哈蟆油

摘要： 为了探究中国林蛙(Rana chensinensis)哈蟆油最佳采收期,为养殖和采收提供依据,以吉林省靖宇县3龄雌性中国林蛙为研究对象,建立了哈蟆油PUFAs含量测定的体外分析方法,采用气相色谱法测定中国林蛙6个生长阶段(出蛰期、产卵期、捕食期、入蛰期、散居冬眠期和群居冬眠期)哈蟆油中的总PUFAs、OA、ALA、AA、EPA和DHA的含量并进行聚类分析;利用RT-PCR法测定与PUFAs合成相关的FAD基因(Δ6-FAD、Δ5-FAD、Δ9-FAD和n-3系列)的表达量;利用SPSS 19.0和R 4.0.1分析PUFAs含量与FAD基因表达量的相关性。结果表明:在不同生长阶段中,散居冬眠期的中国林蛙哈蟆油中PUFAs含量及FAD基因表达量最高;OA和EPA的含量与总PUFAs含量具有显著相关性,Δ6-FAD和Δ5-FAD基因的表达量与总PUFAs含量具有显著相关性,这4个指标在哈蟆油采集时期的鉴别及质量评价上具有重要参考价值。

摘要： 目的 旨在筛选哈蟆油和牛蛙油中特异性的蛋白质,发现这些差异蛋白与生长环境、冬眠及发育的关系.方法 采用iTRAQ结合质谱技术建立哈蟆油和牛蛙油蛋白质组数据库,通过比较两个蛋白质组数据库,对筛选的差异蛋白进行Gene ontology功能注释和生物信息学分析.结果 通过对牛蛙油与哈蟆油中蛋白质定量的数据进行差异比较,筛选到差异表达蛋白质总数为77个,其中上调蛋白质69个,下调蛋白质8个.哈蟆油中含量较高的8个差异蛋白主要参与免疫调节过程;牛蛙油中含量较高的差异蛋白主要参与生长发育、能量代谢、应激反应、骨架形成等过程.结论 哈蟆油中含量较高的8个差异蛋白质可作为哈蟆油区别于牛蛙油的重要成分,同时哈蟆油的特异性膨胀度可能与含量较高的凝胶形成型黏蛋白类密切相关.

摘要： 目的:基于多肽体外标记定量技术(TMT)蛋白定量检测,研究哈蟆油调节大鼠骨代谢,防治绝经后骨质疏松作用.方法:采用蛋白裂解法提取大鼠股骨总蛋白,依次经过胰蛋白酶酶解、TMT试剂标记、HPLC分级、HPLC-MS联用技术鉴定蛋白,利用生物信息学分析方法进行差异表达蛋白注释、GO富集分析、通路富集分析和蛋白结构域富集分析,利用平行反应监测(PRM)技术验证典型特异表达蛋白.结果:蛋白质定量分析共鉴定到5 654个蛋白,其中注释到4 889个蛋白.与空白对照组比较,模型对照组参与富集度较高的信号通路中差异表达蛋白共22个(fold change＞2.0,fold change＜1/2.0,P＜0.05),其中有6个蛋白发生表达上调,有16个蛋白发生表达下调.与模型对照组比较,哈蟆油0.075 g/kg组参与富集度较高的信号通路中差异表达蛋白共11个(fold change＞2.0,fold change＜1/2.0,P＜0.05),其中有6个蛋白发生表达上调,有5个蛋白发生表达下调.这些差异蛋白重点参与了大鼠体内糖酵解/糖异生、细胞外基质(ECM)-受体相互作用、核糖体代谢、蛋白质消化吸收、脂肪酸降解、补体和凝血级联及心肌病、坏死症、百日咳、病毒病、红斑狼疮等疾病代谢途径.PRM实验验证肌钙蛋白Ⅰ(Tnni1)、心肌肌钙蛋白C(Tnnc1)、丝氨酸蛋白酶的抑制剂(Serpina3k)、半乳糖凝集素(Galentin-1)及肌球蛋白轻链Ⅲ(My13)蛋白表达趋势与TMT检测结果一致.结论:哈蟆油对骨质疏松大鼠骨代谢调节作用可能与Tnni1等11个差异表达蛋白相关,其中与Tnni1、Tnnc1、Serpina3k、Galentin-1及My13等5个蛋白密切相关.

