法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2022-07-29
公开
国际专利申请公布
技术领域
本发明涉及橡胶增强用纤维、橡胶制品、轮胎用帘线、和轮胎。
背景技术
由例如石油等化石资源制成的例如尼龙、聚酯、和维尼纶等合成纤维已常规并广泛地用作用于增强例如轮胎等橡胶制品的纤维(橡胶增强用纤维)的材料。然而,考虑到化石资源的稳定供给和未来的物价飞涨等问题,期望减少上述由化石资源制成的合成纤维的使用。
由化石资源以外的材料制成的纤维材料的实例包括由木材制成的人造丝纤维(rayon fiber)。然而,用由木材制成的纤维替代大部分目前使用的合成纤维可使森林资源耗竭和破坏环境。因此,强烈需要天然来源的且不导致环境问题的可持续供给且合乎伦理的材料。
作为满足这样的需求的措施,已开发通过纺丝来获得蛋白质纤维的技术,其中将在使用微生物的发酵过程中产生的结构蛋白用作原料。更具体地,该蛋白质纤维如下获得:例如,如WO/2017/188434(专利文献1)中所述,分子地设计提供作为纤维的各种性质的蛋白质氨基酸序列和产生蛋白质分子的基因序列,合成基因,纯化通过引入该基因的微生物的发酵产生的结构蛋白,并将结构蛋白作为原料进行纺丝。进一步地,基础正在构建以用该技术大规模生产结构蛋白。
使用微生物的发酵的此类生物衍生原料的生产利用谷物或非食用部分等作为生物质资源,这将不使森林资源耗竭。进一步地,由于用于轮作的农田的扩张,这还可导致碳储蓄量的增加。因此,上述生产可在伦理上提供有助于可持续性未来社会的纤维。
JP2017121843A(专利文献2)描述了将使用由编码源自天然蛛丝蛋白的多肽的基因转化的宿主所产生的多肽纺丝,并将所得丝心蛋白纤维用于增强充气轮胎的纤维帘线中。专利文献2描述了通过用帘线贴胶(topping)用橡胶组合物贴胶增强用纤维帘线来形成预定的轮胎部件。进一步地,专利文献2描述了帘线贴胶用橡胶组合物优选包含相对于100质量份的橡胶组分为3质量份以上的硫。
然而,一些蛋白质纤维由于与水接触而收缩。进一步地,取决于蛋白质纤维的种类或生产方法,一些纤维可在它们与水接触时伸长。在这方面,例如,已报道天然蛛丝具有在以水溶胀时增加其橡胶弹性的性质(M.Gosline,M.W.Denny和M.E.DeMont,Nature,309,551(1984)(非专利文献1))。当在生产过程期间或在产物中发生由于蛋白质纤维与水接触而导致的例如收缩和伸长等未预期的长度变化时,可导致各种问题。
例如,在生产用于轮胎等的橡胶增强用纤维时,可以进行以下过程:其中,纤维在用含硫橡胶组合物贴胶(与橡胶材料复合)之前,通过浸渍或涂布等用水系粘接剂组合物涂覆,然后通过加热来干燥粘接剂组合物的水分和进行粘接处理。此时,如果有如上所述的由于蛋白质纤维的种类或生产方法(水分含量或温度差)而导致的纤维长度的未预期的变化,可操作性和帘线质量可劣化。
除了初始粘接性以外,要求用于涂覆轮胎等中的纤维的粘接剂组合物即使在由各种冲击(例如,轮胎的滚动)而导致的应力和热输入的情况下也应当维持粘接。粘接剂组合物的实例包括,如US2128229A(专利文献3)和JP2005263887A(专利文献4)中所述的通过老化含有间苯二酚、甲醛和橡胶胶乳的混合液获得的RFL(间苯二酚-甲醛-胶乳)粘接剂组合物。
进一步地,为了满足近来减少间苯二酚的使用以降低对环境的负担的需求,例如,WO/2010/125992(专利文献5)描述了含有橡胶胶乳、封端的异氰酸酯化合物、环氧化合物、作为固化剂的氨基系化合物等的无间苯二酚的粘接剂组合物。
引用列表
专利文献
专利文献1:WO/2017/188434
专利文献2:JP2017121843A
专利文献3:US2128229A
专利文献4:JP2005263887A
专利文献5:WO/2010/125992
非专利文献
非专利文献1:J.M.Gosline,M.W.Denny和M.E.DeMont,Nature,309,551(1984)
发明内容
专利文献2中描述的丝心蛋白纤维在与橡胶材料复合时、特别是在湿润时趋于断裂。进一步地,丝心蛋白纤维可不表现足够高的强度,特别是在橡胶制品用于恶劣环境中时。因此,在使用所述纤维作为例如轮胎等橡胶制品中的增强用纤维方面存在改进的余地。
近年中,已改善轮胎的性能并且为了节约能源已减小轮胎的重量,使得由于轮胎旋转而导致的帘线的变形和热输入变得越来越严重。关于可通过浸渍或涂布适当地用水系粘接剂组合物涂覆的纤维材料及其方法以工业上提供确保用于轮胎的橡胶增强用纤维的帘线质量的蛋白质纤维,尚未获得足够的知识。
因此,本发明的目的在于提供可使用生物衍生原料生产的、并且即使在与橡胶材料复合时几乎不断裂的橡胶增强用纤维。本发明的目的还在于提供使用橡胶增强用纤维的高强度的橡胶制品、轮胎用帘线和轮胎。
因此,本发明提供了以下。
即,本发明的第一橡胶增强用纤维使用含有疏水性蛋白的蛋白质纤维。
本发明的第二橡胶增强用纤维使用湿润时的初始拉伸弹性模量为2.0GPa以上的蛋白质纤维。
本发明的橡胶制品包含所述橡胶增强用纤维。
本发明的轮胎用帘线包含所述橡胶增强用纤维。
本发明的轮胎包含所述轮胎用帘线。
发明的效果
根据本发明,可以提供可使用生物衍生原料产生的、并且即使在与橡胶材料复合时几乎不断裂的橡胶增强用纤维。进一步地,根据本发明,可以提供使用橡胶增强用纤维的高强度的橡胶制品、轮胎用帘线、和轮胎。
附图说明
[图1]示意性示出了作为实例的蜘蛛类丝心蛋白的结构域序列。
[图2]示意性示出用于在纤维上形成由粘接剂制成的涂层的示例装置。
具体实施方式
(第一橡胶增强用纤维)
根据本发明的第一实施方案的橡胶增强用纤维(下文中,可称为“第一实施方案的纤维”)使用含有疏水性蛋白的蛋白质纤维。换言之,第一实施方案的纤维是含有疏水性蛋白的蛋白质纤维。
发明人参与了颠覆性研究开发推进计划(Impulsing Paradigm Change throughDisruptive Technologies Program,ImPACT),并对通过模拟天然蛛丝的生产方法来获得的常规蛋白纤维材料的技术进行各种研究。发明人特别研究了常规蛋白质纤维在与橡胶材料复合时容易断裂的问题和它们在恶劣环境中不能充分表现高强度的问题的原因。结果,发明人发现这些问题是由纤维与水的接触而导致的,换言之,含有衍生自天然蛛丝蛋白的多肽的常规纤维的纤维强度在它们与水接触时降低。更具体地,发现纤维在与橡胶材料复合时容易断裂的原因在于涂覆在纤维上的粘接剂是水系粘接剂。进一步地,发现它们不能充分表现高强度的原因在于纤维在高温和湿度条件下吸湿,这加速了纤维的劣化。
认为纤维强度由于与水接触而降低的原因在于衍生自常规天然蛛丝蛋白的分子(蛋白质分子)具有含有许多亲水性氨基酸单元的氨基酸序列。基于此,发明人进一步研究,特别着重于蛋白质分子的分子设计,并且对于使用通过利用微生物的发酵过程获得的蛋白质的纤维的功能、性质和生产性的数据进行累积和分析。结果,发明人新创了一种蛋白质分子,即,疏水性蛋白,其可工业上生产,并且有未发现于生物蛋白中的具有减少的亲水性氨基酸单元的氨基酸序列。
天然蛛丝是从储存在称为丝腺的分泌腺中的蛋白质的水溶液中获得的。由于其亲水性,这种蛋白质可以作为水溶液在内脏器官中流动到吐丝器,同时在内部环境中改变其分子结构。另一方面,上述疏水性蛋白具有与天然蛛丝不同的分子结构,因为其聚集而不容易溶解于活生物体内的例如体液等水中。
以下基于实施方案详细描述第一实施方案的纤维。
<疏水性蛋白>
已设计第一实施方案的纤维中所含有的疏水性蛋白的分子,但对其没有特别限制。其可以是用基因重组技术通过微生物等产生的蛋白质、或通过合成产生的蛋白质。
疏水性蛋白可以是,例如,含有由式1:[(A)n基序-REP]m或式2:[(A)n基序-REP]m-(A)n基序表示的结构域序列的蛋白质。在本实施方案的疏水性蛋白中,可将氨基酸序列(N-末端序列和C-末端序列)进一步添加至结构域序列的N-末端侧和C-末端侧的一者或两者。N-末端序列和C-末端序列通常为不具有重复的氨基酸基序并且包含约100个氨基酸残基的区域,但不限于此。
如本文所用,“结构域序列”是产生结晶区域(通常对应于氨基酸序列的(A)n基序)和非结晶区域(通常对应于氨基酸序列的REP)的氨基酸序列,并且是指由式1:[(A)n基序-REP]m或式2:[(A)n基序-REP]m-(A)n基序表示的氨基酸序列。如本文所用,(A)n基序是指主要由丙氨酸残基构成的氨基酸序列,并且氨基酸残基的数量为2至27。(A)n基序的氨基酸残基的数量可为2至20、4至27、4至20、8至20、10至20、4至16、8至16、或10至16。进一步地,丙氨酸残基的数量与(A)n基序中氨基酸残基的总数的比可为40%以上、60%以上、70%以上、80%以上、83%以上、85%以上、86%以上、90%以上、95%以上、或100%(意味着其仅由丙氨酸残基构成)。存在于结构域序列中的多个(A)n基序的至少7个可仅由丙氨酸残基构成。REP表示含有2至200个氨基酸残基的氨基酸序列。REP可以是含有10至200个氨基酸残基的氨基酸序列。“m”表示2至300的整数,并且其可以是10至300的整数。多个(A)n基序可具有相同氨基酸序列或不同的氨基酸序列。多个REP可具有相同氨基酸序列或不同的氨基酸序列。
疏水性蛋白可以是,例如,通过修饰天然来源的蜘蛛类丝心蛋白的氨基酸序列来获得的疏水性蛋白(例如,疏水性蛋白可通过修饰克隆的天然来源的蜘蛛类丝心蛋白的基因序列而修饰氨基酸序列来获得),或可以是独立于天然来源的蜘蛛类丝心蛋白的人工设计并合成的疏水性蛋白(例如,通过化学合成编码所设计的氨基酸序列的核酸而获得期望的氨基酸序列的疏水性蛋白)。
疏水性蛋白可通过例如修饰克隆的天然来源的蜘蛛类丝心蛋白的基因序列的氨基酸序列来获得,这对应于例如将一种以上的氨基酸残基置换、缺失、插入和/或添加至基因序列。可用例如部分特异性突变形成等本领域技术人员已知的方法进行氨基酸残基的置换、缺失、插入和/或添加。具体地,可根据例如Nucleic Acids Res.10,6487(1982)和Methods in Enzymology,100,448(1983)等文献中所描述的方法来进行。
疏水性蛋白的具体实例包括具有其中谷氨酰胺残基的含量相对于蜘蛛的大壶状腺中产生的大吐丝器牵丝蛋白(drag line protein)减少的结构域序列的修饰蛋白。
修饰蛋白在REP的氨基酸序列中优选包含选自GGX基序和GPGXX基序的至少一种基序。
当修饰蛋白在REP中包含GPGXX基序时,GPGXX基序含量通常为1%以上,并且其可为5%以上且优选为10%以上。对GPGXX基序含量的上限没有特别限制,并且可为50%以下或30%以下。
如本文所用,“GPGXX基序含量”是用以下方法计算的值。
在含有由式1:[(A)n基序-REP]m或式2:[(A)n基序-REP]m-(A)n基序表示的结构域序列的蜘蛛类丝心蛋白中,和在通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除而获得的序列中所包含的所有REP中,将通过将区域中所含有的GPGXX基序的总数乘以三来获得的数(即,GPPGXX基序中G和P的总数)设为“s”,将通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除、并更进一步排除(A)n基序而获得的序列中的所有REP的氨基酸残基的总数设为“t”,GPGXX基序含量计算为“s/t”。
在GPGXX基序含量的计算中,将“通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除而获得的序列”作为对象的原因在于“从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列”(对应于REP的序列)可包含具有与蜘蛛类丝心蛋白的序列特征的相关性低的序列,并且如果“m”小时(即,当结构域序列短时),其影响GPGXX基序含量的计算结果。上述是为了消除该影响。当“GPGXX基序”位于REP的C-末端时,即使“XX”为例如“AA”,也被认为是“GPGXX基序”。
图1示意性示出了蜘蛛类丝心蛋白的结构域序列。将参照图1具体地描述计算GPGXX基序含量的方法。首先,在图1中示出的蜘蛛类丝心蛋白的结构域序列(其为“[(A)n基序-REP]m-(A)n基序”型)中,所有的REP包含在“通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除而获得的序列”(序列在图1中表示为“区域A”)中,使得用于计算“s”的GPGXX基序的数量为7,并且“s”为7×3=21。出于同样的原因,所有REP包含在“通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除而获得的序列”(序列在图1中表示为“区域A”)中,从所述序列进一步排除(A)n基序的所有REP中的氨基酸残基的总数“t”为50+40+10+20+30=150。然后,可通过将“s”除以“t”来计算“s/t”(%),并且在图1中的丝心蛋白的情况中,21/150=14.0%。
