基因,PTEN

摘要： Objective To investigate the effect of p53、PTEN、VHL on expression of HIF-1α and HIF-1αmRNA in colorectal carcinoma.Method The tissue chip technique,SP immunohistochemistry and in situ hybridization methods were used to determine the expression of p53 、PTEN、VHL、HIF-1αand HIF-1α mRNA in tissue specimens from 60 cases with colorectal carcinoma.Results The positive rates of p53、PTEN、VHL、HIF-1α and HIF-1α mRNA were 55％,48.3％,41.7％,58.3％ and 71.7％ respectively.The positive rates of p53 、HIF-1 α 和 HIF-1 α mRNA were significantly higher in the patients with lymph node metastasis than those without node metastasis (P ＜ 0.01).Up-regulated expression of p53 and low-expression of PTEN and VHL were significantly correlated with up-regulated expression of HIF-1αand HIF-1αmRNA.Conclusions It is feasible to utilize tissue chip for rapid,economic and accurate screening of clinical tissue specimens on a large scale.Mutant type p53 is related to up-regulated expression of HIF-1 α,while PTEN and VHL are related to low expression of HIF-1α in colorectal carcinoma.%目的 研究结直肠癌组织中p53、PTEN和VHL对缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α)表达的影响及意义. 方法 采用组织芯片技术制作60例结直肠癌组织芯片,同时采用SP免疫组织化学法和原位分子杂交(cDNA-mRNA)方法检测结直肠癌组织芯片中p53、PTEN、VHL、HIF-1α和HIF-1αmRNA的表达. 结果 60例结直肠癌组织中,p53、PTEN、VHL、HIF-1 α和HIF-1 αmRNA的阳性率分别为55％、48.3％、41.7％、58.3％和71.7％.淋巴结转移组p53、HIF-1α和HIF-1 αmRNA阳性率显著高于无淋巴结转移组(P＜0.01).p53高表达、PTEN和VHL低表达与HIF-1α和HIF-1αmRNA 高表达明显相关. 结论 p53、PTEN、VHL、HIF-1α和HIF-1αmRNA的表达水平可以作为评估结直肠癌预后的参考指标.

摘要： Objective To investigate the expression of PTEN(phosphatase and tension homology deletion on chromosome 10,PTEN) and its pseudogene PTENP1 in acute leukemia (AL) and correlation between them,and to explore the role of PTENP1 on the PTEN expression in AL cells.Methods PTEN and PTENP1 mRNA expression were evaluated in bone marrow (BM) samples from 138 newly diagnosed AL patients and 15 healthy controls by quantitative real-time RT-PCR(qRT-PCR).pCDH1-PTENP1 3'UTR-GFP lentivirus vectors were constructed.293T cells were transfected by calcium phosphate precipitation to produce retrovirus.HL-60 cell line was infected with the retroviral vectors expressing pCDH1-GFP and pCDH1-PTENP1 3'UTR-GFP respectively.The flow cell sorter was used to sort the HL-60 with GFP positively expressed.The mRNA expression of PTEN and PTENP1 was detected by qRT-PCR,the expression of PTEN protein by western blot,and the impact of PTENP13'UTR on the proliferation of HL-60 cells by MTT assay.Results AML patients showed significantly lower PTEN and PTENP1 mRNA expression in BM compared to healthy controls.Correlation analysis showed that the expression of PTEN and PTENP1 mRNA were positively correlated(P ＜ 0.05).The 108 cases of PTENP1 + AML were classified according to the prognostic classification of 2011 NCCN Clinical Practice Guidelines in AML,there was no difference among different subgroups.HL-60 cell line was infected with the retroviral vectors expressing pCDH1-GFP (control group) and pCDH1-PTENP1 3'UTR-GFP respectively.Compared with the control group,PTENP1 mRNA level of HL-60 infected with the retroviral vectors expressing pCDH1-PTENP1 3' UTR-GFP increased significantly,and PTEN mRNA level also increased.While the PTEN protein level and the cell growth rate of the PTENP1 3'UTR group didn' t change significantly.Conclusion PTEN and PTENP1 mRNA expression level of BM cells from AL patients is significantly lower.There is a positive correlation between expression of PTEN and PTENP1 mRNA.PTENP1 may regulate the expression of PTEN in mRNA level.%目的 探讨抑癌基因PTEN与其假基因PTENP1在急性白血病(AL)细胞中的表达情况及两者之间的相关性,并观察在白血病细胞系中PTENP1对PTEN的调控作用.方法 应用实时定量PCR方法检测138例初诊AL患者及15名正常对照者骨髓细胞中PTEN与PTENP1 mRNA的表达水平.构建PTENP1 3'UTR的慢病毒载体pCDH1-PTENP1 3'UTR-GFP,磷酸钙共沉淀法转染293T细胞,病毒原液感染HL-60细胞,流式细胞术分选获得混合克隆.实时定量PCR检测两组不同克隆PTENP1mRNA表达变化,Western blot检测两组不同克隆PTEN蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖抑制率.结果 与正常对照组相比,AL患者骨髓细胞PTEN及PTENPl mRNA表达水平均明显降低(P＜0.05).相关性分析显示,PTEN与PTENP1 mRNA表达水平呈正相关(P＜0.05).将PTENP1阳性急性髓系白血病(AML)组患者(108例)按NCCN 2011年AML治疗指南进行预后分组,各组之间PTEN及PTENP1表达水平无明显差异.pCDH1-PTENP1 3'UTR-GFP病毒原液感染的HL-60细胞,与对照组(pCDHl-GFP)相比,前者感染的HL-60细胞PTENPl mRNA水平明显升高,PTEN mRNA水平亦有升高,但PTEN蛋白表达和细胞增殖无明显变化.结论 AL患者骨髓细胞PTEN及PTENPl mRNA表达水平降低,两者的表达存在相关性.PTENP1可能在mRNA水平对PTEN的表达具有调控作用.

