一种从川楝果实中提取川楝素的方法

摘要

本发明公开一种从川楝果实中提取川楝素的方法，包括以下步骤：将川楝果实粉碎，用水浸没后加入复合酶酶解，酶解液采用高压脉冲电场提取，得到的提取液中加入澄清剂进行除杂，再利用活性炭进行脱色，浓缩得到浸膏，浸膏上大孔吸附树脂，得到的洗脱液减压浓缩得粗提物，粗提物溶解后，加入石油醚沉淀，沉淀经水洗干燥，再次溶解及干燥，得川楝素。本发明通过复合酶预处理、高压脉冲电场提取、澄清剂澄清、活性炭脱色、大孔吸附树脂吸附、石油醚沉淀等步骤对川楝素进行提取，能够有效提高川楝素的纯度和提取率，提取得到的川楝素得率高，杂质少，纯度高。

说明书

技术领域

本发明涉及药物有效成分提取技术领域，具体涉及一种从川楝果实中提取川楝素的方法。

背景技术

川楝(Melia toosendan Sieb.et Zucc.)，为楝属植物川楝亚种，落叶乔木，高可达10米。川楝素是从楝属植物的根皮、枝皮和果实中提取出的四环三萜类化合物。川楝素具有驱虫、杀虫等功效，同时具有非常好的抗肉瘤效应，能够诱导细胞分化、凋亡并抑制人和动物的多种肿瘤细胞繁殖。目前，川楝素的提取方法主要由浸提法、索氏提取法、超声波提取法、微波辅助提取法和超临界二氧化碳萃取法等。

现有从川楝树中提取川楝素的方法，采用萃取和重结晶的方法获得，该方法简单，但是提取消耗的时间长，效率低，不能适用工业化生产的需要。或者将干燥成熟的川楝果实洗干净后用粉碎机打碎，磨成粉末，烘干，加入60％的乙醇溶剂；调节溶液pH值4～6，加入纤维素酶酶解；将所述提取液置于双频超声提取器中，得到酶解液；将酶解液高温灭活，得到提取液，离心，取上清液；氯仿萃取，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，加入乙醇，加热溶解，滴入石油醚直到混合物变成混浊物，静置，析出淡黄色固体，即为川楝素。该方法通过酶解和双频超声波提取，虽然能提高川楝素的含量，但是分离纯化的效果不足，得到的川楝素纯度低。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种从川楝果实中提取川楝素的方法。本发明通过复合酶预处理、高压脉冲电场提取、澄清剂澄清、活性炭脱色、大孔吸附树脂吸附、石油醚沉淀等步骤对川楝素进行提取，能够有效提高川楝素的纯度和提取率，提取得到的川楝素得率高，杂质少，纯度高。

本发明通过以下技术方案实现：

一种从川楝果实中提取川楝素的方法，包括以下步骤：

(1)：将川楝果实洗净，晾干，粉碎；

(2)：用水将步骤(1)粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.01-0.05％的复合酶，酶解1-3h，得酶解液；

(3)：将步骤(2)的酶解液与无水乙醇按料液比1:15-20混合，放入高压脉冲电场中提取6-12min，得粗提液；

(4)：向步骤(3)的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.1-0.3g/L活性炭进行脱色10-20min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏；

(5)：将步骤(4)的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物；

(6)：将步骤(5)的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品；

(7)：将步骤(6)的川楝素粗品用3-6倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。

作为本发明的进一步说明，步骤(1)所述川楝果实粉碎至60-100目。

作为本发明的进一步说明，步骤(2)所述复合酶为纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶以任意比例混合。

作为本发明的进一步说明，步骤(3)所述高压脉冲电场的电场强度为25-40kV/cm，脉冲数为6-10个。

作为本发明的进一步说明，步骤(4)所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为2-5g/L。

作为本发明的进一步说明，步骤(5)所述甲醛为60-100％甲醛。

与现有技术相比，本发明的优点及有益效果为：

1、本发明将川楝果实粉碎后的物料，用复合酶进行处理，使物料细胞壁被破坏，再结合高压脉冲电场提取，脉冲电场产生的磁场与脉冲电场交替作用，使物料的细胞膜透性增加，振荡加剧，最终使细胞膜内物质流出。本发明通过酶解技术和高压脉冲电场技术，能够使川楝素溶出率达到最大，有效提高川楝素的提取率，而且提取时间较常规提取时间大大缩短。

