固相多肽合成

摘要： 固相合成是多肽合成中的一种重要方法.固相多肽合成(Solid Phase Peptide Synthesis,SPPS)因避免了液相合成中冗长的重结晶或分离步骤,减少了合成生产过程中的损失,而得到广泛的应用.然而,一些包含较多疏水性氨基酸且容易出现β-折叠等二级结构的"困难序列"多肽仍然难以顺利合成.本文对这些"困难序列"形成的原因、解决方法以及一些经典的"困难序列"多肽的合成策略进行了综述.

摘要： 口服的左旋多巴,生物利用度低,仅有1％左右能够进入脑内发挥作用,为提高它的生物利用度,降低它的副作用,需对左旋多巴(L-DOPA)化学结构进行修饰.本研究利用2,2-甲氧丙烷(DMP)和Tfa、Fmoc分别保护L-DOPA的儿茶酚结构和L-DOPA的氨基部分,合成了含多巴中间体——Fmoc-DOPA(Acetonide)-OH.本中间体易于保存,且可用于合成含多巴的寡肽,进而对左旋多巴的结构进行修饰.通过对合成产物的13C NMR图的分析,所合成化合物即为目标产物.

摘要： Dmab was a protecting group of carboxyl with the advantages of rapid and chemoselective removal in solid phase peptide synthesis(SPPS), but the efficiency of deprotection of Dmab was not stable sometimes. Therefore, based on the Fmoc/tBu/Dmab orthogonal protection strategy, four peptide resins were synthesized by SPPS, and the deprotection reaction condition of Dmab in SPPS was studied. The results showed that the α-ODmab of Glu and Asp could be removed quickly and complete-ly on the peptide resin, but the intermediate product of 4-aminobenzyl ester peptide could be detected after the deprotective reaction of β-ODmab of Asp and γ-ODmab of Glu. The efficiency of deprotection of Dmab could be deduced as α-ODmab ＞β-ODmab ＞γ-ODmab. In conclusion, the Dmab protecting group held promise in SPPS, especially in the synthesis of head-to-tail cyclic peptides, but was not enough ideal in the synthesis of side-chain cyclic peptides or modified peptides.%在固相多肽合成中,Dmab作为羧基保护基具有脱保护条件温和、步骤简便、选择性高的特点,但有时脱保护效率并不稳定. 为此,基于Fmoc/tBu/Dmab三维正交保护策略,利用固相多肽合成技术设计并合成了4个肽树脂,对固相多肽合成中Glu和Asp主链和侧链羧基的Dmab保护基脱除规律进行了研究. 结果显示,树脂上α-ODmab的脱保护快速、完全,β-ODmab和γ-ODmab脱保护反应较慢,可以检测到相应的中间产物(4-氨基苄酯肽),推测脱保护效率由快到慢依次为 α-ODmab ＞ β-ODmab ＞ γ-ODmab. 该结果表明Dmab作为α-COOH保护基具有较高的应用价值,但用于β-COOH和γ-COOH保护时,其脱保护条件尚不成熟.

摘要： 目的 阐明TxIB线性肽通过一部氧化法,在体外被氧化折叠形成含有两对二硫键活性肽的具体路径,为后续大量人工合成该活性肽的方法研究提供基础.方法 采用N-9芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成法人工合成TxIB线性肽,用高效液相和质谱分析法,监测研究TxIB一步氧化折叠过程中所经历的路径.结果 TxIB氧化路径经历了1对二硫键(1SS)、2对二硫键(X-2SS)折叠中间体后,最终形成稳定的含有2对二硫键(N-2SS)的氧化型TxIB.结论 芋螺毒素TxIB折叠路径与前期研究的水蛭素氧化折叠路径一致.

