基因枪法

摘要： 茶树遗传转化技术是指应用重组DNA技术、细胞组织培养技术或种质系统转化技术,有目的地将外源基因或DNA片段插入到茶树受体基因组中并使其在后代植株中得以表达的过程,在茶树遗传改良、品种选育中发挥重要作用.对茶树遗传转化中受体系统建立、茶树遗传转化方法进行概述,阐述了茶树遗传转化研究重点、方向以及当前茶树遗传转化研究所面临的转化效率低和离体再生困难的问题,提出了原位转化技术在茶树遗传转化中的应用潜力,从而达到优化茶树遗传转化体系的目的.

摘要： 为建立基因枪法介导的辣椒遗传转化体系,以小孢子胚胎发生率较高的辣椒品种L5的花药为受体,利用基因枪法将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入L5花药小孢子中,并进行花药培养诱导小孢子胚胎发生,探讨基因枪法转化辣椒花药小孢子的适宜参数。结果表明,辣椒小孢子处于单核靠边期的花药在9°C下暗培养4 d时为最佳受体;CaMV35S启动子能启动GFP基因在辣椒花药培养的小孢子胚胎中表达;基因枪各轰击参数对小孢子胚胎发生有显著影响(P<0.05),随着基因枪轰击次数和轰击压力的增加以及轰击距离的减小,小孢子胚胎发生数量逐渐减少;最适的轰击参数为基因枪轰击2次、轰击压力1 350 psi和轰击距离9 cm,此时获得的转化胚胎数量最多;在最适的轰击参数下辣椒花药小孢子的平均转化效率为4.2%;体式荧光显微镜下共检测到14个转化胚胎。本研究结果为进一步建立基因枪介导的辣椒花药稳定遗传转化体系提供了一定的理论基础和技术支撑。

摘要： 全球水资源短缺，干旱已是玉米生产发展的主要限制因素。通过培育抗旱能力提高的转P5CS基因玉米株系，为玉米抗旱遗传育种提供新材料。利用基因工程策略构建植物表达载体pBPC-P5CS-F129A，用基因枪法对玉米自交系京501幼胚愈伤组织进行遗传转化，在选择培养基中加入10 mg/L的草丁膦进行筛选，对草丁膦抗性再生植株进行了PCR检测和 Northern blot鉴定，对转P5CS基因玉米植株进行了抗旱性分析。结果表明，与对照相比，转基因植株的抗旱能力得到提高。干旱胁迫下，转P5CS基因玉米植株的脯氨酸含量比对照高，而丙二醛含量比对照低。%A drought-resistance function gene,VaP5CS,was cloned from mothbean(Vigna aconitifolia). Plant expression vector pBPC-P5CS-F129A was constructed using gene engineering strategy,then the genetic transformation of young embryo callus in maize inbred line Jing 501 was performed by microprojectile bombardment. Further,the transformed explants were directly selected on the medium containing 10 mg/L glufosinate,and the glufosinate-resistant plantlets were confirmed by PCR amplification and Northern blot identification. Finally,the different drought resistance indexes ofP5CS-transgenic maize plants were analyzed. The results showed that the transgenic plants presented the improved drought resistance comparing to control plants. Under drought stress,the proline content in theP5CS-transgenic maize plant was higher than that in the control,while the MDA content was lower than that in the control.

摘要： 以芥蓝品种小香菇为试材,分别采用基因枪法和农杆菌介导转化法将Bt抗虫基因Cry2Aa2转化到芥蓝中,并对两种转化方法进行了优化和比较.结果表明:基因枪法在轰击距离为6 cm、轰击次数为1次时转化效率最高,为0.43％;农杆菌介导转化法以带子叶下胚轴为外植体、预培养2d、侵染10 min、共培养2d、抑菌培养5d后转入筛选培养基为最佳参数,转化效率为0.37％.经PCR和PCR-Southern鉴定,基因枪法和农杆菌介导转化法均成功将目的基因导入芥蓝基因组中.经抗虫性表型鉴定,T0代转基因芥蓝植株对甘蓝夜蛾幼虫的抗性高于非转基因植株.

