PML/RARα融合基因

摘要： 目的探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)患者异常早幼粒细胞Auer小体发生率的影响因素。方法收集2018年5月至2020年5月该院确诊的38例APL患者,计数出现Auer小体的异常早幼粒细胞的比例作为Auer小体发生率。采用秩和检验比较不同PML/RARα融合基因类型、CD56与HLA-DR表达、性别、年龄患者Auer小体发生率的差异;采用Spearman相关分析异常早幼粒细胞各项流式表达率(CD13、CD33、CD117、CD38、CD64)及初诊白细胞计数(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)和融合基因剪接体相对表达量(PML/ABL)与Auer小体发生率之间的相关性,采用简单线性回归对Auer小体发生率的影响因素进行单因素分析。结果CD56阴性组的Auer小体发生率高于阳性组,PML/RARα融合基长链型(L型)Auer小体发生率高于短链型(S型),差异均有统计学意义(P<0.05);初诊WBC与Auer小体发生率呈负相关(r=-0.376,P<0.05)。结论CD56的表达、PML/RARα融合基因类型与患者初诊WBC均可影响APL患者Auer小体的发生率。

摘要： 目的探究分析采用PML-RARα融合基因方法检测急性早幼粒细胞白血病的准确率,进而指导临床诊断。方法选取于2017年1月—2018年1月间于该院进行诊断和治疗的64例急性早幼粒细胞白血病患者和64名健康体检者为研究对象,分别检测其血液中PML-RARα融合基因的阳性情况,以及治疗前后PML-RARα融合基因的表达情况。结果健康体检者的PML-RARα融合基因阳性率为0.00%,而白血病患者的阳性率为95.31%,则白血病患者中PML-RARα融合基因阳性率显著高于健康体检者(χ^2=116.5373,P<0.05);治疗前PML-RARα融合基因阳性率为95.31%,治疗后为73.44%,则治疗后PML-RARα融合基因的阳性率显著降低(χ^2=11.6148,P<0.05)。结论急性早幼粒细胞白血病患者的PML-RARα融合基因的阳性率较高,通过对PML-RARα融合基因的表达量进行检测可以用于临床诊断急性早幼粒细胞白血病,同时PML-RARα融合基因表达的强弱能够反应病情的程度。

摘要： 目的 自主研制用于检测白血病染色体PML/RARα融合基因的双色荧光原位杂交(FISH)检测试剂盒.方法 根据染色体基因图谱,选定合适的细菌人工染色体(BAC)克隆重叠群分别作为PML基因探针和RARα基因探针.对入选的BAC克隆进行STS-PCR鉴定和荧光原位杂交鉴定.最后将完成鉴定的PML探针标记红色荧光素,RARα探针标记绿色荧光素,加上配套试剂组成FISH检测试剂盒.用双盲法检测白血病临床样本37例,对自制探针和同类进口探针在各项技术参数上进行对比研究.结果 自制试剂盒检测PML/RARα融合基因与进口探针相比,其阴、阳性率和同类进口产品完全符合;自制探针的荧光信号更强,信噪比更高.结论 自主研制的PML/RARα融合基因FISH检测试剂盒设计合理、质量可靠,可用于替代价格昂贵的进口产品.%Objective To develop a dual-colour FISH kit for detecting the leukemia PML/RARα fusion gene. Methods Based on the chromosome and gene map, corresponding BAC clone contigs were selected as PML and RARα FISH probes located on chromosome 15q22 and 17q21 respectively. The PML FISH and RARα probes were labeled with red and green fluorophores, respectively. The self-developed FISH kit and the commercial imported one were compared in terms of multiple technical parameters detected by double blind studies of 37 cases of clinical hematological samples. Results The detection results were consistent between the self-developed FISH kit and the commercial imported one with respect to detecting PML/RARα gene translocation. The self-developed probes were comparable to the commercial imported FISH probes in terms of multiple technical parameters, such as appearance, physical characteristics, fluorencence quench and stability at cold storage. Furthermore, the self-developed probes possessed stronger fluorescence signal intensities and better signal noise ratios than the imported probes did. Conclusion The FISH diagnostic kit developed in this work could serve as a domestic replacement for the expensive imported products.