摘要： 先采用Fmoc固相多肽合成法,以2-Chlorotrityl chloride (2-CTC)树脂做载体,DIC/HOBt做缩合剂,逐步缩合得到全保护谷胱甘肽树脂,以TFA/EDT/m-Cresol为裂解液脱除保护基团,粗肽经半制备反相高效液相色谱法纯化得α-GSH、γ-GSH纯品,后将所得γ-GSH纯品分别采用空气,双氧水,碘氧化得GSSG,经纯化得GSSG纯品,合成的α-GSH、γ-GSH纯品纯度达99％,GSSG纯度达98％,利用标准品,经外标法计算总收率分别为60％、64％、57％.并观察三者对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的治疗效果结果显示都能显著降低ALT与AST的活性,且与注射用γ-GSH没有显著性差异,可以为工业化生产提供借鉴.

摘要： 为了获得高纯产品,在制备胸腺肽α1 (Tα1)工艺中分别对合成、纯化两步骤进行控制.在固相多肽合成过程中,以TBTU/HOBt/DIEA体系作为缩合试剂,在易形成α螺旋和β转角的肽序位置,通过采用HOBt/DIC补投的方法促使偶联反应完全.在分离纯化阶段,结合反相色谱和离子色谱的优势,以反相离子对液相色谱法为主要分离手段,通过多步分离实现纯化.获得的粗肽纯度为67.2％,胸腺肽α1产品纯度达99.5％以上,总收率为17.2％.此法可作为制备高纯多肽药物的有效手段.%The synthesis and purification steps were controlled in preparation of thymosin α1 to obtain the product with high-purity.In the solid-phase peptide synthesis (SPPS) process,TBTU/HOBt/DIEA was employed as the coupling reagent.In the sites where α-helix or β-turn structure formed easily,re-coupling reagent of HOBt/DIC was used to ensure a complete reaction.In the separation and purification process,a multi-step method was employed,in which reversed-phase ion-pair liquid chromatography was used as the main means,combining the advantages of reversed-phase chromatography and ion chromatography.The results showed that through the re-coupling the crude peptide had a purity of 67.2％ with the use of TBTU/HOBt/DIEA reagent in SPPS.The purity of the refined thymosin α1 was above 99.5％ with a total yield of 17.2％ with the reversed-phase ion-pair liquid chromatography.This separation process avoids complex chromatography separation process.The method may be an efficient way for preparation of peptides with high purity.

摘要： 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅳ (HWTX-Ⅳ)是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离纯化到的一种新型多肽类神经毒素,能明显抑制表达于大鼠背根神经节细胞的河豚毒素敏感型(TTX-s)钠通道.为了更好地研究该毒素的结构与功能之 间的关系,采用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成法合成了用谷氨酸(Glu)替代HWTX-Ⅳ第28位苏氨酸残基的突变体T28D-HWTX-Ⅳ,线性多肽合成产物经反相高效液相色谱(HPLC)分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物采用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)技术鉴定分子质量,通过全细胞膜片钳电生理技术测定其电压门控钠通道药理学活性.当第28位Thr残基被Glu取代后,突变体T28D-HWTX-Ⅳ对表达于大鼠DRG细胞膜上的TTX-S钠通道的IC50值约为362 nmol/L,对TTX-S钠通道的抑制活性比天然HWTX-Ⅳ(IC50值=30 nmol/L)下降了约12倍,显示第28位的Thr残基是HWTX-Ⅳ与TTX-S型钠通道相互作用的关键活性残基.目前的研究为进一步探索HWTX-Ⅳ的结构与功能关系及新型镇痛药物的研发奠定了基础.

摘要： 从海南产桶形芋螺中发现了一个新的T-超家族芋螺毒素B8.1T,其氨基酸序列为DCCPESPPCCH,具有两对二硫键,其连接方式为Cys2-Cys9,Cys3-Cys10.首先采用N-9-芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成法合成了B8.1T线性肽,根据采用半胱氨酸保护基团的不同,探索了3种不同的氧化方法:(1)两步氧化法;(2) One-pot方法;(3)自由氧化法.同时对提高芋螺毒素氧化折叠效率的条件进行了优化,对B8.1T的生物活性进行了初步的研究.结果表明,3种方法都可合成正确折叠的芋螺毒素B8.1T,其中两步氧化法和One-pot法合成效率高于自由氧化法,自由氧化折叠条件的优化表明,折叠反应添加物等能提高正确折叠产物的积累效率.B8.1T的动物活性试验显示,当对小鼠进行颅内给药时,对其行为活动产生抑制效应,而对肌肉给药的金鱼无明显影响.

