用于治疗骨病的基因治疗剂

摘要

在一些方面，本公开涉及用于调节(例如，增加和/或减少)受试者中骨量的组合物和方法。在一些方面，本公开提供了分离的核酸，和例如rAAV载体的载体，其被配置以表达促进(例如，增加)或抑制(例如，减少)某些类型的骨细胞的活性、分化或功能的转基因，这些骨细胞例如成骨细胞、破骨细胞、骨细胞等。在一些实施方案中，本公开描述的分离的核酸和载体可用于治疗与骨量增加(例如骨硬化症)或骨量减少(例如骨质疏松症)有关的病症和病况。

说明书

相关申请

根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2018年3月23日提交的标题为“用于治疗骨病的基因治疗剂”的美国临时申请号62/647,595，以及2019年2月1日提交的标题为“用于治疗骨病的基因治疗剂”的美国临时申请号62/799,843的优先权。

背景技术

骨代谢的缺陷引起各种不同的骨病，包括与病理学损耗或骨量有关的病症以及与骨量的病理学增加有关的病症。对骨量的影响可能是全身性或局部的。例如，骨质疏松症是以骨量减少为特征的疾病，并且是与衰老有关的脆弱和痛苦的主要来源。估计1000万50岁以上的美国人患有骨质疏松症，并且每年约有150万个体发生与骨质疏松症有关的骨折，具有严重的健康后果。用于骨质疏松症的大多数现有治疗剂抑制破骨细胞(OC)的骨吸收，并且这种抑制伴随着许多副作用，包括非典型性骨折和颌骨坏死。间断应用的甲状旁腺激素(PTH)是合成代谢药剂，其促进成骨细胞(OB)功能并可用于治疗骨质疏松症患者。然而，由于对PTH诱导的骨肿瘤的担心，这种药剂的使用受到限制。此外，一种新开发的合成代谢药物抗骨硬化蛋白抗体通过增强的Wnt信号传递促进OB分化。然而，在炎性关节炎的情况下，已观察到抗骨硬化蛋白抗体在TNF依赖性炎症的情况下增加骨组织破坏并提高中风风险。同样地，归因于升高的中风发病率，组织蛋白酶K的小分子抑制剂(例如奥当卡替)从FDA考量中被撤消。

发明内容

本公开的一些方面涉及用于调节(例如，增加或减少)骨形成和/或新陈代谢的组合物和方法。本公开部分基于编码一种或多种调节骨代谢的转基因的重组腺相关病毒(rAAV)。因此，在一些实施方案中，本公开描述的rAAV可用于治疗与骨代谢失调(例如骨密度降低、骨密度增加等)有关的疾病或病症。

因此，在一些方面，本公开提供了一种分离的核酸，其编码：第一区域，其包含第一腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)或其变体；和第二区域，其包含编码至少一种骨代谢调节剂的转基因。

在一些实施方案中，骨代谢调节剂是骨形成促进剂。在一些实施方案中，骨形成促进剂选自由以下组成的组：促进OB和/或骨细胞(OCY)分化或活性的蛋白、抑制OC分化或活性的蛋白以及抑制OC分化或活性的抑制性核酸。

在一些实施方案中，骨代谢调节剂是骨形成抑制剂。在一些实施方案中，骨形成抑制剂选自由以下组成的组：抑制OB和/或OCY分化或活性的蛋白、促进OC分化或活性的蛋白以及抑制OB表达或活性的抑制性核酸。

在一些实施方案中，转基因编码选自由以下组成的组的骨形成促进剂：甲状旁腺激素(PTH)、PTH相关蛋白(PTHrP)、去糖化酶(deglycase)DJ1、靶向骨硬化蛋白(SOST)的抑制性核酸、靶向schnurri-3(SHN3)的抑制性核酸和靶向组织蛋白酶K(CTSK)的抑制性核酸。

在一些实施方案中，转基因编码选自由以下组成的组的骨形成抑制剂：骨硬化蛋白(SOST)、schnurri-3(SHN3)、组织蛋白酶K(CTSK)、靶向甲状旁腺激素(PTH)的抑制性核酸、靶向PTH相关蛋白(PTHrP)的抑制性核酸和靶向去糖化酶DJ1的抑制性核酸。

在一些实施方案中，转基因编码选自由dsRNA、siRNA、shRNA、miRNA和人造miRNA(amiRNA)组成的组的至少一种抑制性核酸。

在一些实施方案中，抑制性核酸起到突变末端重复(mTR)的功能。

在一些实施方案中，转基因包含SEQ ID NO:1-15中任何一个所示的序列。在一些实施方案中，转基因靶向(例如，与之杂交或与之结合)SEQ ID NO:1-15中任何一个所示的序列或其互补序列。

在一些实施方案中，本公开描述的分离的核酸进一步包含与转基因有效连接的至少一个启动子。

在一些实施方案中，本公开描述的分离的核酸进一步包含含有第二AAV ITR或其变体的第三区域。

在一些方面，本公开提供了包含如本公开所述的分离的核酸的载体。在一些实施方案中，载体是质粒。

在一些方面，本公开提供了包含如本公开所述的分离的核酸或载体的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是细菌细胞、酵母细胞、昆虫(例如，Sf9)细胞或哺乳动物细胞。

本公开部分基于以骨细胞如OB、OCY、OC等的向性增加为特征的rAAV。在一些实施方案中，本公开描述的rAAV包含异源骨靶向肽或结合至骨靶向部分。

因此，在一些方面，本公开提供了分离的核酸，其编码包含异源骨靶向肽的重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白。在一些实施方案中，异源骨靶向肽靶向OC(例如，相对于OB，尤其或优先靶向OC)。在一些实施方案中，异源骨靶向肽靶向OB(例如，相对于OC，尤其或优先靶向OB)。在一些实施方案中，异源骨靶向肽包含SEQ ID NO:16、17、57、58、59、60、61、62和63中所示的氨基酸序列。

在一些方面，本公开提供了包含一个或多个携带叠氮化物的非天然氨基酸的rAAV衣壳蛋白。在一些实施方案中，衣壳蛋白经由一个或多个携带叠氮化物的非天然氨基酸结合至一个或多个阿仑膦酸盐(Ale)部分。

在一些方面，本公开提供了重组腺相关病毒(rAAV)，其包含：衣壳蛋白；和如本公开所述的分离的核酸。

在一些实施方案中，衣壳蛋白的血清型选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAV.rh8、AAV.rh10、AAV.rh39、AAV.43、AAV2/2-66、AAV2/2-84和AAV2/2-125，或前述SEQ ID NO:18-34中任何一个的变体。

在一些实施方案中，衣壳蛋白转导OB和/或OCY。在一些实施方案中，衣壳蛋白(例如，转导OB和/或OCY的衣壳蛋白)的血清型选自AAV4、AAV1、AAV6、AAV6.2和AAV9，或前述任何一种的变体。

在一些实施方案中，衣壳蛋白转导OC。在一些实施方案中，衣壳蛋白(例如，转导OC的衣壳蛋白)的血清型选自AAV1、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV.rh39和AAV.rh43，或前述任何一种的变体。

在一些实施方案中，衣壳蛋白包含异源骨靶向肽，例如包含SEQ ID NO:16、17、57、58、59、60、61、62和63所示的氨基酸序列的异源骨靶向肽。在一些实施方案中，异源骨靶向肽靶向OC(例如，相对于OB，尤其或优先靶向OC)。在一些实施方案中，异源骨靶向肽靶向OB(例如，相对于OC，尤其或优先靶向OB)。

在一些实施方案中，将编码异源骨靶向肽的核酸序列插入衣壳蛋白的VP2开放阅读框中。在一些实施方案中，将核酸序列插入对应于编码AAV2衣壳蛋白的核酸序列的N587和R588的密码子之间或N末端。在一些实施方案中，将核酸序列插入对应于编码AAV9衣壳蛋白的核酸序列的Q588和A589的密码子之间或N-末端。

在一些实施方案中，衣壳蛋白由具有一个或多个携带叠氮化物的非天然氨基酸的氨基酸序列编码。在一些实施方案中，衣壳蛋白经由一个或多个携带叠氮化物的非天然氨基酸结合至一个或多个阿仑膦酸盐(Ale)部分。

在一些实施方案中，rAAV是自互补AAV(scAAV)。

在一些方面，本公开提供了用于将转基因递送至骨组织的方法，该方法包括施用如本公开所述的分离的核酸、组合物或rAAV给受试者。

在一些方面，本公开提供了用于治疗与骨密度降低有关的疾病或病症的方法，该方法包括施用给患有或怀疑患有如本文所述的与骨密度降低有关的疾病或病症的受试者，其中rAAV的转基因编码骨形成促进剂。在一些实施方案中，骨形成促进剂选自由以下组成的组：促进OB和/或OCY分化或活性的蛋白、抑制OC分化或活性的蛋白和抑制OC分化或活性的抑制性核酸。

在一些实施方案中，骨形成促进剂选自由以下组成的组：甲状旁腺激素(PTH)、PTH相关蛋白(PTHrP)、去糖化酶DJ1、靶向骨硬化蛋白(SOST)的抑制性核酸、靶向schnurri-3(SHN3)的抑制性核酸和靶向组织蛋白酶K(CTSK)的抑制性核酸。

在一些实施方案中，与骨密度降低有关的疾病或病症选自由以下组成的组：骨质疏松症、临界大小骨缺损(critical sized-bone defect)、由废用或受伤引起的机械性病症以及例如乳腺癌或前列腺癌转移的继发性病症、1型糖尿病、狼疮、类风湿性关节炎、炎性肠疾病、甲状腺功能亢进、乳糜泻、哮喘、牙周炎和多发性硬化。

在一些方面，本公开提供了用于治疗与骨密度增加有关的疾病或病症的方法，例如选自由骨硬化症、骨肉瘤和异位骨化组成的组的疾病，该方法包括施用如本文所述的rAAV给患有或怀疑患有与骨密度增加有关的疾病或病症的受试者，其中rAAV的转基因编码骨形成抑制剂。在一些实施方案中，骨形成抑制剂选自由以下组成的组：抑制OB和/或OCY分化或活性的蛋白、促进OC分化或活性的蛋白和抑制OC分化或活性的抑制性核酸。

在一些实施方案中，骨形成抑制剂选自由以下组成的组：骨硬化蛋白(SOST)、schnurri-3(SHN3)、组织蛋白酶K(CTSK)、靶向甲状旁腺激素(PTH)的抑制性核酸、靶向PTH相关蛋白(PTHrP)的抑制性核酸和靶向去糖化酶DJ1的抑制性核酸。

在一些实施方案中，与骨密度降低有关的疾病或病症选自由以下组成的组：骨质疏松症、致密性成骨不全症(pycnodysostosis)、骨硬化症(sclerosteosis)、肢端肥大症、氟蚀病、骨髓纤维化、丙型肝炎相关性骨硬化和骨癌，例如骨肉瘤和转移性骨癌。

在本公开描述的方法的一些实施方案中，施用通过注射而发生。在一些实施方案中，注射是全身注射(例如，尾静脉注射)、局部注射(例如，肌肉内(IM)注射、膝注射或股骨髓内注射)。

在一些实施方案中，施用通过将包含如本公开描述的rAAV的组织或移植物植入受试者而发生。

在一些实施方案中，施用导致选自由OB、OCY、OC和软骨细胞组成的组的细胞类型的转导。

附图简要说明

图1显示了体外转导小鼠原代OB前体的scAAV血清型的鉴定。在出生后第3-5天从新生鼠颅盖分离出小鼠OB前体，并将其培养于生长培养基中以扩增。将细胞与编码GFP蛋白的14种不同scAAV血清型温育2天，并使用表面荧光显微镜术通过GFP表达分析它们的转导效率。

图2显示了体外转导小鼠ATDC5软骨细胞系的scAAV血清型的鉴定。将小鼠软骨细胞祖细胞系ATDC5与编码GFP蛋白的14种不同scAAV血清型温育2天，并使用表面荧光显微镜术通过GFP表达分析它们的转导效率。

图3显示了可体外转导小鼠原代OC的scAAV血清型的鉴定。从2月龄小鼠(C57BL/6J)的长骨分离衍生自骨髓的单核细胞(BM-MO)，并通过添加小鼠m M-CSF(40ng/ml)将其扩增。在小鼠M-CSF(40ng/ml)和小鼠Rank配体(10ng/ml)的存在下，将BM-MO与编码GFP蛋白的15种不同scAAV血清型温育6天，并使用表面荧光显微镜术通过GFP表达分析它们的转导效率。

图4显示了可体外转导小鼠Raw264.7 OC系的scAAV血清型的鉴定。在用小鼠Rank配体(5ng/ml)处理后2天，在小鼠Rank配体(5ng/ml)存在下，将Raw264.7细胞与编码GFP蛋白的17种不同scAAV血清型温育6天。使用表面荧光显微镜术通过GFP表达分析它们的转导效率。

图5显示了小鼠中表达GFP的AAV转导的组织的光学图像。将单剂量的PBS或10

图6A-6B显示了可转导关节软骨中的软骨细胞和/或骨表面的OB和/或OC的scAAV血清型的鉴定。将单剂量的10

图7显示了脂质体可以通过降低小鼠中scAAV9转导对肌肉的感染力来增强scAAV9转导对骨细胞的选择性。将编码GFP的scAAV9血清型的10

图8显示了编码GFP的scAAV9血清型可以转导小鼠中骨表面的OB、OC和OCY。将编码GFP的scAAV9血清型的10

图9显示了骨探查AAV载体的开发。(A)通过遗传操作将骨靶向肽DSS((AspSerSer)

图10的图描绘了具有骨靶向肽的VP2衣壳蛋白(方框；(AspSerSer)

图11A-11C显示了OB中DSS-scAAV9的体外特征化。将小鼠OB前体与scAAV9-WT(WT)或两种DSS-scAAV9(DSS-588、DSS-Nter)温育2天。使用抗GFP的western印迹(图11A)和表面荧光(图11B，左)通过GFP表达分析它们的转导效率。使用Hsp90作为上样对照。或者，将转导的OB在OB分化条件下培养6天，并通过碱性磷酸酶(ALK)染色评估OB分化(图11B，右)，并通过RT-PCR评估OB基因表达(标准化为Hprt，图11C)。N.S.：不显著。

图12A-12C显示了OC中DSS-scAAV9的体外特征化。用小鼠Rank配体(5ng/ml)处理后2天，用scAAV9-WT(WT)或两种DSS-scAAV9(DSS-588、DSS-Nter)处理Raw264.7。转导后2天，使用抗GFP抗体的western印迹(图12A)和表面荧光(图12B，左)通过GFP表达来分析它们的转导效率。在Rank配体存在下培养转导的OC，并在3天后通过TRAP染色评估OC分化(图12B，右)，并通过RT-PCR评估OC基因表达(标准化为Hprt，图12C)。N.S：不显著。

图13显示了DSS-scAAV9(Nter)可以转导小鼠中骨表面的OB、OC和OCY。将编码GFP的scAAV9-WT(WT)或两种DSS-scAAV9(DSS-588、DSS-Nter)的10

图14显示了成熟OB中SHN3的瞬时缺失增加了成年小鼠的骨量。将1月龄雌性Shn3-fl/fl(WT)或Shn3-fl/fl；OCN/ERT-cre(CKO)小鼠用他莫昔芬(50mg/kg)处理5天，并在6周后通过microCT分析测量骨量。显示的是小梁骨的3D重建(左)，且定量参数显示在右图中：骨体积/总体积(BV/TV)。**：P，0.005。

图15显示了SHN3缺失防止了小鼠中雌激素缺乏诱导的骨质流失。3月龄雌性小鼠经历了卵巢切除(OVX)手术或经历了假的手术(假手术)，并在手术后2个月通过microCT分析测量骨量。显示的是小梁骨(左上)和干体中间皮质骨(左下)的3D重建。定量参数显示在右图中：骨体积/总体积(BV/TV)。**：P，0.005，N.S：不显著。

图16A-16D显示了OB中scAAV9-mSHN3i的体外特征化。用编码scAAV9的对照载体(对照)或两种小鼠-SHN3 shRNAsi(Sh-SHN3-1、-2)处理小鼠原代颅盖OB。转导后3天，分别通过使用表面荧光的GFP表达和使用RT-PCR的SHN3 mRNA水平分析它们的转导效率(图13A)和敲低效率(图13B)。(图13C和13D)在OB分化条件下培养转导的OB，并在培养的第6天和第15天进行RT-PCR和茜素红染色。*：P，0.05，**：P，0.005。

图17A-17B显示了scAAV9-mSHN3i的体内特征化。将编码GFP的scAAV9(对照，Sh-SHN3-1)的10

图18A-18D显示了OC中scAAV9-mCTSKi的体外特征化。用小鼠Rank配体(5ng/ml)处理后2天，用scAAV9-对照(对照)或两种scAAV9-mCTSKi(Sh-CTSK-1、-2)处理Raw264.7。转导后2天，通过使用表面荧光的GFP表达和使用RT-PCR的CTSK mRNA水平分别分析它们的转导效率(图18A)和敲低效率(图18B)。图18C-18D显示了在Rank配体存在下培养转导的OB，并在3天后通过TRAP活性(图18C，顶部)和染色(图18C，底部)评估OC分化，并通过RT-PCR评估OC基因表达(标准化为Hprt，图18D)。*：P，0.05，**：P，0.005。

