一种基因工程菌株及其制备和基于该菌株的抗体亲和力成熟的定向进化方法

摘要

本发明涉及连续定向进化领域，涉及一种基因工程菌株及其制备和基于该菌株的抗体亲和力成熟的连续定向进化方法。所述菌株通过将突变质粒和筛选靶标质粒构建到改造菌株JS200‑ΔthyaΔfola中得到；所述突变质粒包括pEP‑mcs‑(GGGGS)2‑F1,2‑Flag；所述筛选靶标质粒包括pLA230‑mcs‑(GGGGS)2‑F3‑6xHis。抗原和抗体通过分别与mDHFR(murine DHFR)的两个功能互补片段F1,2和F3融合，形成Ag‑F1,2和Ab‑F3。通过逐级递增的甲氧苄啶(TMP)抗性筛选，该方法可以在固/液体空间中实现，通过固/液体培养后获得亲和力提高的抗体单克隆菌株，操作简单，通量高。