一种Bmi-1-RING1B过表达的血清9型重组腺相关病毒的构建方法及其应用

摘要

本发明涉及一种Bmi‑1‑RING1B过表达的血清9型重组腺相关病毒的构建方法，设计合成带有BamH I和EcoR I两个酶切位点的Bmi‑1和RING1B串联的序列，扩增后得目的片段，利用BamH I和EcoR I对穿梭质粒pshuttl‑CMV和目的片段进行双酶切，然后连接，得到重组穿梭质粒，将重组穿梭质粒扩增提纯后，与pAAV‑RC和pHelper质粒一起共转染293T细胞，培养后收获细胞，反复冻融离心，即得。该病毒靶向心脏，在心脏细胞内表达Bmi‑1‑RING1B复合蛋白，直接靶向GATA4，促进GATA4泛素化及选择性自噬降解，可作为防治病理性心肌细胞肥大的药物。