图19A-19B显示了scAAV9-mCTSKi的体内表征。将编码GFP的scAAV9(对照，Sh-CTSK-1)的10

图20显示了骨靶向scAAV9介导的基因沉默的策略。将对OB基因(SHN3i、SOSTi)或对OC基因(CTSKi)特异的ShRNA克隆到BT-scAAV9血清型(DSS或HABP-scAAV9、Ale-scAAV9)中。将这些scAAV9血清型注射到小鼠的髓内股骨中以进行局部递送。对于全身递送，将它们IP或IV注射到小鼠中以沉默OB或骨细胞中的SHN3或SOST表达，或以沉默骨表面OC中的CTSK表达。

图21显示了用于全身生产的AAV介导的基因添加。将人PTH(1-84aa)、人PTHrP(1-140aa)或小鼠DJ-1cDNA克隆到scAAV9载体中，并将它们肌肉内注射到小鼠中以进行全身表达。

图22A-22G显示了体外和体内转导骨细胞的scAAV载体。图22A和22B显示了用PBS或用相同CB-Egfp转基因包装的14种不同的AAV衣壳处理颅骨成骨细胞(COB)、衍生自骨髓的破骨细胞前体(BM-OCP)或软骨细胞(ATDC5)。两天后，通过抗GFP抗体的免疫印迹评估EGFP表达。使用抗Hsp90抗体作为上样对照。通过Image J软件以内源性Hsp90蛋白水平百分比测量EGFP蛋白的免疫印迹定量。图22C显示了将单剂量的1x10

图23A-23K显示了成骨细胞中Shn3的诱导性缺失增加成年小鼠的骨增长(boneaccrual)。在图23A-23D中，将单剂量的4×10

图24A-24K显示了通过全身递送的AAV9进行的SHN3沉默促进骨形成。图24A的图显示了含有CMV增强子/鸡β-肌动蛋白启动子(CB)、amiR-ctrl或amiR-shn3、Egfp报告基因(EGFP)、β-珠蛋白polyA序列(PA)和反向末端重复(ITR)的scAAV9构建体。在图24B-24D中，在将编码amiR-ctrl或amiR-shn3的scAAV9关节内(i.a.)注射到两月龄雄性小鼠的膝关节两周后，通过IVIS 100光学成像(图24B)和冰冻切片的股骨的荧光显微镜术(图24C)评估EGFP表达。在图24D中，在来自股骨的以荧光激活细胞分选术(FACS)分选的表达EGFP的细胞中评估标准化为hprt的EGFP蛋白水平(顶部)和shn3 mRNA水平(底部)。在图24E-24F中，在将携带amiR-ctrl或amiR-shn3的scAAV9 i.a.注射到两月龄雌性小鼠的膝关节中两个月后，通过microCT评估股骨小梁骨量。显示了代表性3D重建(图24E)和相对定量(图24F)(n＝6/组)。在图24G-24K中，将单剂量的4×10

图25A-25J显示了通过全身递送的AAV9的Shn3沉默防止绝经后骨质疏松症的小鼠模型中的骨质流失。图25A-25B显示了在三月龄雌性Shn3

图26A-26M：骨归巢(bone-homing)AAV9。DSS-Nter衣壳介导Shn3沉默，以防止绝经后骨质疏松症的小鼠模型的骨质流失。图26A的图是合理设计的骨特异的AAV衣壳的构建体。将骨靶向肽基序(DSS，红色)插入AAV9衣壳的Q588和A589之间(DSS-588)或AAV9-VP2的N端(DSS-Nter)。cap：衣壳蛋白。图26B和26C显示了在感染不同浓度的scAAV9、scAAV9.DSS-587或scAAV9.DSS-Nter后两天，在成骨条件下培养COB六天。通过用抗EGFP抗体进行的免疫印迹(图26B)或荧光显微镜术(图26C)评估EGFP表达。通过快蓝染色评估ALP活性(图26C)。图26D-26H显示了将单剂量的4×10

图27A-27C显示了体外转导成骨细胞、破骨细胞和软骨细胞的scAAV血清型的鉴定。用PBS或14种不同的AAV血清型处理颅骨成骨细胞(COB，图27A)、衍生自骨髓的破骨细胞前体(BM-OCP，图27B)或软骨细胞系(ATDC5，图27C)。两天后，通过荧光显微镜术监测EGFP表达。比例尺：100μm。

图28A-28B显示了转导骨和软骨的scAAV血清型的鉴定。将单剂量的PBS或1x10

图29A-29D显示了小鼠中全身递送的scAAV9的组织分布。图29A和29B显示了将单剂量的PBS或4×10

图30显示了股骨中全身递送的scAAV9的分布。将单剂量的4×10

图31A-31E显示了Shn3

图32A-32C显示了成骨细胞中携带amiR-shn3的scAAV9的体外特征化。用携带amiR-ctrl或amiR-shn3的scAAV9处理后两天，在成骨条件下培养COB。分别通过荧光显微镜术、RT-PCR和茜素红染色评估EGFP表达(图32A)、Shn3和成骨基因的mRNA水平(图32B)和矿化作用(图32C)。比例尺：100mm(图32A)。数值代表平均值±SD：*，P<0.05；***，P<0.001；和****，P<0.0001，通过未配对两尾学生t检验(图32B和32C)。

图33A-33F显示了用全身递送的携带amiR-shn3的scAAV9处理的小鼠的特征化。将单剂量的4×10

图34A-34C显示了绝经后骨质疏松症的小鼠模型中全身递送的scAAV9-amiR-shn3的治疗效果。在三月龄雌性小鼠上实施假手术或OVX手术，并在六周后i.v.注射单剂量的4×10

图35A-35C显示了在体外或体内的scAAV9.DSS载体的特征化。(图35A)将单剂量的1×10

图36A-36E显示了小鼠中全身递送的scAAV9.DSS-Nter的组织分布。将单剂量的PBS或4×10

图37A-37C显示了在绝经后骨质疏松症的小鼠模型中全身递送的携带amiR-shn3的scAAV9.DSS-Nter的治疗效果。在三月龄雌性小鼠上实施假手术或OVX手术，并在六周后i.v.注射单剂量的PBS或4×10

具体实施方式

本公开的一些方面涉及组合物(例如，分离的核酸，rAAV等)，该组合物在被递送至受试者时有效地调节骨代谢，例如通过促进或抑制骨形成和/或促进或抑制骨吸收。因此，本公开描述的方法和组合物在一些实施方案中可用于治疗与骨代谢失调有关的疾病和病症，例如骨质疏松症、炎症引起的骨质流失、乳腺癌或前列腺癌转移引起的骨质流失、骨硬化症、骨肉瘤和异养性骨化。

本公开中提供了用于将转基因(例如抑制性RNA，如shRNA、miRNA等)递送至受试者的组合物和方法。组合物通常包含编码能够调节骨代谢的转基因(例如蛋白、抑制性核酸等)的分离的核酸。例如，在一些实施方案中，转基因降低靶蛋白的表达，例如与促进或抑制骨形成有关的靶蛋白。

“骨代谢”通常指涉及骨形成和/或骨吸收的生物过程。在一些实施方案中，骨代谢涉及产生自成骨细胞(OB)和分化的骨细胞的新骨的形成，和/或被破骨细胞(OC)吸收的成熟骨组织。OB源自衍生自骨髓的间充质细胞，这些间充质细胞最终末期分化为骨细胞。OB(和骨细胞)的功能或活性包括但不限于骨形成、骨矿化作用和OC活性的调控。已经观察到骨量减少由OB和/或骨细胞功能或活性的抑制导致。已经观察到骨量增加由OB和/或骨细胞功能或活性的增加导致。OC源自衍生自骨髓的单核细胞，并且在一些实施方案中已经观察到OC由来自OB的信号控制。OC的功能包括骨吸收。在一些实施方案中，已经观察到骨量减少由OC活性的增加导致。在一些实施方案中，已经观察到骨量增加由OC活性的抑制导致。

在一些实施方案中，本公开描述的分离的核酸或rAAV包含编码至少一种骨代谢调节剂(例如，1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种或更多种骨代谢调节剂)的转基因。如本文所用，“骨代谢调节剂”指诱导或抑制骨形成或沉积的分子(由核酸如转基因编码的核酸或蛋白)，例如通过增加或减少涉及骨形成或骨吸收的蛋白、细胞等的表达、活性和/或功能。通常，骨代谢调节剂可以是肽、蛋白或干扰核酸(例如，dsRNA、siRNA、shRNA、miRNA、人工miRNA等)。在一些实施方案中，骨代谢调节剂是骨形成诱导剂。在一些实施方案中，骨代谢调节剂是骨形成抑制剂。

“骨形成诱导剂”指通过促进OB和/或骨细胞(OCY)分化或活性和/或通过抑制OC活性来促进骨合成的分子。在一些实施方案中，骨形成诱导剂是核酸(例如，RNAi寡核苷酸或miRNA寡核苷酸或反义寡核苷酸)或由核酸(例如转基因)编码的蛋白，其促进OB和/或骨细胞的功能或活性(例如，骨形成、矿化作用、破骨细胞活性或功能的调控等)。在一些实施方案中，促进OB和/或骨细胞的活性或功能的骨形成诱导剂的示例包括但不限于甲状旁腺激素(PTH)、PTH相关蛋白(PTHrP)、去糖化酶DJ1。在一些实施方案中，骨形成诱导剂是抑制OC分化或活性的抑制性核酸，如靶向骨硬化蛋白(SOST)、schnurri-3(SHN3)、组织蛋白酶K(CTSK)等的抑制性核酸。

“骨形成抑制剂”指抑制OB和/或骨细胞分化或活性和/或增加OC分化、活性或功能的分子。在一些实施方案中，骨形成抑制剂是核酸(例如RNAi寡核苷酸或miRNA寡核苷酸或反义寡核苷酸)或由核酸(例如转基因)编码的蛋白，其抑制OB和/或骨细胞分化或活性。在一些实施方案中，抑制OB和/或骨细胞活性或功能的骨形成抑制剂的示例包括但不限于MAPK抑制剂和促炎细胞因子(例如，肿瘤坏死因子α(TNF-α)等)。在一些实施方案中，骨形成抑制剂是抑制OB和/或骨细胞分化或活性的抑制性核酸。

在一些实施方案中，分离的核酸编码一种或多种(例如1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种或更多种)抑制性核酸，例如dsRNA、siRNA、shRNA、miRNA、人工microRNA(ami-RNA)等。通常，抑制性核酸特异性结合(例如，与之杂交)编码与骨代谢有关的基因产物(例如蛋白)的基因(例如PTH、PTHrP、DJ1、SOST、SHN3、CTSK等)的至少两个(例如2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个或更多个)连续碱基。如本文所用，“连续碱基”指相互共价结合(例如，通过一个或多个磷酸二酯键等)的两个或更多个核苷酸碱基(例如作为核酸分子的一部分)。在一些实施方案中，该至少一种抑制性核酸与编码与骨代谢有关的基因产物(例如蛋白)的基因(例如PTH、PTHrP、DJ1、SOST、SHN3、CTSK等)的两个或更多个(例如2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个或更多个)连续碱基的同一性为约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约99％或约100％。

“microRNA”或“miRNA”是能够介导转录或翻译后基因沉默的小的非编码RNA分子。通常，miRNA被转录为发夹或茎环(例如，具有自互补性，单链主链)双链体结构，被称为初级miRNA(pri-miRNA)，其被酶加工(例如，通过Drosha、DGCR8、Pasha等)成pre-miRNA。pri-miRNA的长度可以变化。在一些实施方案中，pri-miRNA的长度范围从约100个至约5000个碱基对(例如，约100个、约200个、约500个、约1000个、约1200个、约1500个、约1800个或约2000个碱基对)。在一些实施方案中，pri-miRNA的长度大于200个碱基对(例如，长度为2500个、5000个、7000个、9000个或更多个碱基对)。

也以发夹或茎环双链体结构为特征的pre-miRNA的长度也可以变化。在一些实施方案中，pre-miRNA长度的大小范围从约40个碱基对至约500个碱基对。在一些实施方案中，pre-miRNA长度的大小范围从约50个至100个碱基对。在一些实施方案中，pre-miRNA长度的大小范围从约50个至约90个碱基对(例如，长度为约50个、约52个、约54个、约56个、约58个、约60个、约62个、约64个、约66个、约68个、约70个、约72个、约74个、约76个、约78个、约80个、约82个、约84个、约86个、约88个或约90个碱基对)。

通常，pre-miRNA被输出到细胞质中，并经Dicer酶加工以首先产生不完美的miRNA/miRNA*双链体，并随后产生单链成熟miRNA分子，随后将其装载到RNA诱导的沉默复合体(RISC)中。通常，成熟miRNA分子长度的大小范围从约19个至约30个碱基对。在一些实施方案中，成熟miRNA分子的长度是约19个、约20个、约21个、约22个、约23个、约24个、约25个、约26个、约27个、约28个、约29个或30个碱基对。

在一些方面，本公开提供了编码一种或多种人工miRNA的分离的核酸和载体(例如，rAAV载体)。如本文所用，“人工miRNA”或“amiRNA”指内源pri-miRNA或pre-miRNA(例如，miRNA主链，其是能够产生功能性成熟miRNA的前体miRNA)，其中miRNA和miRNA*(例如，miRNA双链体的过客链)序列已被指导靶基因的高效RNA沉默的相应amiRNA/amiRNA*序列所替代，例如Eamens等人(2014),Methods Mol.Biol.1062:211-224中所描述的。例如，在一些实施方案中，人工miRNA包含miR-155pri-miRNA主链，其中编码骨代谢调节(例如，骨形成抑制剂)miRNA的序列已被插入以替代内源miR-155成熟miRNA编码序列。在一些实施方案中，本公开所述的miRNA(例如人工miRNA)包含miR-155主链序列、miR-30主链序列、mir-64主链序列或miR-122主链序列。

在一些实施方案中，本公开提供了分离的核酸，其包含编码靶向SHN3基因(GeneID：59269)的人工microRNA的转基因，该SHN3基因编码Schnurri-3蛋白。Schnurri-3(SHN3)蛋白是调控NK-κβ蛋白表达以及免疫球蛋白和T细胞受体抗体重组的转录因子。在一些实施方案中，SHN3基因由NCBI登录号NM_001127714.2或NM_024503.5代表。在一些实施方案中，SHN3蛋白由NCBI登录号NP_001121186.1或NP_078779.2代表。

在一些方面，本公开涉及包含编码人工microRNA的转基因的分离的核酸，其用于减少SHN3表达(例如，来自SHN3基因的一种或多种基因产物的表达，例如由SEQ ID NO:69中核苷酸序列编码的mRNA或编码具有SEQ ID NO:70所示氨基酸序列的蛋白的那个)。

在一些实施方案中，人工microRNA靶向(例如，与之结合或包含与之互补的区域)SHN3基因的至少6个连续核苷酸。在一些实施方案中，人工microRNA靶向(例如，与之结合或包含与之互补的区域)SHN3基因的6个至30个连续核苷酸。在一些实施方案中，人工microRNA靶向SHN3基因的12个至24个连续核苷酸。在一些实施方案中，人工microRNA靶向SHN3基因的9个至27个连续核苷酸。在一些实施方案中，人工microRNA靶向SHN3基因的至少6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个连续核苷酸。

在一些实施方案中，人工microRNA的长度在6个至50个核苷酸之间。在一些实施方案中，人工microRNA的长度在8个至24个核苷酸之间。在一些实施方案中，人工microRNA的长度在12个至36个核苷酸之间。在一些实施方案中，人工microRNA的长度是6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个或50个核苷酸。

在一些实施方案中，分离的抑制性核酸使靶基因的表达降低50％至99％(例如，50％至99％之间的任何整数，包含端值)。在一些方面，分离的抑制性核酸使靶基因的表达降低75％至90％。在一些方面，分离的抑制性核酸使靶基因的表达降低80％至99％。在一些实施方案中，分离的抑制性核酸使SHN3基因的表达降低50％至99％(例如，50％至99％之间的任何整数，包含端值)。在一些实施方案中，分离的抑制性核酸使SHN3基因的表达降低75％至90％。在一些方面，分离的抑制性核酸使SHN3基因的表达降低80％至99％。

包含转基因的区域(例如，第二区域、第三区域、第四区域等)可以被置于分离的核酸的任何合适的位置。该区域可以被置于核酸的任何非翻译部分，包括例如内含子、5’或3’非翻译区域等。

在一些情况下，将该区域(例如，第二区域、第三区域、第四区域等)置于编码蛋白的核酸序列(例如蛋白编码序列)的第一密码子的上游可以是合意的。例如，该区域可以被置于蛋白编码序列的第一密码子和第一密码子上游2000个核苷酸之间。该区域可以被置于蛋白编码序列的第一密码子和第一密码子上游1000个核苷酸之间。该区域可以被置于蛋白编码序列的第一密码子和第一密码子上游500个核苷酸之间。该区域可以被置于蛋白编码序列的第一密码子和第一密码子上游250个核苷酸之间。该区域可以被置于蛋白编码序列的第一密码子和第一密码子上游150个核苷酸之间。

在一些情况下(例如当转基因缺乏蛋白编码序列时)，将该区域(例如，第二区域、第三区域、第四区域等)置于转基因的poly-A尾的上游可以是合意的。例如，该区域可以被置于poly-A尾的第一碱基和第一碱基上游2000个核苷酸之间。该区域可以被置于poly-A尾的第一碱基和第一碱基上游1000个核苷酸之间。该区域可以被置于poly-A尾的第一碱基和第一碱基上游500个核苷酸之间。该区域可以被置于poly-A尾的第一碱基和第一碱基上游250个核苷酸之间。该区域可以被置于poly-A尾的第一碱基和第一碱基上游150个核苷酸之间。该区域可以被置于poly-A尾的第一碱基和第一碱基上游100个核苷酸之间。该区域可以被置于poly-A尾的第一碱基和第一碱基上游50个核苷酸之间。该区域可以被置于poly-A尾的第一碱基和第一碱基上游20个核苷酸之间。在一些实施方案中，该区域被置于启动子序列的最后一个核苷酸碱基和poly-A尾序列的第一个核苷酸碱基之间。

