一种鸡肠道β防御素的氨基酸序列与多核苷酸序列及提取方法

摘要

一种鸡肠道β-防御素cDNA，其特征在于：具有如下序列，TCAGACAGCCAGCTGTGCAG GAACAACCAT GGCCACTGCC GGAGGCTCTG CTTCCACATGGAGAGCTGGG CTGGGAGCTG CATGAACGGC CGCCTGCGCT GCTGCAGGTTCTCCACCAAG CAGCCCTTTT CCAACCCTAA ACATTCAGTG CTGCACACAGCAGAGCAGGA CCCTTCCCCA AGCCTTGGAG GGACGTGA。该β-防御素的氨基酸序列特征是：Ser-Asp-Ser-Gln-Leu Cys-Arg-Asn-Asn-His Gly-His-Cys-Arg-ArgLeu-Cys-Phe-His-Met Glu-Ser-Trp-Ala-Gly Ser-Cys-Met-Asn-Gly Arg-Leu-Arg-Cys-CysArg-Phe-Ser-Thr-Lys-Gln Pro-Phe-Ser-Asn-Pro Lys-His-Ser-Val-Leu His-Thr-Ala-Glu-GlnAsp-Pro-Ser-Pro-Ser Leu-Gly-Gly-Thr。其提取方法，包括以下步骤：A、收集破碎鸡肠道黏膜细胞，B、之后破碎小囊泡。C、5％乙酸搅拌浸提，离心，取上清，弃沉淀，上清液分装冻存，即为鸡肠道β-防御素粗提物。D、低温下将上清液上样于Sephadex G-100凝胶柱，用0.2mol/L乙酸钠洗脱，恒流泵的速度为3×1，经核酸蛋白检测仪检测后自动收集器收集，每管1.5mL，记录仪记录(速度为6cm/h，量程20mv)。E、通过琼脂糖弥散方法检测各收集管液体对巴氏杆菌的抗菌活性，收集有抑菌作用的洗脱液，真空冷冻干燥保存。F、有抑菌作用的洗脱液进行Tricine-PAGE纯化，蛋白条带电转印至PVDF膜，采用Sanger水解逐段分析法做氨基酸序列分析。G、BLAST软件推导鸡肠道β防御素cDNA序列。