在大肠杆菌中高效表达可溶性细菌漆酶的方法

摘要

本发明提出了一种利用麦芽糖结合蛋白与细菌漆酶融合形成麦芽糖结合蛋白-细菌漆酶融合蛋白并在低温下进行表达的技术方法，其步骤为：A、麦芽糖结合蛋白-细菌漆酶基因的构建，B、阳性转化子的筛选，C、融合蛋白的表达，D、可溶性融合蛋白的鉴定，E、融合蛋白的纯化，F、漆酶酶动力学参数测定。本发明实现了在大肠杆菌细胞内高效表达麦芽糖结合蛋白-细菌漆酶融合蛋白。可溶性细菌漆酶不仅可高效表达而且还保持与未融合细菌漆酶相同的酶活力。克服了细菌漆酶在大肠杆菌细胞内高效表达时形成大量的不溶性包涵体的问题。该方法操作简单、发酵时间短、节约成本。还可以直接将细菌漆酶固定在麦芽糖亲和层析树脂上进行各种酶催化反应。