bar基因

摘要： 为了安全防除抗草铵膦转基因马铃薯田间杂草,以转Bar基因马铃薯为试验材料,分析比较了有效成分1440 g·hm^(-2)灭草松(T1)、99 g·hm^(-2)11%砜嘧磺隆·精喹禾灵(T2)、1440 g·hm^(-2)灭草松+99 g·hm^(-2)11%砜嘧磺隆·精喹禾灵复配剂(T3)、1695 g·hm^(-2)草铵膦(T4)、923 g·hm^(-2)草甘膦(T5)和清水(CK)处理下杂草防效、马铃薯生长指标、块茎产量及品质特性和药剂残留情况。结果表明,草甘膦在杀灭杂草的同时,也杀死了马铃薯植株,受害率达100%;灭草松、11%砜嘧磺隆·精喹禾灵和草铵膦对马铃薯均未产生药害,但因对杂草的防效不同而导致达到的增产效果差异显著。药后45 d时,灭草松和11%砜嘧磺隆·精喹禾灵复配剂(T3)对阔叶杂草的株、鲜重防效较灭草松单独处理(T1)分别提高35.13和38.71个百分点,较11%砜嘧磺隆·精喹禾灵单独处理(T2)分别提高23.88和16.29个百分点,对禾本科杂草的株、鲜重防效较T1分别提高78.36和80.92个百分点,较T2分别提高11.85和8.23个百分点,马铃薯单株产量较CK、T1和T2分别增加58.39%、35.52%和11.44%。草铵膦(T4)对阔叶和禾本科杂草的株、鲜重防效都显著高于T1、T2和T3,单株产量较CK、T1、T2和T3分别增加67.40%、43.24%、17.79%和5.6%。因此,用有效成分1695 g·hm^(-2)的草铵膦可以高效防治转Bar基因马铃薯田间杂草,但为了防止转Bar基因马铃薯连作时,因靶标除草剂草铵膦作用单一而诱导杂草产生草铵膦抗性的风险,建议用有效成分1440 g·hm^(-2)的灭草松和99 g·hm^(-2)11%砜嘧磺隆·精喹禾灵复配剂与草铵膦轮换防治杂草。本研究为转Bar基因马铃薯大面积种植中田间杂草的科学防治提供了科学依据。

摘要： 随着转基因大豆(Glycine max)市场的扩大,我国对转基因大豆的食品安全、环境风险等问题争议日渐加剧.越来越多的国家要求对转基因食品进行标识,部分国家对转基因成分含量亦有要求.为了建立转Bar基因大豆的快速、有效检测方法,对转Bar基因大豆进行定量检测,本研究以纯化的膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)蛋白为抗原免疫小鼠(Mus musculus),成功制备了18株特异性良好的PAT单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),利用在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的PAT分段蛋白筛选到一组能进行夹心ELISA的配对单克隆抗体9F5和3G12,并以这对单抗为基础建立了PAT快速定量双抗夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法.该方法以9F5为捕获抗体包被酶标板,检测抗体3G12经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记后以2μg/mL的工作浓度与抗原在37°C共同孵育30 min,室温避光显色15～20 min.该检测方法检测限为1.69 ng/mL,对PAT蛋白的检测范围为0.5～8.0μg/mL,板内板间变异系数均小于10％.该法灵敏度高、稳定性好,1 h即可完成检测,为转Bar基因大豆的快速定量检测提供了技术支撑.

摘要： 抗除草剂bar基因是转基因植物中常用标记基因,也是转基因成分检测中重要的筛选基因.参照标准方法,检测水稻和小麦2个待测样的bar基因,通过分析待测样和对照样凝胶电泳结果,比对bar基因序列与标准序列的差异,结果发现水稻bar基因序列为236 bp,比标准提供的262 bp片段小26 bp;小麦待测样中bar基因序列为485 bp,比标准提供序列大223 bp,两待测样与标准序列相似度较低,不能判定为阳性.采用测序技术进一步确证转基因成分检测中的特异性片段,对结果判定具有重要的参考作用.

