一种编码高活性反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶的基因片段及其应用

摘要

本发明公开了一种具有编码高活性反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶的基因片段及其应用，对指孢囊菌（ Dactylosporangium sp . RH1）中反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶（GenBankID:BAA20094.1）基因密码子进行优化获得 p4hyd 基因，对优化后 p4hyd 基因进行截短，获得 P4Hyd_1-257 基因，分别构建重组质粒pET-M-3C-P4Hyd和pET-M-3C-P4Hyd_1-257，通过大肠杆菌进行原核表达，以菌体作酶源转化生产反式-4-羟基-L-脯氨酸。实验结果表明，以L-脯氨酸为底物，相比于pET-M-3C-P4Hyd，pET-M-3C-P4Hyd_1-257转化生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的最高转化率由91.4%提高到97.4%，转化反应时间由80小时缩短到60小时，转化率得到明显提高，转化时间明显缩短。本发明可用于生物转化法生产L-羟脯氨酸，具有较好的工业应用前景。