摘要： 目的 探讨将哈蟆油(林蛙油)冻干中药饮片用于新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎)的辅助治疗是否能提高机体免疫力和抗应激能力,从而改善患者临床症状、控制病情进展、缩短治疗周期.方法 收集2020年5月25日至6月17日牡丹江医学院附属红旗医院收治的40例输入型新冠肺炎患者的临床资料,随机分为常规治疗组和哈蟆油组,每组20例.常规治疗组仅给予抗病毒、对症治疗、营养支持等基础治疗;哈蟆油组患者在常规治疗基础上口服哈蟆油(林蛙油)冻干中药饮片(每次0.2?g,每日2次).比较两组患者治疗后主要临床症状的改善情况、胸部CT显示病灶吸收情况、实验室检查结果以及新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸转阴时间.?结果 两组患者入院时一般情况、临床症状、既往疾病、胸部CT影像、C-反应蛋白(CRP)、淋巴细胞计数(LYM)、CD4+及CD8+?T淋巴细胞水平以及患者的临床分型分布比较差异均无统计学意义.治疗3?d后,哈蟆油组发热、咳嗽、纳差症状消失率均明显高于常规治疗组〔发热:77.8％(7/9)比62.5％(5/8),咳嗽:66.7％(6/9)比50.0％(3/6),纳差:60.0％(3/5)比40.0％(2/5),均P<0.05〕;治疗6?d后,哈蟆油组发热、咳嗽、乏力、纳差症状消失率均明显高于常规治疗组〔发热:88.9％(8/9)比75.0％(6/8),咳嗽:77.8％(7/9)比50.0％(3/6),乏力:100.0％(3/3)比75.0％(3/4),纳差:80.0％(4/5)比60.0％(3/5),均P<0.05〕.治疗5?d,哈蟆油组胸部CT显示总有效率明显高于常规治疗组〔90.0％(18/20)比60.0％(12/20),P<0.05〕.治疗7?d,哈蟆油组CRP、CD8+?T淋巴细胞水平均明显低于常规治疗组〔CRP(mg/L):2.87±2.83比7.63±6.53,CD8+:(24.40±2.56)％比(28.95±3.50)％,均P<0.05〕,LYM、CD4+?T细胞水平明显高于常规治疗组〔LYM(×109/L):2.35±0.66比1.90±0.51,CD4+:(33.81±3.15)％比(30.10±4.01)％,均P<0.05〕.哈蟆油组2019-nCoV核酸转阴时间较常规治疗组明显缩短(d:8.85±3.64比11.65±4.52,P<0.05).结论 新冠肺炎患者服用哈蟆油(林蛙油)中药饮片可以减轻炎症反应,增强非特异性免疫和细胞免疫功能,在控制病情进展、促进康复、缩短治疗周期等方面具有一定效果.

摘要： 建立高效液相色谱法测定1-甲基海因含量的方法,比较哈蟆油和哈蟆卵中其含量.色谱柱:Venusil MP-C18 (4.6 mm× 150 mm,5 μm);检测波长:215 nm;流动相:100％水;流速:1.0 mL/min;柱温:30°C.结果 表明,1-甲基海因在35.110 0～0.351 1 μg/mL线性关系良好(r=0.999 9);哈蟆油和哈蟆卵中1-甲基海因的平均回收率(n=6)分别为100.55％和100.87％.该方法简便、准确、重复性好,可作为哈蟆油和哈蟆卵中1-甲基海因含量的测定方法.

摘要： 传统中药哈蟆油在我国药食两用的历史悠久,哈蟆油及其复方被广泛应用在衰老及其相关疾病治疗中,其抗衰老的现代实验研究已有诸多报道.本文从现代衰老学说角度将哈蟆油在衰老及其相关疾病中的作用及其机制作一综述,内容涉及哈蟆油调节免疫功能、减少自由基生成、抑制细胞凋亡、提高神经内分泌功能、改善循环功能等抗衰老功能.分析哈蟆油通过多方位作用实现抗衰老功效的机制,对进一步研究其抗衰老机制的方向进行展望.

