优化的柑橘Ccl-eEF1a启动子和CsUAP56小内含子构建的载体和应用

摘要

本发明公开了优化的柑橘Ccl‑eEF1a启动子和CsUAP56小内含子构建的载体和应用；使用优化的Ccl‑eEF1a启动子和CsUAP56内含子，结合柑橘和豇豆密码子优化的mEGFP和tdTomato基因等共12个片段构建了适用于柑橘和豇豆瞬时转化的亚细胞定位载体，所述亚细胞定位载体为pHCi12C，该载体已优化消除了所有Golden Gate克隆常用酶切位点，可将候选基因通过双BsmBI酶切位点定向插入mEGFP基因3’端，且载体具有蓝白斑筛选功能可快速鉴定获得阳性克隆；同时载体内设计了核定位tdTomato内部参照，在进行如转录因子亚细胞定位观察时，相较于普通的亚细胞定位载体而言，可不用额外进行细胞核荧光染色步骤，直接将mEGFP‑目的基因融合蛋白定位结果与核定位tdTomato结果作叠加比较，即可准确快捷地评判候选基因是否定位在细胞核。