摘要： 目的 探讨上凋PTEN表达对白血病耐药细胞化疗增敏的作用及其机制.方法 将PTEN真核表达质粒导入耐阿霉素(ADM)的K562细胞(K562/ADM细胞)中,采用Western blot和RTPCR方法检测PTEN基因在转染前后细胞的表达,MTT法检测ADM对转染前后K562/ADM细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,采用重组人半胱天冬酶-3(caspase-3)活性定量试剂盒分析caspase-3的活性,Western blot检测自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)-I/Ⅱ、自噬相关蛋白Beelinl、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化40S核糖体蛋白6s激酶(p-p70S6K)的表达,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透视电镜观察自噬泡的情况.结果 ①与未经处理和转染空载体的K562/ADM细胞相比,转染PTEN基因的K562/ADM细胞组PTEN mRNA和蛋白表达水平均增高;②转染PTEN基因使K562/ADM细胞对ADM的敏感性增强,与转染空载体细胞比较,其细胞存活率从(94.07±2.60)%降低到(53.83±4.20)%,细胞凋亡率从(11.89±1.70)%增加到(43.69±2.30)%;经caspase-3抑制剂(Z-DEVE-FMK)预处理后,未能完全阻止ADM对细胞的毒性作用;③ADM处理细胞12和24 h后,转染PTEN基因的K562/ADM细胞casepase-3活性(2.27±0.13和3.15±0.08)均明显高于转染空载体组(1.19±0.14和1.48±0.06)(P值均<0.05);④与转染空载体组比较,转染PTEN基因的K562/ADM细胞LC3-Ⅱ和Beclinl的蛋白表达水平分别增加83%和18%,p-Akt和p-p70S6K的蛋白表达水平分别降低96%和87%;⑤增加PTEN的表达,细胞内自噬泡较转染空载体组明显增多.结论 上调PTEN基因表达能明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,该作用可能与上调PTEN基因表达、抑制P13K/AkL/mTOR通路活性从而促进细胞凋亡和自噬的发生有关.

摘要： 目的 探讨Survivin及PTEN在下咽癌组织中的表达、临床意义及其相关性.方法 应用免疫组化方法检测56例下咽癌和15例癌旁正常组织中Survivin及PTEN的表达.结果 Survivin在15例癌旁正常组织中表达率为6.7%(1/15),在56例下咽癌组织中表达率为76.8%(43/56),明显高于癌旁正常组织(P＜0.05);与之相反,PTEN在下咽癌组织中表达率为28.6%(16/56),呈低表达,而在癌旁正常组织中PTEN表达率86.7%(13/15),明显高于在下咽癌组织的表达率(P＜0.05).经统计分析下咽癌组织中Survivin与PTEN表达呈负相关关系.Survivin与PTEN的表达均与年龄、性别无关(P>0.05),但与病理分级有关(P＜0.05);Survivin的表达又与临床分期及淋巴结转移相关(P＜0.05),而PTEN则与这两种因素无关(P>0.05),但是下咽癌不同的原发部位PTEN表达率不同(P＜0.05),Survivin表达得到的结果却相反.结论 Survivin基因可能通过抑制下咽癌细胞凋亡而成为下咽癌发生的一个重要因素.同时Survivin的过度表达与其恶性程度密切相关,进一步说明Survivin可以作为判断下咽癌预后情况的指标之一.PTEN在癌组织中的低表达也证明其突变与下咽癌发生有着重要的关系,这可能为我们临床工作者在基因治疗方面上找到新的突破.