摘要： 为获得草铵膦完全抑制蛹虫草生长的最小浓度和一种快速构建Bar基因双元载体的方法,本文首先采用浓度梯度法研究草铵膦对蛹虫草的抑制效果,其次采用双接头PCR(DJ-PCR)构建Bar基因表达盒,然后分别采用T4 DNA连接酶法和同源重组法把Bar基因表达盒插入双元载体pAg1-H3的T-DNA区域,以构建Bar基因双元载体pAg-Bar,并比较T4DNA连接酶法和同源重组法的连接效果,最后通过农杆菌介导转化法来验证载体pAg-Bar的有效性及Bar基因在蛹虫草中的功能。结果表明:草铵膦完全抑制蛹虫草分生孢子生长的最小质量浓度为400μg/mL;采用DJ-PCR方法可快速构建Bar基因表达盒;采用T4 DNA连接酶法和同源重组法均可实现双元载体pAg-Bar的构建,而同源重组法更快速、高效;采用农杆菌介导转化法可把双元载体pAg-Bar中的Bar基因表达盒整合入蛹虫草的基因组,使蛹虫草转化子具有草铵膦抗性。本研究建立的载体构建方法具有快速、高效的特点,适用于抗性基因载体、敲除载体、超表达载体等载体的构建,为蛹虫草基因功能的鉴定提供技术支撑。

摘要： 以"甘农3号"紫花苜蓿为受体,利用农杆菌介导法导入双价基因OvBAN/bar,通过PCR检测和Southern杂交分析表明,4个转基因株系含有目的基因且均出现杂交条带,其中2个株系为单拷贝,1个株系为双拷贝,1个株系为三拷贝;对获得的4株转基因苜蓿进行qRT-PCR分析表明,具有三拷贝数的1个转基因株系OvBAN基因的表达量最高,其次为双拷贝数的2个转基因株系,并且这些株系的花青素还原酶活性及缩合单宁含量均显著高于野生型苜蓿.以过量表达OvBAN基因的3株转基因苜蓿为试验材料,进行抗蚜性和除草剂耐受性分析.结果表明,与野生型苜蓿相比,转OvBAN/bar基因苜蓿对苜蓿蚜都具有较好的抗性,蚜虫抑制率为78％ ～93％;用0.5％的市售草铵膦喷施各株系,10 d后各转基因株系除个别叶片枯萎死亡,其他叶片及茎秆生长状况良好,而野生型苜蓿全部枯萎死亡,表明bar基因已整合到转基因苜蓿基因组中并稳定表达.综上所述,转OvBAN/bar基因紫花苜蓿表现出良好的抗虫性和除草剂耐受性.

摘要： 基因飘流是水稻(Oryza sativa L.)转基因安全性研究中的重要内容,研究花粉竞争对基因飘流的影响对于建立并完善转基因飘流模型具有重要意义.本实验分别以籼、粳型转基因水稻和籼、粳常规水稻为花粉供体,不育系为花粉受体,研究籼、粳型双供体在基因飘流中的竞争性.结果表明,同种亚种双供体的基因飘流率与花粉源数量成正相关关系,且基因飘流率与供体花粉数量关系符合S曲线.基因飘流是花粉数量竞争和遗传竞争的综合结果.

摘要： 为了获得同时具备抗虫和抗除草剂特性的甘蓝型油菜新种质材料,以湘油15下胚轴为外植体,将人工合成的抗虫融合基因cry1ab/ac与带有草铵膦抗性基因bar的植物表达载体pFGC5941连接,构建了植物表达载体pF-GC-Bt.利用农杆菌介导油菜下胚轴遗传转化体系,将载体pFGC-Bt转入到油菜品种湘油15愈伤组织中.经愈伤组织分化和植株再生,获得了7株T0转基因植株.分株收获这7株转基因油菜的种子,种于花盆中,用除草剂basta喷洒,对存活下来的植株用检测引物进行PCR检测.挑选11株2个基因检测结果都呈现阳性的植株,进行Cry1Ab/Ac蛋白双抗体夹心免疫层析技术检测,在这11株油菜中都检测到了Cry1Ab/Ac蛋白.进行转基因油菜抗菜粉蝶幼虫(菜青虫)的离体鉴定,以非转基因湘油15为对照,结果显示,啃食了转基因油菜叶片的菜青虫停止运动和生长,大概7 d后陆续死亡,而非转基因油菜叶片上的菜青虫表现正常,3 d后叶片基本被其啃食干净.饲喂鉴定结果表明,转抗虫融合基因cry1ab/ac油菜对菜青虫具有明显抗性.得到了同时具有菜青虫和草铵膦双抗性的转基因植株,且抗性显著,为油菜的抗性育种提供了新的材料.