在某些情况下，该区域可以被置于转基因poly-A尾的最后一个碱基的下游。该区域可以在poly-A尾的最后一个碱基和最后一个碱基的下游2000个核苷酸的位置之间。该区域可以在poly-A尾的最后一个碱基和最后一个碱基的下游1000个核苷酸的位置之间。该区域可以在poly-A尾的最后一个碱基和最后一个碱基的下游500个核苷酸的位置之间。该区域可以在poly-A尾的最后一个碱基和最后一个碱基的下游250个核苷酸的位置之间。该区域可以在poly-A尾的最后一个碱基和最后一个碱基的下游150个核苷酸的位置之间。

应当理解，在转基因编码多于一个miRNA的情况下，每个miRNA均可以被置于转基因内的任何合适的位置。例如，编码第一miRNA的核酸可以被置于转基因的内含子中，并且编码第二miRNA的核酸序列可以被置于另一个非翻译区域中(例如，蛋白编码序列的最后一个密码子和转基因的poly-A尾的第一个碱基之间)。

在一些实施方案中，转基因进一步包含编码一个或多个表达控制序列(例如启动子等)的核酸序列。表达控制序列包括合适的转录起始、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA加工信号，例如剪接和多聚腺苷酸化(polyA)信号；稳定细胞质mRNA的序列；增强翻译效率的序列(即Kozak共有序列)；增强蛋白稳定性的序列；和当需要时增强编码产物分泌的序列。大量表达控制序列，包括天然的、组成型、诱导型和/或组织特异性启动子，在本领域中已知且可以被利用。

“启动子”指由细胞的合成机制或引入的合成机制识别并被启动基因的特异性转录所需要的DNA序列。短语“有效放置”、“在控制下”或“在转录控制下”意指：启动子相对于核酸而言处于正确的位置和方向，以控制基因的RNA聚合酶起始和表达。

对于编码蛋白的核酸，通常将多聚腺苷酸化序列插入转基因序列之后和3’AAVITR序列之前。可用于本公开的rAAV构建体还可以含有内含子，理想地位于启动子/增强子序列和转基因之间。一个可能的内含子序列衍生自SV-40，并被称为SV-40T内含子序列。可以使用的另一个载体元件是内部核糖体进入位点(IRES)。IRES序列用于从单个基因转录物中生产多于一种多肽。IRES序列将用于生产含有多于一条多肽链的蛋白。这些和其他常见载体元件的选择是常规的，并且许多这样的序列是可获得的[参见，例如，Sambrook等人，和其中引用的参考文献，例如第3.18 3.26和16.17 16.27页，以及Ausubel等人,CurrentProtocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,New York,1989]。在一些实施方案中，手足口病病毒2A序列包含在多蛋白中；这是小肽(长度约18个氨基酸)，其已显示出介导多蛋白的切割(Ryan,M D等人,EMBO,1994；4:928-933；Mattion,N M等人,J Virology,1996年11月；p.8124-8127；Furler,S等人,Gene Therapy,2001；8:864-873；和Halpin,C等人,The Plant Journal,1999；4:453-459)。2A序列的切割活性先前已在包括质粒和基因治疗载体(AAV和逆转录病毒)的人工系统中被证实(Ryan,M D等人,EMBO,1994；4:928-933；Mattion,N M等人,J Virology,1996年11月；p.8124-8127；Furler,S等人,Gene Therapy,2001；8:864-873；和Halpin,C等人,The Plant Journal,1999；4:453-459；de Felipe,P等人,Gene Therapy,1999；6:198-208；de Felipe,P等人,Human Gene Therapy,2000；11:1921-1931.；和Klump,H等人,Gene Therapy,2001；8:811-817)。

组成型启动子的示例包括但不限于：逆转录病毒劳斯肉瘤病毒(RSV)LTR启动子(任选地具有RSV增强子)、巨细胞病毒(CMV)启动子(任选地具有CMV增强子)[参见，例如，Boshart等人,Cell,41:521-530(1985)]、SV40启动子、二氢叶酸还原酶启动子、β-肌动蛋白启动子、磷酸甘油激酶(PGK)启动子和EF1α启动子[Invitrogen]。在一些实施方案中，启动子是增强的鸡β-肌动蛋白启动子。在一些实施方案中，启动子是U6启动子。

诱导型启动子允许基因表达的调控，并且可以被以下调控：外源提供的化合物，环境因素例如温度，或特定生理状态(例如急性期)、特定细胞分化状态的存在或仅在复制细胞中。诱导型启动子和诱导型系统可从各种商业来源获得，包括但不限于Invitrogen、Clontech和Ariad。许多其他系统已经被描述，并且可由本领域技术人员容易地选择。由外源提供的启动子调控的诱导型启动子的示例包括锌诱导型绵羊金属硫蛋白(MT)启动子、地塞米松(Dex)诱导型小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、T7聚合酶启动子系统(WO 98/10088)；蜕皮激素昆虫启动子(No等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:3346-3351(1996))、四环素抑制系统(Gossen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551(1992))、四环素诱导系统(Gossen等人,Science,268:1766-1769(1995)，另参见Harvey等人,Curr.Opin.Chem.Biol.,2:512-518(1998))、RU486诱导系统(Wang等人,Nat.Biotech.,15:239-243(1997)和Wang等人,Gene Ther.,4:432-441(1997))和雷帕霉素诱导系统(Magari等人,J.Clin.Invest.,100:2865-2872(1997))。也可用于这种情况的其他类型的诱导型启动子是那些被以下调控的：特定生理状态(例如温度、急性期)、细胞特定分化状态或仅在复制细胞中。

在另一个实施方案中，将使用转基因的天然启动子。当期望转基因的表达应模仿天然表达时，天然启动子可以是优选的。当转基因的表达必须被暂时地或发育地调控，或以组织特异性方式调控，或应答于特定转录刺激而调控时，可以使用天然启动子。在进一步的实施方案中，还可以使用其他天然表达控制元件，例如增强子元件、多聚腺苷酸化位点或Kozak共有序列，以模拟天然表达。

在一些实施方案中，调控序列赋予组织特异性基因表达能力。在一些情况下，组织特异性调控序列结合以组织特异性方式诱导转录的组织特异性转录因子。这样的组织特异性调控序列(例如启动子、增强子等)是本领域公知的。示例性组织特异性调控序列包括但不限于以下组织特异性启动子：肝特异性甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子、胰岛素启动子、胰高血糖素启动子、生长抑素启动子、胰多肽(PPY)启动子、突触蛋白-1(Syn)启动子、肌酸激酶(MCK)启动子、哺乳动物结蛋白(DES)启动子、α-肌球蛋白重链(a-MHC)启动子或心肌肌钙蛋白T(cTnT)启动子。其他示例性启动子包括β-肌动蛋白启动子、乙型肝炎病毒核心启动子，Sandig等人,Gene Ther.,3:1002-9(1996)；α-甲胎蛋白(AFP)启动子，Arbuthnot等人,Hum.Gene Ther.,7:1503-14(1996))、骨骨钙素启动子(Stein等人,Mol.Biol.Rep.,24:185-96(1997))；骨唾液蛋白启动子(Chen等人,J.Bone Miner.Res.,11:654-64(1996))、CD2启动子(Hansal等人,J.Immunol.,161:1063-8(1998)；免疫球蛋白重链启动子；T细胞受体α-链启动子、神经元的如神经元特异性烯醇化酶(NSE)启动子(Andersen等人,Cell.Mol.Neurobiol.,13:503-15(1993))、神经丝轻链基因启动子(Piccioli等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:5611-5(1991))和神经元特异性vgf基因启动子(Piccioli等人,Neuron,15:373-84(1995))，以及其他对技术人员而言显而易见的启动子。

在一些实施方案中，组织特异性启动子是骨组织特异性启动子。骨组织特异性启动子的示例包括但不限于成骨相关转录因子(osterix)、骨钙素、1型胶原蛋白α1、DMP1、组织蛋白酶K、Rank等的启动子。

本公开的一些方面涉及包含多于一个启动子(例如2个、3个、4个、5个或更多个启动子)的分离的核酸。例如，在具有包含编码蛋白的第一区域和编码抑制性RNA(例如，miRNA)的第二区域的转基因的构建体的情况下，使用第一启动子序列(例如，有效连接至蛋白编码区域的第一启动子序列)驱动蛋白编码区域的表达，并用第二启动子序列驱动抑制性RNA编码区域的表达(例如，有效连接至抑制性RNA编码区域的第二启动子序列)可以是合意的。通常，第一启动子序列和第二启动子序列可以是相同的启动子序列或不同的启动子序列。在一些实施方案中，第一启动子序列(例如，驱动蛋白编码区域表达的启动子)是RNA聚合酶III(polIII)启动子序列。polIII启动子序列的非限制性示例包括U6和H1启动子序列。在一些实施方案中，第二启动子序列(例如，驱动抑制性RNA表达的启动子序列)是RNA聚合酶II(polII)启动子序列。PolII启动子序列的非限制性示例包括T7、T3、SP6、RSV和巨细胞病毒启动子序列。在一些实施方案中，polIII启动子序列驱动抑制性RNA(例如，miRNA)编码区域的表达。在一些实施方案中，polII启动子序列驱动蛋白编码区域的表达。

本公开的分离的核酸可以是重组腺相关病毒(AAV)载体(rAAV载体)。在一些实施方案中，如本公开所述的分离的核酸包含含有第一腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)或其变体的区域(例如，第一区域)。可以将分离的核酸(例如，重组AAV载体)包装到衣壳蛋白中并施用给受试者和/或递送至选择的靶细胞。“重组AAV(rAAV)载体”通常至少由转基因及其调控序列，以及5’和3’AAV反向末端重复(ITR)组成。如本公开别处所述的，转基因可以包含编码一种或多种蛋白和/或包含靶向受试者的内源mRNA的核酸的抑制性核酸(例如shRNA、miRNA等)的一个或多个区域。如本公开别处所述的，转基因还可以包含编码例如蛋白和/或表达控制序列(例如，poly-A尾)的区域。

通常，ITR序列的长度为约145bp。优选地，分子中使用编码ITR的实质上整个的序列，尽管对这些序列的一定程度的微小修饰是允许的。修饰这些ITR序列的能力在本领域能力范围内。(参见，例如，如Sambrook等人,"Molecular Cloning.A Laboratory Manual",2ded.,Cold Spring Harbor Laboratory,New York(1989)；和K.Fisher等人,J Virol.,70:520 532(1996)的教材)。本发明中采用的这种分子的一个示例是含有转基因的“顺式作用”质粒，其中选择的转基因序列和相关调控元件的侧翼是5’和3’AAV ITR序列。AAV ITR序列可以获自任何已知的AAV，包括目前已鉴定的哺乳动物AAV类型。在一些实施方案中，分离的核酸(例如，rAAV载体)包含具有选自以下血清型的至少一个ITR：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAV9、AAVrh10、AAVrh39、AAVrh43、AAV2/2-66、AAV2/2-84、AAV2/2-125及其变体。在一些实施方案中，分离的核酸包含编码AAV2 ITR的区域(例如，第一区域)。

在一些实施方案中，分离的核酸进一步包含含有第二AAV ITR的区域(例如，第二区域、第三区域、第四区域等)。在一些实施方案中，第二AAV ITR具有选自以下的血清型：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAV9、AAVrh10、AAVrh39、AAVrh43、AAV2/2-66、AAV2/2-84、AAV2/2-125及其变体。在一些实施方案中，第二ITR是缺乏功能性末端解离位点(TRS，terminal resolution site)的突变体ITR。术语“缺乏末端解离位点”可以指包含消除ITR的末端解离位点(TRS)的功能的突变(例如，有义突变，如非同义突变或错义突变)的AAV ITR，或指缺乏编码功能性TRS的核酸序列(例如ΔTRS ITR)的截短的AAV ITR。不希望受到任何特定理论的束缚，包含缺乏功能性TRS的ITR的rAAV载体产生自互补的rAAV载体，例如如McCarthy(2008)Molecular Therapy 16(10):1648-1656所述的。

如本文所用，术语“自互补的AAV载体”(scAAV)指含有双链载体基因组的载体，该双链载体基因组由AAV的一个ITR中的末端解离位点(TR)的缺乏产生。TR的缺乏阻止在TR不存在之处的载体末端的复制起始。通常，scAAV载体产生单链、反向重复基因组，其在每个末端具有野生型(wt)AAV TR且在中间具有突变的TR(mTR)。本发明部分基于以下认识：编码RNA发夹结构(例如shRNA、miRNA和AmiRNA)的DNA片段在病毒基因组复制过程中可以起到类似于突变的反向末端重复(mTR)的功能，产生自互补的AAV载体基因组。例如，在一些实施方案中，本公开提供了包含在两个末端的每个末端均具有反向末端重复(ITR)的单链自互补核酸和包含有效连接有编码发夹形成RNA(例如，shRNA、miRNA、ami-RNA等)的序列的启动子的中心部分的rAAV(例如，自互补的AAV；scAAV)载体。在一些实施方案中，编码发夹形成RNA(例如，shRNA、miRNA、ami-RNA等)的序列在通常被突变ITR占据的自互补核酸的位置被取代。

“重组AAV(rAAV)载体”通常至少由转基因及其调控序列，以及5’和3’AAV反向末端重复(ITR)组成。这种重组AAV载体被包装到衣壳蛋白中并被递送至选择的靶细胞。在一些实施方案中，转基因是与载体序列异源的核酸序列，其编码目标多肽、蛋白、功能性RNA分子(例如，miRNA、miRNA抑制剂)或其他基因产物。核酸编码序列以允许转基因在靶组织的细胞中转录、翻译和/或表达的方式有效连接至调控组分。

本公开提供了包含单个顺式作用的野生型ITR的载体。在一些实施方案中，ITR是5’ITR。在一些实施方案中，ITR是3’ITR。通常，ITR序列的长度为约145bp。优选地，分子中使用编码ITR的实质上整个的序列，尽管对这些序列的一定程度的微小修饰是可允许的。修饰这些ITR序列的能力在本领域能力范围内。(参见，例如，如Sambrook等人,"MolecularCloning.A Laboratory Manual",2d ed.,Cold Spring Harbor Laboratory,New York(1989)；和K.Fisher等人,J Virol.,70:520 532(1996)的教材)。例如，ITR可以在其末端解离位点(TR)被突变，其抑制在TR已经被突变的载体末端的复制，并导致自互补AAV的形成。本公开中采用的这种分子的一个示例是含有转基因的“顺式作用”质粒，其中选择的转基因序列和相关调控元件的侧翼是5’AAV ITR序列和3’发夹形成RNA序列。AAV ITR序列可以获自任何已知的AAV，包括目前已鉴定的哺乳动物AAV类型。在一些实施方案中，ITR序列是AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAV9、AAV10和/或AAVrh10 ITR序列。

在一些实施方案中，本公开的rAAV是假型rAAV。例如，含有被Y的蛋白衣壳化的血清型X的ITR的假型AAV载体将被命名为AAVX/Y(例如，AAV2/1具有AAV2的ITR和AAV1的衣壳)。在一些实施方案中，假型rAAV可用于组合来自一种AAV血清型的衣壳蛋白的组织特异性靶向能力与来自另一种AAV血清型的病毒DNA，从而允许转基因靶向递送至靶组织。

用于获得具有所需衣壳蛋白的重组AAV的方法是本领域中公知的。(参见，例如，US2003/0138772)，其内容通过引用以其整体并入本文)。通常，该方法涉及培养含有编码AAV衣壳蛋白的核酸序列；功能性rep基因；由AAV反向末端重复(ITR)和转基因组成的重组AAV载体；和允许重组AAV载体包装到AAV衣壳蛋白中的足够辅助功能的宿主细胞。在一些实施方案中，衣壳蛋白是由AAV的cap基因编码的结构蛋白。AAV包含三种衣壳蛋白，即病毒体蛋白1至3(命名为VP1、VP2和VP3)，所有这些蛋白均经由选择性剪接转录自单个cap基因。在一些实施方案中，VP1、VP2和VP3的分子量分别为约87kDa、约72kDa和约62kDa。在一些实施方案中，经由翻译，衣壳蛋白在病毒基因组周围形成球状的60-mer蛋白壳。在一些实施方案中，衣壳蛋白的功能是保护病毒基因组，递送基因组并与宿主相互作用。在一些方面，衣壳蛋白以组织特异性的方式将病毒基因组递送至宿主。

在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白具有的AAV血清型选自由以下组成的组：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAV9、AAVrh10、AAVrh39、AAVrh43、AAV2/2-66、AAV2/2-84、AAV2/2-125。在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白具有的血清型衍生自非人灵长类动物，例如scAAV.rh8、AAV.rh39或AAV.rh43血清型。在一些实施方案中，AAV衣壳蛋白具有AAV9血清型。

本公开部分基于包含对骨组织具有增加的向性的衣壳蛋白的rAAV。在一些实施方案中，将衣壳蛋白接枝到骨靶向肽。异源骨靶向肽可以靶向OC(例如，相对于OB，尤其或优先靶向OC)或OB(例如，相对于OC，尤其或优先靶向OB)。在一些实施方案中，骨靶向肽是(AspSerSer)

