食蟹猴U6启动子高效表达小RNA及多个小RNA表达的载体构建方法

摘要

本发明提供了一种食蟹猴U6基因启动子macU6，包括如SEQ ID NO：1所示的核苷酸酸序列。本发明首次在食蟹猴基因组中获得一段与U6启动子同源的序列，即macU6启动子，且具有高效的转录能力。并将其引入到多gRNA表达载体中。本发明中采用Golden Gate克隆技术和Gateway重组克隆技术相结合的方法，构建出由不同U6启动子驱动gRNA串联表达的多gRNA表达载体，该方法简单、高效、灵活、省时。同时，通过引入新的高效的macU6启动子来解决因U6启动子种类过少、U6重复出现导致的载体不稳定问题。