甘薯褪绿矮化病毒西非株系的实时荧光定量PCR检测方法及应用

摘要

本发明涉及一种甘薯褪绿矮化病毒西非株系实时荧光定量PCR检测方法及应用，该方法以甘薯褪绿矮化病毒西非株系SPCSV-WA的核苷酸序列为模板，设计扩增SPCSV-WA？cp基因的特异性引物和特异性CSV探针，提取感病甘薯叶片的总RNA；用CSV-DL2引物反转录合成cDNA第一链，然后用CSV-CP-P2引物反转录合成cDNA第二链，利用CSV-CP-P1和反向引物CSV-CP-P2进行PCR扩增反应；以SPCSV-WA？cp基因的重组质粒为阳性标准质粒绘制标准曲线，通过优化反应体系和反应条件，建立了SPCSV-WA的实时荧光定量PCR检测方法。结果表明，该方法只能检测到目的病毒，标准曲线的斜率和相关系数分别为-3.239和1，扩增效率为103.568%；最低可检测到约3.31拷贝/μL的阳性质粒，灵敏度比常规PCR高1000倍。本发明实时荧光定量PCR方法可用于田间甘薯样品的检测，为SPCSV的早期预警和流行学研究提供了技术手段。