p-Akt

摘要： Objective:To investigate the effects of Qishen Yiqi dropping pills serum on KATP channel opening and PI3K/AKT signaling pathway of hypoxic/reoxygenated H9C2 cardiocytes.Methods:H9C2 cardiocytes cultured in vitro were randomly divided into five groups,A:H9C2 cell group B:H9C2 cells+H2O2 model group C:H9C2 cells+H2O2 model+Qishen Yiqi group D:H9C2 cells+H2O2 model+Qishen Yiqi+wort group E:H9C2 cells+H2O2 model+Qishenyiqi+5-HD group,the drug intervention is according to the corresponding conditions.CCK-8 method was used to detect the cell activity of each group;Western blot was used to detect the expression of AKT and P-Akt proteins in myocardial cells in each group.The current was recorded by the standard patch clamp whole cell recording method,and the current was collected and analyzed by Pclamp6.0 software.Results:CCK-8 test results showed that compared with group A,the activity of myocardial cells in group B was significantly decreased,and the difference was statistically significant(P0.05);The results of whole cell patch clamp experiment showed that the outward current of B was significantly increased compared with that of A,and the difference between groups was statistically significant(P<0.01);compared with group B,cardiomyocytes in group C further increased the outward current,and the difference between groups was statistically significant(P<0.01);compared with C,the current of D and E group were significantly decreased,with statistical significance between groups(P<0.01).Conclusion:QishenYiqi dropping pills can protect cardiomyocytes by activating p-Akt protein expression and KATP channel opening in H9C2 cardiomyocytes.

摘要： 目的:探讨芪参益气滴丸含药血清对缺氧/复氧H9C2心肌细胞KATP通道开放及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:体外培养H9C2心肌细胞随机分为5组,即A:H9C2细胞组,B:H9C2细胞+H_(2)O_(2)模型组,C:H9C2细胞+H_(2)O_(2)模型+芪参益气组,D:H9C2细胞+H_(2)O_(2)模型+芪参益气+PI3K/AKT信号通路阻断剂(wort)组,E:H9C2细胞+H_(2)O_(2)模型+芪参益气+mitoKATP特异性阻断剂(5-HD)组,按照相应的条件进行给药干预。CCK-8法检测各组心肌细胞活性;Western blot法检测各组心肌细胞AKT、pAKT蛋白的表达。标准膜片钳全细胞记录方法记录电流,由Pclamp6.0软件采集和分析电流。结果:CCK-8检测结果显示:与A组相比,B组心肌细胞活性明显下降,差异具有统计学意义(P0.05)。全细胞膜片钳实验结果显示:与A组相比,B组外向电流显著增加,组间差异具有统计学意义(P<0.01);与B组相比,C组的心肌细胞进一步增加外向电流,组间差异具有统计学意义(P<0.01);与C组相比,D、E组电流明显降低,组间具有统计学意义(P<0.01)。结论:芪参益气滴丸通过激活缺氧/复氧H9C2心肌细胞中p-AKT蛋白的表达及KATP通道的开放,对心肌细胞起到保护作用。

摘要： 目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)信号通路中相关蛋白磷酸化PI3K(phosphorylated phosphoinositide 3-kinase,p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)在胃癌组织中的表达与胃癌相关病理参数之间的关系。方法收集2017年1月至2018年12月南昌大学第二附属医院经胃镜病理确诊为胃癌并行手术切除患者的胃癌标本(n=100)和对应癌旁组织(n=100),以及正常胃黏膜组织(n=48),比较3种组织中p-PI3K和p-Akt的表达情况,探讨PI3K/Akt信号通路相关蛋白与胃癌相关病理参数之间的关系。结果p-PI3K在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中的阳性表达率分别为55.0%、23.0%及14.6%;p-Akt在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中的阳性表达率分别为29.0%、13.0%及8.3%,胃癌组织中p-PI3K、p-Akt的表达率均显著高于癌旁组织及正常胃黏膜,差异均有统计学意义(P0.05)。肿瘤病理分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、浸润深度穿透浆膜及淋巴结转移的患者胃癌组织中p-PI3K、p-Akt的阳性率更高(P<0.05)。结论p-PI3K和p-Akt在胃癌组织中高表达,且与胃癌的相关病理参数存在显著相关性,PI3K/Akt信号通路可能参与了胃癌的发生与发展。