摘要： Objective: To synthesize sperm peptides for establishment of the enzyme - linked immunosorbent assay ( ELJSA ) to detect antisperm - antibodies ( AsAb) . Methods; The sperm peptide P10G, YLP12 and SP17 were synthesized by the PS3 automated solid phase peptide synthesizer, purified by RP - HPLC and identified by mass spectrum (MS). With the synthetic peptide as a coating antigen, the ELISA method was used to detect serum concentration of AsAb. Results; The molecular weights of three synthesize peptides identified by MS were in good agreement with calculated molecular weights. The purity of the synthetic peptides purified by HPLC was 97.5% , 97.78% and 95.5%. AsAb was detected by the indirect ELISA based on the peptide compared with the commercial kit, and results showed that both assays were unanimous with Kappa value more than 0.75. Conclusion; Automated solid - phase peptide synthesis could be used to synthesize high purity sperm antigen peptides. Hie synthesized peptide P10G, YLP12 and SP17 show high antigenic activities and can be used as a coating antigen for indirect ELISA to detect AsAb.%目的:以合成精子抗原肽为抗原建立酶联免疫吸附测定法( ELISA)检测抗精子抗体(AsAb).方法:通过PS3全自动合成仪合成精于肽P10G、YLP12和SP17抗原肽,经反相高效液相色谱(HPLC)纯化和质谱鉴定,分别包板制备ELISA试剂盒,并检测血清标本.结果:成功合成3种目的肽,质谱分析结果主峰分子量与理论值基本一致,HPLC结果显示其纯度为97.5％、97.78％和95.5％.以3种合成肽为抗原建立ELISA检测AsAb,与商品化试剂盒比较,均显示极好的一致性(Kappa值＞0.75).结论:全自动固相多肽合成技术可用于高纯度的精子抗原肽合成,所合成的P10G、YLP12和SP17抗原肽均具有较好的抗原活性,可作为ELISA的包被抗原用于AsAb检测.

摘要： Objective; To develop the solid phase synthesis method of pramlintide and to establish the oxidation and purification condition. Methods; Pramlintide was synthesized by Fmoc solid phase peptide synthesis method, using Rink Amide-AM Resin as solid carrier and HBTU/HOBt/DIEA as coupling reagents. Protection groups of the crude peptide were cleaved by a mixture of TFA/Thioanisole/phenol/H20/EDT/TIS. Disulfide bridge was formed by air, DMSO or H2O2 oxidation. The crude pramlintide was purified by semi-preparative RP-HPLC. Results; Pramlintide was identified by RP-HPLC and MALDI-TOF-MS. The purity of the crude peptide was about 50. 0%. After the purification by semi-preparative HPLC, the purity was increased to more than 95. 0% , and the overall yield was 30.5%. Conclusion; This method is simple and cost-effective and can produce pramlintide with high purity, which may be useful for the industrial manufacturing.%目的:探索普兰林肽的固相合成、氧化条件及纯化方法.方法:采用Fmoc固相多肽合成法,以Rink Amide-AM树脂做载体,HBTU/HOBt/DIEA做缩合剂,逐步缩合得到全保护线性普兰林肽树脂,以TFA/苯甲硫醚/苯酚/H2O/EDT/TIS配比的裂解液脱除保护基团,分别采用空气,二甲基亚砜,双氧水氧化两个半胱氨酸的巯基形成一对二硫键,半制备反相高效液相色谱法纯化.结果:合成含37个氨基酸以及一对二硫键的普兰林肽经RP-HPLC和MALDI-TOF-MS确证,粗品纯度在50.0％以上,粗品经半制备型反相高效液相色谱纯化,所得精肽的纯度大于95.0％,总收率为30.5％.结论:该方法简单,合成的产品成本低,纯度高,可为工业化生产提供借鉴.