修饰蛋白优选具有9%以下、更优选7%以下、进一步优选4%以下、特别优选0%的谷氨酰胺残基含量。
如本文所用,“谷氨酰胺残基含量”是用以下方法计算的值。
在含有由式1:[(A)n基序-REP]m或式2:[(A)n基序-REP]m-(A)n基序表示的结构域序列的蜘蛛类丝心蛋白中,和在通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除而获得的序列(对应于图1中“区域A”的序列)中所包含的所有REP中,将该区域中所含有的谷氨酰胺残基的总数设为“u”,将通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除、并更进一步排除(A)n基序而获得的序列中的所有REP的氨基酸残基的总数设为“t”,谷氨酰胺残基含量计算为“u/t”。在谷氨酰胺残基含量的计算中,将“通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除而获得的序列”作为对象的原因与上述原因相同。
对于修饰蛋白,结构域序列可具有对应于通过在天然来源的蜘蛛类丝心蛋白中、在REP中缺失一个以上的谷氨酰胺残基或用其它氨基酸残基替代REP中一个以上的谷氨酰胺残基来获得的氨基酸序列的氨基酸序列。
“其它氨基酸残基”可以是谷氨酰胺残基以外的氨基酸残基,但优选为具有比谷氨酰胺残基更大疏水性指数(HI)的氨基酸残基。氨基酸残基的疏水性指数(HI)列于表1。
表1
如表1中列出的,具有比谷氨酰胺残基更大疏水性指数的氨基酸残基的实例包括选自以下的氨基酸残基:异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、苯丙氨酸(F)、半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、苏氨酸(T)、丝氨酸(S)、色氨酸(W)、酪氨酸(Y)、脯氨酸(P)和组氨酸(H)。上述中,更优选选自异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、苯丙氨酸(F)、半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)和丙氨酸(A)的氨基酸残基,并且仍更优选选自异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)和苯丙氨酸(F)的氨基酸残基。
对于修饰蛋白,REP的疏水性优选为-0.8以上、更优选-0.7以上、进一步优选0以上、仍更优选0.3以上、和特别优选0.4以上。对REP的疏水性的上限没有特别限制,并且其可为1.0以下或0.7以下。
如本文所用,“REP的疏水性”是用以下方法计算的值。
在例如含有由式1:[(A)n基序-REP]m或式2:[(A)n基序-REP]m-(A)n基序表示的结构域序列的蜘蛛类丝心蛋白等蛋白质中,和在通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除而获得的序列(对应于图1中“区域A”的序列)中所包含的所有REP中,将区域中各氨基酸残基的疏水性指数的总和设为“v”,将通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除、并更进一步排除(A)n基序而获得的序列中的所有REP的氨基酸残基的总数设为“t”,REP的疏水性计算为“v/t”。在REP的疏水性的计算中,将“通过将从位于最C-末端侧的(A)n基序至结构域序列的C-末端的序列从结构域序列排除而获得的序列”作为对象的原因与上述原因相同。
如本文所用,“REP的疏水性”与“平均HI”同义。
与天然来源的蜘蛛类丝心蛋白的结构域序列相比,除了对应于在REP中缺失一个以上的谷氨酰胺残基和/或用天然来源的蜘蛛类丝心蛋白的结构域序列的其它氨基酸残基置换REP中一个以上的谷氨酰胺残基的修饰以外,修饰蛋白可具有对应于进一步置换、缺失、插入和/或添加一个以上的氨基酸残基的氨基酸序列的修饰。
修饰蛋白可例如通过在来自克隆的天然来源的蜘蛛类丝心蛋白的基因序列的REP中缺失一个以上的谷氨酰胺残基、和/或用其它氨基酸残基替换REP中一个以上的谷氨酰胺残基来获得。进一步地,其可例如通过设计对应于在来自天然来源的蜘蛛类丝心蛋白的氨基酸序列的REP中缺失一个以上的谷氨酰胺残基和/或用其它氨基酸残基替代REP中一个以上的谷氨酰胺残基的氨基酸序列,和化学合成编码所设计的氨基酸序列的核酸来获得。
更具体地,修饰蛋白的实例包括(6-i)含有SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:21中记载的氨基酸序列的修饰丝心蛋白,和(6-ii)含有与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:21中记载的氨基酸序列具有90%以上序列同一性的氨基酸序列的修饰丝心蛋白。
下文中描述(6-i)修饰丝心蛋白
SEQ ID NO:1中记载的氨基酸序列(Met-PRT410)是基于为天然来源丝心蛋白的Nephila clavipes(GenBank登录号:P46804.1,GI:1174415)的碱基序列和氨基酸序列,并且其通过修饰氨基酸以改善生产性来获得,例如,(A)n基序中具有连续丙氨酸残基的氨基酸序列中,将连续丙氨酸残基的数量设为5。另一方面,由于Met-PRT410中未修饰谷氨酰胺残基(Q),谷氨酰胺残基含量与天然来源的丝心蛋白的谷氨酰胺残基含量大约相同。
SEQ ID NO:5(M_PRT888)中记载的氨基酸序列是通过用VL替换Met-PRT410(SEQID NO:1)中所有的QQ来获得的。
SEQ ID NO:6(M_PRT965)中记载的氨基酸序列是通过用TS替换Met-PRT410(SEQID NO:1)中所有的QQ并用A替换剩余的Q来获得的。
SEQ ID NO:7(M_PRT889)中记载的氨基酸序列是通过用VL替换Met-PRT410(SEQID NO:1)中所有的QQ并用I替换剩余的Q来获得的。
SEQ ID NO:8(M_PRT916)中记载的氨基酸序列是通过用VI替换Met-PRT410(SEQID NO:1)中所有的QQ并用L替换剩余的Q来获得的。
SEQ ID NO:9(M_PRT918)中记载的氨基酸序列是通过用VF替换Met-PRT410(SEQID NO:1)中所有的QQ并用I替换剩余的Q来获得的。
SEQ ID NO:10(M_PRT699)中记载氨基酸序列是通过用VL替换M-PRT525(SEQ IDNO:12)中所有的QQ来获得的。SEQ ID NO:12(M_PRT525)中记载的氨基酸序列是通过如下来获得的:将两个丙氨酸残基插入至Met-PRT410(SEQ ID NO:1)中丙氨酸残基为连续的区域(A5),删除C-末端侧的两个结构域序列并用丝氨酸残基(S)或脯氨酸残基(P)替换13个谷氨酰胺残基(Q),使得分子量与Met-PRT410的分子量几乎相同。
SEQ ID NO:11(M_PRT698)中记载的氨基酸序列是通过用VL替换M_PRT525(SEQ IDNO:12)中所有的QQ并用I替换剩余的Q来获得的。
SEQ ID NO:21(Met-PRT966)中记载的氨基酸序列是通过如下来获得的:用VF替换在SEQ ID NO:2中记载的氨基酸序列(将SEQ ID NO:20中记载的氨基酸序列添加至C末端之前的氨基酸序列)中所有的QQ并用I替换剩余的Q。
如表2中列出的,SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:21中记载的氨基酸序列全部具有9%以下的谷氨酰胺残基含量。
表2
(6-i)修饰丝心蛋白可包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:21中记载的氨基酸序列。
(6-ii)修饰丝心蛋白包含与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:21中记载的氨基酸序列具有90%以上序列同一性的氨基酸序列。(6-ii)修饰丝心蛋白也是含有由式1:[(A)n基序-REP]m或式2:[(A)n基序-REP]m-(A)n基序表示的结构域序列的蛋白质。序列同一性优选为95%以上。
(6-ii)修饰丝心蛋白优选具有9%以下的谷氨酰胺残基含量。进一步地,(6-ii)修饰丝心蛋白优选具有10%以上的GPGXX基序含量。
修饰蛋白可在N-末端和C-末端的一者或两者处包含标签序列。这使得例如修饰蛋白的分离、固定、检测、和可视化成为可能。
更具体地,含有标签序列的修饰蛋白的实例包括(6-iii)含有SEQ ID NO:13、SEQID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:22中记载的氨基酸序列的修饰丝心蛋白,和(6-iv)含有与SEQ ID NO:13、SEQID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:22中记载的氨基酸序列具有90%以上序列同一性的氨基酸序列的修饰丝心蛋白。
通过分别地在SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:21中记载的氨基酸序列的N-末端处添加SEQ ID NO:3中记载的氨基酸序列(包括His标签序列和铰链序列)来获得SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:22中记载的氨基酸序列。由于仅将标签序列添加至N-末端,谷氨酰胺残基含量未改变,SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:22中记载的氨基酸序列全部具有9%以下的谷氨酰胺残基含量(表3)。
表3
(6-iii)修饰丝心蛋白可包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:22中记载的氨基酸序列。
(6-iv)修饰丝心蛋白包含与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:22中记载的氨基酸序列具有90%以上序列同一性的氨基酸序列。(6-iv)修饰丝心蛋白也是含有由式1:[(A)n基序-REP]m或式2:[(A)n基序-REP]m-(A)n基序表示的结构域序列的蛋白。序列同一性优选为95%以上。
(6-iv)修饰丝心蛋白优选具有9%以下的谷氨酰胺残基含量。进一步地,(6-iv)修饰丝心蛋白优选具有10%以上的GPGXX基序含量。
修饰蛋白可包含用于将在重组蛋白生产系统中产生的蛋白释放至宿主的外部的分泌信号。分泌信号的序列可根据宿主的种类适当地设定。
疏水性蛋白优选为例如蛛丝蛋白等蛋白质,其中计算所有构成氨基酸残基的疏水性指数(HI)的总和,并且通过将总和除以氨基酸残基的总数获得的值(平均HI)为0以上。在这种情况下,所得纤维更难以断裂。疏水性指数(HI)列于表1。
疏水性蛋白可例如通过制备用具有编码疏水性蛋白的核酸序列和可操作地连接至核酸序列的一条以上的调控序列的表达载体转化的宿主、并由宿主表达核酸来生产。
对生产编码疏水性蛋白的核酸的方法没有特别限制。例如,核酸可用如下方法产生:通过聚合酶链式反应(PCR)等、使用编码天然蛛丝蛋白的基因来扩增和克隆的方法,或化学合成核酸的方法。对化学合成核酸的方法没有特别限制。例如,可用以下方法化学合成基因:基于获得自NCBI网络数据库等的蛛丝蛋白的氨基酸序列信息,通过PCR等连接由AKTAoligopilot plus 10/100(GE Healthcare Japan Co.,Ltd.)自动合成的寡核苷酸的方法。此时,为了促进疏水性蛋白的纯化和/或验证,可接受的是合成编码含有氨基酸序列的疏水性蛋白的核酸,其中氨基酸序列含有起始密码子并将His10标签添加至N-末端。
调控序列是控制宿主中重组蛋白的表达的序列(例如,启动子、增强子、核糖体结合序列、或转录终止序列),其可取决于宿主的种类适当地选择。在宿主细胞中起作用并且可诱导靶标疏水性蛋白的表达的诱导型启动子可用作启动子。诱导型启动子是可以通过存在诱导物质(表达诱导物)、不存在阻遏分子、或例如温度、渗透压、或pH值的增加或减少等物理因素来控制转录的启动子。
