一种无标记多位点整合表达谷氨酰胺酶菌株及其构建方法

摘要

本发明公开了一种无标记多位点整合表达谷氨酰胺酶菌株及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的是将谷氨酰胺酶基因在16S rDNA、nprB、nprE、aprE、spo0A、epr、bpr 7个位点整合表达，最终得到了多位点无抗性整合表达谷氨酰胺酶菌株BSM7。本发明得到的BSM1和BSM7，摇瓶发酵24h后，酶活分别为40.5U/mL和85.6U/mL，突变酶活提高了111.4％。BSM7菌株分批补料发酵，在32h左右达到最高酶活，为375.6U/mL。通过遗传稳定性分析发现，BSM7的遗传稳定性远远大于改基因的质粒表达的稳定性。该发明提高了谷氨酰胺酶酶在食品工业的应用潜力。