘要： 本文考察了利用液相制样法建立了基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的定量分析方法,发现应利用液相制样法,所得定量分析结果优于固相制样法的结果.

摘要： 本发明公开了二硫化钼/纳米银复合物作为基质在基质辅助激光解吸电离(MALDI)飞行时间质谱检测中的应用。首先通过改进的化学锂离子插层剥离法制备得到寡片层的二硫化钼，并在此基础上通过原位还原硝酸银制备得到二硫化钼/纳米银复合物。以该复合物作为MALDI基质的分析方法适用于对分子量小于1000的小分子进行质谱分析。适合的分子种类包括氨基酸、寡肽、脂肪酸、生物碱、激素、抗生素、抗菌药和抗癌药物等。采用本方法检测质荷比值(m/z)小于1000的分子时，不存在基质背景干扰现象。本方法可在有机与生物质谱、质谱成像、蛋白质谱学、代谢组学、生物标记物发现和环境分析等领域得到有效的应用。

摘要： 本发明公开了二硫化钼/纳米银复合物作为基质在基质辅助激光解吸电离(MALDI)飞行时间质谱检测中的应用。首先通过改进的化学锂离子插层剥离法制备得到寡片层的二硫化钼，并在此基础上通过原位还原硝酸银制备得到二硫化钼/纳米银复合物。以该复合物作为MALDI基质的分析方法适用于对分子量小于1000的小分子进行质谱分析。适合的分子种类包括氨基酸、寡肽、脂肪酸、生物碱、激素、抗生素、抗菌药和抗癌药物等。采用本方法检测质荷比值(m/z)小于1000的分子时，不存在基质背景干扰现象。本方法可在有机与生物质谱、质谱成像、蛋白质谱学、代谢组学、生物标记物发现和环境分析等领域得到有效的应用。

摘要： 本发明涉及细菌药敏检测领域，公开了一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用。该试剂盒中含有各自独立保存或者两者以上混合保存的以下单元：微量富集装置、质谱基质试剂、细菌培养试剂和抗生素；其中，所述微量富集装置中含有长底离心管、富集管和短底离心管，所述富集管为圆锥形，且该圆锥形的富集管的锥顶由滤膜构成，以及所述富集管能够置于所述长底离心管和所述短底离心管中，使得液体能够在离心作用下通过所述滤膜引出所述富集管以进入所述长底离心管或所述短底离心管中。该试剂盒用于药敏检测时具有样本需求量低，检测所需时长短的特点。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了一种基于基质辅助激光解吸电离‑飞行时间质谱的丝状真菌多维蛋白指纹图谱数据库构建方法。本发明构建方法对菌株前处理方法进行优化，在确保前处理效果的前提下简化了前处理步骤，降低了前处理成本，降低了操作危险性。同时采用多维建库的方法，采集丝状真菌不同培养阶段的蛋白指纹图谱，优化建库参数，构建数据库，提高数据库库容量的同时，提高丝状真菌质谱鉴定准确性。

摘要： 本发明公开了一种二硫化钼/石墨相碳化氮复合材料在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测中的应用。本发明以二硫化钼/石墨相碳化氮复合材料(MoS2/g‑C3N4)作为基质，采用MALDI‑TOF‑MS对氨基酸、喹诺酮类抗生素、环糊精以及聚乙二醇等物质进行分析，能有效抑制或消除背景噪音，显著提高分析物的信噪比(S/N)，效果明显优于CHCA、MoS2以及g‑C3N4。

摘要： 本发明涉及分析检测技术领域，特别涉及基质溶液和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测方法。所述基质溶液包括3‑羟基‑2‑吡啶甲酸、柠檬酸氢二铵、乙腈、三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液和溶剂；所述三羟甲基氨基甲烷在所述基质溶液中的终浓度0.01mol/L～1mol/L。本发明基质溶液可以满足微升级别制样，形成均匀、致密的基质层，有利于核酸样本的吸附，且弥补由于核酸的降解导致信号峰强度弱或者峰缺失的情况，大幅度提高质谱信号的采集成功率，可使质谱信号的采集成功率达到100％。

摘要： 本发明公开了一种石墨烯基质及其在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的应用，它是在MALDI-TOFMS中将石墨烯作为辅助基质能高效、快速地实现从小分子化合物到生物大分子的分析和检测，更为重要的是可有效排除传统有机基质的分子离子峰的背景干扰，能够实现对氨基酸、脂类化合物、多肽、蛋白质、寡核苷酸等各种结构分子的分析和检测。用石墨烯作为基质的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱是不需要加入任何有机基质的解吸离子化方法，可避免被分析物分解，具有很好的重现性和高耐盐性；为天然产物及生物代谢物提供了高效、快速的检测方法，同样也可用于常见生物大分子的检测，可以在所有的MALDI-TOFMS质谱中推广和应用，实现了石墨烯的深层次应用。

摘要： 本发明公开了一种基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与FTIR光谱联用的微生物鉴定和分型方法。该方法的具体步骤如下：（1）分别收集微生物特征质谱和红外吸收光谱；（2）对所收集的特征质谱和红外吸收光谱进行前处理；（3）将前处理后的特征质谱和红外吸收光谱数据进行数据融合；（4）对质谱和红外吸收光谱融合后的数据进行聚类分析，实现微生物的鉴定和分型。本发明用于微生物分型的数据集包含更多特征性的生物信息，能实现极其相似的用朴学手段难以区分的菌株的有效区分，例如大肠埃希氏菌与志贺菌的区分。

摘要： 本发明公开了一种二硫化钼/石墨相碳化氮复合材料在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测中的应用。本发明以二硫化钼/石墨相碳化氮复合材料(MoS

摘要： 本发明公开了金簇作为基质在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI‑TOF‑MS)检测中的应用。本发明利用金簇作为基质，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI‑TOF‑MS)对氨基酸小分子、环糊精、聚乙烯二醇等物质进行分析，结果表明，以牛血清白蛋白(BSA)为模板的金簇被成功合成，并且以金簇作为基质，采用MALDI‑TOF‑MS分别测定了氨基酸小分子、环糊精、聚乙烯二醇等物质的分子量，该研究结果，拓宽了金簇的使用范围。