表达载体的种类可取决于宿主的种类适当地选择,例如质粒载体、病毒载体、粘粒载体、福斯质粒载体(fosmid vector)和人工染色体载体。表达载体优选为可在宿主细胞中自主复制、或可整合至宿主的染色体和在可转录编码蛛丝蛋白的核酸的位置处含有启动子的载体。
宿主优选为任何原核生物和真核生物如酵母、丝状真菌、昆虫细胞、动物细胞和植物细胞。
当例如细菌等原核生物用作宿主时,表达载体优选为可在原核生物中自主复制并且同时包含启动子、核糖体结合序列、编码疏水性蛋白的核酸、和转录终止序列的载体。其可包含控制启动子的基因。
原核生物的实例包括属于以下的微生物:埃希氏菌属(Escherichia)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、沙雷氏菌属(Serratia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、微杆菌属(Microbacterium)、短杆菌属(Brevibacterium)、棒杆菌属(Corynebacterium)、和假单胞菌属(Pseudomonas)。属于埃希氏菌属的微生物的实例包括大肠杆菌(Escherichia coli)。属于短芽孢杆菌属的微生物的实例包括土壤短芽孢杆菌(Brevibacillus agri)。属于沙雷氏菌属的微生物的实例包括液化沙雷氏菌(Serratia liquefaciens)。属于芽孢杆菌属的微生物的实例包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。属于微杆菌属的微生物的实例包括嗜氨微杆菌(Microbacterium ammoniaphilum)。属于短杆菌属的微生物的实例包括叉开短杆菌(Brevibacterium divaricatum)。属于棒杆菌属的微生物的实例包括产氨棒杆菌(Corynebacterium ammoniagene)。属于假单胞菌属的微生物的实例包括恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。
当原核生物用作宿主时,引入编码疏水性蛋白的核酸的载体的实例包括pBTrp2(Boehringer Mannheim制造)、pGEX(Pharmacia制造)、pUC18、pBluescriptII、pSupex、pET22b、pCold、pUB110、和pNCO2(JP2002238569A)。
作为宿主的真核生物的实例包括酵母和丝状真菌(例如,霉菌)。酵母的实例包括属于酵母属(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、和裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)的酵母。丝状真菌的实例包括属于曲霉属(Aspergillus)、青霉属(Penicillium)、和木霉属(Trichoderma)的丝状真菌。
当真核生物用作宿主时,引入编码疏水性蛋白的核酸的载体的实例包括YEp13(ATCC37115)和YEp24(ATCC37051)。对将表达载体引入宿主细胞的方法没有限制,只要其是将DNA引入宿主细胞的方法即可。其实例包括使用钙离子的方法[Proc.Natl.Acad.Sci.USA,69,2110(1972)]、电穿孔法、原生质球法(spheroplastmethod)、原生质体法(protoplast method)、乙酸锂法、和感受态法(competent method)。
除了直接表达以外,由用表达载体转化的宿主表达核酸的方法可为根据例如分子克隆第2版(Molecular Cloning 2nd Edition)中所描述的方法的分泌生产、和融合蛋白表达等。
疏水性蛋白可例如通过在培养基中培养转化的宿主、在培养基中生产并累积疏水性蛋白、和从培养基收集疏水性蛋白来产生。在培养基中培养转化的宿主的方法可为通常用于培养宿主的方法。
当宿主是例如大肠杆菌等原核生物或例如酵母等真核生物时,培养基可为天然培养基或合成培养基,只要其包含可由宿主同化的碳源、氮源、和无机盐等并且可以有效培养宿主即可。
碳源可为可由宿主同化的任何材料,其实例包括葡萄糖、果糖、蔗糖、含有上述的例如糖蜜、淀粉和淀粉水解物等碳水化合物、例如乙酸和丙酸等有机酸类、和例如乙醇和丙醇等醇类。
氮源的实例包括例如氨、氯化铵、硫酸铵、乙酸铵和磷酸盐等无机或有机酸的铵盐、其它含氮化合物、蛋白胨、肉提取物、酵母提取物、玉米浆、酪蛋白水解物、豆粕和豆粕水解物、和各种发酵微生物及它们的消化产物。
无机盐的实例包括磷酸二氢钾(primary potassium phosphate)、磷酸氢二钾(secondary potassium phosphate)、磷酸镁、硫酸镁、氯化钠、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、和碳酸钙。
例如大肠杆菌等原核生物或例如酵母等真核生物的培养可例如在诸如振荡培养或深层通气搅拌培养等的需氧条件下进行。培养温度为例如15℃至40℃。培养时间通常为16小时至7天。培养期间培养基的pH优选维持在3.0至9.0。培养基的pH可使用无机酸、有机酸、碱性溶液、尿素、碳酸钙、或氨等来调节。
根据需要,培养期间可将例如氨苄青霉素和四环素等抗生素添加至培养基。根据需要,在培养由使用诱导型启动子作为启动子的表达载体转化的微生物的情况中,可将诱导物添加至培养基。例如,在培养由使用lac启动子的表达载体转化的微生物时,可将异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷等添加至培养基,和在培养由使用trp启动子的表达载体转化的微生物时,可将吲哚丙烯酸等添加至培养基。
可用通常用于蛋白质分离和纯化的方法分离和纯化由转化的宿主产生的疏水性蛋白。例如,当疏水性蛋白以溶解状态在细胞内表达时,在培养完成后,通过离心收集宿主细胞并悬浮于水系缓冲液中,然后用超声波破碎机、弗氏压碎器、Manton-Gaulin均质器、或Dynomill等破碎宿主细胞以获得无细胞提取物。对于通过离心无细胞提取物来获得的上清液,可使用通常用于蛋白质分离和纯化的方法来获得纯化样品,所述方法为,使用溶剂提取法、使用硫酸铵的盐析法、脱盐法、使用有机溶剂的沉淀法、使用例如二乙氨基乙基(DEAE)-琼脂糖凝胶、DIAION HPA-75(Mitsubishi Kasei Corporation制造)等树脂的阴离子交换层析法、使用例如S-琼脂糖凝胶FF(S-Sepharose FF)(Pharmacia制造)等树脂的阳离子交换层析法、使用例如丁基琼脂糖凝胶和苯基琼脂糖凝胶等树脂的疏水性层析法、使用分子筛的凝胶过滤法、亲和层析法、聚焦层析法、和例如电泳如等电点电泳等方法,其中这些方法可单独使用或两种以上组合使用。
层析法优选为使用TOYOPEARL Phenyl(Tosoh)、TOYOPEARL DEAE(Tosoh)、和Sephadex G-150(Pharmacia Biotech)的柱层析法。
当通过在细胞中形成不溶性物质来表达疏水性蛋白时,类似地回收、破碎、和离心宿主细胞以将疏水性蛋白的不溶性物质作为沉淀级分回收。可用蛋白变性剂溶解回收的疏水性蛋白的不溶性物质。该操作后,可用与上述相同的离心和纯化方法来获得疏水性蛋白的纯化样品。
当细胞外分泌疏水性蛋白时,可从培养上清液回收疏水性蛋白。即,用例如离心等方法处理细胞以获得培养上清液,可使用与上述相同的分离和纯化方法从培养上清液获得纯化样品。
<蛋白质纤维>
第一实施方案的纤维是含有上述疏水性蛋白的蛋白质纤维并且可通过纺丝疏水性蛋白来产生。由于第一实施方案的纤维包含已经历如上所述的特定分子设计的疏水性蛋白,当通过浸渍于水等中以使其湿润时,显著抑制纤维强度的降低。因此,第一实施方案的纤维即使在与橡胶材料复合时、特别是在对其进行需要与水系组分接触的操作时,几乎不断裂。
对纺丝方法没有特别限制,只要其可将疏水性蛋白纺丝即可,其实例包括干式纺丝、熔融纺丝、和湿式纺丝。湿式纺丝是优选的纺丝方法。进一步地,其中疏水性蛋白溶解于溶剂中的纺丝原液(undiluted spinning solution)(原液溶液(dope solution))可用于任何方法。
以下主要以湿式方式为例进行说明。
在湿式纺丝中,首先,将纺丝原液从纺丝喷嘴(喷嘴)挤出至凝固液(凝固液槽),并可通过固化凝固液中的疏水性蛋白来获得丝(yarn)形状的未拉伸丝。
纺丝原液中的疏水性蛋白的含量可为1质量%以上、2质量%以上、4质量%以上、7质量%以上、10质量%以上、或15质量%以上,并且其可为40质量%以下、35质量%以下、30质量%以下、或25质量%以下。
对用于纺丝原液的溶剂没有特别限制,只要其可溶解或分散疏水性蛋白即可。溶剂的具体实例包括有机溶剂,例如二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)、六氟-2-丙醇(HFIP)、六氟丙酮(HFA)、和甲酸。溶剂可以是通过将在下文中描述的溶解促进剂添加至水来获得的溶剂。溶剂可单独使用或两种以上组合使用。
溶剂特别优选为选自由二甲基亚砜、甲酸、和添加有溶解促进剂的二甲基亚砜或甲酸组成的组的至少一种。
纺丝原液可进一步包含溶解促进剂。溶解促进剂促进纺丝原液的制备。
溶解促进剂可以是例如含有下文中所述的路易斯酸和路易斯碱的无机盐。路易斯碱的实例包括含氧酸离子(oxoacid ion)(例如硝酸根离子和高氯酸根离子等)、金属含氧酸离子(例如高锰酸根离子)、卤素离子、硫氰酸根离子、和氰酸根离子。路易斯酸的实例包括例如碱金属离子和碱土金属离子等金属离子、例如铵离子等多原子离子、和配离子(complex ion)。无机盐的实例包括例如氯化锂、溴化锂、碘化锂、硝酸锂、高氯酸锂和硫氰酸锂等锂盐,例如氯化钙、溴化钙、碘化钙、硝酸钙、高氯酸钙和硫氰酸钙等钙盐,例如铁氯化物、铁溴化物、铁碘化物、硝酸铁、高氯酸铁和硫氰酸铁等铁盐,例如氯化铝、溴化铝、碘化铝、硝酸铝、高氯酸铝和硫氰酸铝等铝盐,例如氯化钾、溴化钾、碘化钾、硝酸钾、高氯酸钾和硫氰酸钾等钾盐,例如氯化钠、溴化钠、碘化钠、硝酸钠、高氯酸钠和硫氰酸钠等钠盐,例如氯化锌、溴化锌、碘化锌、硝酸锌、高氯酸锌和硫氰酸锌等锌盐,例如氯化镁、溴化镁、碘化镁、硝酸镁、高氯酸镁和硫氰酸镁等镁盐,例如氯化钡、溴化钡、碘化钡、硝酸钡、高氯酸钡和硫氰酸钡等钡盐,和例如氯化锶、溴化锶、碘化锶、硝酸锶、高氯酸锶和硫氰酸锶等锶盐。这些无机盐用作甲酸中疏水性蛋白的溶解促进剂。当纺丝原液包含溶解促进剂(上述无机盐)时,疏水性蛋白可以以高浓度溶解于纺丝原液。因此,可进一步改善蛋白质纤维的生产效率,并且可改善蛋白质纤维的质量和例如蛋白质纤维的应力等物理性质。无机盐可以是选自由氯化锂和氯化钙组成的组的至少一种。溶解促进剂可单独使用或两种以上组合使用。
纺丝原液中溶解促进剂的含量可为0.1质量%以上、1质量%以上、4质量%以上、7质量%以上、10质量%以上、或15质量%以上,并且其可为20质量%以下、16质量%以下、12质量%以下、或9质量%以下。
根据需要,纺丝原液可进一步包含各种添加剂。添加剂的实例包括增塑剂、流平剂、交联剂、结晶成核剂、抗氧化剂、紫外线吸收剂、着色剂、填料、和合成树脂。相对于100质量份的纺丝原液中蛋白质的总量,添加剂的总含量可为50质量份以下。
纺丝原液可进一步包含醇,只要不损害本发明的效果即可。
纺丝原液的粘度可根据纺丝方法适当地设定,并且其可为例如35℃下100cp至15,000cp(厘泊)。纺丝原液的粘度可使用例如Kyoto Electronics Manufacturing Co.,Ltd制造的商品名“EMS粘度计”测定。
凝固液可为具有去溶剂化的功能的任何溶液,并且其实例包括例如甲醇、乙醇和2-丙醇等碳数为1至5的低级醇、和丙酮。根据情况,凝固液可添加有水。凝固液的温度优选为0℃至30℃。当具有直径为0.1mm至0.6mm的喷嘴的注射泵用作纺丝喷嘴时,每孔的挤出速度优选为0.2ml/小时至6.0ml/小时、更优选1.4ml/小时至4.0ml/小时。对凝固液槽的长度没有限制,只要其可有效去除溶剂即可,并且其可为例如200mm至500mm。未拉伸丝的收集速度可为例如1m/min至20m/min,并且优选为1m/min至3m/min。滞留时间可为例如0.01分钟至3分钟,并且优选为0.05分钟至0.15分钟。进一步地,可通过在凝固液中拉伸(预拉伸)来获得预拉伸丝。为了抑制低级醇的蒸发,可将凝固液保持在低温下并且丝可作为未拉伸丝收集。可以以多阶段设置凝固液槽,根据需要,可以在各阶段中或在特定阶段中收集丝。