如本文所用，“接枝(grafting)”指将一个分子与另一个分子结合或联合。在一些实施方案中，术语接枝指至少两个分子的结合或联合，使得至少两个分子中的一个被插入到至少两个分子中的另一个中。在一些实施方案中，术语接枝指至少两个聚合物分子的结合或联合，使得至少两个分子中的一个附接到至少两个分子中的另一个。在一些实施方案中，术语接枝指一个聚合物分子(例如，核酸、多肽)与另一个聚合物分子(例如，核酸、多肽)的结合或联合。在一些实施方案中，术语接枝指至少两个核酸分子的结合或联合，使得至少两个分子中的一个附接到至少两个核酸分子中的另一个。

在一些实施方案中，术语接枝指至少两个核酸分子的结合或联合，使得至少两个核酸分子中的一个被插入到至少两个核酸分子中的另一个中。例如，已经观察到靶向肽可以被接枝到编码VP2 AAV衣壳蛋白的核酸的某些基因座上。在一些实施方案中，将靶向肽(例如骨靶向肽)插入到对应于编码AAV2或AAV9 VP2衣壳蛋白的Q588和A589和/或N587和R588的密码子之间的位置的位置。在一些实施方案中，将靶向肽插入到编码VP3衣壳蛋白的N587和R588的密码子之间的位置(或对应于AAV2或AAV9中的这些氨基酸位置的位置)。在一些实施方案中，将靶向肽插入到编码VP1衣壳蛋白的S452和G453的密码子之间的位置。其他可能的位置可以是N587和R588。

在一些实施方案中，通过接枝形成的核酸(接枝的核酸)编码嵌合蛋白。在一些实施方案中，接枝的核酸编码嵌合蛋白，使得一个多肽被有效地插入到另一个多肽中(例如，在N末端之前或C末端之后不直接结合)，从而产生两个多肽的连续融合。在一些实施方案中，接枝的核酸编码嵌合蛋白，使得一个多肽被有效地附接到另一多肽上(例如，在N末端之前或C末端之后直接结合)，从而产生两个多肽的连续融合。在一些实施方案中，术语接枝指至少两个多肽或其片段的结合或联合，使得至少两个多肽或其片段中的一个被插入到至少两个多肽或其片段中的另一个中。在一些实施方案中，术语接枝指至少两个多肽或其片段的结合或联合，使得至少两个多肽或其片段中的一个被附接到至少两个多肽或其片段中的另一个。

在一些实施方案中，本公开涉及结合至一个或多个骨靶向部分的腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白。“骨靶向部分”通常指促进rAAV转运到骨或骨组织的小分子、肽、核酸等。例如，在一些实施方案中，骨靶向部分是与骨细胞(例如，OB、OC、骨细胞等)上的受体结合的肽或小分子。骨靶向部分的示例包括但不限于阿仑膦酸盐(ALE)、多肽例如环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-酪氨酸-赖氨酸(cRGCyk)、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(D-Asp8)和适体例如CH6。骨靶向部分可以直接结合至衣壳蛋白或经由接头分子(例如氨基酸接头、PEG接头等)结合至衣壳蛋白。

在一些实施方案中，接头是富含甘氨酸的接头。在一些实施方案中，接头包含至少两个甘氨酸残基。在一些实施方案中，接头包含GGGGS(SEQ ID NO:64)。在一些实施方案中，接头包含选自由以下组成的组的式：[G]

在一些实施方案中，衣壳蛋白包含一个或多个携带叠氮化物的非天然氨基酸，其能够与标记有ADIBO的骨靶向部分反应(例如，经由“点击化学”以形成衣壳蛋白-骨靶向部分结合物)。包含携带叠氮化物的非天然氨基酸的衣壳蛋白由例如Zhang等人(2016)Biomaterials 80:134-145描述，并且用于肽结合的基于ADIBO的点击化学由例如Prim等人(2013)Molecules 18(8):9833-49描述。

可以将待培养于宿主细胞中以将rAAV载体包装在AAV衣壳中的组分反式提供给宿主细胞。可选择地，可以由稳定的宿主细胞提供所需组分(例如，重组AAV载体、rep序列、cap序列和/或辅助功能)的任何一种或多种，该稳定的宿主细胞已经使用本领域技术人员已知的方法被工程化以含有所需组分的一种或多种。最合适地，这种稳定的宿主细胞将含有在诱导型启动子控制下的所需组分。然而，所需组分可以在组成型启动子的控制下。在适合与转基因一起使用的调控元件的讨论中，本文提供了合适的诱导型和组成型启动子的示例。在另一个替代中，选择的稳定的宿主细胞可以含有在组成型启动子控制下的选择的组分和在一个或多个诱导型启动子控制下的其他选择的组分。例如，可以产生稳定的宿主细胞，其衍生自293细胞(其含有在组成型启动子控制下的E1辅助功能)，但是其含有在诱导型启动子控制下的rep和/或cap蛋白。本领域技术人员还可以产生其他稳定的宿主细胞。

生产本公开的rAAV所需的重组AAV载体、rep序列、cap序列和辅助功能可以使用任何合适的遗传元件(载体)递送至包装宿主细胞。选择的遗传元件可以通过任何合适的方法递送，包括本文所描述的那些。用于构建本公开的任何实施方案的方法是核酸操作领域的技术人员已知的，并且包括基因工程、重组工程和合成技术。参见，例如，Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,Cold SpringHarbor,N.Y。类似地，产生rAAV病毒体的方法是公知的，并且合适方法的选择不是本公开的限制。参见，例如，K.Fisher等人,J.Virol.,70:520-532(1993)和美国专利号5,478,745。

在一些实施方案中，可以使用三重转染方法(在美国专利号6,001,650中详细描述)生产重组AAV。通常，通过用待包装进AAV颗粒的重组AAV载体(包含转基因)、AAV辅助功能载体和附属功能载体转染宿主细胞来生产重组AAV。AAV辅助功能载体编码“AAV辅助功能”序列(即，rep和cap)，其以反式发挥作用，用于生产性的AAV复制和衣壳化。优选地，AAV辅助功能载体支持有效的AAV载体生产而不产生任何可检测的野生型AAV病毒体(即，含有功能性rep和cap基因的AAV病毒体)。适用于本公开的载体的非限制性示例包括描述于美国专利号6,001,650的pHLP19和描述于美国专利号6,156,303的pRep6cap6载体，这两篇文献以其全文通过引用并入本文。附属功能载体编码用于非AAV衍生的病毒功能和/或细胞功能的核苷酸序列，AAV依赖这些核苷酸序列进行复制(即“附属功能”)。附属功能包括AAV复制所需的那些功能，包括但不限于，涉及AAV基因转录的激活、阶段特异的AAV mRNA剪接、AAVDNA复制、cap表达产物的合成和AAV衣壳装配的那些部分。基于病毒的附属功能可以源自任何已知的辅助病毒，例如腺病毒、疱疹病毒(除了单纯疱疹病毒1型)和牛痘病毒。

在一些方面，本公开提供了转染的宿主细胞。术语“转染”用于指细胞摄取外源DNA，并且当外源DNA已被引入细胞膜内侧时，细胞已经被“转染”。若干转染技术是本领域公知的。参见，例如，Graham等人(1973)Virology,52:456，Sambrook等人(1989)MolecularCloning,a laboratory manual,Cold Spring Harbor Laboratories,New York，Davis等人(1986)Basic Methods in Molecular Biology,Elsevier和Chu等人(1981)Gene 13:197。这些技术可用于将一种或多种外源核酸，例如核苷酸整合载体和其他核酸分子引入合适的宿主细胞中。

“宿主细胞”指包含或能够包含目的物质的任何细胞。通常，宿主细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞(Sf9)或哺乳动物(例如人、啮齿动物、非人灵长类动物等)细胞。宿主细胞可用作AAV辅助构建体、AAV小基因质粒、附属功能载体或与重组AAV生产相关的其他转移DNA的受体。该术语包括已经被转染的原始细胞的后代。因此，本文所用的“宿主细胞”可以指已用外源DNA序列转染的细胞。应当理解，归因于天然的、偶然的或蓄意的突变，单个亲本细胞的后代与原始亲本在形态或基因组或总DNA互补上不一定完全相同。

如本文所用，术语“细胞系”指能够在体外连续或长期生长和分裂的细胞群。通常，细胞系是源自单个祖细胞的克隆群体。本领域中进一步已知的是，在这些克隆群体的储存或转移期间，核型可能发生自发或诱导的变化。因此，源自所指细胞系的细胞可以不与祖细胞或培养物精确相同，并且所指细胞系包括这类变体。

如本文所用，术语“重组细胞”指其中已引入外源DNA片段的细胞，如导致生物活性多肽的转录或生物活性核酸(例如RNA)的产生的DNA片段。

在一些方面，本公开提供了包含衣壳蛋白和分离的核酸的重组AAV，该分离的核酸包含编码AAV ITR的第一区域和包含转基因的第二区域，其中该转基因编码人工microRNA。人工microRNA可降低细胞(例如成骨细胞、破骨细胞、骨细胞、软骨细胞)或受试者中靶基因的表达。在一些实施方案中，rAAV包含降低细胞或受试者中SHN3表达的人工microRNA。

rAAV可包含至少一个修饰，其增加rAAV对骨细胞(例如成骨细胞、破骨细胞、骨细胞、软骨细胞)的靶向。增加rAAV对骨细胞靶向的修饰的非限制性示例包括异源骨靶向肽(例如，如SEQ ID NO:16、17、57、58、59、60、61、62或63中任何一个所示的)、AAV衣壳血清型(例如AAV1、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAVrh39、AAVrh43)。

使用本公开的rAAV可以使细胞或受试者中SHN3的表达降低50％至99％(例如，50％至99％之间的任何整数，包含端值)。使用本公开的rAAV可以使细胞或受试者中SHN3的表达降低75％至90％。使用本公开的rAAV可以使细胞或受试者中SHN3的表达降低80％至99％。

用于将重组载体包装在所需AAV衣壳中以生产本公开的rAAV的前述方法并不意指是限制性的，并且其他合适的方法对技术人员而言是显而易见的。

施用方式和组合物

根据本领域中已知的任何合适方法可以将本公开的rAAV以组合物的形式递送至受试者。例如，可以将优选地悬浮在生理学相容的载体(例如在组合物中)中的rAAV施用给受试者，例如宿主动物，例如人、小鼠、大鼠、猫、狗、绵羊、兔子、马、奶牛、山羊、猪、豚鼠、仓鼠、鸡、火鸡或非人类灵长类动物(例如猕猴)。在一些实施方案中，宿主动物不包括人。

rAAV到哺乳动物受试者的递送可以通过例如肌肉内注射或通过施用至哺乳动物受试者的血流中。施用至血流中可以通过注射进静脉、动脉或任何其他血管。在一些实施方案中，通过隔离肢体灌注(isolated limb perfusion)的方式施用rAAV至血流中，这是外科领域中公知的技术，该方法基本上使技术人员能够在rAAV病毒体的施用之前将肢体与全身循环隔离。技术人员还可以采用隔离肢体灌注技术的变体(描述于美国专利号6,177,403中)来施用病毒体至隔离肢体的脉管系统中，以潜在增强向肌细胞或组织的转导。此外，在某些情况下，将病毒体递送至受试者的骨(例如骨组织)中可以是合意的。“骨组织”意指脊椎动物的骨和/或关节(例如，软骨、轴骨(axial bone)和附肢骨(appendicular bone)等)的所有细胞和组织。因此，该术语包括但不限于成骨细胞、骨细胞、破骨细胞、软骨细胞等。经由使用针、导管或相关装置的滑膜内注射、膝注射、股骨髓内注射等，通过使用本领域中已知的外科技术，可以将重组AAV直接递送至骨。在一些实施方案中，通过静脉内注射施用如本公开所述的rAAV。在一些实施方案中，通过肌肉内注射施用rAAV。

本公开的一些方面涉及包含含有衣壳蛋白和编码转基因的核酸的重组AAV的组合物，其中转基因包含编码一种或多种骨代谢调节剂的核酸序列。在一些实施方案中，核酸进一步包含一个或多个AAV ITR。在一些实施方案中，rAAV包含含有SEQ ID NO:1-15中任何一个所示的序列(或其互补序列)或其部分的rAAV载体。在一些实施方案中，组合物进一步包含药学上可接受的载体。

在一些实施方案中，组合物包含含有衣壳蛋白和核酸的重组AAV，该核酸包含编码AAV ITR的第一区域和包含转基因的第二区域，其中该转基因编码靶向SHN3的人工microRNA。在一些实施方案中，重组AAV包含SEQ ID NO:3所示的序列。在一些实施方案中，衣壳蛋白进一步包含SEQ ID NO:16-17或57-63所示的异源骨靶向肽。

本公开的一些方面提供了降低细胞中SHN3表达的方法。细胞可以是单个细胞或细胞群(例如培养物)。细胞可以是体内的(例如在受试者中)或体外的(例如在培养物中)。受试者可以是哺乳动物，任选地是人、小鼠、大鼠、非人灵长类动物、猪、狗、猫、鸡或奶牛。

通过使用本公开的分离的核酸、rAAV或组合物，可以使细胞或受试者中SHN3的表达降低50％至99％(例如，50％至99％之间的任何整数，包含端值)。通过使用本公开的分离的核酸、rAAV或组合物，可以使细胞或受试者中SHN3的表达降低75％至99％。通过使用本公开的分离的核酸、rAAV或组合物，可以使细胞或受试者中SHN3的表达降低80％至99％。

本公开的组合物可以仅包含rAAV，或与一种或多种其他病毒(例如，编码一种或多种不同转基因的第二rAAV)组合。在一些实施方案中，组合物包含1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种或更多种不同的rAAV，每一种rAAV均具有一个或多个不同的转基因。

考虑到rAAV被指示的适应症，本领域技术人员可以容易地选择合适的载体。例如，一种合适的载体包括盐水，其可以与多种缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)一起配制。其他示例性载体包括无菌盐水、乳糖、蔗糖、磷酸钙、明胶、葡聚糖、琼脂、果胶、花生油、芝麻油和水。载体的选择不是本公开的限制。

任选地，除rAAV和载体之外，本发明的组合物还可以含有其他常规的药物成分，例如防腐剂或化学稳定剂。合适的示例性防腐剂包括氯丁醇、山梨酸钾、山梨酸、二氧化硫、没食子酸丙酯、对羟基苯甲酸类、乙基香草醛、甘油、苯酚和对氯酚。合适的化学稳定剂包括明胶和白蛋白。

以足够的量施用rAAV以转染目标组织的细胞并提供足够水平的基因转移和表达而没有过度的不利影响。常规的和药学上可接受的施用途径包括但不限于，直接递送至选择的器官(例如，门静脉内递送至肝脏)、口服、吸入(包括鼻内和气管内递送)、眼内、静脉内、肌肉内、皮下、皮内、瘤内和其他胃肠外(parental)施用途径。如需要可以组合施用途径。

获得特定“治疗效果”所需的rAAV病毒体的剂量，例如，基因组拷贝/每千克体重(GC/kg)的剂量单位，将基于多种因素而变化，这些因素包括但不限于：rAAV病毒体的施用途径、获得治疗效果所需的基因或RNA表达水平、所治疗的特定疾病或病症以及基因或RNA产物的稳定性。基于上述因素以及本领域公知的其他因素，本领域技术人员可以容易地确定用于治疗患有特定疾病或病症的患者的rAAV病毒体的剂量范围。

rAAV的“有效量”是足以靶向感染动物、靶向所需组织(例如骨组织)的量。有效量将主要取决于诸如物种、年龄、体重、受试者的健康状况以及要靶向的组织的因素，并且因此可以在动物和组织之间变化。例如，rAAV的有效量的范围通常在约1ml至约100ml的溶液中含有约10

在一些实施方案中，以每个日历日(例如24小时期间)不多于一次施用一个剂量的rAAV给受试者。在一些实施方案中，以每2个、3个、4个、5个、6个、7个日历日不多于一次施用一个剂量的rAAV给受试者。在一些实施方案中，以每个日历周(例如7个日历日)不多于一次施用一个剂量的rAAV给受试者。在一些实施方案中，以不多于每两周一次(例如在两个日历周期间一次)施用一个剂量的rAAV给受试者。在一些实施方案中，以每个日历月不多于一次(例如，在30个日历日中一次)施用一个剂量的rAAV给受试者。在一些实施方案中，以每六个日历月不多于一次施用一个剂量的rAAV给受试者。在一些实施方案中，以每个日历年(例如，365天或闰年的366天)不多于一次施用一个剂量的rAAV给受试者。

在一些实施方案中，配制rAAV组合物以减少组合物中AAV颗粒的聚集，特别是在高rAAV浓度存在处(例如～10

药学上可接受的赋形剂和载体溶液的配制是本领域技术人员公知的，用于在多种治疗方案中使用本文所述的特定组合物的合适的剂量和治疗方案的开发也是公知的。

通常，这些制剂可以含有至少约0.1％或更多的活性化合物，尽管活性成分的百分比当然可以变化并且可以方便地介于总配方重量或体积的约1％或2％至约70％或80％之间或更多。自然地，可以以在化合物的任何给定单位剂量中获得合适剂量的方式制备每种治疗上有用的组合物中的活性化合物的量。制备这些药物制剂的领域的技术人员将考虑如溶解度、生物利用度、生物学半衰期、施用途径、产品保存期限以及其他药理学考虑的因素，并且因此，多种剂量和治疗方案可以是合意的。

在某些情况下，以皮下、胰内、鼻内、胃肠道外、静脉内、肌肉内、鞘内、股骨髓内或口服、腹膜内或通过吸入的方式递送本文中公开的合适配制的药物组合物中的基于rAAV的治疗构建体将是合意的。在一些实施方案中，可以使用如美国专利号5,543,158；5,641,515和5,399,363(各自通过引用整体并入本文)中描述的施用形式递送rAAV。在一些实施方案中，施用的优选模式是通过门静脉注射。