摘要： 目的：探讨哈蟆油(OR)对D-半乳糖所致雌性衰老大鼠子宫组织细胞增殖调控因子p21和cyclinD1基因表达的影响,进一步探讨OR延缓雌性大鼠生殖器官衰老机制.rn 方法：SPF级SD雌性青年大鼠40只随机分为模型组(D-gal组)、维生素E(VE组)、哈蟆油高剂量组(OR-H组)、中剂量组(OR-M组)、低剂量组(OR-L组),每组8只,D-半乳糖颈背部皮下注射42d,建立亚急性衰老模型.另取雌性青年大鼠8只,同样部位每日注射生理盐水,作为空白组.第15天开始灌胃给药,给药时间28天.给药结束后,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测衰老大鼠子宫组织p21和cyclinD1基因的表达情况.rn 结果：雌性衰老大鼠各组子宫组织qRT-PCR结果显示p21和cyclinD1基因表达相比均有显著的统计学意义(P＜0.01).D-gal组p21基因表达与Normal组比较升高,差异有显著性(P＜0.01).OR各剂量组p21基因表达与D-gal组比较下降,差异有显著性(P值均为＜0.01),OR-L组作用较为明显.D-gal组cyclinD1基因表达与Normal组比较降低,差异有显著性(P＜0.01);OR各剂量组cyclinD1基因表达与D-gal组比较均升高,差异有显著性(P值均为＜0.01),表达随着OR剂量增加而升高.rn 结论：OR可降低雌性衰老大鼠子宫组织细胞增殖负性调控因子p21基因表达,提高正性调控因子cyclinD1基因表达,促进衰老雌性大鼠子宫细胞增殖.OR延缓雌性生殖器官衰老作用可能通过调控子宫组织p21-cyclinD1信号通路发挥作用.

摘要： 目的:探讨哈蟆油(OR)对D-半乳糖所致雌性衰老大鼠子宫组织细胞增殖负性调控因子p16和正性调控因子cyclinD1蛋白表达的影响,进一步探讨OR延缓雌性大鼠生殖器官衰老机制.rn 方法:SPF级SD雌性青年大鼠40只随机分为模型组(D-gal组)、维生素E(VE组)、哈蟆油高剂量组(OR-H组)、中剂量组(OR-M)、低剂量组(OR-L组),每组8只,D-半乳糖颈背部皮下注射42d,建立亚急性衰老模型.另取雌性青年大鼠8只,同样部位每日注射生理盐水,作为空白组.第15天开始灌胃给药,给药时间28天.给药结束后,免疫组化法检测衰老大鼠子宫组织p16和免疫印迹法检测cyclinD1蛋白的表达情况.rn 结果:雌性衰老大鼠子宫组织免疫组化结果表明,子宫组织p16阳性染色多为胞浆着色,见于子宫内膜、上皮细胞胞浆、子宫间质腺体腺上皮细胞胞浆,外膜上皮也有表达,弥漫性、灶性分布均有.D-gal组p16阳性细胞积分与Normal组比较升高,差异有显著性(P＜0.01).OR各剂量组与D-gal组相比,p16阳性细胞积分降低,差异有显著性(P值均＜0.0l).免疫印迹法结果表明D-gal组子宫组织cyclinD1蛋白表达与空白组比较降低,差异有显著性(P＜0.0l).OR-H、M、L组cyclin D1蛋白表达与D-gal组比较,表达均升高(P值均＜0.01),OR-H组尤为明显.rn 结论:应用OR可以减缓衰老子宫组织结构的损伤,改善衰老子宫萎缩和衰老程度,OR可降低雌性衰老大鼠子宫组织细胞增殖负性调控因子p16蛋白的高表达,同时显著提高细胞增殖正性调控因子cyclinD1蛋白的表达,促进衰老雌性大鼠子宫细胞增殖.哈蟆油延缓雌性生殖器官衰老作用可能通过调控子宫pl6-cyclinD1信号通路来促进有关增殖调控蛋白表达发挥延缓衰老作用.