然后,可以拉伸所得未拉伸丝(或预拉伸丝)以获得拉伸丝(蛋白质纤维)。拉伸方法的实例包括湿热拉伸和干热拉伸。
湿热拉伸可以在温水中、在通过将有机溶剂等添加至温水来获得的溶液中、或在蒸汽加热中进行。温度可为例如50℃至90℃、并且优选为75℃至85℃。在湿热拉伸中,可拉伸未拉伸丝(或预拉伸丝)例如1至10次,并且优选2至8次。
干热拉伸可以使用管式电热炉、或干热板等进行。温度可为例如140℃至270℃、并且优选为160℃至230℃。在干热拉伸中,可拉伸未拉伸丝(或预拉伸丝)例如0.5至8次,并且优选1至4次。
湿热拉伸和干热拉伸可单独地进行,或它们可以以多步或组合进行。例如,拉伸可由第一步拉伸为湿热拉伸和第二步拉伸为干热拉伸来进行,或拉伸可由第一步拉伸为湿热拉伸、第二步拉伸为湿热拉伸、和第三步拉伸为干热拉伸来进行。即,拉伸可通过适当地组合湿热拉伸和干热拉伸来进行。
拉伸后的最终拉伸倍率为例如未拉伸丝(或预拉伸丝)的5至20倍,并且优选6至11倍。
拉伸后的纤维可用作第一实施方案的纤维,但第一实施方案的纤维可通过在拉伸后、在所得蛋白质纤维中进一步化学交联多肽分子来获得。可交联的官能团的实例包括氨基、羧基、硫醇基和羟基。例如,多肽中所含有的赖氨酸侧链的氨基可与谷氨酸或天冬氨酸侧链的羧基通过脱水缩合经由酰胺键交联。交联可通过在真空加热下的脱水缩合反应来进行、或可使用脱水缩合剂如碳二亚胺来进行。
多肽分子之间的交联可使用例如碳二亚胺或戊二醛等交联剂来进行、或可使用例如转谷氨酰胺酶等酶来进行。碳二亚胺是由通式R1N=C=NR2(其中,R1和R2分别独立地表示碳数为1至6的烷基和含有环烷基的有机基团)表示的化合物。碳二亚胺的具体实例包括1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、1-环己基-3-(2-吗啉基乙基)碳二亚胺、和二异丙基碳二亚胺(DIC)。上述中,碳二亚胺优选EDC或DIC,因为EDC和DIC在多肽分子之间形成酰胺键的能力高并容易地引起交联反应。
交联处理优选通过将交联剂施加至蛋白质纤维、并进行真空加热和干燥来进行。可将纯交联剂施加至蛋白质纤维、或可将用碳数为1至5的低级醇和缓冲液等稀释至0.005质量%至10质量%的浓度的交联剂施加至蛋白质纤维。交联处理优选在20℃至45℃的温度下进行3至42小时。蛋白质纤维通过交联处理获得较高应力(强度)。
如上所述,通过用其中溶解了蛋白质的原液纺丝来取向β-折叠晶体,使得所得纤维的初始拉伸弹性模量接近于通过利用纤维张力的液晶纺丝获得的高强度纤维的初始拉伸弹性模量。进一步地,所得纤维趋于抵抗纤维轴方向的压缩应变输入,并且不太可能出现其中沿纤维轴方向发生破裂的断裂面。认为原因是蛋白质或蛋白质的高级结构的纤维轴方向上取向的β-折叠晶体之间的相互作用。
(第二橡胶增强用纤维)
根据本发明的第二实施方案的橡胶增强用纤维(下文中可称为“第二实施方案的纤维”)使用湿润时的初始拉伸弹性模量为2.0GPa以上的蛋白质纤维。换言之,第二实施方案的纤维是湿润时的初始拉伸弹性模量为2.0GPa以上的蛋白质纤维。如上所述,第二实施方案的纤维的湿润时的初始拉伸弹性模量高,使得在通过浸渍于水等中来使其湿润时,显著抑制纤维强度的降低。因此,第二实施方案的纤维即使在与橡胶材料复合时、特别地在对其进行需要与水系组分接触的操作时,几乎不断裂。
第二实施方案的纤维包括上述第一实施方案的纤维,并且可进一步包括除了第一实施方案的纤维以外的纤维。例如,第二实施方案的纤维可包括通过制备含有除了上述疏水性蛋白以外的蛋白(例如,亲水性蛋白)的蛋白质纤维、并用几乎不溶于水的组分涂覆其表面来获得的纤维。
如本文所用,“初始拉伸弹性模量”是指通过在拉伸速度为300mm/min的条件下、对纤维长度为300mm的纤维进行拉伸试验来测定的杨氏模量。
如本文所用,“湿润时(的纤维)”是指已浸渍于水中15分钟并充分湿润的纤维。另一方面,如本文所用,“干燥时(的纤维)”是指未进行例如浸渍等特殊处理的纤维。
拉伸试验可例如使用Instron制造的Instron 3345进行。进一步地,初始拉伸弹性模量可以是例如通过用诸如“Instron Bluehill Le”等分析软件分析由Instron 3345获得的数据来计算的。
第二实施方案的纤维的湿润时的初始拉伸弹性模量优选为3.0GPa以上、且更优选为4.0GPa以上。进一步地,第二实施方案的纤维的湿润时的初始拉伸弹性模量为例如12.0GPa以下。
第二实施方案的纤维的湿润时的断裂强度优选为50MPa以上。在该情况下,可更有效地增强橡胶制品的强度。进一步地,第二实施方案的纤维的湿润时的断裂强度可为例如350MPa以下。
第二实施方案的纤维的干燥时的断裂强度优选为100MPa以上。在该情况下,可更有效地增强橡胶制品的强度。进一步地,第二实施方案的纤维的干燥时的断裂强度可为例如700MPa以下。
如本文所用,“断裂强度”是指纤维长度为300mm的纤维在拉伸速度为300mm/min的条件下对其进行拉伸试验并且拉伸强度降低15%时的强度。
拉伸试验可例如使用Instron制造的Instron 3345进行。
纤维的干燥/湿润时的初始拉伸弹性模量和断裂强度可通过例如适当地选择纺丝期间用于原液的溶剂的种类、和调节纺丝期间的拉伸倍率来调节。
第二实施方案的纤维的生产方法与上文中对于第一实施方案的纤维所描述的相同。
以下描述了第一实施方案的纤维和第二实施方案的纤维(下文中,可简单地统称为“纤维”)的共同事项。
对纤维没有特别限制,其可为短纤维;无纺布;帘线织物;膜;和例如帆布单丝帘线(canvas monofilament cord)等帘线、或通过将一根或多根复丝捻合来获得的捻合帘线。特别地,在增强例如轮胎和传送带等橡胶制品时,纤维优选为帘线,并且更优选为通过捻合多根丝来获得的捻合帘线。对纤维的总细度(fineness)没有特别限制,但其优选为500dtex至5,000dtex。
当纤维与橡胶材料复合时,纤维长度优选超过6.0mm、更优选超过10mm、仍更优选35mm以上。这是因为,如上所述,本实施方案的纤维具有降低断裂的可能性的效果,特别是在湿润时,并且所述效果在长纤维中比在断裂的短纤维中更显著。
关于纤维长度,纤维手册第2版(Fiber Handbook 2nd edition)(Society ofFiber Science and Technology编辑:Maruzen Co.,Ltd.;1994;第66页)将长度超过10mm的纤维分类为“长纤维”,并将长度小于10mm的纤维分类为“短纤维”。本实施方案也通过与上述文献相同的标准来分类纤维。尽管上述文献中未提及长度恰好为10mm的纤维,如本文所用,其包含在“短纤维”中。进一步地,“长纤维”包括连续纤维。
纤维可在表面上设置有由粘接剂组合物制成的涂层,使得其可包埋在橡胶材料中以获得具有增加的强度的橡胶制品。进一步地,在形成涂层时,可例如预先通过电子束、微波、电晕放电、或等离子体等对纤维的要涂覆的表面进行预处理。涂层的厚度优选为0.5μm至50μm、更优选为1μm至10μm。
从容易涂覆的观点,粘接剂组合物优选溶解于溶剂中以降低其粘度并使用。进一步地,从降低对环境的负担的观点,溶剂优选包含水。即,从降低对环境的负担的观点,粘接剂组合物优选为水系粘接剂组合物。如上所述,显著抑制了在使纤维湿润时纤维强度的降低,使得即使在使用水系粘接剂组合物时,纤维几乎不断裂。
如本文所用,“水系粘接剂组合物”是指水在整体中的比例为30质量%以上的粘接剂组合物。
对水系粘接剂组合物没有特别限制,只要其可改善对橡胶材料的粘接性即可,其实例包括含有通常用于接合橡胶和纤维的组分的水系粘接剂组合物。水系粘接剂组合物特别优选包含橡胶胶乳(组分(A))如橡胶胶浆(rubber cement)。换言之,水系粘接剂组合物优选包含橡胶组分。在该情况中,可更有效改善粘接性。
(A)橡胶胶乳(橡胶组分)的实例包括可用硫硫化的橡胶胶乳,更具体的实例包括天然橡胶胶乳和具有不饱和二烯的合成橡胶胶乳。这些橡胶胶乳可单独使用或两种以上组合使用。
对天然橡胶胶乳没有特别限制,其实例包括田间胶乳(field latex)、氨处理的胶乳、离心分离和浓缩的胶乳、用洗涤剂和/酶处理的脱蛋白的胶乳、及其改性物。
对具有不饱和二烯的天然橡胶胶乳没有特别限制,其实例包括苯乙烯-丁二烯共聚物橡胶胶乳、乙烯基吡啶-苯乙烯-丁二烯共聚物橡胶胶乳、羧基修饰的苯乙烯-丁二烯共聚物橡胶胶乳、丁腈橡胶胶乳、和氯丁二烯橡胶胶乳。这些合成橡胶胶乳可单独使用或两种以上组合使用。
(A)橡胶胶乳在水系粘接剂组合物中总固成分中的含量(固成分浓度)优选为25质量%以上。在该情况中,存在足够的与贴胶用橡胶组合物(复合用橡胶材料)相互作用并导致硫化的粘接剂组合物中含有的橡胶胶乳的橡胶组分,橡胶组分通过共硫化而彼此粘附,并且可改善橡胶增强用纤维和橡胶材料的复合体中涂覆的橡胶的粘附状态。从同样的观点,(A)橡胶胶乳在水系粘接剂组合物中总固成分中的含量(固成分浓度)优选为30质量%以上。
除了(A)橡胶胶乳以外,水系粘接剂组合物优选进一步包含(B)间苯二酚和(C)甲醛。在该情况下,可进一步有效改善粘接性。对水系粘接剂组合物没有特别限制,可使用常规已知并使用的间苯二酚-甲醛-胶乳混合物(RFL组合物)。
当水系粘接剂组合物包含(A)橡胶胶乳、(B)间苯二酚和(C)甲醛时,(A)橡胶胶乳在水系粘接剂组合物中总固成分中的含量(固成分浓度)优选为25质量%以上且优选为80质量%以下。当含量为25质量%以上时,存在足够的与贴胶用橡胶组合物(复合用橡胶材料)相互作用并导致硫化的粘接剂组合物中含有的橡胶胶乳的橡胶组分,橡胶组分通过共硫化而彼此粘附,并且可改善橡胶增强用纤维和橡胶材料的复合体中涂覆的橡胶的粘附状态。进一步地,当含量为80质量%以下时,可相对确保特定量以上的(B)间苯二酚和(C)甲醛,使得充分确保由粘接剂组合物制成的涂层的耐内聚断裂抗力(cohesive fractureresistance),并且在涂层中几乎不发生断裂。因此,可获得充分的粘接性。从相同的观点,(A)橡胶胶乳在水系粘接剂组合物中总固成分中的含量(固成分浓度)更优选为30质量%以上、且仍更优选为40质量%以上。进一步地,其更优选为70质量%以下、且仍更优选为65质量%以下。
当水系粘接剂组合物包含(A)橡胶胶乳、(B)间苯二酚和(C)甲醛时,(C)甲醛与(B)间苯二酚的摩尔比((C)甲醛/(B)间苯二酚)优选在0.8至1.5的范围内。在该情况下,由(C)甲醛适当地引发(B)间苯二酚的缩聚,并且可进一步改善由粘接剂组合物制成的涂层的耐内聚断裂抗力。
可选地,从降低对环境的负担的观点,水系粘接剂组合物优选不包含(B)间苯二酚。
除了(A)橡胶胶乳以外,水系粘接剂组合物可进一步包含选自由(D)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性化合物、(E)环氧化合物、和(F)胺化合物组成的组的至少一种组分。对水系粘接剂组合物没有特别限制,其实例包括WO/2010/125992中所述的粘接剂组合物。
(D)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性化合物的“(封端的)异氰酸酯基团”是指封端的异氰酸酯基团或异氰酸酯基团,其包括
(i)通过异氰酸酯基团与异氰酸酯基团用封端剂的反应获得的封端的异氰酸酯基团,
(ii)其中异氰酸酯基团不与异氰酸酯基团用封端剂反应的异氰酸酯基团,
(iii)通过从封端的异氰酸酯基团解离封端剂来获得的异氰酸酯基团,和(iv)异氰酸酯基团。
(D)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性化合物的“水系”是指(D)水性化合物是水溶性或水分散性的,其中“水溶性”不必须是指其为完全水溶性的,但也是指其为部分地水溶性的或在粘接剂组合物的水溶液中不发生相分离。
对封端剂没有特别限制,只要其为可以根据需要通过进行热处理来解离封端剂并恢复异氰酸酯基团、同时保护异氰酸酯基团免于任意化学反应的封端剂化合物即可。这样的封端剂的实例包括醇、酚、活性亚甲基、肟、内酰胺、和胺,对其没有特别限制。其具体实例包括内酰胺,例如ε-己内酰胺、δ-戊内酰胺、和γ-丁内酰胺;酚类,例如苯酚、甲酚、乙基苯酚、丁基苯酚、辛基苯酚、壬基苯酚、二壬基苯酚、苯硫酚、氯苯酚、戊基苯酚;肟类,例如甲乙酮肟、丙酮肟、苯乙酮肟、苯甲酮肟、和环己酮肟;醇类,例如甲醇、乙醇、丁醇(butanol)、异丙醇、丁基醇(butyl alcohol)、和环己醇;丙二酸二烷基酯例如丙二酸二甲酯和丙二酸二乙酯;活性亚甲基类,例如乙酰乙酸甲酯、乙酰乙酸乙酯、和乙酰丙酮,和硫醇类,例如丁硫醇和十二硫醇;酰胺类,例如乙酰苯胺和乙酸酰胺(acetate amide);酰亚胺类,例如琥珀酰亚胺、邻苯二甲酸酰亚胺、和马来酸酰亚胺;亚硫酸盐类,例如亚硫酸氢钠;溶纤剂类(cellosolves),例如甲基溶纤剂、乙基溶纤剂、和丁基溶纤剂;吡唑类,例如吡唑、3,5-二甲基吡唑、3-甲基吡唑、4-苄基-3,5-二甲基吡唑、4-硝基-3,5-二甲基吡唑、4-溴-3,5-二甲基吡唑、和3-甲基-5-苯基吡唑;胺类,例如二甲胺、二乙胺、二正丙胺、二异丙胺、二环己胺、二苯胺、二甲苯胺、N,N-二乙基羟胺、N,N’-二苯基甲脒、2-羟基吡啶、3-羟基吡啶、和2-巯基吡啶;和三唑类,例如1,2,4-三唑。封端剂可单独使用或以两种以上的组合使用。