摘要： Objective To construct,express,and purify the prokaryotic expression vector for PML-RARα fusion gene related proteins.Methods PML-RARα-pET32a(+) plasmid was used as a template and 1 200 bp sequences of PML and RARα were amplified by polymerase chain reaction and subcloned into expression vector pET32a(+) to construct recombinant plasmid;then the ligated products were transformed into DH5α.The positive clone was propagated and the recombinant plasmids were extracted for further identification and sequencing.The correct recombinant plasmids were named after PML-Flag-pET32a(+) and Flag-RARα-pET32a(+) respectively.E.coli BL21(DE3) were transformed with PML-Flag-pET32a(+) and Flag-RARα-pET32a(+),respectively,and induced with IPTG for protein expression.Fusion protein with an N-terminal Histag could be purified by Ni2+-resin affinity chromatography.Purified protein was identified by SDS-PAGE and Western blotting.Results The purpose gene was got by PCR amplification;it was confirmed by EcoRI/HindⅢdouble enzyme digestion and DNA sequencing that the recombinant plasmids PML-Flag-pET32a(+) and Flag-RARα-pET32a(+) were constructed successfully.PML and RARα proteins were expressed efficiently after the recombinant plasmids had been transformed and induced in E.coli BL21(DE3);SDS-PAGE and Western blotting demonstrated that the purified proteins were interest proteins.Conclusions Construction of recombinant plasmids and expression and purification of the PML and RARα proteins laid a solid foundation for antibody preparation.%目的 构建PML-RAR o[融合基因相关重组表达质粒,在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并进行纯化.方法 利用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)以PML-RAR α全长质粒为模板分别扩增出长度均为1 200 bp的PML和RAR o[序列,并将它们分别插入PET32a(+)质粒中,构建重组表达质粒,化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆,菌落PCR筛选阳性转化子,双酶切和测序鉴定重组质粒的正确性.正确重组的表达质粒分别命名为PML-Flag-PET32a(+)和Flag-RARα-PET32a(+).将正确重组的表达质粒转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用表达蛋白的组氨酸“标签”(His-tag)进行Ni2+-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质.结果 PCR扩增获得目的基因,重组表达质粒经EcoRI/HindⅢ双酶切和测序鉴定证明构建正确.转化感受态BL21(DE3)并经诱导后得到高效表达,SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白.结论 成功构建重组表达质粒,并经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步的抗体制备等实验奠定了基础.

摘要： 目的：探讨荧光原位杂交技术（FISH）检测PML/RARα融合基因在急性早幼粒细胞白血病（APL）诊断中的应用价值。方法应用常规细胞遗传学分析28例APL患者的染色体核型，同时用FISH法检测PML/RARα融合基因。结果28例初诊的APL患者254例常规核型分析检出t(15；17)（q22；q12）；2例患者核型正常；另1例未检出t(15；17)，核型分析结果为涉及15和17号染色体的复杂异常；FISH检测所有病例均存在PML/RARα融合基因。结论 FISH法行PML/RARα融合基因检测特异性和敏感性好，是诊断APL的可靠方法。%Objective To explore the application value of detecting PML/RARα fusion gene in the diagnosis of acute promye-locytic leukemia(APL) with fluorescence in situ hybridization(FISH). Methods The chromosome karyotype of 28 cases of APL pa-tients was analyzed with the conventional cytogenetic analysis method and the PML/RARα fusion gene was detected with FISH method. Results Among 28 first diagnosed APL patients,the t (15;17)(q22;q12) was detected in 24 25 patients with the conven-tional karyotype analysis;Two patients were detected to be normal karyotype;And the t (15;17) was not detected in one case. The karyotype analysis results showed the complex abnormalities involving in the chromosome 15 and 17;The PML/RARα fusion gene was detected to exist in all cases with FISH detection. Conclusion The PML/RARα fusion gene detection with FISH method is a reliable way for the diagnosis of APL with fine specificity and sensitivity.