适用于注射用途的药物形式包括无菌水溶液或分散液和用于临时制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。分散液也可以在甘油、液体聚乙二醇及其混合物中和油中制备。在储存和使用的常规情况下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。在许多情况下，该形式是无菌的且流动性达到容易注射的程度。它在生产和储存条件下必须是稳定的，并且必须防腐以免于微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物和/或植物油的溶剂或分散介质。例如通过使用如卵磷脂的包衣、通过在分散液的情况下维持所需的粒径以及通过使用表面活性剂可以维持适当的流动性。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟苯甲酸类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等可以实现对微生物作用的阻止。在许多情况下，优选包括例如糖或氯化钠的等渗剂。通过在组合物中使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现注射组合物的延长吸收。

例如，对于施用注射水溶液，如需要可以合适地将溶液进行缓冲，并且首先用足够的盐水或葡萄糖使液体稀释剂等渗。这些特定的水溶液特别适合于静脉内、肌肉内、皮下和腹膜内施用。在这一点上，本领域技术人员将知道可以采用的无菌水性介质。例如，可以将一个剂量溶于1ml等渗的NaCl溶液中，然后添加到1000ml皮下输液液体中，或在建议的输注部位注射(参见例如，"Remington's Pharmaceutical Sciences"15th Edition,1035-1038页和1570-1580页)。取决于宿主的状况，剂量必然会发生一些变化。在任何情况下，负责施用的人员将确定对于个体宿主的合适剂量。

通过将所需量的活性rAAV并入具有本文列举的多种其他成分的合适溶剂中然后过滤灭菌(需要时)来制备无菌注射溶液。通常，通过将各种灭菌的活性成分并入含有基础分散介质和来自以上列举的那些所需的其他成分的无菌媒介物中来制备分散体。就用于制备无菌注射溶液的无菌粉末而言，优选的制备方法是真空干燥和冰冻干燥技术，其从其先前无菌过滤的溶液中产生活性成分和任何其他所需成分的粉末。

本文公开的rAAV组合物也可以以中性或盐形式配制。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白的游离氨基形成)，并且其与例如盐酸或磷酸的无机酸或如乙酸、草酸、酒石酸、苦杏仁酸等的有机酸形成。与游离羧基形成的盐也可以源自例如钠、钾、铵、钙或铁的氢氧化物的无机碱，以及如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等的有机碱。经由制剂，将以与剂型相容的方式和以治疗有效的量来施用溶液。以各种剂型如可注射溶液、药物释放胶囊等容易地施用制剂。

如本文所用，“载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、媒介物、包衣、稀释剂、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂、缓冲剂、载体溶液、悬浮液、胶体等。用于药物活性物质的这些介质和试剂的使用是本领域公知的。补充的活性成分也可以并入组合物中。短语“药学上可接受的”指当施用给宿主时不产生过敏或相似的不良反应的分子实体和组合物。

递送载体如脂质体、纳米胶囊、微粒、微球、脂质颗粒、囊泡等可用于将本公开的组合物引入合适的宿主细胞中。特别地，rAAV载体递送的转基因可以被配制以包裹在脂质颗粒、脂质体、囊泡、纳米球或纳米颗粒等中的形式进行递送。

这些制剂可以优选用于本文公开的核酸或rAAV构建体的药学上可接受的制剂的引入。脂质体的形成和使用是本领域技术人员通常已知的。最近，开发了具有改进的血清稳定性和循环半衰期的脂质体(美国专利号5,741,516)。此外，已经描述了脂质体和脂质体样制备物作为潜在药物载体的各种方法(美国专利号5,567,434；5,552,157；5,565,213；5,738,868和5,795,587)。

脂质体已成功用于对其他程序的转染通常有抵抗的多种细胞类型。此外，脂质体不存在基于病毒的递送系统典型的DNA长度的限制。脂质体已被有效地用于将基因、药物、放射治疗剂、病毒、转录因子和变构效应物(allosteric effector)引入各种培养的细胞系和动物中。此外，已经完成了多种成功的检查脂质体介导的药物递送的有效性的临床试验。

脂质体由分散在水性介质中并自发形成多层同心双层囊泡(也被称为多层囊泡(MLV))的磷脂形成。MLV的直径通常为25nm至4μm。MLV的超声处理导致直径范围在200至

或者，可以使用rAAV的纳米胶囊制剂。纳米胶囊通常可以以稳定且可再现的方式截留物质。为了避免归因于细胞内聚合体超载引起的副作用，应使用能够在体内降解的聚合物来设计这些超细颗粒(尺寸约0.1μm)。考虑使用满足这些要求的可生物降解的聚氰基-丙烯酸烷酯纳米颗粒。

除上述递送方法外，还考虑将以下技术作为将rAAV组合物递送至宿主的替代方法。超声促渗(sonophoresis)(即超声)已被使用并描述于美国专利号5,656,016，其作为用于增加药物渗透进和通过循环系统的速率和功效的装置。考虑的其他药物递送替代方式是骨内注射(美国专利号5,779,708)、微芯片装置(美国专利号5,797,898)、托吡卡胺制剂(ophthalmic formulation)(Bourlais等人,1998)、透皮基质(美国专利号5,770,219和5,783,208)和反馈控制的递送(美国专利号5,697,899)。

本公开提供了用于递送有效量的转基因(例如，编码一种或多种骨代谢调节剂的分离的核酸或rAAV)至受试者的方法。在一些实施方案中，该方法包括施用有效量的编码能够促进或抑制骨形成的干扰RNA的分离的核酸给受试者的步骤。在一些实施方案中，该方法包括施用有效量的编码能够促进或抑制骨吸收的干扰RNA的分离的核酸给受试者的步骤。因此，在一些实施方案中，本文所述的分离的核酸、rAAV和组合物用于治疗患有或怀疑患有与骨代谢失调有关的疾病或病症的受试者。

如本文所用，“与骨代谢失调有关的疾病或病症”指以骨沉积和骨吸收之间的失衡为特征的病症，其导致以下之一：1)相对于健康个体(例如，未患有以骨沉积和骨吸收之间的失衡为特征的疾病的受试者)的异常增加的骨沉积(例如，形成)，或2)相对于健康个体(例如，未患有以骨沉积和骨吸收之间的失衡为特征的疾病的受试者)的异常减少的骨沉积(例如，形成)，或3)相对于健康个体(例如，未患有以骨沉积和骨吸收之间的失衡为特征的疾病的受试者)的异常增加的骨吸收(例如，破坏)，或4)相对于健康个体(例如，未患有以骨沉积和骨吸收之间的失衡为特征的疾病的受试者)的异常减少的骨吸收(例如，破坏)。

“与骨密度降低有关的疾病”指由以下原因导致的以增加的骨孔隙度(boneporosity)为特征的病况：1)相对于健康个体(例如，未患有以骨密度降低为特征的疾病的受试者)的异常减少的骨沉积(例如，形成)，或2)相对于健康个体(例如，未患有以骨密度降低为特征的疾病的受试者)的异常增加的骨吸收(例如，破坏)。与增加的骨孔隙度有关的疾病可以由以下两种原因之一引起：1)相对于健康个体(例如，未患有以骨密度降低为特征的疾病的受试者)的异常减少的OB和/或骨细胞的分化、功能或活性，和/或2)相对于健康个体(例如，未患有以骨密度降低为特征的疾病的受试者)的异常增加的OC分化、功能或活性。“孔隙度”通常指未被骨组织占据的骨部分的体积。

“与骨密度增加有关的疾病”指以由以下原因之一导致的降低的骨孔隙度(boneporosity)为特征的病况：1)相对于健康个体(例如，未患有以骨密度增加为特征的疾病的受试者)的异常增加的骨沉积(例如，形成)，或2)相对于健康个体(例如，未患有以骨密度增加为特征的疾病的受试者)的异常减少的骨吸收(例如，破坏)。与降低的骨孔隙度有关的疾病可以由以下两种原因之一引起：1)相对于健康个体(例如，未患有以骨密度增加为特征的疾病的受试者)的异常增加的OB和/或骨细胞的分化、功能或活性，和或2)相对于健康个体(例如，未患有以骨密度增加为特征的疾病的受试者)的异常减少的OC分化、功能或活性。

本公开的一些方面提供了治疗与骨代谢失调有关的疾病或病症的方法。骨代谢失调可以是与骨密度降低有关的疾病(例如，骨质疏松症、临界大小骨缺损、由废用或受伤引起的机械性病症)。骨代谢失调可以是与骨密度增加有关的疾病(例如，骨硬化症、致密性成骨不全症、硬化性狭窄病、肢端肥大症、氟蚀病、骨髓纤维化、丙型肝炎相关性骨硬化症、异养性骨化)。

在一些实施方案中，治疗与骨代谢失调有关的疾病或病症的方法包括施用包含转基因的重组AAV(rAAV)给有此需要的受试者。rAAV可以包含促进其靶向骨细胞(例如破骨细胞和成骨细胞)的修饰。促进其靶向骨细胞的rAAV的非限制性修饰包括SEQ ID NO:16-17或57-63中的异源骨靶向肽、骨特异性启动子和具有相对于其他组织增加的骨靶向的AAV血清型。在一些实施方案中，治疗骨代谢失调的方法包括施用包含如SEQ ID NO:16-17或57-63中的异源骨靶向肽的rAAV给有此需要的受试者。

在一些实施方案中，包含异源骨靶向肽的rAAV包含上调或下调与骨代谢失调有关的靶基因的转基因。在一些实施方案中，该转基因上调靶基因的表达，该靶基因的表达在与骨密度降低有关的病症(例如，骨质疏松症、临界大小骨缺损、由废用或受伤引起的机械性病症)中降低。在一些实施方案中，转基因下调在与骨密度降低有关的疾病中增加的靶基因的表达。在一些实施方案中，转基因上调靶基因的表达，该靶基因的表达在与骨密度降低有关的病症(例如，骨质疏松症、临界大小骨缺损、由废用或受伤引起的机械性病症)中降低。在一些实施方案中，转基因下调在与骨密度降低有关的疾病中增加的靶基因的表达。

本公开的一些方面提供了用于治疗与以骨代谢失调为特征的疾病或病症有关的疾病或病症的方法，该方法包括施用包含衣壳蛋白和编码抑制性核酸的分离的核酸的rAAV给受试者。rAAV可以包含抑制性核酸(例如，siRNA、shRNA、miRNA或amiRNA)。抑制性核酸可以减少或增加与以骨代谢失调为特征的疾病或病症有关的靶基因的表达。

在一些实施方案中，本公开提供了治疗与骨密度降低相关的疾病或病症的方法。该方法包括施用包含靶向与骨密度降低有关的基因的转基因的rAAV或分离的核酸给有此需要的受试者。在一些实施方案中，rAAV或分离的核酸包含编码靶向与骨密度降低有关的基因的人工microRNA的转基因。在一些实施方案中，靶基因是SHN3、PTH、PTHrP、DJ1、SOST、CTSK或RANK。

本公开的一些方面提供了治疗与骨密度降低有关的疾病或病症的方法，包括施用rAAV或分离的核酸。在一些实施方案中，rAAV或分离的核酸包含SEQ ID NO:3所示的序列或其互补序列。在一些实施方案中，rAAV包含含有SEQ ID NO:18-34中任何一个所示的序列的衣壳蛋白。在一些实施方案中，rAAV包含含有SEQ ID NO:16-17和57-63中任何一个所示的序列的异源骨靶向肽。

通过使用本公开的方法，可以将细胞或受试者中SHN3的表达降低50％至99％(例如，50％至99％之间的任何整数，包含端值)。通过使用本公开的方法，可以将细胞或受试者中SHN3的表达降低75％至90％。通过使用本公开的方法，可以将细胞或受试者中SHN3的表达降低80％至99％。

在一些实施方案中，物质的“有效量”是足以产生所需效果(例如，转导骨细胞或骨组织)的量。在一些实施方案中，分离的核酸的有效量是足以转染(或在rAAV介导的递送的情况下感染)足够数量的受试者靶组织的靶细胞的量。在一些实施方案中，靶组织是骨组织(例如，骨和骨组织细胞，例如OB、OC、骨细胞、软骨细胞等)。在一些实施方案中，分离的核酸(例如，其可以经由rAAV递送)的有效量可以是足以在受试者中具有治疗益处(例如，增加OB和/或骨细胞的活性或功能、抑制OB和/或骨细胞的活性、增加OC的活性或功能、抑制OC的活性或功能等)的量。有效量将取决于多种因素，例如受试者的物种、年龄、体重、健康状况以及所靶向的组织，并且因此可以如本公开中别处所述在受试者和组织间变化。

通过以下实施例将更详细地描述本发明的示例性实施方案。这些实施方案是本发明的示例，本领域技术人员将认识到本发明不限于示例性实施方案。

实施例

已经鉴定了几种骨形成的关键调节子作为骨质疏松症的治疗靶标。例如，归因于增加的OB活性，天然产生的骨形成抑制剂骨硬化蛋白(SOST)或衔接蛋白schnurri-3(SHN3，也称为HIVEP3)的抑制导致骨量的逐渐增加。不同于主要在OB中起作用的SHN3和SOST，组织蛋白酶K(CTSK)在OC中高度表达，并且其抑制通过阻断OC活性增加了骨量。最后，用包括PTH、PTH相关蛋白(PTHrP)或DJ-1的骨合成代谢因子处理促进了骨形成。在这个实施例中，描述了可以通过使用骨靶向腺相关病毒(AAV)介导的基因沉默或添加来操纵这些候选基因表达的基因治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂(例如，本公开描述的组合物)通过促进OB功能和骨形成或通过抑制OC活性和骨破坏阻止骨质流失，而仅具有有限的对骨重塑和再生活性的不良作用。

使用骨靶向腺相关病毒(BT-AAV)开发基因治疗剂

高转导效率、持续的转基因表达以及缺乏感染后的免疫原性和致病性，这些使得AAV成为用于基因治疗中的非常有吸引力的病毒载体。迄今为止，已经在全球超过130个临床试验和2,000例患者中评估了AAV载体。然而，非特异的细胞靶向、可能的预先存在的免疫和其他限速事件使得鉴定更多天然AAV血清型和通过载体工程化改进AAV血清型的性质和功能成为必要。在此，鉴定了可以在体外和体内转导OB和/或OC的AAV血清型。

转导OB、OC和软骨细胞的AAV血清型的鉴定

为此，将增强的绿色荧光蛋白(GFP)报告基因包装到17种AAV衣壳(scAAV1、scAAV2、scAAV3、scAAV4、scAAV5、scAAV6、scAAV6.2、scAAV7、scAAV8、scAAV9、scAAVrh8、scAAVrh10、scAAVrh39、scAAVrh43、scAAV2/2-66、scAAV2/2-84、scAAV2/2-125)中。通过使用表面荧光显微术监测GFP表达评估了这些纯化的AAV血清型载体转导源自间充质干细胞(MSC)的小鼠OB谱系细胞或软骨细胞谱系细胞或源自骨髓单核细胞(BM-MO)的小鼠OC的能力。首先，为了测试它们对OB谱系细胞或软骨细胞谱系细胞的转导能力，分别从Cyagen和ATCC购买了小鼠MSC和软骨细胞祖细胞系(ATDC5)。此外，小鼠OB前体细胞(pre-OB)分离自三种不同的同基因背景(C57BL/6J、BALB/cJ、129S1/SvlmJ)的出生后第3-5天的小鼠新生鼠的颅盖，并在成骨培养基中培养6天以分化成成熟OB(mOB)。将单剂量的17种纯化的AAV血清型的10

表1：可在体外转导小鼠MSC谱系细胞的scAAV血清型的鉴定。

在17种AAV血清型中，scAAV4在三种不同的小鼠背景scAAV1、scAAV5、scAAV6上转导小鼠OB谱系细胞是最有效的，且scAAV6.2(scAAV6的工程化版本)在三种不同的小鼠背景上转导小鼠OB谱系细胞和软骨细胞谱系细胞是最有效的，且scAAV9在C57B6/J背景上仅转导pre-OB是最有效的(图1和图2中的代表性图像)。

接下来，研究了纯化的AAV血清型转导小鼠OC前体细胞的能力。小鼠原代OC前体细胞(BM-MO，源自骨髓的单核细胞)分离自两月龄小鼠(C57BL/6J)的长骨，并通过添加小鼠M-CSF(40ng/ml，R&D Systems)进行扩增。在小鼠M-CSF(40ng/ml)和小鼠Rank配体(10ng/ml，R&D Systems)的存在下培养BM-MO 6天，以分化成成熟OC(图3)。此外，在用小鼠Rank配体(10ng/ml)培养4天后，将小鼠OC前体细胞系(Raw264.7)分化成成熟OC(图4)。将单剂量的17种纯化的AAV血清型的10

表2：在体外转导小鼠OC的scAAV血清型的鉴定。

在17种AAV血清型中，scAAV1、5、6、6.2、7和9有效地转导小鼠原代OC和Raw264.7OC系，而scAAV8和10、scAAVrh39和43仅转导Raw264.7OC系。(图3和图4中的代表性图像)。

为了检查AAV衣壳对关节软骨和骨的向性，从体外筛选中选出八种scAAV-Egfp载体(scAAV1、scAAV4、scAAV5、scAAV6、scAAV7、scAAV9、scAAVrh.10和scAAVrh.39)。为了测试它们转导关节软骨上的软骨细胞和/或骨表面的OB和/或OC的能力，将单剂量的八种选择的编码GFP的AAV血清型的10