封端剂特别优选为苯酚、ε-己内酰胺和酮肟,其可通过加热由热分解来容易且稳定地导致粘接剂组合物的热固化。
(D)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性化合物优选为(D-1)为具有芳香环的多异氰酸酯和具有一个以上的活性氢基团的封端剂的加成产物的水分散性(封端的)异氰酸酯化合物。对于“(D-1)为具有芳香环的多异氰酸酯和具有一个以上的活性氢基团的封端剂的加成产物的水分散性(封端的)异氰酸酯化合物”,“活性氢基团”是指含有在置于合适条件下时起到活性氢(原子氢(氢自由基)和氢阴离子(氢化物))的作用的氢的基团。活性氢基团的实例包括氨基和羟基。
具体地,“(D-1)为具有芳香环的多异氰酸酯和具有一个以上的活性氢基团的封端剂的加成产物的水分散性(封端的)异氰酸酯化合物”包括芳香族多异氰酸酯或芳香族脂肪族多异氰酸酯。芳香族多异氰酸酯的实例包括亚苯基二异氰酸酯类,例如间苯二异氰酸酯和对苯二异氰酸酯;甲苯二异氰酸酯类,例如2,4-甲苯二异氰酸酯和2,6-甲苯二异氰酸酯(TDI);二苯基甲烷二异氰酸酯类,例如2,4’-二苯基甲烷二异氰酸酯、4,4’-二苯基甲烷二异氰酸酯(MDI)、二烷基二苯基甲烷二异氰酸酯、四烷基二苯基甲烷二异氰酸酯;聚亚甲基聚苯基多异氰酸酯(聚合MDI);间或对异氰酸基苯磺酰基异氰酸酯类;二异氰酸基联苯类,例如,4,4’-二异氰酸基联苯和3,3’-二甲基-4,4’-二异氰酸基联苯;萘二异氰酸酯类,例如1,5-萘二异氰酸酯。芳香脂肪族多异氰酸酯的实例包括苯二甲基二异氰酸酯类,例如间苯二甲基二异氰酸酯、对苯二甲基二异氰酸酯(XDI)、和四甲基苯二甲基二异氰酸酯;二乙基苯二异氰酸酯;和α,α,α,α-四甲基苯二甲基二异氰酸酯(TMXDI)。实例进一步包括改性产物,例如多异氰酸酯的碳二亚胺、多元醇和脲基甲酸酯。
在这些分子中含有芳香环的多异氰酸酯中,从粘接剂组合物的帘线集束性(focusing property)的观点,优选芳香族多异氰酸酯,更优选甲苯二异氰酸酯(TDI)、二苯基甲烷二异氰酸酯(MDI)或聚亚甲基聚苯基多异氰酸酯(聚合MDI),特别优选二苯基甲烷二异氰酸酯(MDI)。
(D)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性化合物更优选为(D-2)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性聚氨酯化合物。
(D-2)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性聚氨酯化合物的市售可得商品的实例包括MEISEI CHEMICAL WORKS,LTD.制造的DM-6400、DKS Co.Ltd.制造的ELASTRON BN69、和EMS制造的GRILBOND IL-6。进一步地,(D-2)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性聚氨酯化合物也可以是DKS Co.Ltd.制造的ELASTRON BN27、BN77、BN11等。
(D-2)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性聚氨酯化合物可例如通过使(α)具有其中芳香族类(aromatic)通过亚烷基链键合的分子结构的有机多异氰酸酯化合物、(β)具有多种活性氢的化合物、和(γ)异氰酸酯基团用热分解封端剂反应来获得。(α)有机多异氰酸酯化合物中亚烷基链的键优选为亚甲基键。
(D-2)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性聚氨酯化合物可由已知方法如JPS6351474B中所述方法生产。
当配混时,(D)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性化合物在水系粘接剂组合物中总固成分中的含量(固成分浓度)优选为5质量%以上。进一步地,含量优选为75%以下。当含量为5质量%以上时,可进一步改善纤维和橡胶材料的复合期间的粘接性。进一步地,当含量为75质量%以下时,可相对确保特定量以上的(A)橡胶胶乳,使得可良好维持纤维和橡胶材料的复合期间的粘接性。从相同的观点,(D)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性化合物在水系粘接剂组合物中总固成分中的含量(固成分浓度)更优选为10质量%以上、且仍更优选20质量%以上。进一步地,含量优选为75质量%以下、更优选60质量%以下、且仍更优选50质量%以下。
(E)环氧化合物是指在其结构式中具有为3元环醚的氧杂环丙烷(oxacyclopropane)(oxirane)(环氧基团)的化合物。
(E)环氧化合物优选为在一个分子中含有两个以上的环氧基团的化合物。在该情况下,多官能化(polyfunctionalization)进一步改善由粘接剂组合物制成的涂层的耐断裂性并且还改善高温下的粘接性。从相同的观点,(E)环氧化合物更优选为在一个分子中含有四个以上的环氧基团的化合物。
(E)环氧化合物的具体实例包括环氧氯丙烷和多元醇的反应产物,例如二甘醇/二缩水甘油醚、聚乙烯/二缩水甘油醚、聚丙二醇/二缩水甘油醚、新戊二醇/二缩水甘油醚、1,6-己二醇/二缩水甘油醚、甘油/聚缩水甘油醚、三羟甲基丙烷/聚缩水甘油醚、聚甘油/聚缩水甘油醚、季戊四醇/聚缩水甘油醚、二甘油/聚缩水甘油醚、和山梨醇/聚缩水甘油醚;酚醛清漆型环氧树脂类,例如苯酚酚醛清漆型环氧树脂和甲酚酚醛清漆型环氧树脂;和双酚A型环氧树脂。(E)环氧化合物优选为环氧氯丙烷和多元醇的反应产物、或酚醛清漆型环氧树脂。
山梨醇/聚缩水甘油醚、聚甘油/聚缩水甘油醚、酚醛清漆型环氧树脂等可为市售可得的产品。
当配混时,(E)环氧化合物在水系粘接剂组合物中总固成分中的含量(固成分浓度)优选为0.3质量%以上。进一步地,含量优选为45质量%以下。当含量为0.3质量%以上时,可进一步改善粘接性。进一步地,当含量为45质量%以下时,可相对确保特定量以上的(A)橡胶胶乳和其它组分,使得可良好维持纤维和橡胶材料的复合期间的粘接性。从相同的观点,(E)环氧化合物在水系粘接剂组合物中总固成分中的含量(固成分浓度)更优选为0.5质量%以上。进一步地,含量更优选为40质量%以下。
(F)胺化合物可为例如已知作为胺系固化剂的胺类,其实例包括脂肪族胺类、脂环族胺类、芳香族胺类、杂环胺、和曼尼希碱类(Mannich base)。上述中,优选使用杂环胺作为(F)胺化合物。
杂环胺的实例包括哌嗪、1-氨乙基哌嗪、1,4-二氨乙基哌嗪、3-氨基吡咯烷、2-(2-氨乙基)吡咯烷、4,4’-二哌嗪、4,4’-亚乙基二哌啶、4,4’-三亚甲基二哌啶、4-(氨乙基)哌啶、和3-(4-氨基丁基)哌啶。
当配混时,(F)胺化合物在水系粘接剂组合物中总固成分中的含量(固成分浓度)优选为0.2质量%以上且10质量%以下。当含量为0.2质量%以上时,(F)胺化合物可用作用于(D)具有(封端的)异氰酸酯基团的水性化合物和/或(E)环氧化合物的固化剂,这可进一步加强固化。进一步地,当含量为10质量%以下时,可以有效抑制水系粘接剂组合物的脆化(embrittlement),从而抑制粘接性的降低。
当水系粘接剂组合物包含(A)橡胶胶乳时,其优选不包含硫(元素硫)。这是因为在使用硫时,硫粉末可在(A)橡胶胶乳中沉淀,或者当(A)橡胶胶乳的橡胶颗粒通过加热或干燥用硫转变为硫化橡胶时,贴胶用橡胶材料中的橡胶组分难以与粘接剂组合物中的橡胶组分相互作用。
可例如通过浸渍、涂刷、浇注、喷雾、辊涂、和刮涂等来形成由粘接剂组合物制成的涂层。以下描述浸渍作为实例。
图2示出了用浸渍法在纤维(帘线)表面上形成由粘接剂组合物制成的涂层的示例装置的概述。在图2所示的装置10中,帘线未卷绕,将每帘线的张力调整为0.20kg至1.2kg,并将帘线浸渍在液体槽5中的粘接剂组合物(液体)中。接下来,通过拉伸辊4由辊间拉伸压力来调节附着至帘线的粘接剂组合物的量,在干燥区1中、在例如110℃至140℃且优选110℃至120℃下干燥帘线,然后,在热区2和标准化区3中、在例如130℃至170℃和优选130℃至150℃下对帘线进行热处理。然后,可适当地冷却。当帘线的张力超过1.2kg时,帘线的强度可降低,并且当张力低于0.20kg时,移动的帘线可变松散并且可频繁地发生从帘线轨道的脱轨。应注意,浸渍期间帘线张力越低,与水接触的特定蛋白质纤维的张力方向上的变形越小。因此,帘线的张力优选0.20kg至0.30kg。
为了增强所得橡胶制品,可通过将纤维包埋在橡胶材料等中来将纤维与橡胶材料复合(贴胶)、并且可用常规方法与橡胶材料硫化和整合。对橡胶材料中所含有的橡胶组分没有特别限制,其实例包括例如天然橡胶(NR)、聚异戊二烯橡胶(IR)、聚丁二烯橡胶(BR)、苯乙烯-丁二烯橡胶(SBR)、丙烯腈丁二烯橡胶(NBR)、氯丁二烯橡胶(CR)和丁基橡胶(IIR)等共轭二烯系橡胶、以及乙烯-丙烯共聚物橡胶(EPM)、乙烯-丙烯-二烯共聚物橡胶(EPDM)和聚硅氧烷橡胶。上述中,优选共轭二烯系合成橡胶。这些橡胶组分可单独使用或两种以上的组合使用。
通常用于橡胶工业的各种配混剂如炭黑、二氧化硅和氢氧化铝等填料;硫化剂;硫化促进剂;防老剂;和软化剂可适当地添加至橡胶组分。
硫化剂的实例包括无机硫化剂例如硫磺,秋兰姆多硫化物化合物例如二硫化四甲基秋兰姆和四硫化双五亚甲基秋兰姆,和有机硫化剂例如4,4-二硫代吗啉、对醌二肟、p,p’-二苯醌二肟、和环状硫酰亚胺。上述中,优选使用硫磺作为硫化剂。
当纤维在表面上设置有由粘接剂组合物制成的涂层并且它们与橡胶材料一起硫化时,橡胶材料中所含有的硫化剂转移至粘接剂组合物并且粘接剂组合物通过硫化剂交联,这提供更好的粘接性。
(橡胶制品)
本发明的一个实施方案的橡胶制品包括上述橡胶增强用纤维。由于橡胶制品包含橡胶增强用纤维,其具有高强度。橡胶制品除了其包含橡胶增强用纤维以外没有特别限制。对橡胶制品没有特别限制,并且其实例包括轮胎、传送带、皮带、软管、空气弹簧、橡胶履带、隔震(seismic isolation)橡胶、防震(vibration-insulating)橡胶等。
(轮胎用帘线和轮胎)
本发明的一个实施方案的轮胎用帘线包括上述橡胶增强用纤维。由于轮胎用帘线包括橡胶增强用纤维,其具有高强度。轮胎用帘线可以是橡胶增强用纤维。
进一步地,本发明的一个实施方案的轮胎包括上述轮胎用帘线。由于轮胎包括轮胎用帘线,其具有高强度。轮胎除了任何部件设置有轮胎用帘线以外没有特别限制。进一步地,对制造轮胎的方法没有特别限制,并且可使用已知的轮胎制造方法制造。
以下参照实施例更详细地描述本发明,但本发明不限于以下实施例并且可在不脱离本发明的范围的情况下酌情变化。
(1-1)编码疏水性蛋白的核酸的合成和表达载体的构建
合成编码经设计的具有SEQ ID NO:17中记载的氨基酸序列的蛋白质的核酸。将NdeI位点添加至核酸的5’末端,并在终止密码子的下游添加EcoRI位点。将这五种核酸克隆至克隆载体(pUC118)。然后,用NdeI和EcoRI通过限制性酶处理来切割核酸,然后与蛋白表达载体pET-22b(+)重组以获得表达载体。
(1-2)疏水性蛋白的表达
用含有编码具有SEQ ID NO:17中记载的氨基酸序列的蛋白质的核酸的pET22b(+)表达载体转化大肠杆菌(Escherichia coli)BLR(DE3)。在2mL的含有氨苄青霉素的LB培养基中培养转化的大肠杆菌15小时。将培养液添加至100mL的含有氨苄青霉素的菌种培养基(表4中列出)中,使得OD600为0.005。将培养液温度保持在30℃,进行玻瓶培养直至OD600达到5(约15小时)以获得菌种培养液。
表4菌种培养基(培养开始时每1L)
添加氨苄青霉素至100mg/L的最终浓度以获得菌种培养基。