2、本发明引入天然中药澄清剂KBT-ZTC，对在乙醇提取的过程中存在的蛋白质、油脂、淀粉等大分子杂质，起到良好的澄清作用；提取液经过活性炭脱色，去除了色素，为后续分离纯化提供良好的基础。

3、本发明利用大孔树脂对川楝素进行分离提纯，将川楝素从粗提液中分离，减少川楝素中杂质的含量。

4、本发明通过复合酶预处理、高压脉冲电场提取、澄清剂澄清、活性炭脱色、大孔吸附树脂吸附、石油醚沉淀等步骤对川楝素进行提取，能够有效提高川楝素的纯度和提取率，提取得到的川楝素得率高，杂质少，纯度高。

5、本发明川楝素的提取率为1.3-1.6mg/g，纯度大于96％。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明进一步详细说明，但不限于本发明的保护范围。

实施例1

一种从川楝果实中提取川楝素的方法，包括以下步骤：

(1)：将川楝果实洗净，晾干，粉碎至60目；

(2)：用水将步骤(1)粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.01％的复合酶，酶解3h，得酶解液；所述复合酶为纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶以任意比例混合；

(3)：将步骤(2)的酶解液与无水乙醇按料液比1:15混合，放入高压脉冲电场中提取12min，得粗提液；所述高压脉冲电场的电场强度为25kV/cm，脉冲数为6个；

(4)：向步骤(3)的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为2g/L；当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.3g/L活性炭进行脱色10min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏；

(5)：将步骤(4)的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用60％甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物；

(6)：将步骤(5)的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品；

(7)：将步骤(6)的川楝素粗品用3倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。

通过高效液相色谱检测，本实施例川楝素的提取率为1.31％，纯度为96.4％。

实施例2

一种从川楝果实中提取川楝素的方法，包括以下步骤：

(1)：将川楝果实洗净，晾干，粉碎至100目；

(2)：用水将步骤(1)粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.01-0.05％的复合酶，酶解1h，得酶解液；所述复合酶为纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶以任意比例混合；

(3)：将步骤(2)的酶解液与无水乙醇按料液比1:20混合，放入高压脉冲电场中提取6min，得粗提液；所述高压脉冲电场的电场强度为40kV/cm，脉冲数为10个；

(4)：向步骤(3)的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为5g/L；当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.1g/L活性炭进行脱色20min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏；

(5)：将步骤(4)的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用100％甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物；

(6)：将步骤(5)的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品；

(7)：将步骤(6)的川楝素粗品用6倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。

通过高效液相色谱检测，本实施例川楝素的提取率为1.40％，纯度为96.5％。

实施例3

一种从川楝果实中提取川楝素的方法，包括以下步骤：

(1)：将川楝果实洗净，晾干，粉碎至80目；

(2)：用水将步骤(1)粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.02％的复合酶，酶解2h，得酶解液；所述复合酶为纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶以任意比例混合；

(3)：将步骤(2)的酶解液与无水乙醇按料液比1:18混合，放入高压脉冲电场中提取10min，得粗提液；所述高压脉冲电场的电场强度为30kV/cm，脉冲数为8个；

(4)：向步骤(3)的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为3g/L；当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.2g/L活性炭进行脱色15min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏；

(5)：将步骤(4)的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用75％甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物；

(6)：将步骤(5)的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品；

(7)：将步骤(6)的川楝素粗品用5倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。

通过高效液相色谱检测，本实施例川楝素的提取率为1.56％，纯度为97.1％。

实施例4

一种从川楝果实中提取川楝素的方法，包括以下步骤：

(1)：将川楝果实洗净，晾干，粉碎至80目；

(2)：用水将步骤(1)粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.04％的复合酶，酶解2h，得酶解液；所述复合酶为纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶以任意比例混合；

(3)：将步骤(2)的酶解液与无水乙醇按料液比1:17混合，放入高压脉冲电场中提取8min，得粗提液；所述高压脉冲电场的电场强度为35kV/cm，脉冲数为9个；

(4)：向步骤(3)的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为4g/L；当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.3g/L活性炭进行脱色15min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏；

(5)：将步骤(4)的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用80％甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物；

(6)：将步骤(5)的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品；

(7)：将步骤(6)的川楝素粗品用4倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。

通过高效液相色谱检测，本实施例川楝素的提取率为1.53％，纯度为97.0％。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。