摘要： [目的]通过基因枪介导共转化,获得转拟南芥抗旱基因PYL5的小麦植株,为转基因小麦的抗旱功能研究奠定基础.[方法]以小麦品种西农889、绵阳19和宁春16为供试材料,通过基因枪介导法将诱导型启动子Rd29A启动的PYL5基因和筛选标记基因Bar共转化到小麦幼胚愈伤组织中,经过除草剂PPT(Phosphinothricin)筛选和愈伤组织分化,获得再生植株.根据目标基因PYL5和Bar基因序列分别设计特异引物,对移栽成活的小麦T0代再生植株进行基因特异性PCR检测.[结果]采用基因枪分别轰击西农889的1800个、绵阳19的800个和宁春16的800个幼胚愈伤组织,经过筛选和分化分别获得了9,5和14株小麦再生植株;对转基因小麦T0代再生植株的基因特异性PCR检测结果表明,西农889、绵阳19和宁春16 Bar基因的转化率分别为0.280％,0.500％和0.750％,PYL5基因的转化率分别为0.110％,0.125％和0.500％,Bar和PYL5基因的共转化率分别为0.110％,0.125％和0.500％.[结论]PYL5基因成功转入到了小麦品种西农889、绵阳19和宁春16中.

摘要： [目的]获得转KN2基因的小麦植株,为研究KN2基因对提高转基因小麦抗寒性的作用,以及为利用基因工程提高小麦抗逆性奠定基础.[方法]以弱冬性小麦品种小偃22为供试材料,通过基因枪法,用含有KN2基因的植物表达载体和筛选标记基因bar共转化小麦幼胚愈伤组织,经过除草剂(Phosphinothricin,草丁膦)筛选和愈伤组织分化获得再生植株,并对得到的再生小麦植株进行PCR检测.[结果]采用基因枪法共轰击小偃22的幼胚愈伤组织1 680个,共获得再生植株17株,移栽到花盆中成活15株;根据目标基因序列设计特异引物,对成活的小麦植株进行PCR检测,结果表明获得含有bar基因和KN2基因的转基因阳性植株分别为6株和4株,转化率分别为0.36％和0.24％,bar和KN2的共转化率为0.24％.[结论]KN2基因成功地转入到小麦品种小偃22中.

摘要： 以新疆海岛棉品种新海13号的茎尖为转化受体,采用基因枪介导法,研究DNA包裹浓度、微载体种类、前渗处理时间、轰击条件、筛选方法等对茎尖转化的影响,建立了基因枪法介导的海岛棉茎尖转化体系.研究结果表明,采用1.5μg· μL-1的质粒DNA包裹1.0 μm金粉微载体,前渗处理12h,轰击压力为7.584 MPa(11 00 psi),轰击距离为6 cm,后渗处理16h,恢复处理24 h,在120 mg·L-1卡那霉素浓度下直接筛选35 d.在添加4 g·L-1活性炭粒的生根培养基中诱导抗性幼苗生根,获得抗性再生植株.通过PCR和RT-PCR检测,共得到5株转抗除草剂基因EPSPS的阳性植株.该研究体系的建立为海岛棉的遗传转化奠定了基础,为海岛棉的育种工作提供了材料.

摘要： 为了培育可高效吸收利用铵态氮的小麦品种,将高亲和铵转运因子AtPRP3-AtAMT1;1融合基因导入优质强筋小麦品种龙辐18中,利用基因枪法对3 760个小麦幼胚愈伤组织进行了轰击.结果表明:经过筛选分化共获得69株抗性苗.用2对特异引物对转基因植株进行检测,成功获得4个转基因植株,转化率为0.11％,可作为选育高亲和铵转运因子小麦的原始材料.

摘要： 该研究总结了目前最常见的几种植物转基因方法:基因枪法、农杆菌介导法、花粉管通道法、聚乙二醇介导法、病毒介导法的遗传转化原理,及其适用范围、应用实例和发展过程,并对每一种方法的优缺点进行了归纳和总结.