摘要： 目的:观察中药复方乳岩宁联合依西美坦对MCF-7(michigan cancer foundation-7,MCF-7)乳腺癌细胞周期及ERα(estrogen receptorα,ERα)、p-Akt(phosphorylated-protein kinase B,p-Akt)蛋白表达的影响,探讨中药复方乳岩宁联合依西美坦抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖的信号转导通路。方法:将40只造模成功的绝经荷瘤裸鼠随机分为模型组、依西美坦组、乳岩宁组、结合组(乳岩宁+依西美坦)。连续给药21天后脱颈处死裸鼠,完整剥离出瘤体,切开标本取材。采用碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染法测乳腺癌细胞周期,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测乳腺癌组织中p-Akt、ERα蛋白表达。结果:各用药组G_(0)/G_(1)(zero/first gap)期细胞比例增多,S期比例减少,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组裸鼠瘤组织中ERα、p-Akt蛋白高表达,与各用药组相比差异有统计学意义(P<0.01);各用药组均可下调ERα、p-Akt蛋白表达,其中结合组作用更显著,与乳岩宁组、依西美坦组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:乳岩宁联合依西美坦可能通过抑制组织细胞周期进程,下调癌组织中p-Akt、ERα蛋白表达来抑制PI3K-Akt信号通路的活性,实现抑制乳腺癌细胞增殖,同时中药乳岩宁对依西美坦有协同作用。

摘要： 目的 通过研究象皮生肌膏对大鼠慢性难愈性创面模型PTEN、p-AKT、VEGF蛋白表达的影响,探讨象皮生肌膏促进创面愈合的作用机制.方法 从72只SD雄性大鼠中随机选取18只为空白组,其余54只大鼠使用全层皮肤缺损法制备慢性难愈性创面模型,并随机分为实验组、对照组、模型组,每组18只.造模完成后实验组予象皮生肌膏外敷,对照组予重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶外敷,模型组和空白组予生理盐水外涂,于造模后的第3、7、14天观察创面愈合情况,计算创面愈合率,HE染色观察皮肤组织形态,ELISA检测各组皮肤组织PTEN、p-AKT、VEGF蛋白表达情况.结果 第3、7、14天实验组、对照组创面愈合率均高于模型组(P＜0.05),且第7天实验组优于对照组(P＜0.05).HE染色结果显示,空白组第3、7、14天皮肤组织完整,前后无明显形态学变化;模型组第3、7天创面组织大量炎性细胞浸润、表皮大量坏死脱落,第14天见少量毛细血管形成;实验组及对照组第3天炎性细胞浸润、表皮灶性坏死脱落,第7、14天炎性细胞浸润逐渐减少、较多成纤维细胞和毛细血管增生、肉芽组织基本形成.第3、7、14天空白组PTEN、p-AKT、VEGF蛋白表达水平均无明显差异(P＞0.05).第3、7、14天模型组PTEN蛋白表达水平均低于空白组(P＜0.05),实验组及对照组均低于模型组(P＜0.05),且第7天达到最低水平(P＜0.05).第3、7、14天模型组p-AKT蛋白表达水平均高于空白组(P＜0.05),实验组及对照组均高于模型组(P＜0.05),且第7天达到最高水平(P＜0.05).第3、7、14天模型组VEGF蛋白表达水平均低于空白组(P＜0.05),实验组及对照组均高于模型组(P＜0.05),且第7天达到最高水平(P＜0.05).结论 象皮生肌膏能降低大鼠创面中PTEN蛋白表达水平、提高p-AKT、VEGF蛋白表达水平,加快慢性创面愈合速度,调控PTEN/AKT/VEGF信号通路可能是象皮生肌膏促进慢性创面愈合的机制之一.

