A549

摘要： 目的:探讨A激酶锚定蛋白9(AKAP9)对肺腺癌细胞A549的作用及其可能的分子机制。方法:通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测shRNA的沉默效果;通过MTT和克隆形成实验检测AKAP9对肺腺癌细胞A549增殖的影响;Transwell实验检测AKAP9对肺腺癌细胞A549迁移的影响;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测周期相关蛋白P27、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)的表达和细胞外信号调节激酶(ERK)通路中表皮生长因子受体(EGFR)、ERK的磷酸化水平。结果:RT-qPCR和Western blot结果显示,shRNA可以有效地沉默肺腺癌细胞A549中AKAP9的表达(P<0.01)。MTT和克隆形成结果示,与对照组相比,沉默AKAP9显著抑制癌细胞A549的增殖和克隆形成能力(P<0.01)。Transwell实验示,与对照组相比,沉默AKAP9显著抑制癌细胞A549的迁移能力(P<0.01)。流式细胞术结果示,与对照组相比,沉默AKAP9可以诱导肺腺癌细胞G1-S期阻滞(P<0.01)。Western blot结果示,与对照组相比,沉默AKAP9增加细胞周期负性调控因子P27,减少正性调控蛋白Cyclin D1、CDK4的表达,并降低EGFR、ERK的磷酸化水平(P<0.01)。结论:沉默AKAP9可以通过抑制ERK通路活性减弱肺腺癌细胞A549增殖和迁移的能力。

摘要： 目的探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549,通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA;通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平;Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况;CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒,CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果HOXB13促进了A549细胞的增殖(P<0.05);生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p;在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后,HOXB13蛋白表达量降低(P<0.05);而干扰miR-20a-5p表达后,HOXB13蛋白的表达量升高(P<0.05);细胞增殖实验结果显示,miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反,miR-20a-5p及HOXB13同时过表达,细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a-5p及单独过表达HOXB13组之间(P<0.05)。结论miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。

摘要： 目的 研究紫芜菁乙醇提取物对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的肺上皮细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法 用150μmol/L H_(2)O_(2)诱导肺上皮细胞A549,用50、100和200μg/ml紫芜菁乙醇提取物处理H_(2)O_(2)诱导的A549细胞,将细胞分为NC组、H_(2)O_(2)组、50、100、200μg/ml紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组、miR-NC+H_(2)O_(2)组、miR-223-3p+H_(2)O_(2)组、anti-miR-NC+H_(2)O_(2)组、anti-miR-223-3p+H_(2)O_(2)组、anti-miR-NC+紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组、anti-miR-223-3p+紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术检测A549细胞存活率和凋亡率,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、白细胞介素(IL)-8和p-IκBα蛋白表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-223-3p含量。结果 H_(2)O_(2)组A549细胞中miR-223-3p水平显著低于NC组(P<0.05);200μg/ml紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组的A549细胞中miR-223-3p含量显著高于H_(2)O_(2)组(P<0.05)。与miR-NC+H_(2)O_(2)组相比,miR-223-3p+H_(2)O_(2)组A549细胞存活率、miR-223-3p、CyclinD1水平均显著升高,细胞凋亡率、酶切caspase-3、IL-8和p-IκBα水平均显著降低(P<0.05)。与anti-miR-NC+H_(2)O_(2)组相比,anti-miR-223-3p+H_(2)O_(2)组A549细胞存活率、miR-223-3p、CyclinD1水平均显著降低,细胞凋亡率、酶切caspase-3、IL-8和p-IκBα水平均显著升高(P<0.05),与anti-miR-NC+紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组相比,anti-miR-223-3p+紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组A549细胞存活率、miR-223-3p、CyclinD1水平显著降低,细胞凋亡率、酶切caspase-3、IL-8和p-IκBα水平显著升高(P<0.05)。结论 紫芜菁乙醇提取物通过上调miR-223-3p,抑制核转录因子(NF)-κB信号通路介导的IL-8表达,促进H_(2)O_(2)诱导的A549细胞存活并抑制细胞凋亡。