摘要： 本发明公开了一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法。该方法包括：制备二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒和偶联rink amide linker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒；分别以二者为固相进行多肽合成；向两组固相中加入K试剂。对于前者，K试剂可将合成多肽脱侧链保护但不将多肽切下，得到肽磁纳米探针。对于后者，其可将多肽脱侧链保护并从该固相上切下，得到合成多肽。本方法在外磁场作用下可迅速脱离反应体系，为合成带来很大便利，并且能够简便精确地合成多肽，同时同步构建多肽磁纳米探针，以用于在体外和体内印证合成肽的生物学功能，也可用于大规模多肽库的建立，迅速筛选出功能肽。

摘要： 本发明公开了一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法。该方法包括：制备二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒和偶联rink amide linker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒；分别以二者为固相进行多肽合成；向两组固相中加入K试剂。对于前者，K试剂可将合成多肽脱侧链保护但不将多肽切下，得到肽磁纳米探针。对于后者，其可将多肽脱侧链保护并从该固相上切下，得到合成多肽。本方法在外磁场作用下可迅速脱离反应体系，为合成带来很大便利，并且能够简便精确地合成多肽，同时同步构建多肽磁纳米探针，以用于在体外和体内印证合成肽的生物学功能，也可用于大规模多肽库的建立，迅速筛选出功能肽。

摘要： 本实用新型公开了一种基于振摇床的固相多肽稳定合成装置，装置卡设于振摇床内，装置包括安装支架、安装座、废液收集瓶以及循环水真空泵，安装座固定设置于安装支架内，安装支架底部卡设于振摇床内，安装座内开设有多组竖直设置的放置槽，每一放置槽内设置有多肽合成管，多肽合成管底部穿过安装座连接有并流槽，并流槽一侧连接废液收集瓶，废液收集瓶顶部与循环水真空泵连通，安装座内部于每一多肽合成管外壁设置有夹持组件，安装支架外侧滑动设置有遮阳篷。本实用新型的优点在于实现灵活遮挡的同时不会影响到试剂的加注，同时通过振摇床的方式提供混合动力，相较于气式混合，避免因为气量过大造成树脂溢出的情况，反应过程中夹持也更加稳定。

摘要： 本发明公开了一种利用固相多肽合成四肽异构体的方法，所述的方法包括：以三苯氯甲基型树脂的任何一种为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有芴甲氧羰酰基保护的氨基酸，获得四肽异构体树脂；其间依次脱去芴甲氧羰酰基保护基团，用缩合剂进行接肽反应，获得保护的四肽异构体树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得四肽异构体粗品，并经C18或C8色谱柱进行分离纯化，获得所述的四肽异构体。本发明要求保护的四肽异构体合成方法具有原辅材料来源方便，工艺稳定，生产周期短，生产成本低，收率高，纯度好，质量稳定的优点，可规模化生产，极具市场竞争力。

摘要： 提供一种利用微波辅助的流动固相多肽合成方法及其系统，其利用微波对氨基酸连接循环进行辅助，所述氨基酸连接循环的微波辅助环境不同，并且各个氨基酸连接循环的微波辅助环境保持不变，在先氨基酸连接循环所得到的产物移入另一微波辅助环境，各个氨基酸连接循环在完成一个批次的氨基酸连接循环后，继续在保持不变的微波辅助环境下重复进行下一批次的氨基酸连接循环。能够降低多肽合成的失败风险，有利于生产过程的质量控制，同时节省了合成的时间，增加速度和产能。