摘要： 目的:为了观察和分析急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL) PML/RARα融合基因首次转阴时间和首次转阴时间长短的临床意义.方法:选取我院初诊APL患者60例,按照APL临床路径行诱导缓解及缓解后巩固治疗和维持治疗;应用多重巢式PCR动态监测APL患者PML/ RARα融合基因的表达水平变化,计算首次转阴时间,随访观察并评价首次转阴时间的临床意义.结果:除3例死亡和1例失访外,其余56例初诊APL患者经正规治疗后,其PML/ RARα融合基因均在24至381 d之间首次转阴,平均首次转阴时间为(131±90)d.首次转阴时间在PML/RARα融合基因不同亚型之间存在差异,L型转阴时间较S型的短(P =0.032),而不同年龄、性别、危险度分层组别之间差异均无统计学意义.首次转阴后的56例患者分别随访25 d至1979 d,中位随访时间为946 d,其中1例133 d首次转阴患者维持3个月后转阳并且随后出现临床复发,其余55例患者均长期保持分子水平缓解.结论:初诊APL患者PML/RARα融合基因平均约在正规治疗后4个月首次转阴;不同基因亚型之间首次转阴时间存在差异.PML/RARα融合基因首次转阴时间可客观反映APL患者治疗后白血病细胞的消减水平,对临床治疗有提示作用,但不能作为判断预后的绝对依据;以PML/RARα融合基因动态监测微小残留病灶对分析APL复发具有重要的临床意义.

摘要： Objective To determine the biology feature of circulating endothelial cells (CECs) in acute promyelocytic leukemia (APL) patients compared to healthy donors, and analyze the relationship to expression of PML/RARαfusion gene.Methods CECs were sorted from peripheral blood by MACS and then counted by three color flow cytometry. The cells were identiifed by immunofluorescence staining for the expression of CD31, CD34, CD144, VEGFR-2 and CD133. These CECs were cultured in vitro and calculated to draw growth curve and determinate colony forming rate.ResultsThese CECs showed more increased quantity and proliferative potential as compared to healthy donors. The positive rate of CD133 and frequency of CECs is signiifcantly higher in APL patients than in healthy donors (P﹤0.05). There was higher CD133 positive rate and more than 8-fold elevated frequency of CECs in CD34+APL patients as compared to healthy donors. Higher CECs quantity and CD133 positive rate have positive correlation with expressions of PML/RARα fusion gene.Conclusion It may be helpful for evaluating prognosis and designing treatment strategy if we could accurately count and provide insight into these CECs.%目的：探讨急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia, APL）患者的循环内皮细胞（circulating endothelial cells, CECs）与健康者CECs在生物学特性上的差异，并分析其与PML/RARα融合基因的关系。方法免疫磁珠结合三色流式细胞仪分选计数APL患者的CECs。免疫荧光染色鉴定CECs表面CD31、CD144、VEGFR-2及CD133的表达情况，体外培养绘制其生长曲线，并测定CECs的集落形成率。结果 APL患者的CECs的数量及增殖能力明显高于对照组，16例APL患者CECs中CD133阳性率及集落形成率均高于对照组（P﹤0.05），其中CD34+APL患者CECs表达CD133高达（50.3±9.2）%，其集落形成率是对照组的8倍。APL患者CECs数量及CD133阳性率均与PML/RARα融合基因呈正相关。结论精确计数并深入了解CECs可能有助于评价预后及设计治疗策略。

