bcl-2相关X蛋白质

摘要： 目的 探讨微小RNA-141-3p(miR-141-3p)靶向调控含CUE结构域蛋白2(CUEDC2)对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。方法 2018年7月至2019年12月,从美国ATCC购买大鼠胰腺腺泡细胞AR42J。100 nm/L雨蛙素(CAE)刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J 6 h建立急性胰腺炎细胞模型。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测雨蛙素干预后AR42J细胞中miR-141-3p和CUEDC2的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-141-3p和CUEDC2的靶向关系。利用脂质体转染法将miR-141-3p抑制物(anti-miR-141-3p)、miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、CUEDC2过表达载体(pcDNA-CUEDC2)、空载体(pcDNA)分别转染AR42J细胞,经雨蛙素干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,酶联免疫吸附试验(Elisa)试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 雨蛙素干预处理后AR42J细胞中miR-141-3p的表达水平显著升高[(2.43±0.24)比(1.00±0.09)],CUEDC2的表达水平显著降低。miR-141-3p靶向负性调控CUEDC2表达。与转anti-miR-NC和雨蛙素协同处理组比较,转染anti-miR-141-3p和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(27.48±2.33)%比(15.64±1.51)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(136.54±14.58)ng/L比(226.48±20.54)ng/L]和IL-6[(115.89±11.65)ng/L比(193.47±18.63)ng/L]的分泌显著降低;与转染pcDNA和雨蛙素协同处理组比较,转染pcDNA-CUEDC2和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(23.87±2.35)%比(14.23±1.44)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(158.74±15.32)ng/L比(236.87±18.66)ng/L]和IL-6[(135.77±14.97)ng/L比(189.67±17.32)ng/L]的分泌显著降低;转染si-CUEDC2可逆转转染anti-miR-141-3p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。结论 抑制miR-141-3p通过靶向CUEDC2可促进急性胰腺炎腺泡细胞的凋亡,抑制TNF-α和IL-6分泌,从而减轻雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤。

摘要： 目的探讨何首乌主要成分二苯乙烯苷(TSG)、大黄素(Emodin)对高糖诱导下海马神经元HT-22细胞凋亡的影响。方法将小鼠海马神经元HT-22细胞分为4组:对照培养基组(NC组,葡萄糖浓度25 mmol/L)、高糖培养基组(HG组,葡萄糖浓度55 mmol/L)、HG+TSG组和HG+Emodin组。HG+TSG组和HG+Emodin组分别用TSG和Emodin以50、100、200μmol/L的浓度作用细胞12、16、20、24、48 h,CCK-8法检测细胞存活率,确定细胞的最佳作用浓度和时间。流式细胞术检测细胞凋亡率;通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4组细胞组蛋白乙酰化转移酶(HAT)和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性;蛋白免疫印迹(Western blot)检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果TSG以200μmol/L、48 h,Emodin以100μmol/L、48 h作用细胞为最适条件。流式细胞术结果显示,TSG和Emodin干预细胞48 h后,细胞凋亡率显著降低。ELISA结果显示,HG+TSG组的HAT活性显著下调,HDAC活性上调;HG+Emodin组的HAT和HDAC活性显著下调。Western blot结果显示,TSG和Emodin作用细胞48 h后,Bax和Caspase-3的表达显著下调,Bcl-2的表达显著上调。结论TSG和Emodin可能通过调节HAT和HDAC活性,从而改善在高糖诱导下的海马神经元细胞凋亡。