相比之下，当将scAAV9注射入膝关节时，GFP蛋白在位于皮质骨中的OB和骨细胞中高表达。经处理的小鼠的全身和单个器官成像显示，EGFP表达在肝脏和后肢中最高(图23和29)。心脏和股骨中的表达是中等的，而未检测到肺、肾和脾中的表达。通过荧光显微镜术和免疫印迹分析进一步证实了心脏、肝和股骨中的EGFP表达(图23)。如观察到的，EGFP蛋白主要在皮质骨和小梁骨的骨内成骨细胞和骨细胞中表达，而不在韧带、关节软骨、生长板、骨膜成骨细胞、骨髓和髌骨(patellta)中表达(图23和30)。这些结果证明，全身递送的scAAV9载体靶向位于骨内的成骨细胞谱系细胞。

除scAAV9外，还在scAAV5处理中观察到皮质骨骨膜细胞中GFP的高表达和骨细胞中GFP的低表达。当注射scAAV4时，小群的骨膜细胞表达GFP蛋白，而在scAAV6.2处理中未检测到GFP表达(图6B)。因此，这些结果表明，scAAV9血清型在转导小鼠骨表面上的OB和OC是最有效的。为了提高scAAV9对骨组织的转导效率，将scAAV9与PBS或X-tremeGene 9DNA转染试剂(Roche，一种具有极低细胞毒性的脂质混合物)一起配制，并注射到小鼠的膝关节中(图7和8)。当与X-tremeGene 9(脂质体)一起配制时，GFP蛋白在生长板下和小梁骨表面(桡骨)上有活性的OB和OC中以及在皮质骨(骨干)中终末分化的OB、骨细胞中高表达。但是，GFP表达在肌肉中显著减少，表明X-tremeGene 9制剂改变了scAAV9的体内向性。

经由衣壳蛋白的遗传或化学修饰的骨靶向-scAAV9(BT-scAA9)血清型的开发

为了最佳化骨质疏松症中AAV介导的基因治疗，scAAV9血清型归巢并累积在OB和OC位于其中的骨表面上是合意的。已经观察到骨靶向肽((AspSerSer)

该实施例描述了将骨靶向肽插入AAV衣壳中以引导工程化的scAAV9血清型至骨(图9A，DSS-scAAV9、HABP-scAAV9)。通过使用标准克隆方法，将编码(AspSerSer)

为了检查DSS插入是否影响scAAV9的感染力，将包装进原型AAV9、AAV9.DSS-587或AAV9,DSS-Nter衣壳的载体感染到COB中，并通过免疫印迹或荧光显微镜术评估EGFP表达(图29)。与scAAV9相比，scAAV9.-DSS-Nter在较低MOI(10

测试了用衣壳蛋白上的骨靶向分子修饰的工程化的scAAV9血清型(Ale-scAAV9)。为了在AAV衣壳蛋白上创造含叠氮化物的氨基酸，将VP3衣壳蛋白中的天冬酰胺587改变为琥珀密码子(TAG)或将此琥珀密码子插入天冬酰胺587和精氨酸588之间。与这些突变VP3质粒一起，使用DNA转染试剂将pHelper、pAAV-GFP和pPyIRS/tRNACUA以1:1:1:2的摩尔比瞬时转染到AAV-293包装细胞中。6小时后，用含有1mM N-2-叠氮基O乙基氧羰基-L-赖氨酸(N-2-azideoethyloxycarbonyl-L-lysine，NAEK)的新鲜培养基替换培养基，并且72小时后从转染的细胞收获具有携带叠氮化物的氨基酸的scAAV9血清型(叠氮化物-scAAV9)。表达自pPyIRS/tRNACUA质粒的正交琥珀抑制剂氨酰基-tRNA合成酶/tRNA-CUA对在NAEK存在下于琥珀密码子位点处合成携带叠氮化物的非天然氨基酸。

通过用抗VP3抗体的免疫印迹确认了含有叠氮化物部分的VP3突变体的表达。一旦确认，通过监测GFP表达来评估叠氮化物-scAAV9血清型转导OB或OC的能力。用编码GFP的叠氮化物-scAAV9血清型处理原代小鼠OB，并通过表面荧光显微镜术评估GFP的表达。此外，这些scAAV9血清型用于在M-CSF和Rank配体存在下感染小鼠BM-MO(OC前体细胞)。将它们的转导效率与编码GFP的WT-scAAV9血清型进行比较。

接下来，经由点击化学，通过交联亲骨分子(ADIBO-Ale)和叠氮化物-scAAV9血清型的VP3衣壳蛋白中携带叠氮化物的氨基酸，生产骨靶向scAAV9血清型(Ale-scAAV9)。将叠氮化物-scAAV9血清型在室温下与不同浓度的ADIBO-Ale(FutureChem)温育，并在2小时后使用透析去除未结合的ADIBO-Ale。通过监测GFP表达来检查Ale-scAAV9血清型转导原代OB或OC的能力。

DSS-scAAV9转导至骨细胞和组织的验证

之前已报道，当将肽无效地或不合适地融合到AAV衣壳中时，AAV的转导效率会显著降低。为了测试DSS肽插入对scAAV9转导至OB和OC的能力的影响，用不同剂量的编码GFP的scAAV9(WT-、DSS-588、DSS-Nter)处理小鼠OB和OC前体细胞。2天后，通过使用抗GFP抗体的western印迹和通过表面荧光显微镜术来分析GFP的表达。如图11和12中所见(A和B-左)，当经DSS-588处理时，在OB和OC中均几乎未检测到或未检测到GFP蛋白表达。相比之下，与WT-scAAV9相比，DSS-Nter scAAV9的处理显示了OB和OC中GFP表达的减少，并且其表达以剂量依赖的方式增加。在这些scAAV9的处理中，OB(图11B-右和11C)和OC(图12B-右和12C)的分化是正常的，表明scAAV9转导不影响OB和OC功能。

接下来，研究了DSS-scAAV9载体在体内转导至骨细胞的能力。用X-tremeGene 9配制编码GFP的scAAV9载体(WT-、DSS-588、DSS-Nter)，并将单剂量的10

测试了AAV衣壳在体内的骨靶向活性。如之前所述，将scAAV9或scAAV9-DSS-Nteri.v.注射到两月龄小鼠中，并在注射后两周通过EGFP表达评估组织分布。尽管在经scAAV9或scAAV9-DSS-Nter全身处理的小鼠的全身中观察到相等水平的EGFP蛋白(图36)，但经scAAV9.DSS-Nter注射的小鼠产生了分别在心脏和肝中经scAAV9实现的那些的～55％和～75％的EGFP表达水平(图26和图36)。重要地，股骨和腰椎中的表达在处理组之间是相对来说相当的(图26和36)。值得注意的是，与经scAAV9处理的股骨相比，经scAAV9.DSS-Nter处理的股骨显示了增加数量的表达EGFP的细胞(图26)。这些结果表明，与骨靶向肽基序(DSS)融合的工程化的VP2衣壳蛋白通过去靶向至非骨骼组织的递送来提高scAAV9的骨归巢特异性，并转而增加了其对骨的向性。

用于体内特异性骨转导的BT-scAAV9血清型的全身递送的验证

为了检查BT-scAAV9血清型在体内归巢于骨的能力，局部或全身施用单剂量的1×10

编码特异于小鼠Schnurri-3(SHN3)、骨硬化蛋白(SOST)或组织蛋白酶K(CTSK)的shRNA的scAAV9载体的生成

硬化性狭窄病是一种具有高骨量的罕见遗传性疾病，并且已被观察到与编码骨硬化蛋白的SOST基因中的丧失功能型突变有关。骨硬化蛋白分泌自骨细胞、终末分化的成骨细胞，并且抑制骨形成和增强骨吸收。经单克隆人抗骨硬化蛋白抗体的处理通过促进骨形成和抑制骨吸收来恢复患有骨质疏松症的人患者和动物模型的骨质流失。然而，归因于增加的中风风险，FDA的批准目前是不太可能的。不同于抑制成骨细胞分化的骨硬化蛋白，组织蛋白酶K(CTSK，一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶)在对骨吸收重要的成熟破骨细胞中高表达。致密性成骨不全症(Pycnodysostosis，一种具有高骨量的罕见遗传性疾病)由人体内CTSK基因的失活性突变导致。经CTSK的小分子抑制剂的处理通过抑制骨吸收同时限制对骨再生活性的不利影响来阻止患有骨质疏松症的人患者和动物模型的骨质流失。然而，归因于升高的中风发生率，其最近已从FDA的考虑中撤消。

Schnurri-3(SHN3)作为成骨细胞分化的新型抑制剂。使用可诱导的loxP:Cre系统瞬时缺失OB中的SHN3导致小鼠中骨量的显著增加，表明SHN3表达的下调提供了一种有吸引力的治疗方法以恢复骨质疏松症中的低骨量(图14)。同样地，SHN3的抑制通过促进骨形成阻止了骨质疏松症小鼠模型中的骨质流失(图15)。然而，不同于骨硬化蛋白和CTSK，SHN3缺乏对骨特异，并与非骨组织的表型无关。因此，将实施例1中所述的骨靶向scAAV9载体随后用于载体，以在体外和体内沉默OB和/或OC中的小鼠SHN3、SOST或CTSK。

改造靶向上述基因(例如SHN3、CTSK)的两个shRNA发夹以替代功能性自互补AAV载体(例如mTR)所需的突变的反向末端重复(mTR)，并且修饰的shRNA-mTR序列描述于序列一节中。将这些修饰的shRNA-mTR在限制性酶位点PstI和Bgl2处克隆到pAAVscCB6-EGFP载体中，并包装到scAAV9衣壳中。

生产表达特异于小鼠schnurri-3(SHN3)和小鼠组织蛋白酶K(CTSK)的两个shRNA发夹的纯化的scAAV9载体(scAAV9-mSHN3i和scAAV9-mCTSKi)。对于体外特征化，分别在OB和OC中测试scAAV9-mSHN3i和scAAV9-mCTSKi的感染力、敲低效率和功能活性。首先，用小鼠原代OB前体细胞处理单剂量的10

接下来，检查了体内scAAV9-mSHN3i载体的转导和敲低效率(图17)。用X-tremeGene 9配制编码GFP的scAAV9载体(Sh-SHN3-1)，并将单剂量的10

此外，还在小鼠OC中研究了scAAV9-mCTSKi的感染力、敲低效率和功能活性。为获得OC前体细胞，将小鼠单核细胞系Raw264.7用Rank配体(5ng/ml)处理2天。随后，将这些OC前体细胞用单剂量的10

编码特异于小鼠骨硬化蛋白(SOST)shRNA的两种shRNA发夹(scAAV9-mSOSTi)的pAAVscCB6载体的敲低效率在具有骨硬化蛋白高表达的表达GFP-DMP1的骨细胞系中得到验证。一旦生成，将单剂量的10

使用BT-AAV介导的基因沉默开发用于骨质疏松症的基因治疗剂

此实施例描述了编码特异于小鼠SHN3、SOST、CTSK的shRNA发夹(SHN3i、SOSTi、CTSKi)的scAAV9血清型的功能性功效的测试。将shRNA发夹克隆到编码GFP的AAV载体中，并包装到BT-AAV衣壳(DSS-scAAV9、Ale-scAAV9)中(图20)。作为阴性对照，将对照ShRNA(cont-i)克隆到AAV载体中。将编码cont-i、SHN3i或SOSTi的BT-AAV血清型转导至原代小鼠OB中，并在三天后通过定量PCR评估SOST或SHN3的敲低效率。通过编码cont-i或CTSKi的BT-AAV血清型转导小鼠原代OC前体细胞，并在M-CSF和RANK配体存在下培养。转导后三天，通过定量PCR分析CTSK的敲低效率，并在六天后评估CSTK沉默抑制OC分化的能力。

为了检查这些基因治疗剂在骨质疏松症小鼠模型中阻止骨质流失的能力，在假手术或OVX手术后4周，对4月龄雌性小鼠(C57BL/6J，n＝12只小鼠/组)IV或IP注射单剂量的1×10

此外，用耐酒石酸的酸性磷酸酶(TRAP)染色组织切片作为OC分化的标记，并且对I型胶原α1(Coll)和Runx2的免疫组织化学(IHC)作为OB分化的标记。此分析伴有测量OB分化基因表达的骨RNA的定量PCR分析。最后，如在患有骨质疏松症的人患者中一样，使用ELISA通过测量血清骨更新标记(包括I型胶原C端端肽(CTX)、1型前胶原的N端前肽(P1NP)和骨特异的碱性磷酸酶(BSAP))的水平来分析全身OB和OC活性。

在一些实施方案中，经由皮下注射的重组PTH肽(1-34aa)或重组PTHrP肽(1-36aa)的间断性治疗在患有骨质疏松症的人患者和动物模型中增加OB活性并促进骨形成。这些肽(特立帕肽(teriparatide)、阿巴帕肽(abaloparatide))被FDA批准，并且目前用于患有骨质疏松症的人患者。在一些实施方案中，分泌性因子DJ-1充当OB与内皮细胞间交叉感知的介导物的作用。在一些实施方案中，DJ-1的治疗促进人MSC中的OB分化和人内皮细胞中的血管生成，同时其抑制OC分化。

该实施例描述了经由肌肉内(IM)注射的编码分泌性成骨因子的scAAV9血清型至动物的递送，经由之，被注射的肌肉充当生物泵，提供了血液循环中这些因子的稳定的高表达，以促进骨质疏松症环境中的骨形成(图21)。为此，将编码人PTH(1-84aa)、人PTHrP(1-140aa)或小鼠DJ-1(1-190aa)的cDNA克隆到pAAVscCB6-EGFP载体中，其在限制性酶位点Agel和Hind3间含有用于蛋白分泌的常规信号肽，并包装到肌肉向性的AAV衣壳(PTH-scAAV9、PTHrP-scAAV9、DJ-1-scAAV9)中。这些cDNA序列在序列一节中描述。

为了在体外验证AAV转导的细胞中这些分泌性成骨因子的产生，使用scAAV9血清型转导小鼠成肌细胞系(C2C12)，并在培养后三天收获上清液和通过ELISA测定分泌因子的水平。或者，裂解细胞并通过免疫印迹评估细胞内蛋白。一旦确认它们的分泌，在成骨培养条件下将这些成骨因子与小鼠原代OB一同温育，且将评估它们的成骨潜力。作为阴性对照，使用编码GFP的scAAV9血清型。

接下来，研究分泌性成骨因子的AAV介导的基因添加在骨质疏松症环境中是否阻止骨质流失。在4月龄雌性小鼠(C57BL/6J，n＝12只小鼠/组)中进行假手术或OVX手术，并在手术后4周经由IM注射施用单剂量的1x10

为了检查SHN3的短期抑制对骨形成的影响，通过将Shn3

生成编码Cre的scAAV9载体(scAAV9-Cre，图30)以充当用于Shn3

已显示人造microRNA(amiR设计进入miRNA支架中的siRNA盒)有效促进体内靶标信息降解。此外，这些设计允许表达盒由pol II启动子驱动，扩展了用scAAV载体控制基因敲低的能力。工程化人工microRNA盒以靶向shn3(amiR-shn3)或对照(amiR-ctrl)。在此设计中，amiR被内含子地(intronically)插入CB启动子和Egfp报告基因之间(图24)，其允许阳性转导(positively transduced)的细胞或组织的视觉追踪。然后，将测试盒包装到AAV9衣壳中。scANV9-amiR-shn3或scAAV9-amiR-ctrl的处理导致体外阳性转导的COB(图32)。与用amiR-ctrl处理的COB相比，scAAV9-amiR-shn3的处理导致shn3 mRNA水平降低～50％，和ibsp表达和矿化作用的相对增加(图32)。

为了检查amiR在体内增强骨合成代谢活性的能力，经由i.a.施用将scAAV9-amiR-shn3载体注射到两月龄小鼠的膝关节中。处理后两个月，分别通过IVIS光学成像(图24)和荧光显微镜术(图24)检查后肢和股骨中的EGFP表达。重要的是，分离自股骨的FACS分选的表达EGFP的细胞显示了shn3 mRNA水平降低～50％(图24)。与经amiR-ctrl处理的股骨相比，经amiR-shn3处理的股骨显示了相对小梁骨量的显著增加(图24)。这些结果表明，scAAV9-amiR-shn3的局部递送在敲低成骨细胞谱系细胞中的SHN3表达中有效，并进而增加体内骨量。

然后检查了scAAV9-amiR-shn3在全身递送后能促进体内骨合成代谢活性的能力。i.v.施用到三月龄小鼠中后两个月，如预期的，主要在后肢、肝和股骨中检测到EGFP表达(图33)。通过scAAV9-amiR-shn3转导的股骨显示了shn3 mRNA水平降低～50％(图24)，和小梁骨量和皮质骨矿物质密度的显著增加(图24)。同样地，体内成骨细胞活性在这些小鼠中增加，如更高的骨形成速率(BFR)、矿物质沉积速率(MAR)和每骨表面的成骨细胞表面(Ob.S/BS)所显示的(图24)。然而，在这些小鼠中，抗酒石酸的酸性磷酸酶(TRAP)阳性的破骨细胞的数量和骨吸收标记C末端端肽I型胶原(CTX)的血清水平没有改变(图33)。这些结果表明，全身递送的AAV9-amiR-shn3减少成骨细胞谱系细胞中shn3的表达，增强成骨细胞活性，并增加了骨量，而没有破骨细胞数量和功能的任何体内改变。因此，scAAV9-amiR-shn3载体可作为有力的骨合成代谢剂用于治疗骨质疏松症。