摘要： 目的 检测人类叉头框O3(forkhead box O3,Foxo3)蛋白、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein ki-nase B,P-Akt)在中耳胆脂瘤的表达和DAPI核染色情况.方法 应用免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)检测中国医科大学附属盛京医院2019年8月-11月期间30例中耳胆脂瘤标本(分为原发性胆脂瘤组和继发性胆脂瘤组)及15例正常皮肤标本中Foxo3和DAPI核染色情况;应用Western blot免疫印迹法检测以上标本中P-Akt(ser473)、Foxo3及内参GAPDH的表达情况;应用SPSS 22.0统计软件进行统计学分析.结果 ①免疫荧光实验显示,Foxo3定位于胆脂瘤和正常皮肤的细胞核和细胞质,DAPI染色于细胞核;Foxo3在中耳胆脂瘤的荧光值明显弱于正常皮肤,差异具有统计学意义(t=2.78,P=0.007,P<0.01);DAPI在中耳胆脂瘤的荧光值弱于正常皮肤,差异具有统计学意义(t=2.08,P=0.03,P<0.05);Foxo3和DAPI在原发性胆脂瘤和继发性胆脂瘤的染色均无统计学差异.②Western blot免疫印迹法检测显示:胆脂瘤中P-Akt(ser473)的表达量明显高于正常皮肤中的表达量,两者差异具有统计学意义(t=2.05,P=0.02,P<0.05);Foxo3的表达量明显低于正常皮肤,差异具有统计学意义(t=1.94,P=0.04,P<0.05);两者在原发性胆脂瘤和继发性胆脂瘤的表达均无统计学差异.③在中耳胆脂瘤标本中,Foxo3和DAPI呈显著正相关(r=0.451,P=0.001,P<0.01);P-Akt(ser473)和Foxo3的表达呈显著负相关(r=-0.466,P=0.0007,P<0.01).结论 中耳胆脂瘤的DAPI和Foxo3荧光染色均弱于正常皮肤组织,且两者呈正相关;胆脂瘤中P-Akt表达明确高于正常皮肤组织,而Foxo3在胆脂瘤中的表达明确低于正常皮肤,且两者呈负相关.这提示PI3K/Akt/Foxo3通路通过抑制凋亡的方式参与中耳胆脂瘤的发病过程.

摘要： 目的:观察嗅三针对SAMP8小鼠海马磷酸化PI3K、Akt蛋白表达和海马突触可塑性损伤的影响,探讨嗅三针治疗阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的作用机制.方法:将40只SAMP8小鼠随机分为模型组(Model)、嗅三针组(XSZ)、嗅神经切断嗅三针组(XSZ+XSJ)和盐酸多奈哌齐组(Donepezil),每组10只,10只SAMR1小鼠作为正常组(Control).XSZ组和XSZ+XSJ组采用电针刺激印堂穴和双侧迎香穴,Donepezil组采用盐酸多奈哌齐灌胃,Control组和Model组不干预.采用Morris水迷宫实验评价小鼠学习记忆能力,新物体识别实验评价小鼠新物体识别能力,Western Blot和免疫组化检测小鼠海马区p-PI3K和p-Akt蛋白表达,透射电镜观测小鼠海马突触超微结构.结果:与Model组比较,XSZ和Donepezil干预均可以明显降低SAMP8小鼠4d平均逃避潜伏期,增加其靶象限停留时间、穿越平台次数和新物体偏爱指数,明显升高其海马p-PI3K和p-Akt蛋白表达(P＜0.05),改善其海马神经元突触结构;XSZ+XSJ对于SAMP8小鼠学习记忆能力、新物体识别能力指标及p-PI3K、p-Akt蛋白表达无显著影响(P＞0.05),对其突触结构损伤无明显改善;对于上述指标的影响,XSZ组与Donepezil组比较无显著差异(P＞0.05).结论:嗅三针可能基于嗅觉通路完整性,调节海马PI3K/Akt磷酸化表达,修复海马突触形态结构损伤,改善海马突触可塑性,从而发挥提高SAMP8小鼠学习记忆能力的效应.