摘要： 目的 探讨双硫仑螯合铜(DSF-Cu)对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响。方法 2018年1月至2019年10月,培养MCF-7人乳腺癌细胞和耐紫杉醇乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞,用定量紫杉醇持续诱导MCF-7/紫杉醇细胞维持耐药性。通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数;通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞在不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20、25μmol/L)干预不同时间(24 h和48 h)后的抑制率,并分析细胞抑制率与DSF-Cu浓度和作用时间的关系;通过划痕实验检测DSF-Cu对MCF-7/紫杉醇细胞迁移能力的影响;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测MCF-7和MCF-7/紫杉醇细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和自噬效应蛋白Beclin-1基因和蛋白的表达,并在紫杉醇和DSF-Cu单药及联合干预MCF-7/紫杉醇细胞中后,检测Bcl-2、Bax和Beclin-1蛋白的表达;通过流式细胞计数技术检测不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20μmol/L)干预MCF-7/紫杉醇细胞不同时间(12 h、24 h和48 h)后细胞凋亡情况。结果MCF-7和MCF-7/紫杉醇细胞在紫杉醇干预24 h后IC_(50)值分别为1 394.79μmol/L和321.42μmol/L,MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数为4.34;在不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20、25μmol/L)DSF-Cu干预MCF-7/紫杉醇细胞24 h后细胞抑制率分别为(27.42±3.38)%、(42.71±0.77)%、(57.52±7.10)%、(73.83±1.76)%、(85.55±2.25)%,48 h后细胞抑制率分别为(51.27±4.59)%、(57.34±5.94)%、(71.50±1.80)%、(81.54±4.36)%、(90.96±2.13)%,DSF-Cu以浓度与时间依赖性抑制乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞增殖(P<0.05);划痕实验证实DSF-Cu能抑制乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞迁移;qRT-PCR结果显示,与MCF-7细胞相比,MCF-7/紫杉醇细胞中Bcl-2和Beclin-1基因表达升高,Bax基因表达降低(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,与MCF-7细胞比较,MCF-7/紫杉醇细胞中Bcl-2和Beclin-1蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低(P<0.05)。MCF-7/紫杉醇细胞在紫杉醇和DSF-Cu单药及联合干预后Bcl-2表达分别为1.81±0.28、1.25±0.09、0.87±0.10,Bax表达分别为0.65±0.15、1.07±0.15、1.34±0.04,Beclin-1表达分别为1.53±0.22、0.85±0.18、0.53±0.08,MCF-7/紫杉醇细胞在DSF-Cu干预后Bax蛋白表达升高,Bcl-2和Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05);流式结果显示不同浓度DSF-Cu(0、5、10、15、20μmol/L)干预MCF-7/紫杉醇细胞24 h后,细胞凋亡率分别为(5.50±1.01)%、(11.03±1.04)%、(55.12±5.06)%、(68.86±3.36)%、(80.07±4.30)%,在IC浓度的DSF-Cu干预MCF-7/紫杉醇细胞不同时间(0 h、12 h、24 h、48 h)后,细胞凋亡率分别为(4.47±0.57)%、(15.92±2.63)%、(34.85±2.70)%、(74.94±1.13)%,MCF-7/紫杉醇在DSFCu干预后细胞凋亡情况与DSF-Cu呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论 DSF-Cu可通过诱导凋亡、抑制自噬来抑制乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞增殖和迁移,逆转乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇耐药性。

摘要： 目的探讨电针(EA)刺激足三里、内关穴对脑缺血大鼠的影响及对mTOR信号通路的调控作用。方法将75只大鼠按随机数字表法分为假手术(Sham)组、大脑中动脉阻塞(MCAO)模型3 d组、EA干预3 d组、MCAO模型7 d组、EA干预7 d组,每组15只。除Sham组外,其余组采用Longa线栓法构建永久性MCAO大鼠模型,EA干预组术后每日治疗内关和足三里穴20 min。于相应时间点对各组行神经功能缺损评分,采用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色分析脑梗死体积,HE和尼氏染色评估脑缺血后病理改变,Western blot法检测梗死侧大脑皮层中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关因子蛋白激酶B(AKT)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、总mTOR蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测梗死侧大脑皮层中LC3B、Beclin-1和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白X(Bax)mRNA的表达。结果与Sham组相比,MCAO模型组各时间点神经功能缺损评分升高(P<0.05),大脑皮层区出现大片坏死及炎性浸润,大量神经元坏死,细胞排列紊乱,完整神经元数量显著减少(P<0.05),LC3B、Beclin-1 mRNA表达显著降低(P<0.05),MCAO模型7 d组的Bax mRNA表达显著增加(P<0.05),并且mTOR磷酸化水平(p-mTOR/t-mTOR)显著高于MCAO模型3 d组(P<0.05)。与MCAO模型组相比,EA干预7 d组大鼠神经功能缺损评分降低,EA干预3 d组和7 d组脑梗死面积百分比均明显降低(P<0.05),大脑皮层区坏死灶显著减小,炎性浸润改善,细胞排列不规律,完整神经元数量显著增加(P<0.05)。与MCAO模型7 d组相比,EA干预7 d组LC3B、Beclin-1 mRNA表达显著增加,Bax mRNA表达显著降低,p-mTOR/t-mTOR水平显著降低(均P<0.05)。AKT蛋白在各组中表达无明显差异。结论EA刺激足三里、内关穴对脑缺血性损伤具有神经保护作用,并诱导自噬发生,抑制凋亡反应,其机制可能与抑制mTOR信号通路活化有关。

