RGA法检测重组人促红细胞生成素生物学活性

摘要

一种新的重组人促红细胞生成素(RecombinantHumanErythropoietin，rhEPO)生物活性测定方法。它的基本原理是：利用STAT5的反应元件(sisinducibleelement，SIE；thegammaresponseregion，GRR；theinterferonγ-activatedsequence，GAS)构建报告基因载体，转染UT-7细胞，加压筛选和单克隆分离培养得到稳定单克隆细胞株UT-7／G7。rhEPO与配体结合后，经过一系列信号转导，激活报告基因萤光素酶的表达，通过检测rhEPO刺激后萤光素酶表达的变化来对rhEPO活性进行定量。具体检测步骤为：UT-7／G7细胞用DPBS洗3次后，分析培养基培养17-20小时，以60,000个／孔铺96孔板，加入系列浓度的rhEPO，作用4h，检测萤光素酶活性。该方法操作简单，反应灵敏，变异性小，对于rhEPO的质量控制和临床应用具有重要意义。