一种基于CRISPR-Cas13a的抑制真核细胞中基因表达水平的方法及其应用

摘要

涉及基因工程领域，具体公开了一种基于CRISPR‑Cas13a的抑制真核细胞中基因表达水平的方法及其应用。通过设计并合成与目的基因mRNA中某段序列互补的向导RNA，与Cas13a蛋白形成Cas13a‑向导RNA复合物；在真核细胞中，该复合物在向导RNA的引导下，与序列互补的目的基因mRNA结合并激活Cas13a蛋白的RNA降解活性，从而引起目的基因mRNA的降解和表达水平抑制。另外，通过向导RNA的位置筛选，以及人为添加错配的方式，该方法可以高效并特异性抑制单碱基突变的癌基因表达水平，同时不影响野生型基因表达。通过向导RNA设计，本方法可用于真核细胞中的基因表达沉默以及单碱基突变的癌基因表达特异性抑制，具有特异性高、稳定准确、简便快速的特点。