摘要： 为了验证小麦籽粒大小相关基因TaCYP78A5在小麦籽粒发育中的功能,对pINO启动子驱动的TaCYP78A5基因过表达的转基因小麦后代株系进行了鉴定,检测了T_0代植株目标基因拷贝数,定量分析了7个T_1代阳性植株的目标基因表达,并对其籽粒大小进行了统计。结果表明,利用Bar试纸条和目标基因特异PCR检测相结合的方法对21株转基因T_0代再生苗进行检测,共鉴定出14个阳性植株,除2个植株的目标基因拷贝数为3和1个植株为7外,其余11个T_0代转基因植株目标基因插入拷贝数均为1~2个,其中有6个单拷贝植株。与野生型相比,7个T_1代阳性植株目标基因表达量均极显著增加,粒厚和粒宽均有不同程度增加,粒重极显著增加。

摘要： 利用筛选标记基因可方便快捷的区分转基因植株和非转基因植株。筛选标记基因通常用PCR、Southern杂交等分子手段检测。随着规模化转基因工作的开展，大量转基因植株需要及时准确的鉴定。叶片涂抹除草剂筛选转基因植株具有快速、高效的优势。本研究结果显示，除草剂草铵膦对小麦品种轮选987和科农199的有效筛选浓度分别为75 mg·L-1和125 mg·L-1；对以轮选987为受体材料的转bar基因小麦植株的有效筛选浓度为100 mg·L-1，该浓度可用于针对此类转基因材料的大规模筛选。%The selection marker gene was widely used to detect and identify transgenic plants in biotechnological breeding of crops. For detection of selection marker genes, the molecular techniques such as Polymerase-Chain-Reaction (PCR) and Southern blot were generally applied. However, with the rapid progress of genetic transformation of crop species, a large number of transgenic plants need to be identified timely and usually, bar was designed as the marker gene. The method painting herbicide (glufosinate-ammonium) on leaf has the advantage of quickness and effectiveness for verifying transformation. The results showed that in wheat varieties Lunxuan 987 and Kenong199, the effective selection concentrations of herbicide were 75 mg·L-1 and 125 mg·L-1, respectively. Further, the effective selection concentrations of herbicide were 100 mg·L-1 for detecting the activity of bar protein when Lunxuan 987 was transformed as the donor plant, suggesting this concentration of glufosinate-ammonium might be suitable for large scale detection.

摘要： 对花粉管介导获得的4个转bar基因水稻植株稳定后代主要农艺性状的变异进行研究的结果表明,外源基因的导入可引起受体植株后代农艺性状可遗传的变异.多数转基因系的株高、穗长、粒长、千粒重等性状有比对照增加的趋势,而一次枝梗数、二次枝梗数、每穗总粒数、每穗实粒数、结实率和粒宽则有比对照减少的趋势.外源基因的导入对穗数和单株产量的影响则较小.

摘要： 根据定向克隆原则构建植物表达载体pUBCG0229,新的植物表达载体共8,602 bp,带有抗螟虫的cryIA(c)基因和抗除草剂的bar基因.bar基因既可作为筛选标记基因,又可作为甘蔗生产上有用的抗逆基因.用基因枪轰击法将pUBCG0229质粒DNA转化甘蔗品种桂糖94-119的胚性愈伤组织,使用PPT(Phosphinothricin)对轰击后的材料进行分化和生根筛选,移栽成活后使用Basta溶液喷洒筛选,共获得203株抗性植株,部分抗性植株通过PCR检测、Soum锄杂交及PCR产物测序,初步证明已将cryIA(c)基因整合到甘蔗基因组中.

摘要： 本研究用包含ubil启动子启动的bar基因的质粒pAHC25进行谷子的转化.用JQ-700基因枪共轰击豫谷1号码的胚性愈伤组织9批,在bialaphos含量为2~3mg/l的选择培养基上从处理的653块愈伤组织中,获得了29块抗性愈伤组织,其中3块为Gus阳性.从抗性愈伤组织再生的52株再生植株中,用PCR和Southern杂交证实7株为转基因植株.转基因植株的叶片可抗0.1％bialaphos涂抹.转入的基因能稳定遗传给后代,从R4代选出了3个bar基因纯合系.本文对转化操作的一些方法进行了讨论.

