СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ ВМІСТУ ВІЛЬНОГО КАЛЬЦІЮ В КЛІТИНІ ПРИ ДВОХВИЛЬОВОМУ МЕТОДІ ЗБУДЖЕННЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО БАРВНИКА

摘要

Спосіб визначення вмісту вільного кальцію в клітині при двохвильовому методі збудження флуоресцентного барвника включає завантаження барвника fura-2 (AM) всередину клітини, збудження барвника за допомогою епіфлуоресцентного мікроскопа хвилями 340 нм та 380 нм, реєстрацію флуоресценції від 500 нм на детектор за допомогою ПЗЗ камери, визначення фонового рівня автофлуоресценції, який віднімається для кожного сигналу при двох довжинах хвиль, проведення калібрування барвника, причому в ньому проводять додаткову нормалізацію сигналів при збудженні барвника хвилею 340 нм за формулою: EMBED Equation.3 , та при збудженні барвника хвилею 380 нм за формулою: EMBED Equation.3 , де EMBED Equation.3 (або EMBED Equation.3 ) є поточний сигнал, a EMBED Equation.3 (або EMBED Equation.3 ) - початкова флуоресценція до зміни сигналу, далі отримані нормовані сигнали складають, помножують на відношення сигналів EMBED Equation.3 та визначають узагальнений сигнал EMBED Equation.3 за формулою: EMBED Equation.3 , після чого розраховують вміст вільного кальцію в клітині: EMBED Equation.3 , де EMBED Equation.3 - константа дисоціації; EMBED Equation.3 та EMBED Equation.3 мінімальна та максимальна флуоресценція, що визначається за процедурою калібрування.