一种基于CRISPR-nCas3系统的高效基因组大片段删除方法及应用

摘要

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种基于CRISPR‑nCas3系统的高效基因组大片段删除方法及应用。本发明首先利用生物信息学方法确定需要保留的必需基因及可以删除的非必需基因，选择一段长度为10Kb的非必须基因作为目标敲除大片段。然后在目标基因序列的编码链和模板链上各设计一个spacer序列，两个由spacer序列转录并加工出的crRNA搭配经过改造后的nCas3单链核酸内切酶共同作用，完成对目标DNA序列双链的破坏。最后将人工CRISPR簇和供体DNA序列组装到载体上，通过电穿孔转化到运动发酵单胞菌细胞内完成编辑。