摘要： 本文概述了草丁膦的毒害机理及Bar基因的抗性机理,总结了土壤吸水链霉菌在微生物除草剂方面应用现状,以及土壤吸水链霉菌来源的Bar基因在转基因作物育种和作为转化筛选标记方面的研究现状,并对其应用前景进行了展望.

摘要： 本文概述了草丁膦的毒害机理及Bar基因的抗性机理,总结了土壤吸水链霉菌在微生物除草剂方面应用现状,以及土壤吸水链霉菌来源的Bar基因在转基因作物育种和作为转化筛选标记方面的研究现状,并对其应用前景进行了展望.

摘要： 本文概述了草丁膦的毒害机理及Bar基因的抗性机理,总结了土壤吸水链霉菌在微生物除草剂方面应用现状,以及土壤吸水链霉菌来源的Bar基因在转基因作物育种和作为转化筛选标记方面的研究现状,并对其应用前景进行了展望.

摘要： 本文概述了草丁膦的毒害机理及Bar基因的抗性机理,总结了土壤吸水链霉菌在微生物除草剂方面应用现状,以及土壤吸水链霉菌来源的Bar基因在转基因作物育种和作为转化筛选标记方面的研究现状,并对其应用前景进行了展望.

摘要： 本文概述了草丁膦的毒害机理及Bar基因的抗性机理,总结了土壤吸水链霉菌在微生物除草剂方面应用现状,以及土壤吸水链霉菌来源的Bar基因在转基因作物育种和作为转化筛选标记方面的研究现状,并对其应用前景进行了展望.

摘要： 以优质小麦品种高优503、扬麦158和郑州9405的幼胚作为基因枪转化的靶材料.转化雪花莲凝集素(Galanthus nigalis agglutinin GNA)基因通过含有选择培养基的筛选,获得13株有抗生的再生植株.经PCR扩增检测到外来片段的转基因植株再分别提取RNA,然后用RNA做模块合成cDNA,反转录后检测转基因株系的RNA表达.

摘要： 以优质小麦品种高优503、扬麦158和郑州9405的幼胚作为基因枪转化的靶材料.转化雪花莲凝集素(Galanthus nigalis agglutinin GNA)基因通过含有选择培养基的筛选,获得13株有抗生的再生植株.经PCR扩增检测到外来片段的转基因植株再分别提取RNA,然后用RNA做模块合成cDNA,反转录后检测转基因株系的RNA表达.

摘要： 一种荧光PCR定性检测含有Bar基因序列转基因作物探针序列及试剂盒，所述的探针序列包括：序列CCGAGCCGCAGGAACCGCAGGAG向上游延伸5个碱基、向下游延伸5个碱基的区域内形成的序列。所述的试剂盒组成为：核酸提取试剂；核酸扩增试剂，该试剂包括：BarPCR反应液、18s-rRNA反应液、Taq酶(5U/ul)、UNG(1U/ul)；对照品等，本试剂盒对于转入Bar基因序列转基因作物检测灵敏度可达0.1%，本试剂盒具有良好的特异性。由于本试剂盒采用了植物内源基因18S-rRNA作为内标，避免了假阴性的产生，由于本方法对PCR产物实行了实时监测，大大节省了检测时间，节约了人力物力。

摘要： 本发明涉及一种适合除草剂筛选标记Bar基因的RNA干扰载体，包括水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子、位于所述水稻GAS1基因内含子两侧的上游多克隆位点和下游多克隆位点；所述水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子的核苷酸序列为序列表中序列1自5’末端9621‑10099位核苷酸。与用GUS基因作为shRNA的环状结构的RNA干扰载体相比，在应用该基因内含子作为shRNA的环状结构的RNA干扰载体具有更高的干扰效率。同时，实验操作变得简单易行，有利于减少失误，提高工作效率。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种转基因农作物的检测技术，具体涉及转BAR基因农作物的可视化检测方法。利用在PCR体系中加入DNAzyme标记的检测BAR基因的特异性探针，用正反引物对BAR基因进行扩增，利用核酸聚合酶5’-3’外切酶活性将探针中的DNAzyme标记释放，通过检测PCR产物中释放出的标记物来判断该样品是否为转基因样品。本发明具有高效、简便、成本低等特点。