摘要： 目的:rn 探讨哈蟆油(oR)对D-半乳糖所致雌性衰老大鼠肝脏组织p16、p21和cyclinD1蛋白表达的影响,进一步探讨OR延缓雌性大鼠机体衰老机制.rn 方法：rn SPF级SD雌性青年大鼠40只随机分为模型组(D-gal组)、维生素E(VE组)、哈蟆油高剂量组(OR-H组)、中剂量组(OR-M组)、低剂量组(OR-L组),每组8只,D-半乳糖颈背部皮下注42d,建立亚急性衰老模型.另取雌性青年大鼠8只,同样部位每日注射生理盐水,作为空白组.第3周开始灌胃给药,给药时间30天.给药结束后,免疫组化法检测衰老大鼠肝脏组织p16和p21蛋白的表达情况,免疫印迹法(Western blotting)检测OR对雌性衰老大鼠肝脏组织cyclinD1表达的影响.rn 结果：rn 雌性衰老大鼠肝脏组织免疫组化结果表明,p16和p21多为胞浆表达,弥漫性、灶性分布均有.D-gal组p16和p21阳性细胞积分与空白组比较升高,差异有显著性(P＜0.01).与D-gal组相比,OR-M和OR-L组,p16阳性细胞积分降低,差异有显著性(P值均＜0.01),OR各剂量组p21阳性细胞积分降低,差异有显著性(P值均＜0.01).肝脏组织Westemblotting结果表明,D-gal组肝脏组织cyclinD1蛋白表达与空白组比较降低,差异有显著性(P＜0.01).OR各剂量组cyclin D1蛋白表达与D-gal组比较,表达均升高(P值均＜0,01),OR-H组尤为明显.rn 结论：rn OR可降低肝脏组织p16、p21蛋白的高表达.同时显著提高细胞增殖正性调控因子cyclinD1蛋白的表达,促进衰老雌性大鼠肝细胞增殖.哈蟆油延缓雌性衰老作用可能通过调控肝脏p16,p21,cyclinD1信号通路来促进有关增殖调控蛋白表达发挥延缓衰老作用.

摘要： 本实验采用D-半乳糖所致衰老雌性大鼠模型，采用免疫组化和蛋白免疫印迹法(western—blotting)探讨哈蟆油对雌性衰老大鼠肝脏p16，p21和cyclinD1蛋白表达的影响，揭示药物延缓衰老机制。

摘要： 目的：哈蟆油(Oviductus Ranae)来源于中国林蛙(Ranatemporaria chensinensis David)雌体的干燥输卵管，具有补肾益精、养阴润肺的功效。本研究建立了哈蟆油及其伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的化学及生物学定性鉴别方法，以及总蛋白质、胶原蛋白、氨基酸、1.甲基海因和激素的含量测定方法，为哈蟆油质量控制提供科学方法和实验依据。方法：测定不同产地哈蟆油及其伪品的性状、膨胀度、薄层色谱(TLC)和聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)色谱，比较各项定性鉴别结果；采用凯氏定氮法、氛胺T比色法、苟三酮柱后衍生化一氨基酸分析法和高效液相色谱法，分别测定了不同产地哈蟆油及其伪品中总蛋白质、胶原蛋白、氨基酸、1一甲基海因及雌二醇、雌酮、翠酮和孕酮等4种激素的含量。结论：本论文系统地研究了不同产地哈蟆油及其伪品的定性和定量分析方法，为国产哈蟆油及其伪品的质量综合评价提供了详实的实验数据，对今后药典中哈蟆油质量标准的建立具有重要的参考价值。

摘要： 目的：探讨哈蟆油(OR)对D-半乳糖所致雌性衰老大鼠肝脏组织p16、p21 和cyclinD1 蛋白表达的影响，进一步探讨OR 延缓雌性大鼠机体衰老机制。rn 方法：SPF 级SD 雌性青年大鼠40 只随机分为模型组（D-gal 组）、维生素E（VE 组）、哈蟆油高剂量组(OR-H 组)、中剂量组(OR-M 组)、低剂量组(OR-L 组)，每组8 只，D-半乳糖颈背部皮下注42d，建立亚急性衰老模型。另取雌性青年大鼠8 只，同样部位每日注射生理盐水，作为空白组。第3 周开始灌胃给药，给药时间30 天。给药结束后，免疫组化法检测衰老大鼠肝脏组织p16 和p21 蛋白的表达情况，免疫印迹法（Western blotting）检测OR 对雌性衰老大鼠肝脏组织cyclinD1 表达的影响。rn 结果：雌性衰老大鼠肝脏组织免疫组化结果表明，p16 和p21 多为胞浆表达，弥漫性、灶性分布均有。D-gal 组p16 和p21 阳性细胞积分与空白组比较升高，差异有显著性( P＜0.01)。与D-gal 组相比，OR-M 和OR-L 组，p16 阳性细胞积分降低，差异有显著性( P值均＜0.01)，OR 各剂量组p21 阳性细胞积分降低，差异有显著性( P值均＜0.01)。肝脏组织Westernblotting 结果表明，D-gal 组肝脏组织cyclinD1 蛋白表达与空白组比较降低，差异有显著性( P＜0.01)。OR 各剂量组cyclin D1 蛋白表达与D-gal 组比较，表达均升高( P值均＜0.01)，OR-H 组尤为明显。rn 结论：OR 可降低肝脏组织p16、p21 蛋白的高表达。同时显著提高细胞增殖正性调控因子cyclinD1 蛋白的表达，促进衰老雌性大鼠肝细胞增殖。哈蟆油延缓雌性衰老作用可能通过调控肝脏p16，p21，cyclinD1 信号通路来促进有关增殖调控蛋白表达发挥延缓衰老作用。

