一种中华鳖和中华草龟胚胎成纤维细胞永生化方法

摘要

本发明公开了一种中华鳖和中华草龟胚胎成纤维细胞永生化方法。将包含SV40大T抗原的重组慢病毒感染中华鳖或中华草龟的原代胚胎成纤维细胞后，用嘌呤霉素筛选获得中华鳖或中华草龟永生化胚胎成纤维细胞。本发明利用磷酸钙转染法制备包含SV40大T抗原的重组慢病毒，再用SV40慢病毒感染第3代原代胚胎成纤维细胞后用嘌呤霉素筛选永生化胚胎成纤维细胞，该方法经济简单而且费时较短。本发明成功的建立了中华鳖和中华草龟永生化胚胎成纤维细胞系。培养的ImPSEFs和ImMREFs均为贴壁生长，呈经典的细长纺锤形，能在30–34℃良好生长，最佳血清浓度为10％；可检测到成纤维细胞标记基因VIM和ACTA2的表达，以及SV40基因的表达；可用脂质体介导法进行细胞转染，转染率约为30％。