摘要： Objectives To investigate the function of Lapatinib and AZD0530 on PTEN low expressed breast cancer cells. Methods: PTEN-deficient breast cancer cell was created by PTEN knockdown with PTEN-shRNA. After treated with Lapatinib or/and AZD0530, inhibition of cell growth was measured by MTT, cloning formation ability was determined by three-dimensional culture, expression of Akt and Src signaling proteins was analyzed by western blot. Results: Compared to the control group, the experimental group cells were more resistant to Lapatinib; Compared to single a-gent, combined treatment with Lapatinib and AZD0530 could obviously inhibit the growth and cloning information in both groups; In PTEN-deficient cell, Lapatinib and AZD0530 could inhibit the expression of p-Akt-S473 and p-Src-Y416 respectively; Both p-Akt-S473 and p-Src-Y416 were dramatically inhibited by combinational therapy. Conclusion! The lower expression of tumor-suppressor genes PTEN in breast cancer can confer Lapatinib resistance; Src inhibitor can sensitize the Lapatinib-resistant cell to Lapatinib. The sensitization effects maybe mediated through decreasing the activation of p-Akt-S473 and p-Src-Y416.%目的:研究拉帕替尼和AZD0530对PTEN基因低表达的乳腺癌细胞的作用.方法:采用脂质体转染法将PTEN-shRNA转入表达PTEN的乳腺癌细胞M231内,构建PTEN基因沉默的细胞株.拉帕替尼和AZD0530单独或联合处理两组细胞,MTT法测定细胞生长抑制率,三维培养检测细胞的克隆形成能力,Western-blot检测M231-PTEN-shRNA细胞中Akt和Src信号蛋白的改变.结果:和对照组比较,转染组细胞对拉帕替尼具有明显的耐受表现；和单独使用拉帕替尼或AZD0530比较,联合使用拉帕替尼和AZD0530后,细胞的增殖和在三维立体培养中形成克隆的能力均受到明显抑制.拉帕替尼和AZD0530分别降低PTEN低表达组细胞中p-Akt-S473和p-Src-Y416的表达；两药联合使用后,p-Akt-S473和p-Src-Y416的表达极其微量.结论:抑癌基因PTEN的低表达可导致乳腺癌细胞对拉帕替尼敏感性降低；联合使用Src抑制剂能明显增强对耐药细胞生长能力的抑制,其作用可能是通过协同抑制Akt和Src活性实现.

摘要： 目的 探讨PTEN在急性髓性白血病(AML)中的表达情况及其对预后的影响.方法 应用免疫组化(S-P)技术分别检测45例初治AML及40例对照(正常骨髓10例及非恶性血液病30例)骨髓单个核细胞中PTEN的表达,分析PTEN与外周血白细胞数及特异性融合基因的关系,追踪疾病的转归.结果 PTEN基因阳性表达在对照组中非恶性血液病85.35％,与正常人90％比较,差异无显著性(P＞0.05).45例初治AML的PTEN表达阳性率为57.17％,明显低于对照组,差异有显著性( P＜0.01).PTEN的低表达与外周血白细胞计数及骨髓中白血病细胞的比率呈正相关( P＜0.05)；与患者的年龄、性别及与染色体预后分组无明显相关性(P＞0.05).结论 AML患者存在PTEN基因表达异常,PTEN可能也是影响AML患者预后的生物学指标之一.

摘要： @@ PTRN基因于1997年由3个研究小组先后克隆并命名,是迄今发现的第一个具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因,其在细胞生长、凋亡、细胞周期阻滞、细胞迁移过程起关键作用,成为新近研究的热点.

摘要： 目的 探讨PTEN和survivin蛋白在胃肠间质瘤(GIST)中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测85例GIST中PTEN和survivin的表达情况,并分析其表达与临床病理资料的关系.结果 PTEN的表达水平在极低、低、中、高度恶性各组中依次下降,相反,survivin表达则依次升高,各组间差异有统计学意义(均P＜0.05).PTEN与survivin表达呈显著负相关(P＜0.01).结论 联合检测PTEN和survivin可以帮助判断GIST的恶性程度及预后.