摘要： 目的：对市售哈蟆油商品染菌情况进行检查。rn 方法：对5份市售哈蟆油商品中杂菌数进行检查,并检查大肠埃希菌、大肠菌群和沙门菌。rn 结果：哈蟆油商品中杂菌染菌情况比较严重,但大肠埃希菌、大肠菌群和沙门菌未检出。rn 结论：哈蟆油染菌情况严重,但可以通过适当的灭菌手段和包装方式对染菌情况进行控制。

摘要： 目的：对市售哈蟆油商品染菌情况进行检查。方法：对5份市售哈蟆油商品中杂菌数进行检查，并检查大肠埃希菌、大肠菌群和沙门菌。结果：哈蟆油商品中杂菌染菌情况比较严重，但大肠埃希菌、大肠菌群和沙门菌未检出。结论：哈蟆油染菌情况严重，但可以通过适当的灭菌手段和包装方式对染菌情况进行控制。

摘要： 为进一步考察养殖品及其与野生品的种质稳定性情况，本文从横向角度对18份东北不同地域产哈蟆油的养殖品与野生品进行了质量评价及其紫外光谱分析，通过对哈蟆油药材的多方面研究，初步地评价了哈蟆油药材的质量。但鉴于哈蟆油中尚无明确的指标性成分作为质量评价的依据，而目前常以一般的营养成分如水分、灰分、粗脂肪、粗蛋白、氨基酸、脂肪酸等的含量来评价其质量，故本实验对其常规成分进行了比较，同时对其有害物质进行了检测，为制定哈蟆油的质量标准提供了科学依据，以及加快哈蟆油的GAP基地建设奠定了基础。

摘要： 本发明提供一种基于线粒体IGS56序列的哈蟆油真伪鉴定和定量方法，属于分子生物学检测和定量领域。公开了线粒体IGS56序列特征以及三对相关引物的序列特征，用于名贵药材哈蟆油真伪鉴定和定量分析的，IGS56序列为近源物种线粒体基因组序列比对中的高变异区域，首次实现了对近源物种来源的哈蟆油正伪品的鉴定，推广的技术门槛较低，同时能快速、稳定地区分哈蟆油正品与相关伪品。进一步，本发明还公布了一种使用F3/R3引物对进行哈蟆油药材定量分析的荧光定量PCR方法；该法特异性较高，相比药典中现行高效液相色谱法在种属特异性方面优势明显，本发明是对新版中国药典记载及现有技术的合理补充，具有较强的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种用于哈蟆油药材DNA条形码鉴定的PCR扩增引物，该引物对的正向引物序列如SEQ ID No.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示。本发明还提供了一种获得哈蟆油药材DNA条形码的扩增方法，采用如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物进行PCR扩增，PCR扩增的条件为：94°C变性1分钟；94°C变性1分钟，50°C‑54°C退火1.5分钟，72°C延伸1分钟，35个循环；72°C延伸5分钟。采用本发明的PCR扩增引物及扩增方法，其PCR扩增特异性强，能快速有效的获得哈蟆油药材DNA条形码，使利用DNA条形码技术进行哈蟆油药材及基原动物鉴定成为可能。

摘要： 本发明公开了一种基于DNA条形码技术的市售哈蟆油药材检验方法，包括：现场抽样；将现场抽样的样品进行实验室取样；获得实验室取样样品的COI条形码序列；将获得的COI条形码序列与中国林蛙COI特征条形码序列进行比对；根据比对结果判断基原物种的真伪，即是否与2015版中国药典收载物种一致。本发明首次建立基于DNA条形码技术的市售哈蟆油药材检验方法，其客观性、稳定性、准确性好。

