免药物筛选快速获得小鼠Rosa26基因定点整合外源基因的方法

摘要

本发明提供了一种免药物筛选快速获得小鼠Rosa26基因定点整合外源基因的方法，其包括以下步骤：1)选择小鼠Rosa26基因打靶位点；2)设计靶向Rosa26的gRNA；3)构建CRISPR/Cas9表达质粒pX458‑Rosa26；4)构建无启动子的带红色荧光报告基因的同源重组供体载体；5)细胞转染：将所述CRISPR/Cas9质粒pX458‑Rosa26与供体载体共转染进入小鼠ES细胞；5)用流式细胞技术先通过绿色荧光分选出成功转染质粒的细胞进行培养7天后，通过红色荧光进行单细胞分选，经培养获得定点整合外源基因的ES单克隆细胞系。本发明的方法精确快速、简便高效。