摘要： 目的 探讨丹参对脑缺血再灌注损伤脑组织中磷酸化AKT蛋白(p-AKT)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的影响.方法 2020年3—5月,48只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参组和LY294002组,每组12只.丹参组灌胃给予丹参水提物灌胃,LY294002组肌内注射PI3K/AKT抑制剂LY294002,假手术组和模型组给予同体积生理盐水灌胃.采用线栓法建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型.观察脑缺血再灌注后大鼠神经功能缺损情况及脑梗死体积,检测缺血脑组织中p-Akt、HIF-1α和Caspase-3蛋白水平的表达.结果 造模后,假手术组神经功能评分、脑梗死体积均为0;LY294002组神经功能评分最高,脑梗死体积最大,其次为模型组,丹参组最低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).造模后,丹参组HIF-1α水平最高,其次为模型组与LY294002组,均显著高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);造模后,丹参组p-Akt水平最高,其次为模型组,LY294002组次之,均显著高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);造模后,LY294002组Caspase3水平最高,其次为模型组,丹参组次之,均显著高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 丹参对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路,上调p-Akt和HIF-1α蛋白表达,降低Caspase-3表达有关.

摘要： 目的 探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)中EGFR、TGF-α和P-AKT蛋白与PTEN基因的表达及其与临床病理特征的关系.方法 EGFR、TGF-α和P-AKT蛋白采用免疫组化法、PTEN基因采用原位杂交技术分别检测在NSCLC和正常肺组织中的表达,同时分析各因子间的相关性及其与临床病理特征的关系.结果 在NSCLC和正常肺组织中,EGFR的阳性率分别为68.5％(50/73)、30.0％(3/10),P-AKT的阳性率分别为76.7％(56/73)、30.0％(3/10),TGF-α的阳性率分别为72.6％(53/73)、20.0％(2/10),PTEN的阳性率分别为30.1％(22/73)、80.0％(8/10),差异有统计学意义(P<0.05);EGFR、TGF-α和P-AKT蛋白与PTEN基因的表达分别与淋巴结转移、远处转移和分化程度有关,差异有统计学意义(P<0.05);EGFR、TGF-α和P-AKT相互之间呈正相关,三者与PTEN呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EGFR、TGF-α和P-AKT的高表达以及PTEN基因缺失在NSCLC的生长增殖和侵袭转移中发挥着重要作用,可以作为NSCLC的检测和预后指标以及靶向治疗药物的研究靶点.

摘要： 目的 通过对PI3K-Akt-mTOR信号通路相关因子p-Akt、Cathepsin B、Cathepsin D表达的研究,进一步探讨芪蛭胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤神经功能的保护作用.方法 将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、3-MA组、LY组和中药组.制备SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血2h后进行再灌注.各组给予相应药物干预,连续7d,第8日造模.应用神经功能评分法(NSS)评估神经功能缺损程度,脑组织含水量检测脑水肿情况,Western blotting检测相关因子p-Akt、Cathepsin B、Cathepsin D表达水平.结果 同模型组比较,中药组神经功能评分明显降低(P＜0.05),中药组脑组织含水量降低(P＜0.05);Western blotting结果显示:与模型组相比,中药组中p-Akt表达减少(P＜0.05),中药组Cathepsin B、Cathepsin D表达显著增加(P＜0.05).结论 芪蛭胶囊可下调脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分、脑组织含水量,可降低p-Akt的表达,增加Cathepsin B、Cathepsin D的表达,进一步激活自噬,进而保护脑缺血再灌注损伤后大鼠脑神经功能.