摘要： 目的 探讨微小RNA-211(miR-211)在颅内动脉瘤中的表达变化及其对血管平滑肌细胞凋亡的影响.方法 选取2017年5月至2019年1月成都医学院第一附属医院手术切除的颅内动脉瘤组织50例,同时选取同期该院颅脑外伤病人正常颅内动脉血管组织20例.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法 测定颅内动脉瘤中miR-211、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)表达变化.在动脉瘤血管平滑肌细胞中转染miR-211模拟物(miR-211 mimics),流式细胞术检测细胞凋亡.生物信息学数据库预测miR-211的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定miR-211和Bax的靶向关系.蛋白质印迹法(Western blotting)检测转染miR-211 mimics对细胞中Bax蛋白表达影响.在血管平滑肌细胞中转染miR-211 mimics和Bax过表达载体(pcD-NA3.1-Bax),流式细胞术测定凋亡,Western blotting测定Bax蛋白表达.结果 miR-211在颅内动脉瘤中表达下调,Bax在颅内动脉瘤中表达上调.转染miR-211 mimics后的血管平滑肌细胞中miR-211表达水平升高,细胞凋亡率降低[(26.58±2.14)％比(28.41±2.35)％比(13.54±1.17)％,P<0.05],细胞中Bax蛋白表达水平下降.miR-211靶向抑制血管平滑肌细胞中Bax蛋白表达.pcDNA3.1-Bax提高上调miR-211后的血管平滑肌细胞中Bax蛋白表达水平,促进细胞凋亡[(12.47±1.58)％比(23.71±2.24)％,P<0.05].结论 miR-211在颅内动脉瘤中表达下调,miR-211通过靶向Bax抑制血管平滑肌细胞凋亡.

摘要： 目的探讨七氟烷对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型大鼠心肌的保护作用及其机制。方法健康雄性SD大鼠45只,随机分为A、B、C、D、E组,每组9只大鼠。A组大鼠在心肌MIRI模型制备过程中,分离出左冠状动脉前降支(LAD)后,在其下方穿线但不结扎,观察160 min;B组在建立大鼠MIRI模型后,结扎LAD 40 min,随后松开结扎线再灌注120 min;C组大鼠在B组操作的基础上,再灌注开始时吸入体积分数0.024的七氟烷15 min,然后停止吸入七氟烷继续再灌注105 min;D组于MIRI模型制备前1 h先腹腔注射HIF2α阻滞剂PT238510 mg/kg,其后操作同C组;E组于大鼠LAD结扎前15 min经颈内静脉注射AREG蛋白50μg,其余操作同D组。比较各组大鼠缺血前、缺血15 min、再灌注2 h末的心率和血压的变化,并比较各组大鼠心梗质量占左心室质量的比值、Bax/Bcl-2比值的变化。结果时间、分组、时间与分组交互作用对大鼠平均动脉压有明显影响(F_(时间)=101.41,F_(组间)=10.23,F_(交互)=6.93,P0.05)。C、D组与B组以及D组与E组大鼠心梗质量占左心室质量比值比较差异有显著性(t=14.24~20.01,P<0.05)。A~E组大鼠心肌组织Bax/Bcl-2比值比较差异有显著性(F=27.92,P<0.05)。A、C组与B组以及C、E组与D组大鼠心肌组织Bax/Bcl-2比值比较差异有显著性(t=5.04~6.79,P<0.05)。结论七氟烷后处理对大鼠心肌具有保护作用,且该保护作用可以通过HIF2α-AREG通路来实现。