摘要： 目的 探讨胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织中磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)的动态表达与在体肝星状细胞(HSC)凋亡的关系.方法 健康雄性SD大鼠50只,随机分为模型组(n=40)及假手术组(n=10).模型组采用胆总管结扎法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型,并分别于结扎后1、2、3、4周(每个时间点取10只)麻醉后留取肝组织.假手术组大鼠亦于相应时间麻醉后留取肝组织.采用免疫组化法测定大鼠肝组织中PTEN蛋白的表达;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)及α-SMA免疫组化双染法检测在体活化HSC的凋亡情况.结果 正常大鼠肝组织未见凋亡的HSC.随着肝纤维化程度加重,肝组织中PTEN蛋白的表达量逐渐减少(P<0.01),而活化HSC增多,凋亡HSC也增多.造模1、2、3、4周,大鼠肝组织的HSC凋亡指数(分别为4.57%±0.41%、4.02%±0.48%、3.45%±0.37%、2.88%±0.50%)逐渐减少(P<0.01).大鼠肝纤维化组织中PTEN的蛋白表达量与在体HSC的凋亡呈显著正相关(r=0.76,P＜0.01).结论 胆汁淤积性大鼠肝纤维化组织中PTEN的蛋白表达下调与在体活化HSC的凋亡减少相一致.

摘要： 目的 探讨下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)对全脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的保护作用.方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组(转染脂质体)、pshGFP组(转染pshGFP质粒)、pshRNApten治疗组(转染pshRNApten质粒),每组20只,各组分别于再灌注后3d(6只)、7d(7只)、14d(7只)三个时间点进行观察.正常对照组与pshGFP组分别注射脂质体与pshGFP质粒,pshRNApten治疗组于海马局部注射pshRNApten质粒.注射2d后,采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型.利用RT-PCR和免疫组化法检测海马神经元PTEN基因的表达;采用HE和Nissl染色检测神经元损伤情况;采用TUNEL法检测神经元凋亡情况.结果 pshRNApten治疗组海马神经元PTEN基因的mRNA和蛋白表达量均较正常对照组明显下降(P<0.05).pshRNApten治疗组海马神经元损伤和变性程度均明显轻于pshGFP组大鼠,海马TUNEL染色阳性细胞数也明显少于pshGFP组大鼠(P<0.05).结论 下调PTEN能有效缓解由缺血再灌注所致的神经元损伤.

摘要： 本发明提供了一种N端延长型PTEN亚型PTENζ蛋白及其编码基因和应用，属于功能蛋白技术领域。本发明提供的PTEN亚型是在PTEN蛋白基础上在N端连接有一段28aa的多肽，该多肽为一段高尔基定位信号肽段。PTENζ蛋白的翻译起始于5’‑UTR区域的一个非经典的AUG翻译起始位点‑ATT948，该位点下游的回文结构对翻译起始有重要作用。由ATT948起始翻译得到431个氨基酸序列的蛋白命名为PTENζ。PTENζ主要分布在高尔基体和细胞膜。本发明利用CRISPR‑Cas9特异性敲除Hela细胞中PTENζ，利用RUSH系统证实PTENζ特异性敲除导致内质网向高尔基体的囊泡运输时显著提高转运速度。

摘要： 本发明属于生物医药领域，具体涉及PTEN(phosphatase and tensin homolog)基因的上游开放读码框(uORF,up–stream open reading frame)及其编码蛋白的应用。发明人发现了PTEN的5`UTR存在一个潜在的138个碱基的开放读码框(45aa‑uORF)，可以编码45个氨基酸的短肽(命名为PTEN‑45aa)，其在肿瘤的发生、发展过程中具有重要作用。本发明为与PTEN表达调控相关的疾病，尤其是神经胶质瘤提供了新的诊断、治疗方法和药物筛选平台。本发明还提供了一种多肽，用于PTEN表达调控相关的疾病治疗。

摘要： 本发明属于生物医药领域，具体涉及PTEN(phosphatase and tensin homolog)基因的上游开放读码框(uORF,up–stream open reading frame)及其编码多肽的应用。发明人发现了PTEN的5’UTR存在一个潜在的96个碱基的开放读码框(31aa‑uORF)，可以编码31个氨基酸的短肽(命名为PTEN‑31aa)，其在肿瘤的发生、发展过程中具有重要作用。本发明为与PTEN表达调控相关的疾病，尤其是神经胶质瘤提供了新的诊断、治疗方法和药物筛选平台。本发明还提供了一种多肽，用于PTEN表达调控相关的疾病治疗。