将菌种培养液添加至已向其添加500mL的生产培养基(表5中列出)的发酵罐(jarfermentor)中,使得OD600为0.05,并培养转化的大肠杆菌。将培养液的温度保持在37℃,并在pH 6.9下恒定培养。进一步地,将培养液中的溶解氧浓度维持在20%的溶解氧饱和浓度。
表5
生产培养基(培养开始时每1L)
在完全消耗生产培养基中的葡萄糖后即刻,以1mL/min的速度添加料液(葡萄糖455g/1L,酵母提取物120g/1L)。将培养液的温度保持在37℃,并在pH 6.9下恒定控制培养。进一步地,将培养液中溶解氧浓度维持在20%的溶解氧饱和浓度,并进行培养20小时。然后,将1M的异丙基-β-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)添加至培养液至1mM的最终浓度以诱导靶蛋白的表达。添加IPTG后20小时,离心培养液并收集细菌细胞。使用由添加IPTG前后的培养基制备的细菌细胞进行SDS-PAGE,通过依赖于IPTG的添加的靶蛋白大小的条带的出现而确证靶蛋白(PRT918)的表达。
确证了表达的蛋白(修饰蛋白)是疏水性蛋白,其中通过将所有构成氨基酸残基的疏水性指数的总和除以氨基酸残基的总数来获得的值(平均HI)为0.45。
(1-3)疏水性蛋白的纯化
用20mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)洗涤添加IPTG后2小时收集的细菌细胞。将洗涤的细胞悬浮于含有约1mM PMSF的20mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)中,并用高压均质机(GEANiro Soavi)破坏细胞。离心破碎的细胞以获得沉淀物。用20mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)洗涤所得沉淀物直至获得高纯度。将洗涤的沉淀物悬浮于8M胍缓冲液(8M盐酸胍,10mM磷酸二氢钠,20mM NaCl,1mM Tris-HCl,pH 7.0)至100mg/mL的浓度,在60℃下用搅拌机搅拌混合物30分钟以溶解。溶解后,使用透析管(Sanko Junyaku Co.,Ltd.制造的纤维素管36/32)用水进行透析。通过离心回收透析后获得的白色聚集蛋白,通过冷冻-干燥机去除水,并回收冷冻干燥的粉末。
通过使用Totallab(nonlinear dynamics ltd.)的粉末的聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果的图像分析确证了所得冻干粉末中靶蛋白的纯化程度。结果,纯化程度为约85%。
(1-4)纺丝原液(原液)的制备
将其中溶解了氯化锂至4质量%的DMSO用作溶剂。将上述制备的PRT918(SEQ IDNO:17)的疏水性蛋白的冻干粉末添加至溶剂以具有24质量%的含量。然后,在用铝块加热台在90℃下熔融1小时后,去除不溶性物质和泡以获得纺丝原液(原液)。
(1-5)纺丝(蛋白质纤维的制备)
将纺丝原液填充在储备罐中并使用齿轮泵从直径为0.1mm或0.2mm的单孔喷嘴排出至100质量%甲醇凝固浴中。将排出速率调节为0.01mL/min至0.08mL/min。凝固后,在100质量%甲醇洗涤浴中进行洗涤和拉伸。洗涤和拉伸后,使用干热板干燥,并卷绕所获得的原丝(蛋白质纤维)。
(2)含有亲水性蛋白的蛋白质纤维的制备
合成编码具有SEQ ID NO:4中记载的氨基酸序列的蛋白的核酸,除了使用所述核酸以外,根据与上述实质上类似的方法表达蛋白(PRT799)。确证了表达的蛋白(修饰蛋白)不是疏水性蛋白(其为亲水性蛋白),其中通过将所有构成氨基酸残基的疏水性指数的总和除以氨基酸残基的总数来获得的值(平均HI)为-0.8。
根据与上述相同的方法纯化和纺丝修饰的蛋白以获得原丝(蛋白质纤维)。
(3)捻合帘线的制备
将含有上述疏水性蛋白的蛋白质纤维用于实施例1,将含有亲水性蛋白的蛋白质纤维用于比较例1和2,在各实例中获得在2000dtex/2下、其中上捻度为42次/10cm和下捻度为42次/10cm下捻合的帘线(捻合帘线)。
(4)水系粘接剂组合物的制备
通过将500质量份的水和500质量份的固成分含量为20质量%的天然橡胶胶乳(田间胶乳)混合来获得含有天然橡胶的橡胶胶乳(NR胶乳)。NR胶乳用作实施例1和比较例2中的水系粘接剂组合物。
通过将756质量份的水和244质量份的固成分浓度为41质量%的乙烯基吡啶-苯乙烯-丁二烯共聚物橡胶胶乳(Sumitomo A&L Co.,Ltd.制造的“PYLATEX”)混合来获得含有乙烯基吡啶-苯乙烯-丁二烯共聚物橡胶的橡胶胶乳(Vp胶乳)。Vp胶乳用作实施例2和比较例3中的水系粘接剂组合物。
通过将588.29质量份的水、16.61质量份的间苯二酚(Tokyo Chemical IndustryCo.,Ltd.制造)、20.80质量份的福尔马林(Tokyo Chemical Industry Co.,Ltd.制造的“甲醛溶液(37%)”)、和3.79质量份的苛性钠(10%)混合来获得混合物,然后,将混合物在室温下老化7小时以获得含有间苯二酚和甲醛的老化溶液。然后,将370.51质量份的乙烯基吡啶-苯乙烯-丁二烯共聚物橡胶胶乳(Sumitomo A&L Co.,Ltd.制造的“PYLATEX”)添加至629.49质量份的老化溶液,将混合物在室温下老化16小时以获得RFL组合物(间苯二酚-甲醛-胶乳混合物)。RFL组合物用作实施例3和比较例4中的水系粘接剂组合物。
通过将462.39质量份的水、242.17质量份的具有(封端的)异氰酸酯基团的化合物(DKS Co.Ltd.制造的“ELASTRON BN27”,具有30%的固成分浓度和亚甲基联苯的分子结构的热反应性水性聚氨酯树脂)、8.55质量份的环氧化合物(Nagase ChemteX Corporation制造的“DENACOL EX614B”,山梨醇/聚缩水甘油醚)、1.99质量份的胺化合物(Tokyo ChemicalIndustry Co.,Ltd.制造的哌嗪(酸酐))、和284.90质量份的乙烯基吡啶-苯乙烯-丁二烯共聚物橡胶胶乳(Sumitomo A&L Co.,Ltd.制造的“PYLATEX”)以所述顺序混合来获得含胶乳的组合物。含胶乳的组合物具有根据WO/2010/125992的实施例5的组成并且不包含间苯二酚。含胶乳的组合物用作实施例4和比较例5中的水系粘接剂组合物。
(5)蛋白质纤维上的涂层的形成
使用图2中所示的装置10。对上述(3)中制备的捻合帘线施加0.25kg/件的张力(帘线张力)并浸渍在贮存于液体槽5中的粘接剂溶液中。粘接剂溶液可从上述(4)中获得的水系粘接剂组合物适当地选择。然后,将附着有粘接剂溶液的捻合帘线在干燥区1(130℃,120秒)中干燥、同时对其施加0.6kg/件的张力(帘线张力)。接着,在热区2(150℃,40秒)和标准化区3(140℃,40秒)中对其进行热处理。这样,在捻合帘线的表面上形成了由水系粘接剂组合物制成的涂层。
(6)纤维增强橡胶的生产
将所得捻合帘线包埋在含有包含天然橡胶和苯乙烯-丁二烯橡胶、炭黑、和交联剂的橡胶组分的未硫化橡胶组合物(未硫化)中,在160℃下进行硫化20分钟以获得纤维增强橡胶。
在进行上述操作时,进行以下测量等。
(7)蛋白质纤维(涂层形成前)的干燥/湿润时的初始拉伸弹性模量和断裂强度的测量
在温度为20℃和湿度为65%的环境中、在纤维长度为300mm和拉伸速度为300mm/min的条件下、使用Instron制造的Instron 3345对所获得的蛋白质纤维进行拉伸试验。用分析软件“Instron Bluehill Le”分析本拉伸试验中获得的数据以计算杨氏模量,并获得“干燥时的初始拉伸弹性模量”。
进一步地,在将所得蛋白质纤维浸渍在水中15分钟以使纤维充分湿润后,以与上述相同的方式计算纤维的杨氏模量以获得“湿润时的初始拉伸弹性模量”。此外,在对湿润的纤维进行与上述相同的拉伸试验时,拉伸强度降低15%时的强度测定为“湿润时的断裂强度”。结果列于表7。
(8)蛋白质纤维的帘线断裂性的评价
在上述(5)中的捻合帘线的浸渍期间,目视确认当浸渍100m的捻合帘线时,存在或不存在帘线断裂,并根据以下标准评价帘线断裂性。结果列于表7。
良好:不发生帘线断裂
不良:发生帘线断裂
(9)粘接性和橡胶附着性的评价
从最终获得的纤维增强橡胶(硫化产物)挖出帘线,通过以300mm/min的速度拉帘线而将帘线从硫化产物剥离,并将每帘线的剥离抗力确定为粘接力(N/根(piece))。进一步地,观察剥离后的帘线的橡胶附着状态和断裂的存在与否,并根据表6中列出的标准评级。结果列于表7。
表6
表7
根据表7,理解的是,由于实施例1至4的纤维包含疏水性蛋白并且湿润时的初始拉伸弹性模量为2.0GPa以上,即使它们与橡胶材料复合、特别地当对它们进行需要与水系组分接触的操作时,它们几乎不断裂。进一步地,根据表7,理解的是,实施例1至4的纤维即使在形成由水系粘接剂组合物制成的涂层时,维持高纤维强度并且表现对橡胶材料的高粘接性。
根据本发明,可以提供可使用生物来源的原料生产并且即使在与橡胶材料复合时几乎不断裂的橡胶增强用纤维。进一步地,根据本发明,使用橡胶增强用纤维,可以提供高强度的橡胶制品、轮胎用帘线、和轮胎。
10 装置
1 干燥区
2 热区
3 标准化区
4 拉伸辊
5 液体槽
序列表
<110> 株式会社普利司通(Bridgestone Corporation)
丝芭博株式会社(Spiber Inc.)
<120> 橡胶增强用纤维、橡胶制品、轮胎用帘线、和轮胎
<130> 2019P00747
2019PS072JP01
<160> 22
<170>
<210> 1
<211> 590
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Met-PRT410
<400> 1
Met Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
1 5 10 15
Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
20 25 30
Gln Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
35 40 45
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
50 55 60
Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
65 70 75 80
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln
85 90 95
Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
100 105 110
Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala
115 120 125
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr
130 135 140
Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
145 150 155 160
Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
165 170 175
Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr
180 185 190
Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala
210 215 220
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser
225 230 235 240
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
245 250 255
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln
260 265 270
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala
275 280 285
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala
290 295 300
Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
305 310 315 320
Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser
325 330 335
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
340 345 350
Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln
355 360 365
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly
370 375 380
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
385 390 395 400
Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala
405 410 415
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr
420 425 430
Gly Pro Gly Gln Ser Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro
435 440 445
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro
450 455 460
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala
465 470 475 480
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly
485 490 495
Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser
500 505 510
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
515 520 525
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly
530 535 540
Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser
545 550 555 560
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala
565 570 575
Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser
580 585 590
<210> 2
<211> 2364
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Met-PRT799
<400> 2
Met Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
1 5 10 15
Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
20 25 30
Gln Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
35 40 45
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
50 55 60
Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
65 70 75 80
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Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Val Ile Gly Pro Gly Leu Tyr Gly Pro
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Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Leu Tyr Gly Ser Gly Pro Gly
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Pro Gly Val Ile Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
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Gly Val Ile Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
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Gly Leu Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Val Ile Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
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Ala Ser Gly Leu Asn Gly Pro Gly Ser Gly Leu Tyr Gly Pro Gly Val
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Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Leu Tyr
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Gly Pro Gly Val Ile Gly Pro Gly Leu Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly
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Pro Gly Val Ile Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala
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Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Leu Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Leu Ser
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Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly
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Ala Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ile
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Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr
385 390 395 400
Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ile Tyr Gly
405 410 415
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<213> 人工序列
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Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Pro Gly Val Leu Gly Pro Gly Ile Tyr
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Gly Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Val Leu Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
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Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Leu
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<220>
<223> 铰链+His-标签
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His
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Ile Tyr Gly Ile Gly Pro Tyr
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Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly
145 150 155 160
Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro
165 170 175
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180 185 190
Gly Ser Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ile Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala
210 215 220
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser
225 230 235 240
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly
245 250 255
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305 310 315 320
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT966
<400> 22
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1 5 10 15
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Asn Gly Pro Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly Ile Ser Gly Ile Tyr
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Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro
65 70 75 80
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Val Phe Gly
85 90 95
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100 105 110
Phe Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly Ser
115 120 125
Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
130 135 140