摘要： 目的 探讨七氟烷对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型大鼠心肌的保护作用及其机制.方法 健康雄性SD大鼠45只,随机分为A、B、C、D、E组,每组9只大鼠.A组大鼠在心肌MIRI模型制备过程中,分离出左冠状动脉前降支(LAD)后,在其下方穿线但不结扎,观察160 min;B组在建立大鼠MIRI模型后,结扎LAD 40 min,随后松开结扎线再灌注120 min;C组大鼠在B组操作的基础上,再灌注开始时吸入体积分数0.024的七氟烷15 min,然后停止吸入七氟烷继续再灌注105 min;D组于MIRI模型制备前1 h先腹腔注射HIF2α阻滞剂PT238510 mg/kg,其后操作同C组;E组于大鼠LAD结扎前15 min经颈内静脉注射AREG蛋白50μg,其余操作同D组.比较各组大鼠缺血前、缺血15 min、再灌注2 h末的心率和血压的变化,并比较各组大鼠心梗质量占左心室质量的比值、Bax/Bcl-2比值的变化.结果 时间、分组、时间与分组交互作用对大鼠平均动脉压有明显影响(F时间=101.41,F组间=10.23,F交互=6.93,P0.05).C、D组与B组以及D组与E组大鼠心梗质量占左心室质量比值比较差异有显著性(t=14.24～20.01,P<0.05).A～E组大鼠心肌组织Bax/Bcl-2比值比较差异有显著性(F=27.92,P<0.05).A、C组与B组以及C、E组与D组大鼠心肌组织Bax/Bcl-2比值比较差异有显著性(t=5.04～6.79,P<0.05).结论 七氟烷后处理对大鼠心肌具有保护作用,且该保护作用可以通过HIF2α-AREG通路来实现.

摘要： 目的 观察下调跨膜蛋白97(TMEM97)对卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响,并探讨其相关机制.方法 将卵巢癌细胞SKOV3分为转染组(si-TMEM97组)、阴性对照组(siNC组)和空白对照组(Control组).采用实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot法分别在mRNA和蛋白表达水平评估转染siRNA-TMEM97后TMEM97的沉默效果;分别在转染后采用CCK-8法、PI染色法、Annexin V-FITC/PI染色法和流式细胞术检测下调TMEM97对细胞的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,并检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白质(Bax)及P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)通路相关蛋白(P38/MAPK、p-P38/MAPK)的表达变化.结果 si-TMEM97组细胞的增殖能力相比Control组和siNC组降低,而早期凋亡率增高(均P<0.01).si-TMEM97组细胞Bcl-2的蛋白相对表达量较Control组和siNC组降低,而Bax、p-P38/MAPK的蛋白相对表达量较Control组和siNC组增高(均P<0.05).结论 下调TMEM97的表达使卵巢癌细胞SKOV3增殖减少,凋亡增加,这可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达及P38/MAPK信号通路的激活有关.

摘要： 一种不能形成凝胶的低盐蛋白质溶液是由动物肌肉组织通过形成酸性蛋白质水溶液、过滤所述酸性蛋白质水溶液除去盐和酸获得的。通过向所述低盐蛋白质溶液加入生理学上可接受的盐并加热所得的加入盐的蛋白质溶液，可使得所述低盐蛋白质溶液形成凝胶。

摘要： 本发明公开了一种用于检测液相蛋白质交互作用的蛋白质芯片及其制备方法和应用，其中所述蛋白质芯片是在固相载体的表面点阵固定有探针；所述固相载体为氨基十六烷硫醇和活化槐糖脂化学修饰的金箔芯片；所述探针包括受体sCD25蛋白、配体IL‑2蛋白、sCD25抗体或IL‑2抗体。本发明蛋白质芯片具有高特异性和敏感性，其可视检测限与ELISA法测得抗原的最低检测限近乎相同，且其可以实现高通量联合检测，本发明旨在研发一种新方法用于液相中两种蛋白质交互作用的检测。