摘要： 本发明涉及BAR基因的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法，其中，LAMP检测引物组包括下列引物：外引物F3：CGACCTCGCACTAGTAGC；外引物B3：ACCTCGACGGTCAGCG；内引物FIP：AGTACGTCACCGCCGGCCTATAAAGTGCCACCTGGGACTAC；内引物BIP：TGGCGATGCGAGCCTACCTATAAACCCAGGCTCGTCGC；环引物FLP：TCAGGGCTCCACGCTCA。本发明提供的LAMP检测引物组对BAR基因具有良好的特异性。

摘要： 本发明涉及转基因水稻品系Bar68-1的外源插入片段的旁侧序列及其应用，所述旁侧序列包括3’端旁侧序列和5’端旁侧序列，它们的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。利用该旁侧序列作为目的DNA扩增片段建立灵敏、特异性的转基因水稻品系Bar68-1的品系特异性定性PCR检测方法，可广泛用于生物技术领域中转基因水稻的安全评估和检测。

摘要： 一种荧光PCR定性检测含有Bar基因序列转基因作物探针序列及试剂盒，所述的探针序列包括：序列CCGAGCCGCAGGAACCGCAGGAG向上游延伸5个碱基、向下游延伸5个碱基的区域内形成的序列。所述的试剂盒组成为：核酸提取试剂；核酸扩增试剂，该试剂包括：BarPCR反应液、18s－rRNA反应液、Taq酶(5U/ul)、UNG(1U/ul)；对照品等，本试剂盒对于转入Bar基因序列转基因作物检测灵敏度可达0.1％，本试剂盒具有良好的特异性。由于本试剂盒采用了植物内源基因18S－rRNA作为内标，避免了假阴性的产生，由于本方法对PCR产物实行了实时监测，大大节省了检测时间，节约了人力物力。

摘要： 本发明提供了含有Bar基因转基因作物核酸扩增用引物序列，这些序列分布在三对最优引物的延伸区域范围内。所述的最优三对引物中的每对引物的延伸范围是：由游引物和下游引物组成的引物对，在该引物对的上游引物位置前延10个碱基，后延10个碱基，而引物对的下游引物位置前延10个碱基，后延10个碱基，在上述引物对的上下游延伸位置的区域范围内得到引物序列，本发明对位于上述区域范围内最优引物对做荧光PCR检测，其检测灵敏度可达0.1％，而非转基因的农产品大豆、玉米等均无扩增信号，说明这些引物具有良好的灵敏度和特异性。

摘要： 本发明涉及一种适合除草剂筛选标记Bar基因的RNA干扰载体，包括水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子、位于所述水稻GAS1基因内含子两侧的上游多克隆位点和下游多克隆位点；所述水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子的核苷酸序列为序列表中序列1自5’末端9621-10099位核苷酸。与用GUS基因作为shRNA的环状结构的RNA干扰载体相比，在应用该基因内含子作为shRNA的环状结构的RNA干扰载体具有更高的干扰效率。同时，实验操作变得简单易行，有利于减少失误，提高工作效率。

摘要： 本实用新型公开了一种三联快速检测BAR、EPSPS和BT转基因蛋白的试剂盒，包括底板和盖板，底板均分为三个工作区，工作区均设置有用于放置测试带的条形槽，工作区的上侧均设置有盖板，盖板对应条形槽的位置均设置有用于压紧测试带的压块，压块为透明材质。一个检测盒可同时检测3种不同的转基因成份，大大提高了检测的范围，如果仅需要有目的地检测BAR、EPSPS和BT三种转基因蛋白中的1种成份，可将盒子分开，另外两种还可以再次使用，大大降低了使用成本。

摘要： 本发明公开了一种检测转bar基因甘蔗的方法和应用。本发明通过将待检测的甘蔗叶片直接浸泡在除草剂溶液中进行处理，同时以不含有bar基因的甘蔗叶片作为对照，通过直接观察伤害程度就能判断结果。该方法应用于含有bar基因的甘蔗植株的鉴定，特别适合转基因再生植株的快速检测，能够大大降低转基因植株分子检测工作，大幅度提高检测效率，降低检测成本。