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Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Ser Ala Ser Ala
165 170 175
Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro
180 185 190
Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly Ser Gly Pro Gly
195 200 205
Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ile Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly
210 215 220
Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
225 230 235 240
Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
245 250 255
Gly Ile Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
260 265 270
Ala Ser Gly Ile Asn Gly Pro Gly Ser Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val
275 280 285
Phe Gly Pro Gly Ile Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Val Phe
290 295 300
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr
305 310 315 320
Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr
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405 410 415
Pro Gly Val Phe Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile
420 425 430
Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ile Ser
435 440 445
Gly Pro Gly Ser Gly Val Phe Gly Ile Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
450 455 460
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro
465 470 475 480
Tyr Gly Pro Gly Ile Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly
485 490 495
Ile Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Ile Asn Gly Pro Gly Ser Gly Ile
500 505 510
Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Gly Ile Ser Ala Ala Ala Ala Ala
515 520 525
Gly Ile Tyr Val Phe Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
530 535 540
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Val
545 550 555 560
Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ile Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro
565 570 575
Gly Val Phe Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
580 585 590
Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro
595 600 605
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Asn Gly Pro
610 615 620
Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly Ile Ser Gly Ile Tyr Gly Pro Gly
625 630 635 640
Val Phe Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala
645 650 655
Ala Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Ser Ala Ser
660 665 670
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly Ala
675 680 685
Ser Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro
690 695 700
Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly Ser Gly Pro Gly
705 710 715 720
Val Phe Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser
725 730 735
Gly Ile Tyr Gly Ile Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly
740 745 750
Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala
755 760 765
Ala Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser
770 775 780
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Val Phe Gly
785 790 795 800
Pro Tyr Gly Pro Gly Ile Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly Val
805 810 815
Phe Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Val Phe
820 825 830
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr
835 840 845
Gly Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly
850 855 860
Ile Asn Gly Pro Gly Ser Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro
865 870 875 880
Gly Ile Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr
885 890 895
Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly Pro Gly
900 905 910
Val Phe Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Val
915 920 925
Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile
930 935 940
Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ile Ser Ala Ala
945 950 955 960
Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Val Phe Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr
965 970 975
Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
980 985 990
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val
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Phe Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly
1010 1015 1020
Ser Gly Pro Gly Ile Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ile Ser Gly
1025 1030 1035
Pro Gly Ser Gly Val Phe Gly Ile Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
1040 1045 1050
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly
1055 1060 1065
Pro Tyr Gly Pro Gly Ile Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
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Ser Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Ile Asn Gly Pro Gly
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Ser Gly Ile Tyr Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Gly Ile Ser Ala
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Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr Val Phe Gly Pro Gly Val Phe Gly
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Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ile Tyr
1130 1135 1140
Gly Ser Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ile Ser
1145 1150 1155
Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly Val Phe Gly Pro Tyr Ala Ser
1160 1165 1170
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Val Phe Gly Pro Gly
1175 1180 1185
Ala Ser
1190
机译: 用于增强橡胶制品的钢帘线,橡胶-钢帘线复合体,子午线轮胎,摩托车子午线轮胎和轮胎
机译: 高模量纤维帘线增强的橡胶制品,这种纤维帘线增强的气动轮胎及其制造方法
机译: 用高模量纤维帘线增强的橡胶制品和用这种纤维帘线增强的充气轮胎