摘要： 目的研究粗糠柴霉素对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响及潜在作用机制。方法MTT法测定不同浓度粗糠柴霉素对A549细胞的增殖抑制率,流式细胞术测定A549细胞凋亡率,克隆形成实验测定不同放射剂量处理后细胞存活分数,Western blot检测PAK6蛋白表达,qRT-PCR检测PAK6 mRNA的表达。结果8μM粗糠柴霉素处理A549细胞48h,细胞抑制率达(51.34±5.07)%,细胞抑制率和凋亡率较对照组均显著增加(P<0.05);随着照射剂量的增加,粗糠柴霉素组A549的细胞存活分数较对照组显著下降(P<0.05);qRT-PCR和Western Blot实验表明,粗糠柴霉素处理后A549细胞中PAK6基因的mRNA和蛋白表达量与对照组相比显著下降(P<0.05),PAK6过表达后,粗糠柴霉素对A549的抑制率和凋亡率较对照组均显著下降(P<0.05)。结论粗糠柴霉素通过抑制PAK6表达,抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖,促进细胞凋亡,增强其放射敏感性。粗糠柴霉素有望成为肺癌临床放射增敏剂。

摘要： 目的将氨基酸引入喹唑啉母核,探究含喹唑啉结构的氨基酸衍生物的抗肿瘤细胞增殖活性。方法以DL-苯丙氨酸、L-苯丙氨酸、D-苯丙氨酸和3-氨基-3-苯基丙酸为原料合成关键中间体,与喹唑啉母核连接合成一系列4-苯氨基喹唑啉衍生物。采用CCK-8法测试目标化合物对非小细胞肺癌细胞(A549)的抗增殖活性。通过LeDock软件测试目标化合物与EGFR蛋白的结合效果。结果合成了21个新型4-苯氨基喹唑啉衍生物,经1H NMR、LC-MS确证其结构。体外抗肿瘤实验结果表明,目标化合物12u与12o的抗肿瘤活性与阳性对照药吉非替尼相当。LeDock软件测试结果与体外抗肿瘤实验结果一致。结论新型4-苯氨基喹唑啉衍生物具有抗非小细胞肺癌的作用,为进一步探究含喹唑啉的氨基酸抗肿瘤药物打下基础。

摘要： 目的探讨外周血血小板对肺腺癌A549细胞增殖和迁移力的影响。方法将从健康人外周血中分离到的血小板与A549细胞共培养,采用CCK-8实验检测A549细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果共培养1 h,镜下可见血小板向瘤细胞聚集。血小板可增强A549细胞的增殖力,并存在一定的剂量依赖性,共培养时间对瘤细胞增殖力的影响与血小板的加入量有关(P<0.05)。与血小板共培养的A549细胞数穿透Transwelll小室基底膜的数量(128.6±16.0)明显多于A549单独培养组(84.4±12.0),差异有统计学意义(P<0.05)。结论血小板可诱导肺腺癌A549细胞的增殖和迁移,血小板有望成为治疗肺癌的靶点。

摘要： 目的探讨miR-181c-5p调控非小细胞肺癌细胞A549的潜在机制。方法检测非小细胞肺癌细胞A549和人正常肺细胞HLF-a中miR-181c-5p的表达水平。过表达或敲低miR-181c-5p后,检测非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平。通过miRDB在线分析miR-181c-5p潜在底物,过表达miR-181c-5p后,通过实时荧光定量PCR检测潜在底物的表达水平。敲低潜在底物后,检测非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平。结果miR-181c-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的表达水平低于人正常肺细胞HLF-a(P<0.05)。过表达miR-181c-5p后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡上升(P<0.05);敲低miR-181c-5p后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡下降(P<0.05)。敲低TRIM71时,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平上升(P<0.05)。过表达TRIM71后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平下降(P<0.05)。过表达miR-181c-5p后,TRIM71的蛋白水平下降;而敲低miR-181c-5p后,TRIM71的蛋白水平上升。敲低TRIM71后,非小细胞肺癌细胞A549的P53水平上升;而过表达TRIM71后,非小细胞肺癌细胞A549的p53水平下降。过表达miR-181c-5p后,非小细胞肺癌细胞A549的p53水平上升;而敲低miR-181c-5p后,非小细胞肺癌细胞A549的p53水平下降。结论miR-181c-5p通过靶向TRIM71 mRNA的3端非编码区后降低了TRIM71的表达水平,随后凋亡活化基因p53的蛋白水平上升,最后促进了非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。

