一种USP8突变的小鼠动物模型的构建方法及其应用

摘要

本发明提供一种USP8突变的ACTH腺瘤小鼠动物模型的构建方法及其应用，方法包括：根据基因序列设计sgRNA，构建基因打靶载体peSpCas9‑sgRNA并筛选出活性较高的sgRNA；设计含T7启动子的引物分别扩增eSpCas9及前述活性较高的sgRNA并回收纯化，体外转录试剂盒将eSpCas9、sgRNA分别转录成mRNA；同时，根据靶位点确定供体序列，体外合成Donor DNA oligos；将上述试剂共注射至小鼠受精卵，移植假孕鼠后，获得F0代小鼠；F0小鼠离乳后1周左右剪鼠尾，试剂盒提取基因组DNA，设计特异性引物PCR扩增靶位点附近DNA片段，PCR产物送样测序，获得阳性小鼠。