摘要： 本发明公开了一种利用固相多肽合成四肽异构体的方法，所述的方法包括：以三苯氯甲基型树脂的任何一种为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有芴甲氧羰酰基保护的氨基酸，获得四肽异构体树脂；其间依次脱去芴甲氧羰酰基保护基团，用缩合剂进行接肽反应，获得保护的四肽异构体树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得四肽异构体粗品，并经C18或C8色谱柱进行分离纯化，获得所述的四肽异构体。本发明要求保护的四肽异构体合成方法具有原辅材料来源方便，工艺稳定，生产周期短，生产成本低，收率高，纯度好，质量稳定的优点，可规模化生产，极具市场竞争力。

摘要： 微波固相多肽合成反应管，涉及化学反应仪器。自上而下依次包括大直径管口、连接管身且直径逐渐减小的管体中段、小直径管身、支管和塑料部件；大直径管口用于外接加压反应适配器；支管设于管身底部侧面，并与小直径管身呈一定角度夹角，支管靠近小直径管身位置内嵌有砂芯过滤部件，用于在反应过程以及抽滤过程中将树脂保留在反应管内部；支管的管口设有外螺纹，用于连接塑料部件。反应管整体外形成流线型，不干扰CEM微波化学反应器中的压缩空气冷却功能，并且耐受微波反应过程中的升温‑降温循环。可通过红外探头测温，只需通过更换接头就可实现溶剂的替换及树脂的洗涤，减少手动多肽合成的步骤，降低操作难度，大大加快合成速度。

摘要： 一种微波固相多肽合成反应管，涉及化学反应仪器。自上而下依次包括大直径管口、连接管身且直径逐渐减小的管体中段、小直径管身、支管和塑料部件；大直径管口用于外接加压反应适配器；支管设于管身底部侧面，并与小直径管身呈一定角度夹角，支管靠近小直径管身位置内嵌有砂芯过滤部件，用于在反应过程以及抽滤过程中将树脂保留在反应管内部；支管的管口设有外螺纹，用于连接塑料部件。反应管整体外形成流线型，不干扰CEM微波化学反应器中的压缩空气冷却功能，并且耐受微波反应过程中的升温‑降温循环。可通过红外探头测温，只需通过更换接头就可实现溶剂的替换及树脂的洗涤，减少手动多肽合成的步骤，降低操作难度，大大加快合成速度。

摘要： 本实用新型公开了一种高效固相多肽合成装置，包括循环水加热器、多肽合成管、空气泵以及废液收集管，多肽合成管内部通过砂芯板分隔为上方的反应区与下方的缓冲区，多肽合成管外壁固定设置有空心夹层，空心夹层上方设置有进水口与出水口，进水口与出水口均通过软管与循环水加热器连通形成循环水通路，多肽合成管于缓冲区下方设置有废液收集口，废液收集口还设置有三通阀门，三通阀门的上口与缓冲区连通，下口与废液收集口连通，侧口通过软管与空气泵连通，废液收集管上方设置有圆柱形通道，废液收集口底部与圆柱形通道之间通过软管辅助连通。本实用新型的优点在于能够实现多肽反应的稳定与高效，同时无需采用氮气鼓吹反应，更加安全简便。

摘要： 本实用新型涉及多肽合成技术领域，具体为一种高通量固相多肽合成装置，包括装置主体，所述装置主体包括合成反应装置，所述合成反应装置的两侧皆开设有滑轨，且滑轨的内部皆滑动连接有导向块，两组所述导向块远离合成反应装置的一侧皆固定连接有转轴座，且转轴座远离导向块的一端皆和保护罩固定连接，两组所述导向块的背侧皆固定连接有限位机构，所述限位机构包括套筒、限位销和限位弹簧，所述导向块和套筒固定连接，且套筒的内部滑动连接有限位销，所述套筒和限位销之间固定连接有限位弹簧，且限位销的一端嵌入限位孔的背部。本实用新型具有较好的保护性和稳定性，并且便于打开和关闭。