摘要： 本发明涉及鉴定程序性细胞死亡的调节剂的方法，其包括Beclin蛋白质基序与BCL－2蛋白质家族的抗细胞凋亡成员发生相互作用及通过荧光偏振方法鉴定所述相互作用。可向癌症患者施用基于该方法鉴定的调节剂以诱导细胞凋亡型和/或自体吞噬型程序性细胞死亡。本发明也涉及与BCL－2蛋白质家族的抗细胞凋亡成员相互作用的Beclin蛋白质基序及其在癌症患者中诱导程序性细胞死亡的用途。

摘要： 一种不能形成凝胶的低盐蛋白质溶液是由动物肌肉组织通过形成酸性蛋白质水溶液、过滤所述酸性蛋白质水溶液除去盐和酸获得的。通过向所述低盐蛋白质溶液加入生理学上可接受的盐并加热所得的加入盐的蛋白质溶液，可使得所述低盐蛋白质溶液形成凝胶。

摘要： 由下述氟树脂形成了与蛋白质或包含蛋白质的组合物接触的表面的容器及用于制造蛋白质或包含蛋白质的组合物的器材具有显著的低蛋白质吸附性，其中，所述氟树脂为选自四氟乙烯‑六氟丙烯系共聚物及四氟乙烯‑全氟烷基乙烯基醚系共聚物中的至少1种氟树脂，并且，所述氟树脂的熔点为320°C以下，所述氟树脂中的相对于每1×10

摘要： 本发明提供能减小使用了特异性地结合的物质的测定中的由肝型脂肪酸结合蛋白质引起的测定值的变动幅度的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、评价该制剂的方法、制作肝型脂肪酸结合蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。一种用使用了用10mM的氧化剂在25°C下进行1小时的氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值与使用了未进行上述氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值的比表示的氧化变动系数设定为1.4以下的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、用于该制剂的肝型脂肪酸结合蛋白质、编码该蛋白质的DNA、由该DNA转化得到的细胞、该蛋白质的制造方法、评价该制剂的方法、抑制使用该制剂的测定中的测定值的变动幅度的方法、制作该蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。

摘要： 本发明涉及含有抑制纤维粘连蛋白与免疫抑制性受体LILRB4的结合的物质作为有效成分的免疫检查点抑制剂、免疫检查点相关疾病的治疗剂、含有活化免疫抑制性受体LILRB4的物质作为有效成分的免疫抑制剂、抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、纤维粘连蛋白类似物、用于检测纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的试剂盒和使用所述试剂盒检测生物样品中的纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的方法。

摘要： 本发明提供一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4‑氨基安替比林、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，至少Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，至少4‑氨基安替比林包含在含有4‑氨基安替比林的部分组合物中，蛋白酶的稳定剂是使亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，氧化还原电位是包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。

摘要： 本发明提供能够以优异的安全性将蛋白质导入到细胞中的蛋白质导入方法。通过使目标蛋白质承载在由粘土矿物构成的蛋白质导入用载体上并将其添加到细胞中，可以将所述目标蛋白质导入到所述细胞内中。所述粘土矿物优选为层状粘土矿物，可以使用蒙脱石、蛭石、伊利石等。

摘要： 本发明涉及与粉碎或切断洋葱等植物时发生催泪成分的生成有关的表现出将1－丙烯次磺酸转变为催泪成分的作用的蛋白质或多肽、编码该蛋白质或多肽的DNA(催泪成分合成酶基因)、使用用于属于葱属植物的催泪成分合成酶基因分离的引物以及使用该引物分离该基因的方法、含有上述DNA的重组载体、包含含有上述DNA的重组载体的转化体、对用含有上述DNA的重组载体转化的宿主细胞进行培养制造具有催泪成分合成酶活性的蛋白质或多肽的方法、具有催泪成分合成酶活性的蛋白质或多肽、以及具有抑制具有催泪成分合成酶活性的蛋白质或多肽的mRNA翻译的功能的核酸分子。