摘要： 目的 探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的CD34表达与其临床特点、分子生物学特性的关系以及其在不同亚型APL中表达对疾病预后的影响.方法 回顾性分析安徽医科大学附属第一医院2009年12月至2013年10月收治并获得系统治疗的64例急性早幼粒细胞白血病患者的临床资料,了解其抗原表达与临床特点间的关系,并采用x2检验及Log-Rank检验对可能影响患者预后的危险因素进行统计学分析.结果 CD34+患者12例(18.8％),高表达于PML/RAR α-S型患者(9/19,47.4％),且常与CD2+、HLA-DR+共表达(7/13,53.8％对5/8,62.5％),差异有统计学意义(P＜0.05).CD34+与低完全缓解(CR)率密切相关(P＜0.05).WBC＜10×109/L组、CD34-组的总体生存(OS)率、无事件生存(EFS)率显著高于WBC≥10×109/L组、CD34+组,L型组、CD2+组EFS率显著高于S型组、CD2-组,差异均有统计学意义(P＜0.05);但L型与S型组、CD2+组与CD2-组OS差异无统计学意义(P＞0.05).结论 对CD34免疫表型分析可以区分不同生物学特性及具有不同预后的APL亚型.

摘要： 目的 探讨实时定量PCR检测急性早幼粒细胞白血病(APL) PML/RARα融合基因表达水平的意义.方法 用扩增培养的NB4细胞的PML/RARα融合基因进行梯度稀释作为标准品,ABL作为内参,建立标准曲线.采用TaqMan法进行实时定量PCR,并对方法的可靠性、可重复性及灵敏性进行测定.对14例APL患者在初治、诱导缓解及巩固治疗3个时期的PML/RARα mRNA转录本水平进行动态定量监测,结果以NQ表示,NQ=PML/RARα mRNA的拷贝数/ABL mRNA的拷贝数×105.结果 实时定量PCR方法可以检测出1×10-5μ g NB4细胞cDNA中PML/RARα的融合基因,其重复性和稳定性Ct值变异系数分别为1.77％和2.11％.14例患者初治时骨髓PML/RARα融合基因平均水平为3 731,经全反式维甲酸、三氧化二砷双诱导缓解时PML/RARα融合基因平均水平为231,化疗与维甲酸序贯巩固治疗2个疗程后PML/RARα融合基因平均水平为116.治疗前后比较,PML/RARα基因转录本水平明显下降(P＜0.05).结论 实时定量PCR检测PML/RARα融合基因表达敏感性好、特异性高、重复性好,可用于急性早幼粒细胞的诊断和微小残留病的检测.

摘要： 目的:探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)PML/RARα融合基因首次转阴时间及其临床意义.方法：选取我院经白血病MICM分型诊断初次确诊为PML/RARα融合基因阳性(包括L型、S型及S突变型)的APL患者21例,按照APL临床路径行ATRA和As203双诱导治疗以及缓解后巩固和维持治疗;同时经多重巢式RT-PCR动态监测患者PML/RARα融合基因表达水平,并随访观察和评价其临床意义.

摘要： 目的:探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)PML/RARα融合基因首次转阴时间及其临床意义.方法：选取我院经白血病MICM分型诊断初次确诊为PML/RARα融合基因阳性(包括L型、S型及S突变型)的APL患者21例,按照APL临床路径行ATRA和As203双诱导治疗以及缓解后巩固和维持治疗;同时经多重巢式RT-PCR动态监测患者PML/RARα融合基因表达水平,并随访观察和评价其临床意义.

摘要： 目的:探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)PML/RARα融合基因首次转阴时间及其临床意义.方法：选取我院经白血病MICM分型诊断初次确诊为PML/RARα融合基因阳性(包括L型、S型及S突变型)的APL患者21例,按照APL临床路径行ATRA和As203双诱导治疗以及缓解后巩固和维持治疗;同时经多重巢式RT-PCR动态监测患者PML/RARα融合基因表达水平,并随访观察和评价其临床意义.