摘要： 以玉米自交系“丹598”、“H99”和“丹988”的胚性愈伤组织为材料，利用基因枪法将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)s基因的植物表达载体pBI121-S导入玉米自交系中，并对基因枪法转化的条件进行了研究，对转化的愈伤组织进行分化诱导出苗后进行PCR和RT-PCR检测.PCR结果表明，外源目的基因已转入到玉米基因组中;通过RT-PCR试验证明，目的基因能在转基因玉米植株中获得转录.

摘要： 应用基因枪转化技术,以小麦条锈菌野生白化菌系为转化受体,以含有潮霉素抗性基因(hpt)的质粒为插入载体,对基因枪介导小麦条锈菌插入突变的条件进行研究,建立了基因枪法转化小麦条锈菌的瞬时表达参数.用含有潮霉素抗性基因的质粒轰击白化菌系夏孢子,经繁殖后其后代用特异PCR检测到目的片段,表明构建的遗传转化体系可获得稳定的小麦条锈菌突变菌系。

摘要： 本文从遗传转化体系及影响因素等角度综述了茶树遗传转化研究的现状与进展。通过对转化受体、菌株、共培养及转化细胞筛选等转化因素的研究，农杆菌介导法及基因枪法体系在茶树的遗传转化上不断得以优化。受再生系统不完善等很多因素的影响，茶树遗传转化的研究相对其它植物还有一定差距。文章还对茶树遗传转化的进一步研究提出建议。

摘要： 本研究构建了ubiqutin启动子驱动下的CBF1基因的表达载体.以bar基因为筛选标记基因,用基因枪法将CBF1基因转入紫羊茅.经PCR分析及southern杂交鉴定表明,CBF1基因已整合到紫羊茅的基因组中.以转基因紫羊茅为材料,用电解质渗漏法研究了其在不同低温下的耐寒性,结果表明,CBF1转基因紫羊茅的耐寒能力明显增强,半致死温度比对照提高-3至-6度。

摘要： 用基因枪法将来自于棉花的DREB转录因子基因和诱导型启动子Rd29A构建的植物表达载体pRdGH转入小麦品种鲁麦22号,获得转基因小麦植株.T0、T1、T2、T3代分子生物学鉴定证实:GH-DREB基因可以稳定遗传.孕穗期到开花期T3代叶片可溶性糖、蒸腾速率、净光合速率测定结果表明:正常条件下,转基因后代与受体鲁麦22的各生理指标无明显差异,而水分胁迫下,转基因后代的净光合速率随着干旱处理时间的延长而逐渐下降,蒸腾速率随着干旱处理时间的延长而逐渐上升,但是,下降与上升幅度比对照低,其中,在胁迫第3天、第6天都与对照差异极显著,叶片的可溶性糖含量与对照相比差异不显著.说明GH-DREB基因在干旱条件下可通过减少蒸腾速率、维持光合作用.

摘要： 以5个大麦品种的由成熟胚再生体系产生的胚性愈伤组织为受体材料,以构建好的Bar基因为选择基因的玉米淀粉分支酶基因表达载体为目的基因,用基因枪法对其进行了转化.在转化的大麦中,5个不同基因型品种的抗性愈伤获得率为10.32﹪～17.13﹪,将抗性愈伤组织转移到分化培养基中进行分化,绿苗分化率为0﹪～14.29﹪,移栽到小花盆中的再生植株有28株.其中87-3175有11株,87-0053有9株,97-4010有3株,97-6004未分化出苗,208813-509有5株;移栽成活的87-3175有4株,87-0053有5株,208813-509有3株.对10株再生植株进行了PCR检测,其中有7株扩增出0.5kb的Bar基因特异条带,2株扩增出2.4kb的sbe2b基因特异条带,3株扩增出2.5kb的sbe1基因特异条带.对PCR扩增的条带回收测序,测序结果与各自的基因序列相符合,说明外源基因已经整合到大麦基因组中.