摘要： 本发明提供了一种N端延长型PTEN亚型PTENζ蛋白及其编码基因和应用，属于功能蛋白技术领域。本发明提供的PTEN亚型是在PTEN蛋白基础上在N端连接有一段28aa的多肽，该多肽为一段高尔基定位信号肽段。PTENζ蛋白的翻译起始于5’‑UTR区域的一个非经典的AUG翻译起始位点‑ATT948，该位点下游的回文结构对翻译起始有重要作用。由ATT948起始翻译得到431个氨基酸序列的蛋白命名为PTENζ。PTENζ主要分布在高尔基体和细胞膜。本发明利用CRISPR‑Cas9特异性敲除Hela细胞中PTENζ，利用RUSH系统证实PTENζ特异性敲除导致内质网向高尔基体的囊泡运输时显著提高转运速度。

摘要： 本发明提供了一种特异性抑制PTEN基因的shRNA及应用，属于基因工程和生物医药领域；在本发明中，提供了特异性抑制PTEN基因表达的shRNA序列shPTEN‑1、shPTEN‑2和shPTEN‑3；所述shRNA序列能够使卵巢癌细胞中PTEN基因PTEN mRNA下调，在非治疗与诊断目的的特异性沉默卵巢癌细胞中PTEN基因和制备促进卵巢癌细胞凋亡的基因药物中有着很好的应用。

摘要： 本发明提供了DNA分子、检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变的引物，试剂盒及其使用方法，包括用于扩增PTEN基因c.1026+32T>G位点的引物；PCR反应液；本发明还提供了一种检测人类PTEN基因c.1026+32T>G位点突变试剂盒使用方法，可用于快速检测基因PTEN c.1026+32T>G位点突变，可能有助于筛选AD易感人群的分子标志物，对易感个体及其家族成员进行疾病的早期预防、早期诊断及早期治疗具有重要的现实意义。

摘要： 本发明公开了一种胶质瘤PTEN基因突变的检测方法，包括获取胶质瘤患者多模态磁共振图像,将获取的多模态图像标准化,将获取标准化的多模态图像训练成深度残差网络模型以提取深度学习特征并获取类激活图，将获取的类激活图使用最大类间方差法进行二值化以获得感兴趣区域，将获取感兴趣区域多模态图像提取出降维的影像组学特征，整合提取的深度学习特征及降维的影像组学特征进行训练从而整合模型。本发明通过深度学习及影像组学方法高通量提取多模态脑磁共振影像的定量特征，借助深度学习构建预测模型，可在小样本中获取具有代表性的特征，保证模型的效能，在验证数据中具有较好的诊断准确性，有望无创地为临床诊治提供指导，具有较高的卫生经济效益。

摘要： 本发明提供一种人血浆PTEN基因甲基化检测试剂盒及检测方法；所述试剂盒包括：针对人PTEN基因启动子区中CpG富集位点设计的甲基化特异引物对，以及针对人PTEN基因启动子区‑978至‑786位置设计的非甲基化特异引物对。所述甲基化特异引物对的序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；所述非甲基化特异引物对的序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。本发明解决了手术标本的获取创伤性大，甲基化的检出率也相对较低等缺陷；检测针对PTEN基因启动子区中CpG位点，特异性强、获取容易、创伤性小。

摘要： 本发明提供一种基于PTEN基因状态筛选胶质瘤生物标记物的方法，(1)获取胶质瘤患者的PTEN基因状态；(2)将胶质瘤患者分为PTEN‑WT亚组和PTEN‑mutant亚组；(3)分别对各个亚组的患者筛选亚组特异性的DEGs；(4)将亚组特异性的DEGs与各个亚组患者生存时间进行拟合，得到亚组特异性的OPR‑DEGs；(5)构建各个亚组患者的风险评分，观测风险评分与肿瘤的恶性程度的关系，并预测各个亚组患者的生存率；(6)筛选各个亚组的独立预后的OPR‑DEGs；(7)筛选潜在的靶向药物。本发明通过多因素COX分析恶性程度高的PTEN突变亚组的独立的最优预后基因，这对于PTEN突变的胶质瘤的诊断，预后预测和治疗提供了进一步的指导意义。

摘要： 本发明属于生物医药领域，具体涉及PTEN(phosphatase and tensin homolog)基因的上游开放读码框(uORF,up–stream open reading frame)及其编码多肽的应用。发明人发现了PTEN的5’UTR存在一个潜在的96个碱基的开放读码框(31aa‑uORF)，可以编码31个氨基酸的短肽(命名为PTEN‑31aa)，其在肿瘤的发生、发展过程中具有重要作用。本发明为与PTEN表达调控相关的疾病，尤其是神经胶质瘤提供了新的诊断、治疗方法和药物筛选平台。本发明还提供了一种多肽，用于PTEN表达调控相关的疾病治疗。