摘要： 目的分析肺炎克雷伯菌(KP)的毒力基因及耐药性分布,研究高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)与经典肺炎克雷伯菌(cKP)感染的肺炎患者Toll样受体4(TLR4)在血清及细胞水平的表达及TLR4与临床预后的相关性。方法收集患者菌株及血清,检测菌株毒力基因及耐药性,将所收集临床菌株分为hvKP组与cKP组,ELISA方法检测患者血清中的TLR4水平,比较各组TLR4表达的差异及与患者临床肺炎评分的相关性,并通过hvKP与cKP菌株分别侵染人肺泡上皮细胞A549,qRT-PCR方法检测TLR4的mRNA表达水平。结果hvKP组毒力基因中kfu、rmpA1、rmpA2的检出率最高,分别达100%、87.8%、80.5%。hvKP组的血清TLR4水平相比cKP组明显升高,在细胞mRNA水平检测到同样结果,并且TLR4水平与临床预后的PSI评分、CURB-65评分呈正相关。结论rmpA1、rmpA2及magA基因联合诊断hvKP准确性较高,hvKP感染引起血清及细胞水平TLR4的更高表达,TLR4水平与临床预后评分呈正相关性,血清TLR4水平可能作为KPN患者尤其是hvKP感染的患者诊断及预后的检测指标。

摘要： 目的:探讨甘草查尔酮B(LCB)对于人非小细胞肺癌A549细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法和平板克隆形成法检测LCB对A549细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞技术检测对细胞周期、凋亡的影响;采用Western blotting法检测线粒体凋亡蛋白表达。结果:LCB可显著抑制A549细胞的增殖。LCB经处理后将A549细胞阻滞在G0/G1期(P<0.05),同时细胞凋亡率也明显增加(P<0.05)。Bax/Bcl-2比值及Caspase-3蛋白表达明显上升(P<0.05)。结论:LCB可通过阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,从而抑制非小细胞肺癌A549的增殖。

摘要： 目的:研究角叉菜中粗多酚提取工艺及其抗癌活性。方法:采用超声辅助乙醇提取,福林酚法测定含量,并分别采用苯酚硫酸法、考马斯亮蓝G250法、灼烧法和酸碱处理法测定粗多酚中的多糖、蛋白质、总灰分和粗纤维成分。用CCK-8细胞活力测定法测定角叉菜粗多酚对人肺癌A549和H1975细胞活力的影响。结果:乙醇体积分数为61%、超声时间为41 min,超声温度为60°C时,多酚得率为24.8%,多糖6.94%,蛋白质17.1%,总灰分33.4%,粗纤维1.83%。结论:角叉菜粗多酚主要组分对人肺癌细胞活力具有一定抑制作用。

摘要： 一种促进青梗菜和四九菜心增大增绿的光照培养方法，涉及青梗菜和四九菜心的种植培养。在青梗菜和四九菜心幼苗生长期间，采用人工光源对青梗菜和四九菜心幼苗进行照射，有利于青梗菜和四九菜心幼苗叶片生长，叶片变绿，叶绿素积累。所述人工光源的供光模式为常规白光+低剂量UV‑B光照的供光模式。低剂量UV‑B光的波长为280～320nm，光量子通量密度为3μmol·m‑2·s‑1。适用于全人工光青梗菜和四九菜心幼苗生长。优化光照方法，促进青梗菜和四九菜心幼苗生长，缩短生产周期，减少能耗。方法简单，操作便捷，在农业现代化生产上具有广阔的应用空间与市场前景。

