实时荧光定量PCR方法鉴定转基因植物中T-DNA串联重复序列的拷贝数的方法

摘要

本发明公开了一种实时荧光定量PCR方法鉴定转基因植物中T‑DNA串联重复序列的拷贝数的方法，步骤包括：通过农杆菌介导的植物转化方法将含有筛选基因BAR的植物表达载体pSKI015连接上HMGA基因，转入到野生型Col‑4拟南芥中；使用两个参考质粒连接载体；将经过草甘膦筛选的转基因拟南芥的RNA进行提取，反转录获得cDNA作为检测的模板，分别使用草甘膦抗性基因和HMGA基因的定量引物进行实用定量PCR的方式检测突变体植物的拷贝数。本发明的有益效果在于可以有效屏蔽T‑DNA串联结构对识别转基因植物拷贝数的影响，而且定量PCR与Southern blot相比更加方便高效。