摘要： 本文发展了一套通过基因枪法和农杆菌介导法将外源基因导入蕉茎尖的初步方案.将短截的香蕉束顶病毒运动蛋白基因导入香蕉吸芽茎尖后获得一些转化材料,用PCR法能在其中成功检测到MP基因,这表明基因转化可能已成功,进一步的工作正在进行之中.

摘要： 用RT-PCR方法分离了玉米矮花叶病毒外壳蛋白基因(MDMV CP),并且利用基因枪法将该基因导入玉米优良自交系18-599红、18-588白幼胚诱导的愈伤组织中.转化的愈组织在Bialaphos浓度(PPT)为8mg/L、10mg/L、5mg/L的筛选压下经过3次抗性筛选后,分别再生出可育植株12株和16株.PCR和Southern检测结果说明CP基因已整合到玉米自交系统基因组中.对T1代转基因植株进行病毒人工接种试验,结果表明对照植株全部表现为感染玉米矮花叶病的典型症状,而转基因植株后代呈现不同程度的抗性.

摘要： 近年来，基因工程技术在葡萄遗传育种中得到了应用，葡萄遗传再生体系方面取得的进展和一些基因成功地转入葡萄品种，为进一步的葡萄基因工程研究打下了良好的基础。成功的转化方法包括根癌农杆菌介导法和基因枪法等。

摘要： 本文针对大豆生物技术研究进展及发展趋势,从植物组织培养技术在转基因技术中的位置、遗传转化技术的现状、转基因大豆实用化成果等几方面进行了系统阐述,并对转基因植物技术的发展前景作出了展望.

摘要： 本发明提供一种基因枪介导的日本结缕草高效基因编辑方法，针对日本结缕草中的目标基因ZjSGR设计基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列，将含有编码sgRNA序列的DNA片段连接到携带CRISPR/Cas9的载体中，采用基因枪介导转化法转化日本结缕草，或者，将含有编码sgRNA序列的DNA片段的载体、携带CRISPR/Cas9的载体以及含筛选标记基因的载体，采用基因枪介导转化法共同转化日本结缕草，实现对日本结缕草基因ZjSGR的定点突变，进而获得该基因功能缺失的转基因日本结缕草植株。本发明提供基因枪介导的日本结缕草高效基因编辑方法，作为一种定向编辑日本结缕草基因的工具，编辑效率高达37.5％。

摘要： 本发明公开了一种利用基因枪获得转基因小麦的方法及其专用培养基。本发明以小麦幼胚为外植体，不经过预培养直接使用本发明所提供的高渗培养基进行高渗处理后进行基因枪轰击，轰击后再用本发明提供的专用培养基进行高渗处理、愈伤组织诱导、分化和生根培养，且在分化和生根阶段使用筛选剂，在愈伤组织诱导阶段不使用筛选剂，可明显提高小麦的基因转化效率，最高可达36%；且本发明还具有转化周期短（从取幼胚至获得具有根茎叶的再生植株仅需8—10周）、转化稳定性和重复性高的优点。本发明为小麦遗传改良产业化提供了一个有效途径，具有广阔的应用前景。

摘要： 整流加速基因微弹的方法及基因枪，属于生物技术领域。本发明公开了一种整流加速基因微弹的方法，包括如下步骤：利用离心作用将基因微弹均匀地吸附在载片上；将载片放置在加速器喷嘴的入口处；让高压气体进入加速通道，利用所述载片将高压气体整流成在截面上压力分布均匀的气流；所述高压气体吹走基因微弹，并将之加速到所需速度后射击靶细胞。本发明还公开了一种整流气动基因枪，包括脉冲气源装置、加速器、靶面定位器和消音器。利用本发明所述基因枪既可将微弹加速到所需的速度，又可使微弹速度一致且在靶面分布均匀，还可减小冲击波影响，基因微弹制备简单，操作便捷，能满足基因疫苗接种的要求。

摘要： 本发明涉及一种游戏内基因枪建模构建方法及基因枪应用，构建应用真实的扫描方式，引入多种特效显示反馈效果，用逼真的显示效果以达到玩家在游戏里视觉和触觉上震撼的感受，生动形象表现了真实玩家与生物NPC的互动方式，同时玩家在肢体上还要多角度控制基因枪以正确扫描生物获得基因，提高了游戏的可玩性。

