采用串联sgRNA同步激活多个猪内源性干细胞因子转录活性的方法

摘要

本发明提供了一种采用串联sgRNA策略同步激活猪多个内源性干细胞因子的方法，首先利用杀稻瘟菌素和潮霉素药物筛选并构建了能稳定表达dCAS‑VP64和MS2‑P65‑HSF1的PK‑15细胞株（PK‑15‑dCas9‑MS2）。分别设计和构建能靶向猪干细胞因子Oct4、Sox2、Klf4、c‑Myc和miR‑302/367启动子的sgRNAs，在上述细胞上进行高活性的sgRNA筛选，将基因转录激活效率最高的5条sgRNA进行串联组合和构建表达载体，将其导入PK‑15‑dCas9‑MS2细胞中，同步激活猪OSKM和miR‑302/367转录活性，该技术对诱导产生猪的iPSC具有潜在的应用价值。