用于T－A克隆的pG7X－T载体及其制备方法

摘要

本发明涉及用于T-A克隆的pG7X-T载体及其制备方法，属于重组DNA技术的载体构建领域，其技术方案是利用自行设计的引物对质粒pGEM7Zf(+)进行扩增，扩增产物经HindIII消化、自连、转化、筛选等过程，获得新质粒pG7X。相比pGEM7Zf(+)而言，pG7X增加了2个XcmI识别位点，可用于制备T-A克隆载体。用XcmI酶切后得到的两端带有3′dT粘性末端的DNA即为T载体，命名为pG7X-T。该T载体与带有dA末端DNA片段或PCR产物进行连接，阳性重组率达95%以上。利用本发明制备T载体的成本在60元/微克以下，仅为市场价格的十分之一，而且操作简便、性能稳定、重组率高。