Wnt拮抗剂的抑制已被识别为用于骨质疏松症患者中的治疗性干预的一种新方法。先前的研究鉴定了SHN3经由干扰Wnt信号传导而作为成骨细胞分化的抑制剂。卵巢切除(OVX)小鼠是绝经后骨质疏松症的已建立模型。为了进一步证实Shn3的抑制可以是一个有吸引力的促进骨形成而作为骨质疏松症疗法的靶标，将缺少SHN3(Shn3

为了测试scAAV9-amiR-shn3在绝经后骨质疏松症中的治疗效果，对三月龄野生型雌性小鼠进行假手术或OVX手术，且在手术后六周以i.v.注射载体(图25)。七周后，经处理的股骨显示了有效的转导，导致～50％的shn3敲低(图25)。如预期的，表达amiR-ctrl的OVX小鼠相对于假手术小鼠显示了小梁骨量的显著降低。然而，当用scAAV9-amiR-shn3处理时，骨质流失在OVX小鼠的股骨中完全逆转，如通过更高的小梁BV/TV、厚度和连接密度所显示的(图25和图34)。同样地，相对于表达amiR-ctrl的OVX小鼠，这些小鼠中的股骨BFR和MAR增加，表明增强的体内成骨细胞活性(图25)。值得注意的是，通过scAAV9-amiR-shn3实现的shn3沉默不改变体内破骨细胞功能，因为TRAP阳性破骨细胞的数量和骨吸收活性在表达amiR-ctrl和amiR-shn3的OVX小鼠之间相当(图34)。最后，生物力学测试显示，经scAAV9-amiR-shn3处理的小鼠的股骨的强度和刚度受到相当的保护以免受OVX诱导的骨质流失(图25)，表明scAAV9介导的shn3沉默改善骨质疏松症小鼠的临床上有意义的终点。综上所述，这些结果证明，在OVX诱导的骨质疏松症发作后，全身递送的scAAV9-amiR-shn3促进骨形成并增强骨的临床相关的机械性能。

检查了新AAV9.DSS-Nter亲骨(bone-tropic)衣壳递送治疗性amiR-shn3转基因(scAAV9.DSS-Nter-amiR-shn3)至OVX小鼠的能力。对三月龄雌性小鼠进行假手术或OVX手术，并在手术后六周i.v.注射scAAV9.DSS-Nter-amiR-shn3。注射后七周，动物在动物的整个后部(图37)和股骨的成骨细胞谱系细胞(图37)中表现了强的EGFP表达，表明强烈的转导。相对于表达amiR-ctrl的假手术或OVX股骨，shn3 mRNA水平在表达amiR-shn3的OVX股骨中显著降低(图27)。尽管表达amiR-ctrl的OVX小鼠相对于假手术小鼠显示了小梁骨量的显著减少，但骨质流失在经scAAV9.DSS-Nter-amiR-shn3处理的OVX小鼠的股骨(图27)和腰椎骨(图27，图37)中完全逆转，如通过更高的小梁BV/TV、厚度、数量和连接密度所显示的。综上所述，这些结果证明，通过亲骨AAV9.DSS-Nter衣壳的amiR-shn3的递送能抵消绝经后骨质疏松症中的骨质流失。

针对NF-κβ(RANK、TNFRSF11A)配体的受体激活的人源化生物抗体干扰RANK配体(RANKL)和RANK之间的相互作用，其抑制破骨细胞分化所需的RANK信号传导。因此，它的治疗通过抑制破骨细胞介导的骨吸收防止患有骨质疏松症的人患者和动物模型中的骨质流失。

为了通过沉默破骨细胞前体细胞中的RANK而抑制破骨细胞分化，从而抑制骨质疏松症的人患者和动物模型中的骨质流失，检查了新AAV9.DSS-Nter亲骨衣壳递送治疗性amiR-33-mRANKi转基因(scAAV9.DSS-Nter-amiR-mRANKi 1/2)的能力。

方法

scAAV载体设计与生产

以gBlock形式合成amiR-33-ctrl和amiR-33-shn3的DNA序列，并将其在限制性酶切位点(Pstl和Bg1II)克隆到pAAVsc-CB6-Egfp质粒的内含子区域中。pAAVsc-CB6-Cre载体通过用Cre重组酶替换Egfp报告基因产生。通过测序验证构建体。先前的研究表明，转基因小鼠中靶向小鼠Shn3的shRNA的多西环素(doxycycline)诱导的表达导致了shn3 mRNA水平的降低和骨量的相对增加。相同的靶向序列用于产生amiR-33-shn3盒。将pAAV-amiR-ctrl和pAAV-amiR-shn3构建体包装到AAV9衣壳中。此外，将pAAVsc-CB6-Egfp构建体包装到AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAV9-HR、AAVrh8、AAVrh10、AAVrh39和AAVrh43衣壳中。如先前所述，通过HEK293细胞的瞬时转染进行scAAV的生产，通过CsCl沉淀进行纯化，通过使用Egfp引物/探针组在QX200 ddPCR系统(Bio-Rad)上的微滴式数字PCR(ddPCR)进行滴定。表3列出了gBlock和用于ddPCR的寡核苷酸的序列。

表3：引物、探针和gblock的序列

骨靶向scAAV9载体的产生

对编码骨靶向肽基序DSS(AspSerSer)

细胞

从Sigma购入软骨形成的ATDC5细胞，并培养在添加有2％FBS、2mM L-谷氨酰胺和1％青霉素/链霉素的DMEM/Ham’s F12培养基中。此外，通过使用II型胶原酶(50mg/ml，Worthington，LS004176)和中性蛋白酶II(100mg/ml，Roche，10165859001)，从五日龄野生型新生鼠(C57BL/6J)的颅盖中分离出原代骨原细胞(COB)，并保持在含有10％FBS(Gibco)、2mM L-谷氨酰胺(Corning)、1％青霉素/链霉素(Corning)和1％非必需氨基酸(Corning)的α-MEM培养基(Gibco)中。用抗坏血酸(200μM，Sigma，A8960)和β-甘油磷酸酯(10mM，Sigma，G9422)分化COB。最后，从两月龄小鼠(C57BL/6J)的股骨和胫骨中冲洗出骨髓细胞，并培养在含有10％FBS和20ng/ml M-CSF(R&D系统)的α-MEM培养基中的培养皿中，以获得源自骨髓的破骨细胞前体细胞(BM-OCP)。12小时后，将非贴壁细胞重新铺板到组织培养皿中，并在相同的培养基中培养三天。BM-OCP随后在RAMKL(20ng/ml；R&D系统)和M-CSF(20ng/ml；R&D系统)存在下持续六天分化为破骨细胞。

小鼠

如先前所述产生Shn3

通过尾基因组DNA上的PCR确定小鼠基因型。引物序列应要求提供。在所有实验中均使用和分析同窝对照。

MicroCT分析

MicroCT用于对小梁和皮质骨微结构的定性和定量评估，并由不知道所分析的动物的基因型的研究人员进行。用10％中性缓冲的福尔马林固定切除自指定小鼠的股骨，并使用microCT 35(Scanco Medical)以7μm的空间分辨率对其进行扫描。对于股骨远端的小梁骨分析，对始自生长板近侧280μm的上部2.1mm区域进行轮廓化(contoured)。对于股骨的皮质骨分析，使用了长度为0.6mm的干体中段区域。使用12μm的等向性体素尺寸进行L4脊髓节段的MicroCT扫描。通过基于二值化图像的距离转换的方法从轮廓化的2D图像获得3D重建图像。或者，使用Inveon多模态3D可视化程序(Siemens Medical Solutions USA，Inc)来生成microCT模态的多个静态或动态体积的融合3D视图。展示的所有图像是各自基因型的代表(n>5)。

组织学、组织形态测定和免疫荧光

对于组织学分析，从经rAAV载体处理的小鼠解剖出股骨和椎骨，在10％中性缓冲的福尔马林中固定2天，并用5％四钠EDTA脱钙2至4周。通过乙醇系列使组织脱水，在二甲苯中清洗两次，包埋在石蜡中，并沿冠状板从前向后以6μm的厚度进行切片。用苏木精和曙红(H&E)或抗酒石酸的酸性磷酸酶(TRAP)对脱钙的股骨切片进行染色。

对于动态组织形态测定分析，以六天间隔将溶解于2％碳酸氢钠溶液中的25mg/kg钙黄绿素(Sigma，C0875)和50mg/kg茜素-3-甲基亚氨基二乙酸(Sigma，A3882)皮下注射到小鼠中。在10％中性缓冲的福尔马林中固定两天后，将未脱钙的股骨样品包埋在甲基丙烯酸甲酯中，并将近端干骺端纵向切片(5μm)，并以McNeal氏三色染色用于类骨质评估，甲苯胺蓝用于成骨细胞，和TRAP用于破骨细胞。明确目标区域，并使用接口到半自动分析系统(Osteometrics)的Nikon Optiphot 2显微镜来测量骨形成率/骨表面(BFR/BS)、矿物质沉积率(MAR)、骨表面(BS)、成骨细胞表面(Ob.S/BS)和破骨细胞表面(Oc.S/BS)。测量在两个切片/样品(相隔～25μm)上进行并在归一化前求和，以获得根据ASBMR标准的单个测量/样品。此方法已经经过广泛的质量控制和验证，并且结果由两位不同的研究人员以盲目方式进行评估。

对于免疫荧光，收集解剖自经rAAV处理的小鼠的新鲜股骨和椎骨，并立即固定于冰冷的4％多聚甲醛溶液中两天。在0.5M EDTA pH 7.4于4℃以持续摇动(年龄≥1周)进行半脱钙五天，并随后用一天的20％蔗糖磷酸盐缓冲液和第二天的25％蔗糖磷酸盐缓冲液的混合物进行浸润。将所有样品包埋在25％蔗糖溶液和OCT化合物(Sakura)的50/50混合物中，并使用低温恒温器(Leica)切成12μm厚的径向切片。如先前所述进行免疫荧光染色和分析。简言之，在用0.2％Triton X-100处理10分钟后，在室温下用5％驴血清将切片封闭30分钟，并在4℃下用抗BGLAP抗体(sc-365797，Santa Cruz，1:150)温育过夜。用驴抗大鼠IgGAlexa-594(1:500，Molecular Probes)使一抗可视化。用DAPI复染细胞核。使用OlympusIX81共聚焦显微镜或Leica TCS SP5 II Zeiss LSM-880共聚焦显微镜成像样品。

生物力学分析

使用位于骨骼研究成像和生物力学测试中心(Center for Skeletal ResearchImaging and Biomechanical Testing Core)的电力机械测试仪(Electroforce 3230，Bose Corporation，Eden Prairie，MN)在三点弯曲中机械性测试股骨。弯曲夹具的底部跨度长度为8mm。通过在位移控制中以0.05mm/sec的速度用力移动的负载点来进行测试，并以60Hz收集位移数据。在测试过程中，所有骨都以相同的方向放置，且颅骨表面置于支撑物上并承受张力。基于来自测试的力和位移数据和用microCT测量的干体中段几何形状来计算弯曲刚度(El，N-mm2)、表观弹性模量(Eapp，MPa)、极限力矩(Mult，N-mm)、表观极限应力(σapp，MPa)、断裂功(Wfrac，mJ)和表观韧度(Uapp，mJ/mm3)。断裂功是导致股骨断裂所需的能量，且它是通过使用黎曼求和法(Riemann Sum method)求出力-位移曲线下的面积来计算的。使用力-位移曲线的线性部分计算弯曲刚度。在计算表观弹性模量时，使用最小惯性力矩(Imin)。

ELISA分析

根据制造商说明通过使用试剂盒进行CTX1 ELISA(Abclonal MC0850)分析。

成骨细胞分化分析

对于碱性磷酸酶(ALP)染色，用10％中性福尔马林缓冲液固定成骨细胞，并用含有Fast Blue(Sigma，FBS25)和萘酚AS-MX(Sigma，855)的溶液染色。或者，将成骨细胞与10倍稀释的Alamar Blue溶液(Invitrogen，DAL1100)一起温育以进行细胞增殖。随后，洗涤细胞并将其与含有6.5mM Na

为了评估成熟成骨细胞中细胞外基质矿化作用，将细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤两次，并在室温下在70％EtOH中固定15分钟。将固定的细胞用蒸馏水洗涤两次，并随后用2％茜素红溶液(Sigma，A5533)染色5分钟。然后将细胞用蒸馏水洗涤三遍，并检查钙沉积物的存在。通过乙酸提取法定量矿化作用。

定量RT-PCR分析

使用QIAzol(QIAGEN)从细胞纯化总RNA，并使用来自Applied Biosystems的High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit合成cDNA。使用

或者，将解剖自经rAAV9处理的小鼠的股骨和胫骨在含有10mM HEPES(pH 7.2)(CellGro)的汉克斯平衡盐溶液(Life Technologies)中压碎，然后用2.5mg/mL胶原酶A(Roche)和1单位/mL中性蛋白酶II(Roche)于37℃在温和搅拌下酶消化15分钟。将所得细胞悬浮液过滤(40μm)，使用含有0.5％BSA(组分V)和2mM EDTA的PBS(pH 7.2)洗涤。洗涤后，将细胞重悬于含2mM EDTA和1μg/mL 4-6,联脒-2-苯基吲哚(DAPI)的PBS(pH 7.2)中(活/死排除)，并使用FACS Aria II SORP细胞分选仪(Becton Dickinson)在排除DAPI

免疫印迹分析

在TNT裂解缓冲液(50mM Tris-HCl(pH 7.4)、150mM NaCl、1％Triton X-100、1mMEDTA、1mM EGTA、50mM NaF、1mM Na

体外转导成骨细胞、破骨细胞或软骨细胞的rAAV血清型的筛选

将ATDC5细胞或原代COB以1×10

对于体内筛选rAAV载体，将10μL的rAAV-Egfp载体(1×10

rAAV9介导的Cre重组酶或amiR-shn3递送对骨形成的影响

对于局部递送，将10μL的携带amiR-ctrl或amiR-shn3的rAAV9(1×10

对于全身递送，将200μL的携带Egfp、Cre、amiR-ctrl或amiR-shn3的rAAV9(4×10

全身递送的rAAV9-amiR-shn3在绝经后骨质疏松症小鼠模型中的治疗效果

通过麻醉和双侧卵巢切除(OVX)三月龄雌性小鼠(Jackson Laboratory)产生绝经后骨质疏松症的小鼠模型。手术后六周，对假手术或OVX小鼠i.v.注射200μL的携带amiR-ctrl或amiR-shn3的rAAV9或rAAV9.DSS-Nter(4×10

统计方法

所有数据均以平均值±s.e.m表示。在以下假设上计算样本量：所测参数的30％差异被认为与预期平均值的10-20％的σ估计是生物学上显著的。α和β分别设置为.05和0.8的标准值。没有动物或样品被排除在分析之外，并且在适用的情况下将动物随机化到处理组和对照组。对于相关的数据分析，在相关的情况下，首先进行Shapiro-Wilk正态性检验以用于检查组的正态分布。若通过了正态性检验，则两尾、未配对学生t检验，并且若正态性检验失败，则使用Mann-Whitney检验用于两组之间的比较。对于三组或四组的比较，若通过了正态性检验，则使用单向ANOVA，随之对所有成对的组进行Tukey氏多重比较检验。若正态性检验失败，则进行Kruskal-Wallis检验，并随之进行Dunn氏多重比较检验。使用GraphPadPRISM软件(v6.0a，La Jolla，CA)进行统计分析。P<0.05被认为是统计学上显著的。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；和****，P<0.0001。

序列

>SEQ ID NO:1；amiR-33-mSHN3i-1:

tttgtcttttatttcaggtcccAGATCTAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGTACAAACTACTTGAGAGCAGGTGTTCTGGCAATACCTGCCTGCTCTGTAATAGTTTGTACACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCCTGCAGgggatccggtggtggtgcaaatca

>SEQ ID NO:2；amiR-33-mSHN3i-2:

tttgtcttttatttcaggtcccAGATCTAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGACTACAGGTACTCACAAGCTCTGTTCTGGCAATACCTGGAGCTTGTCTGCACCTGTAGTCACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCCTGCAGgggatccggtggtggtgcaaatca

>SEQ ID NO:3；amiR-33-hSHN3i-1:

GtcttttatttcaggtcccagatcttAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGtttccatggtaagttcaaggcTGTTCTGGCAATACCTGGCCTTGAAGATGCCATGGAAACACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCccctgcaggggatccggtggtggtgcaaat

>SEQ ID NO:4；amiR-33-mCTSKi-1:

tttgtcttttatttcaggtcccAGATCTAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGTTTCATCATAGTACACACCTCTGTTCTGGCAATACCTGGAGGTGTGATCCATGATGAAACACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCCTGCAGgggatccggtggtggtgcaaatca

>SEQ ID NO:5；amiR-33-mCTSKi-2:

tttgtcttttatttcaggtcccAGATCTAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGTTACTGTAGGATCGAGAGGGATGTTCTGGCAATACCTGTCCCTCTCCTTACTACAGTAACACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGG

>SEQ ID NO:6；amiR-33-hCTSK-1:

GtcttttatttcaggtcccagatcttAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGattatcgctattgcagctttcTGTTCTGGCAATACCTGGAAAGCTGGTACAGCGATAATCACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCccctgcaggggatccggtggtggtgcaaat

>SEQ ID NO:7；amiR-33-hCTSK-2:

GtcttttatttcaggtcccagatcttAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGtcagattatcgctattgcagcTGTTCTGGCAATACCTGGCTGCAATTCCAATAATCTGACACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCccctgcaggggatccggtggtggtgcaaat