摘要： 一种富贵锑控电位富集并制备四九金的方法，富贵锑破碎磨细至要求粒度后，在纯盐酸体系加入双氧水控电位氧化浸出，浸出后料浆加入铜粉控电位置换，置换渣再用浓硫酸浸煮后得到粗金粉，粗金粉在盐酸溶液中加入双氧水控电位氯化分金，分金液加入氢氧化钠和亚硫酸钠控电位还原得到金粉，金粉经过洗涤后得到四九金粉。本发明的实质是采用控电位方式分别实现了氧化浸出、置换、氯化分金和还原等过程可调可控的目的，金和银的直收率分别达到99.9%和99.0%以上。本发明具有金属分离效果好、技术指标稳定和工艺流程短等优点。

摘要： 一种银阳极泥控电位制备四九金的方法，银阳极泥在硝酸溶液中浸出，硝酸浸出渣再用浓硫酸浸煮后得到粗金粉，粗金粉在盐酸溶液中加入双氧水控电位氯化分金，料浆经过冷却后固液分离，分金液加入氢氧化钠和亚硫酸钠控电位还原得到还原金粉，还原金粉经过浓硫酸精炼后得到四九金粉。本发明的实质是采用控电位方式实现了银阳极泥制备四九金过程的可调可控，制备了纯度为99.99%的金粉，金的直收率达到99.9%以上，具有金直收率高、工艺流程稳定和产品纯度高的优点，克服了传统王水溶解方法存在的环境污染问题。

摘要： 本发明属于有色冶金领域中的贵金属冶炼技术，涉及一种银阳极泥一段化学还原精炼制备四九金的方法。方法为银阳极泥硝酸分银‑分银渣王水分金‑分金液深度除杂‑除杂后液草酸一段还原‑还原金粉加水煮沸‑盐酸浸出。本发明的实质是采用多种手段逐级强化杂质与黄金的分离：银阳极泥硝酸浸出‑浸出渣王水分金‑分金液深度除杂，确保了除杂后液草酸一段还原时，易还原析出的铂、钯，以及易沉淀析出的铜、银、铅和铋等杂质金属混入还原金粉的数量得到了有效控制。继而，还原金粉经过水煮沸洗涤‑盐酸浸出，即可稳定获得国标四九金粉直收率96％‑99％的工艺指标。本发明工艺流程简短，操作简单，能良好适应大规模、小规模的黄金生产过程。

摘要： 一种促进青梗菜和四九菜心增大增绿的光照培养方法，涉及青梗菜和四九菜心的种植培养。在青梗菜和四九菜心幼苗生长期间，采用人工光源对青梗菜和四九菜心幼苗进行照射，有利于青梗菜和四九菜心幼苗叶片生长，叶片变绿，叶绿素积累。所述人工光源的供光模式为常规白光+低剂量UV‑B光照的供光模式。低剂量UV‑B光的波长为280～320nm，光量子通量密度为3μmol·m

摘要： 一种银阳极泥控电位制备四九金的方法，银阳极泥在硝酸溶液中浸出，硝酸浸出渣再用浓硫酸浸煮后得到粗金粉，粗金粉在盐酸溶液中加入双氧水控电位氯化分金，料浆经过冷却后固液分离，分金液加入氢氧化钠和亚硫酸钠控电位还原得到还原金粉，还原金粉经过浓硫酸精炼后得到四九金粉。本发明的实质是采用控电位方式实现了银阳极泥制备四九金过程的可调可控，制备了纯度为99.99%的金粉，金的直收率达到99.9%以上，具有金直收率高、工艺流程稳定和产品纯度高的优点，克服了传统王水溶解方法存在的环境污染问题。

摘要： 一种富贵锑控电位富集并制备四九金的方法，富贵锑破碎磨细至要求粒度后，在纯盐酸体系加入双氧水控电位氧化浸出，浸出后料浆加入铜粉控电位置换，置换渣再用浓硫酸浸煮后得到粗金粉，粗金粉在盐酸溶液中加入双氧水控电位氯化分金，分金液加入氢氧化钠和亚硫酸钠控电位还原得到金粉，金粉经过洗涤后得到四九金粉。本发明的实质是采用控电位方式分别实现了氧化浸出、置换、氯化分金和还原等过程可调可控的目的，金和银的直收率分别达到99.9%和99.0%以上。本发明具有金属分离效果好、技术指标稳定和工艺流程短等优点。