摘要： 本发明公开了哈蟆油真伪鉴别的方法及专用引物。本发明提供了本发明提供用于哈蟆油真伪鉴别的引物对，为能扩增出DNA片段A的引物对；所述DNA片段A是以哈蟆油为模板，用序列1和序列2所示引物对进行扩增得到的产物。本研究通过对位点特异性PCR进行条件优化，实现了在40min内简单、快速、直观的鉴别哈蟆油及其常见混伪品的目的，有助于实现哈蟆油药材现场、准确、快速鉴定。

摘要： 本发明公开了一种哈蟆油基因组DNA提取方法，包括取哈蟆油药材，加入含酸活性水对样品进行复性，加入缓冲液ATL和蛋白酶K裂解样品；加入脂肪组织去除液酚/氯仿/异戊醇去除脂肪及蛋白；加入洗涤液洗涤，通过吸附柱吸附DNA，最终洗脱获得高纯度基因组DNA。本发明还提供了哈蟆油基因组DNA的提取试剂盒及应用。本发明的提取方法能有效提取哈蟆油药材中基因组DNA，获得高纯度的基因组DNA，为DNA条形码技术得到更为广泛的应用提供了良好的基础。

摘要： 本发明公开了一种快速提取哈蟆油基因组DNA的方法，包括1)取哈蟆油样品，加入Chelex‑100和蛋白酶K，先水浴保温，后高温终止，进行细胞裂解，离心后获得第一上清液；其中，Chelex‑100用于螯合所述哈蟆油样品中的非核酸有机物和使蛋白变性便于蛋白酶K进行酶解，蛋白酶K用于消化所述哈蟆油样品中的蛋白质；2)在所述第一上清液中加入酚/氯仿/异戊醇，去除残留的脂类和蛋白质；3)利用异丙醇或无水乙醇沉淀DNA。还提供了快速提取哈蟆油基因组DNA的试剂盒，以及在使用DNA条形码技术鉴定哈蟆油中的应用。本发明的提取方法能实现对干燥哈蟆油药材中基因组DNA的快速有效抽提，为DNA条形码技术得到更为广泛的应用提供基础。

摘要： 本发明公开了一种哈蟆油/林蛙油冻干粉的制备工艺，采用传统工艺与现代加工工艺相结合的生产模式，在传统饮片加工的干燥环节引进超低温真空冷冻干燥技术，能够完整地保留哈蟆油/林蛙油所富含多种有效营养成分，有效成分保有率在95％以上；溶胀、胶体磨研磨和冻干等核心程序中采用的是物理原理，无任何化学添加，只是哈蟆油/林蛙油的形状有所改变，哈蟆油/林蛙油所含的任何成分都没有变化，营养物质更易被人体吸收。

摘要： 本发明公开了一种哈蟆油/林蛙油冻干粉中不饱和脂肪酸含量的测定方法，系统的规定了哈蟆油/林蛙油冻干粉中不饱和脂肪酸的测定方法，经过严谨的测定和系统评估，可对哈蟆油/林蛙油冻干粉形成一个评价体系的参考指标，对哈蟆油/林蛙油冻干工艺和哈蟆油/林蛙油冻干制品的发展和推广具有重大意义。

摘要： 本发明提供一种基于线粒体IGS56序列的哈蟆油真伪鉴定和定量方法，属于分子生物学检测和定量领域。公开了线粒体IGS56序列特征以及三对相关引物的序列特征，用于名贵药材哈蟆油真伪鉴定和定量分析的，IGS56序列为近源物种线粒体基因组序列比对中的高变异区域，首次实现了对近源物种来源的哈蟆油正伪品的鉴定，推广的技术门槛较低，同时能快速、稳定地区分哈蟆油正品与相关伪品。进一步，本发明还公布了一种使用F3/R3引物对进行哈蟆油药材定量分析的荧光定量PCR方法；该法特异性较高，相比药典中现行高效液相色谱法在种属特异性方面优势明显，本发明是对新版中国药典记载及现有技术的合理补充，具有较强的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种非伤害采收哈蟆油的方法，采用人工干预手段促进活体哈蟆排卵，之后以哈蟆卵为原料提取哈蟆油，以卵膜和卵核分开处理，卵膜经过溶胀提取后直接作为哈蟆油成品组分，卵核经过一系列的提取并优化提取工艺，有效提取其中哈蟆油组分，最后将卵核提取物与卵膜结合得到哈蟆油产物，该制备工艺对哈蟆本体无伤害，其可重复产油，提升经济效益和哈蟆本体的价值，具有较高的推广应用意义。