摘要： 目的:探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)PML/RARα融合基因首次转阴时间及其临床意义.方法：选取我院经白血病MICM分型诊断初次确诊为PML/RARα融合基因阳性(包括L型、S型及S突变型)的APL患者21例,按照APL临床路径行ATRA和As203双诱导治疗以及缓解后巩固和维持治疗;同时经多重巢式RT-PCR动态监测患者PML/RARα融合基因表达水平,并随访观察和评价其临床意义.

摘要： 本发明公开了一种融合基因及其制备方法、融合基因表达载体及其构建方法、融合基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。该融合基因，将蛋白转导域TAT连接入利尿多肽HKI序列，借助TAT的高效跨膜转运作用，使HKI快速地穿过食道系统内膜进入体内位点，确保HKI在体内运送过程中稳定发挥作用，使棉铃虫过度排泄死亡。本发明融合基因表达载体，将融合基因构建于植物表达载体pB Ⅰ 121中，由35S启动子驱动表达，在植株内高效表达，棉铃虫取食本发明融合基因表达载体遗传转化的转基因植株后3龄棉铃虫幼虫体重增幅明显减少，死亡率高。本发明融合基因工程菌，浸染待发芽植株，实现融合基因遗传转化植株，培育出转基因抗虫植株。

摘要： 本发明公开了一种融合基因及其制备方法、融合基因表达载体及其构建方法、融合基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。该融合基因，将蛋白转导域TAT连接入利尿多肽HKI序列，借助TAT的高效跨膜转运作用，使HKI快速地穿过食道系统内膜进入体内位点，确保HKI在体内运送过程中稳定发挥作用，使棉铃虫过度排泄死亡。本发明融合基因表达载体，将融合基因构建于植物表达载体pB Ⅰ 121中，由35S启动子驱动表达，在植株内高效表达，棉铃虫取食本发明融合基因表达载体遗传转化的转基因植株后3龄棉铃虫幼虫体重增幅明显减少，死亡率高。本发明融合基因工程菌，浸染待发芽植株，实现融合基因遗传转化植株，培育出转基因抗虫植株。

摘要： 本发明的目的在于，提供一种在癌症中鉴定能够成为预测药剂的治疗有效性的指标的基因、以该基因为目标预测药剂的治疗有效性的新型的方法，并进行了肺腺癌的全转录组测序。其结果，鉴定了KIF5B基因和RET基因的框内融合转录产物。另外，该KIF5B-RET基因融合在日本人肺腺癌的6/319（2%）、美国人肺腺癌的1/80（1%）中被检测出。而且发现，该7例均不显示EGFR、KRAS、ALK癌基因这样的公知的活化突变，因此，判明该基因融合为癌化中的责任突变（驱动突变）。该基因融合被认为是导致RET酪氨酸激酶蛋白的稳定活化的因素，因此，对于检测出该基因融合的患者，以RET酪氨酸激酶抑制剂进行的治疗是有效的。

摘要： 本发明提出一种BCR‑ABL融合基因检测试剂盒和BCR‑ABL融合基因检测方法。所述BCR‑ABL融合基因检测试剂盒包括多种引物和多种探针；所述BCR‑ABL融合基因检测方法包括：以所得样本的RNA为模板，利用多种所述引物和多种所述探针对所述RNA进行微滴式数字PCR扩增；计算BCR‑ABL融合基因与ABL基因拷贝数比值，得到BCR‑ABL融合基因的突变比例。本发明可有效检测3种类型的BCR‑ABL融合基因0.001％的低频突变，特异性强，灵敏度高，检测周期短，结果严谨可靠，实用性强，为慢粒白血病患者诊断以及临床监测提供科学依据。

摘要： 本发明公开了融合基因检测参考品的制备方法及融合基因检测参考品的应用。该方法采用阴性DNA对融合基因阳性片段库进行稀释，得到包括至少1个稀释梯度的融合基因检测参考品；所述融合基因阳性片段库包括至少11个融合基因阳性片段。本发明采用多个融合基因阳性片段，检测覆盖范围广，为将来克服DNA层面融合检测难、漏检多提供了一个新思路，为融合基因检测产品的性能评价标准提供了一个检测的样板，为融合检测技术的进步提出了一个新指标，具有广泛的应用前景和巨大的产业价值。

