通过信使RNA干扰酶促进活细胞内的单蛋白生成

摘要

本发明描述了活大肠杆菌细胞中的单蛋白生成(SPP)系统，其利用了mRNA干扰酶例如MazF的独特性能，MazF是一种细菌毒素，它是一种单链RNA和ACA特异性的核糖核酸内切酶，它在体内有效地和选择性地降解所有的细胞mRNA，造成了总蛋白合成的显著下降。MazF和被遗传工程改造成编码无ACA的mRNA的靶基因的伴随表达造成了持续的和高水平的(高达90％)目标表达，并基本上缺乏背景的细胞蛋白合成。值得注意的是，目标合成持续了至少4天，说明细胞尽管生长停滞但仍保留了转录和翻译的能力。SPP技术非常适用于酵母和人类蛋白，甚至是细菌的整合膜蛋白。这个新系统使得能够获得空前高的信噪比，这将显著地简化先前棘手的但生物学重要的蛋白的结构和功能研究。