摘要： 本发明提供一种基因枪介导的日本结缕草高效基因编辑方法，针对日本结缕草中的目标基因ZjSGR设计基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列，将含有编码sgRNA序列的DNA片段连接到携带CRISPR/Cas9的载体中，采用基因枪介导转化法转化日本结缕草，或者，将含有编码sgRNA序列的DNA片段的载体、携带CRISPR/Cas9的载体以及含筛选标记基因的载体，采用基因枪介导转化法共同转化日本结缕草，实现对日本结缕草基因ZjSGR的定点突变，进而获得该基因功能缺失的转基因日本结缕草植株。本发明提供基因枪介导的日本结缕草高效基因编辑方法，作为一种定向编辑日本结缕草基因的工具，编辑效率高达37.5％。

摘要： 本发明公开一种基于基因枪介导的棉花基因编辑方法及应用，属于基因工程技术领域。本发明方法通过下胚轴茎段培养获得胚性愈伤组织，利用基因枪将包埋好的基因编辑质粒DNA转化棉花胚性愈伤细胞，经过恢复培养、筛选培养和体细胞胚分化获得基因编辑幼苗。本发明所提供的基因枪转化胚性愈伤再生的方法可以缩短棉花遗传转化周期，提高转化体效率，节约时间和工作量，在棉花基因功能研究和育种实践中具有重要的应用前景。

摘要： 本发明提供了一种基于基因枪的海带转基因育种方法，涉及转基因技术领域，该方法使用由游孢子附着培养而来的海带配子体为受体细胞进行基因枪转化，金粉用量为600μg/枪；外源质粒用量为1.0μg/枪；轰击次数2次；可裂膜规格为1100psi；轰击距离为9cm；真空度26inch Hg。该方法对影响基因枪转化效率的各项参数和细胞培养体系进行了优化，从而获得更适合海带基因枪的转化体系，提高了转化效率。

摘要： 本发明公开了一种利用基因枪获得转基因小麦的方法及其专用培养基。本发明以小麦幼胚为外植体，不经过预培养直接使用本发明所提供的高渗培养基进行高渗处理后进行基因枪轰击，轰击后再用本发明提供的专用培养基进行高渗处理、愈伤组织诱导、分化和生根培养，且在分化和生根阶段使用筛选剂，在愈伤组织诱导阶段不使用筛选剂，可明显提高小麦的基因转化效率，最高可达36%；且本发明还具有转化周期短（从取幼胚至获得具有根茎叶的再生植株仅需8—10周）、转化稳定性和重复性高的优点。本发明为小麦遗传改良产业化提供了一个有效途径，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种利用基因枪法和液体培养基抗性筛选的香蕉遗传转化方法，所述利用基因枪法和液体培养基抗性筛选的香蕉遗传转化方法包括：材料处理；基因枪轰击；恢复培养；液体培养基筛选；体细胞胚诱导筛选；成熟的抗性体胚萌发；抗性小苗生根获得完整的转化植株。本发明采用基因枪投送质粒并结合液体培养基筛选的方法，可以更轻易获得再生植株，最终保证并提高香蕉转基因的成功率，试验验证，通过该方法可以得到能正常生长香蕉转基因植株，经检测，再生香蕉的阳性率可以达到100％。

摘要： 本发明公开了一种利用基因枪法介导遗传转化毛竹的方法。本发明的方法包括毛竹成熟胚的获取及预培养、含目的基因质粒的提取、基因枪参数设置、抗性筛选、转化植株鉴定、阳性植株培育和移栽等步骤，以及转化及诱导各过程中专用培养基的配方。本发明解决了毛竹难于进行遗传转化的问题，可有效缩短获得转基因竹的周期(筛选一个月后即获得了抗性幼苗，二至四个月可获得阳性植株)，提高获得转基因毛竹的几率。且本发明的方法重复性好，对工业用竹遗传改良和竹功能基因组学研究等具有重要的作用及广阔的应用前景。