含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用。利用质粒rDNA-GFP，通过酶切和PCR酶切位点突变等方法，构建质粒T-GFP；利用嗜热四膜虫基因组DNA，通过PCR扩增和克隆等方法，构建质粒T-HSP702；利用质粒T-GFP、T-HSP702和pD5H8，通过酶切和连接最终构建得到质粒HSP702-GFP-pD5H8。该载体含有HSP702启动子，能实现外源基因高效表达；该载体上含有可替换的外源基因gfp，通过替换不同的外源基因，以实现四膜虫成为一个外源基因表达系统；在巴龙霉素药物筛选作用下，该载体替换掉四膜虫体内原有的绝大部分rDNA，使外源基因在四膜虫体内大量倍增，以实现目标基因的遗传转化。本发明方法易行，操作方便，该载体在转染进四膜虫中可用于环境中三丁基锡的检测。