摘要： 本发明公开了修饰间充质干细胞的融合基因、具有该融合基因的质粒、慢病毒颗粒、干细胞及应用，该融合基因包含编码分泌信号蛋白的核酸人工序列，编码肺表面活性物质蛋白D的核酸人工序列，编码人源化肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的核酸人工序列，编码自剪切多肽的核酸人工序列，编码Tat蛋白的核酸人工序列，编码单纯疱疹病毒胸苷激酶的核酸人工序列；且以上核酸人工序列顺序依次串联。本发明构建了共同表达TRAIL和HSV‑TK的载体，产生双重的杀伤肿瘤效果。

摘要： 本发明公开了一种基于Ion Torrent测序平台融合基因检测文库的构建方法及融合基因检测的方法。其中，该构建方法包括以下步骤：S1，对样品DNA进行片段化，得到DNA片段；S2，对DNA片段进行末端修复及加碱基A；S3，连接序列已知的接头；S4，进行PCR扩增，得到样本核酸文库；S5，将样本核酸文库基于目标区域捕获平台的探针杂交捕获融合基因及伴侣基因的DNA片段；以及S6，将S5的产物通过PCR引入测序接头序列，得到融合基因检测文库。应用本发明的技术方案，解决了现有技术中Ion Torrent测序平台因RNA样本不合格导致无法检测基因融合及无法检测未知融合断点的融合类型问题。

摘要： 本发明提供了一种Nisin-rbLF-N融合基因、含有该基因序列的表达载体，以及能够高效表达Nisin-rbLF-N融合基因的重组毕赤酵母菌；另外，本发明还提供了所述重组毕赤酵母菌的诱导培养方法。本发明通过PCR方法，将融合基因Nisin-rbLF-N克隆到真核表达载体pPIC9K中，转化毕赤酵母GS115后进行诱导表达，能够表达出可观的融合蛋白。去糖基化后的融合蛋白经过复合蛋白酶酶解，具有抑干酪乳杆菌(G+菌)和大肠杆菌(G-菌)的作用。

摘要： 本发明公开了一种藻蓝蛋白/嵌合降钙素融合基因、融合蛋白、重组质粒、转基因酿酒酵母及应用。本发明将构建得到的线性rDNA2‑leu2‑Ppgk‑cpcB/5hsCT‑rDNA1片段以rDNA为同源重组位点介导整合到亮氨酸缺陷型酿酒酵母中获得转基因酵母BY4742‑LPB5，实现了外源基因在酿酒酵母细胞内的高效稳定表达，大大提高了降钙素的表达稳定性，且消除了抗生素等选择标记给后期工业化生产带来的环境污染不良影响或食品安全性问题。酿酒酵母生产周期短，发酵技术成熟，安全性好，且转基因酿酒酵母不需要蛋白提取、切割加工和纯化等繁琐工艺就可以直接口服，极大地降低了工业化生产成本。

摘要： 本发明公开了一种基于基因修饰得到的人重组干扰素融合基因、融合蛋白及其制备方法，属于生物制品技术领域。基于基因修饰得到人重组干扰素IFN‑β的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。由基因编码的融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明对人重组干扰素IFN‑β基因序列进行扩增，与质粒pET‑28a(+)相连接得到融合基因，再将融合基因转染至大肠杆菌BL21(DE3)中进行扩增和表达得到了可溶性的融合蛋白，解决了大肠杆菌中无法获得可溶性干扰素的问题。本发明还提供了从稳定细胞系获得高纯度的IFN‑KE50蛋白的纯化方法，由于其具有组氨酸标签，用固定金属镍进行亲和层析可以对目标蛋白进行有效的纯化，纯化后蛋白纯度可达到94.8％。简化了后续的纯化步骤，并可以获得更高的纯度。