>SEQ ID NO:8；amiR-33-mSOSTi-1:

tttgtcttttatttcaggtcccAGATCTAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGAcaagtaggcagatgaggcacTGTTCTGGCAATACCTGGTGCCTCAAGTACCTACTTGTCACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCCTGCAGgggatccggtggtggtgcaaatca

>SEQ ID NO:9；amiR-33-mSOSTi-2:

tttgtcttttatttcaggtcccAGATCTAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGtgacctctgtggcatcattccTGTTCTGGCAATACCTGGGAATGATCGCGCAGAGGTCACACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCCTGCAGgggatccggtggtggtgcaaatca

>SEQ ID NO:10；amiR-33-hSosT-1:

GtcttttatttcaggtcccagatcttAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGatggtcttgttgttctccagcTGTTCTGGCAATACCTGGCTGGAGATGAGCAAGACCATCACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCccctgcaggggatccggtggtggtgcaaat

>SEQ ID NO:11；amiR-33-hSosT-2:

GtcttttatttcaggtcccagatcttAGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGACGtCtttGGtCtCAAAGGGGTGTTCTGGCAATACCTGCCCCTTTGTCATCAAAGACGTCACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCCccctgcaggggatccggtggtggtgcaaat

>SEQ ID NO:12；人PTH(1-84aa):

ggaattgtacccgcggccgatccAccggtGCCACCATGATACCTGCAAAAGACATGGCTAAAGTTATGATTGTCATGTTGGCAATTTGTTTTCTTACAAAATCGGATGGGAAATCTGTTAAGAAGAGATCTGTGAGTGAAATACAGCTTATGCATAACCTGGGAAAACATCTGAACTCGATGGAGAGAGTAGAATGGCTGCGTAAGAAGCTGCAGGATGTGCACAATTTTGTTGCCCTTGGAGCTCCTCTAGCTCCCAGAGATGCTGGTTCCCAGAGGCCCCGAAAAAAGGAAGACAATGTCTTGGTTGAGAGCCATGAAAAAAGTCTTGGAGAGGCAGACAAAGCTGATGTGAATGTATTAACTAAAGCTAAATCCCAGTGAagcttatcgataccgtcgactagagctc

>SEQ ID NO:13；人PTHrP(1-140aa):

ggaattgtacccgcggccgatccAccggtGCCACCATGCAGCGGAGACTGGTTCAGCAGTGGAGCGTCGCGGTGTTCCTGCTGAGCTACGCGGTGCCCTCCTGCGGGCGCTCGGTGGAGGGTCTCAGCCGCCGCCTCAAAAGAGCTGTGTCTGAACATCAGCTCCTCCATGACAAGGGGAAGTCCATCCAAGATTTACGGCGACGATTCTTCCTTCACCATCTGATCGCAGAAATCCACACAGCTGAAATCAGAGCTACCTCGGAGGTGTCCCCTAACTCCAAGCCCTCTCCCAACACAAAGAACCACCCCGTCCGATTTGGGTCTGATGATGAGGGCAGATACCTAACTCAGGAAACTAACAAGGTGGAGACGTACAAAGAGCAGCCGCTCAAGACACCTGGGAAGAAAAAGAAAGGCAAGCCCGGGAAACGCAAGGAGCAGGAAAAGAAAAAACGGCGAACTCGCTCTGCCTGGTTAGACTCTGGAGTGACTGGGAGTGGGCTAGAAGGGGACCACCTGTCTGACACCTCCACAACGTCGCTGGAGCTCGATTCACGGTAAagcttatcgataccgtcgactagagctc

>SEQ ID NO:14；小鼠DJ-1(1-190aa):

ggaattgtacccgcggccgatccaccggtcGCCACCATGGGATGGAGCTGTATTATCCTGTTTCTCGTCGCTACTGCCACCGGAGCTCATTCCGCTTCCAAAAGAGCTCTGGTCATCCTGGCCAAAGGAGCAGAGGAGATGGAGACAGTGATTCCTGTGGATGTCATGCGGCGAGCCGGGATCAAAGTCACTGTTGCAGGCTTGGCTGGGAAGGACCCCGTGCAGTGTAGCCGTGATGTAATGATTTGTCCAGATACCAGTCTGGAAGATGCAAAAACGCAGGGACCATACGATGTGGTGGTTCTTCCAGGAGGAAATCTGGGTGCACAGAATTTATCTGAGTCGCCTATGGTGAAGGAGATCCTCAAGGAGCAGGAGAGCAGGAAGGGCCTCATAGCTGCCATCTGTGCAGGTCCTACGGCTCTGTTGGCTCACGAAGTAGGTTTTGGATGCAAGGTCACAACACACCCACTGGCTAAGGACAAAATGATGAATGGCAGTCACTACAGC TACTCAGAGAGCCGCGTGGAGAAGGACGGCCTGATCCTCACCAGCCGCGGGCCGGGGACCAGCTTTGAGTTTGCACTAGCCATTGTGGAGGCACTCGTGGGGAAAGACATGGCCAACCAAGTGAAGGCACCGCTTGTTCTCAAAGACTAGTAAaagcttatcgataccgtcgactagagctcgctg

>SEQ ID NO:15；人DJ-1(1-190aa):

ggaattgtacccgcggccgatccaccggtc GCCACC ATG GGA TGG AGC TGT ATT ATC CTGTTTCTC GTC GCT ACT GCC ACC GGA GCT CAT TCCGCTTCCAAAAGAGCTCTGGTCATCCTGGCTAAAGGAGCAGAGGAAATGGAGACGGTCATCCCTGTAGATGTCATGAGGCGAGCTGGGATTAAGGTCACCGTTGCAGGCCTGGCTGGAAAAGACCCAGTACAGTGTAGCCGTGATGTGGTCATTTGTCCTGATGCCAGCCTTGAAGATGCAAAAAAAGAGGGACCATATGATGTGGTGGTTCTACCAGGAGGTAATCTGGGCGCACAGAATTTATCTGAGTCTGCTGCTGTGAAGGAGATACTGAAGGAGCAGGAAAACCGGAAGGGCCTGATAGCCGCCATCTGTGCAGGTCCTACTGCTCTGTTGGCTCATGAAATAGGTTTTGGAAGTAAAGTTACAACACACCCTCTTGCTAAAGACAAAATGATGAATGGAGGTCATTACACCTACTCTGAGAATCGTGTGGAAAAAGACGGCCTGATTCTTACAAGCCGGGGGCCTGGGACCAGCTTCGAGTTTGCGCTTGCAATTGTTGAAGCCCTGAATGGCAAGGAGGTGGCGGCTCAAGTGAAGGCTCCACTTGTTCTTAAAGACTAGTAAaagcttatcgataccgtcgactagagctcgctg

>SEQ ID NO:16；(AspSerSer)

DSSDSSDSSDSSDSSDSS

>SEQ ID NO:17；HABP-19,骨靶向肽

CγEPRRγEVAγELγEPRRγEVAγEL,

γ(Gla残基):γ-羧化谷氨酸(Glu)通过维生素K依赖的γ-羧化衍生自Glu。

>SEQ ID NO 18:AAV衣壳1；

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEEVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDEDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNFQSSSTDPATGDVHAMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKNPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL

>SEQ ID NO 19:AAV衣壳2；

MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 20:AAV衣壳3B；

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGVPQPKANQQHQDNRRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRILEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 21:AAV衣壳4:

MTDGYLPDWLEDNLSEGVREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQQRLQGDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEQAGETAPGKKRPLIESPQQPDSSTGIGKKGKQPAKKKLVFEDETGAGDGPPEGSTSGAMSDDSEMRAAAGGAAVEGGQGADGVGNASGDWHCDSTWSEGHVTTTSTRTWVLPTYNNHLYKRLGESLQSNTYNGFSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGMRPKAMRVKIFNIQVKEVTTSNGETTVANNLTSTVQIFADSSYELPYVMDAGQEGSLPPFPNDVFMVPQYGYCGLVTGNTSQQQTDRNAFYCLEYFPSQMLRTGNNFEITYSFEKVPFHSMYAHSQSLDRLMNPLIDQYLWGLQSTTTGTTLNAGTATTNFTKLRPTNFSNFKKNWLPGPSIKQQGFSKTANQNYKIPATGSDSLIKYETHSTLDGRWSALTPGPPMATAGPADSKFSNSQLIFAGPKQNGNTATVPGTLIFTSEEELAATNATDTDMWGNLPGGDQSNSNLPTVDRLTALGAVPGMVWQNRDIYYQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLIGGFGLKHPPPQIFIKNTPVPANPATTFSSTPVNSFITQYSTGQVSVQIDWEIQKERSKRWNPEVQFTSNYGQQNSLLWAPDAAGKYTEPRAIGTRYLTHHL

>SEQ ID NO 22:AAV衣壳5:

MSFVDHPPDWLEEVGEGLREFLGLEAGPPKPKPNQQHQDQARGLVLPGYNYLGPGNGLDRGEPVNRADEVAREHDISYNEQLEAGDNPYLKYNHADAEFQEKLADDTSFGGNLGKAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPTGKRIDDHFPKRKKARTEEDSKPSTSSDAEAGPSGSQQLQIPAQPASSLGADTMSAGGGGPLGDNNQGADGVGNASGDWHCDSTWMGDRVVTKSTRTWVLPSYNNHQYREIKSGSVDGSNANAYFGYSTPWGYFDFNRFHSHWSPRDWQRLINNYWGFRPRSLRVKIFNIQVKEVTVQDSTTTIANNLTSTVQVFTDDDYQLPYVVGNGTEGCLPAFPPQVFTLPQYGYATLNRDNTENPTERSSFFCLEYFPSKMLRTGNNFEFTYNFEEVPFHSSFAPSQNLFKLANPLVDQYLYRFVSTNNTGGVQFNKNLAGRYANTYKNWFPGPMGRTQGWNLGSGVNRASVSAFATTNRMELEGASYQVPPQPNGMTNNLQGSNTYALENTMIFNSQPANPGTTATYLEGNMLITSESETQPVNRVAYNVGGQMATNNQSSTTAPATGTYNLQEIVPGSVWMERDVYLQGPIWAKIPETGAHFHPSPAMGGFGLKHPPPMMLIKNTPVPGNITSFSDVPVSSFITQYSTGQVTVEMEWELKKENSKRWNPEIQYTNNYNDPQFVDFAPDSTGEYRTTRPIGTRYLTRPL

>SEQ ID NO 23:AAV衣壳6:

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDKDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNLQSSSTDPATGDVHVMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL

>SEQ ID NO 24:AAV衣壳6.2；

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDKDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNLQSSSTDPATGDVHVMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL

>SEQ ID NO 25:AAV衣壳7:

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPAKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSSVGSGTVAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSETAGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLRFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTIQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQSVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYSFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLARTQSNPGGTAGNRELQFYQGGPSTMAEQAKNWLPGPCFRQQRVSKTLDQNNNSNFAWTGATKYHLNGRNSLVNPGVAMATHKDDEDRFFPSSGVLIFGKTGATNKTTLENVLMTNEEEIRPTNPVATEEYGIVSSNLQAANTAAQTQVVNNQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPEVFTPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNFEKQTGVDFAVDSQGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 26:AAV衣壳8:

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGATNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLSFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFTYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTGGTANTQTLGFSQGGPNTMANQAKNWLPGPCYRQQRVSTTTGQNNNSNFAWTAGTKYHLNGRNSLANPGIAMATHKDDEERFFPSNGILIFGKQNAARDNADYSDVMLTSEEEIKTTNPVATEEYGIVADNLQQQNTAPQIGTVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQSKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTSVDFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 27:AAV衣壳9:

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 28:AAV衣壳rh8:

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGLGPNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNEGTKTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQALGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLVRTQTTGTGGTQTLAFSQAGPSSMANQARNWVPGPCYRQQRVSTTTNQNNNSNFAWTGAAKFKLNGRDSLMNPGVAMASHKDDDDRFFPSSGVLIFGKQGAGNDGVDYSQVLITDEEEIKATNPVATEEYGAVAINNQAANTQAQTGLVHNQGVIPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPLTFNQAKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 29:AAV衣壳rh10:

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAGPSGLGSGTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYQFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFSQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTDGTYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 30:AAV衣壳rh39:

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAGPSGLGSGTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLSFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTQGTQQLLFSQAGPANMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGRDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQTNTGPIVGNVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFSQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 31:AAV衣壳rh43:

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLEAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGATNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLSFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFTYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTGGTANTQTLGFSQGGPNTMANQAKNWLPGPCYRQQRVSTTTGQNNNSNFAWTAGTKYHLNGRNSLANPGIAMATHKDDEERFFPSNGILIFGKQNAARDNADYSDVMLTSEEEIKTTNPVATEEYGIVADNLQQQNTAPQIGTVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQSKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTSVDFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 32:AAV衣壳2/2-66:

MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHQDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPAEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTNAPSGTTTMSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTAADNNNSDYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKYFPQSGVLIFGKQDSGKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQSGNTQAATTDVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 33:AAV衣壳2/2-84:

MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHQDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPAEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTNAPSGTTTMSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTAADNNNSDYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKYFPQSGVLIFGKQDSGKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQSGNTQAATTDVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO 34:AAV衣壳2/2-125:

MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLARAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPAEPDSSSGTGKSGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMASGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQTVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLRFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTAADNNNSDYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGTAMASHKDDEEKYFPQSGVLIFGKQDSGKTNVDIERVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQSGNTQAATSDVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL

>SEQ ID NO:69人Schnurri-3核苷酸序列

CTCACAACCAGCCGACTCTCCCATTATCCAGCTGCCTAGTTTGGTGCTTCAATGTACATGGCTATTCCGTGTGCATATGTGTGTATACAAACACGCATGCATGCCTGGATGGACATACGTATGCACAGGTTATTTTTTAAGGACAATTCTTTCAATAAGGTCTTTACCCCTTACTTGAAACAGGTGTTCATGAAAAAAATGCACAAAATCCTGCCTGGCCGGAATAATTCATGAAGAAGGGGCTGGATCCGTGGGTCAGAGAACACAGGACCAGTTTGCCATCCCAAGGCCGAAGGATTCGAGGCACAAACCCAGCAGCCTCAACCTAGTTCATGGAGGAGCCTCGCGGGGTCCTGGCCAAGCAAGCCCGCCCCTCTGGTGGGAAGAGCGGCGCCTAGGTGGAGGGTGGCTGCCGTAGGAGTGGACATGAATGCTGGCTTTCAGAGAGAACAGCGTTTCAGTTTTGGTCATCGGAAGTGGTGCCTTCAGCACAGAAGAAGAGCGTGATTTCTCCTCCAAGGCCGTTGATCTCCAACCCAGAACTAAAGGGGAGAAGAGCCACCCCCAGCATCCAGCGTGGCATCTCTTGTGCCAGGACCAGGGATGACTGGGCCATGGACACAGATGTCTCCAACCTTCAACCGTTTGCATAGCACACGGGGGACTCGTGGGGGCCACCTGCCACTGCCAGCTGAAACAATACAATGGCAATACTGACATCCTTCATGACGTTTTCCCGACAGACATTCAGGCAGAAAGTGCTGGTGCGTTTTCTGTCTGCAAAGTAGAGGGCCATGCCTCACCAATAGAATAGCGTGGGCCCTGATGACCTGCTCCGAGTCCACTCACAGCCAGTGACACTTGCAAAAAACTCCCAAAGCCGTCTTGGGTTTGGCTCCCACAGCTCTTGACCAATGTGGCCAAAGCTGGACACCTCCTTGGGACACTGGGATTATTCATAAATGCAGCCCGCCCTGACTCTCCCTGAATAGCATCTGAAGTCTTTGTGAAGGTCATGGATCCTGAACAAAGTGTCAAGGGCACCAAGAAGGCTGAGGGAAGTCCCCGGAAGCGGCTGACCAAAGGAGAGGCCATTCAGACCAGTGTTTCTTCCAGCGTCCCATACCCAGGCAGCGGCACAGCTGCCACCCAAGAGAGCCCCGCCCAAGAGCTCTTAGCCCCGCAGCCCTTCCCGGGCCCCTCATCAGTTCTTAGGGAAGGCTCTCAGGAGAAAACGGGCCAGCAGCAGAAGCCCCCCAAAAGGCCCCCCATCGAAGCATCCGTCCACATCTCACAGCTTCCGCAGCACCCTCTGACACCAGCATTCATGTCGCCTGGCAAACCTGAGCATCTCCTGGAGGGGTCCACATGGCAACTGGTTGACCCCATGAGACCTGGACCCTCTGGCTCCTTCGTGGCCCCTGGGCTCCATCCTCAGAGCCAGCTCCTTCCTTCCCACGCTTCCATCATTCCCCCCGAGGACCTTCCTGGAGTCCCCAAAGTCTTCGTGCCTCGTCCTTCCCAGGTCTCCTTGAAGCCCACAGAAGAGGCACACAAGAAGGAGAGGAAGCCCCAGAAGCCAGGCAAGTACATCTGCCAGTACTGCAGCCGGCCCTGTGCCAAGCCCAGCGTGCTCCAGAAGCACATTCGCTCACACACAGGTGAGAGGCCCTACCCCTGCGGCCCCTGTGGCTTCTCCTTCAAGACCAAGAGTAATCTCTACAAGCACAGGAAGTCCCATGCCCACCGCATCAAAGCAGGCCTGGCCTCAGGCATGGGTGGCGAGATGTACCCACATGGGCTGGAGATGGAGCGGATCCCTGGGGAAGAGTTTGAGGAGCCCACTGAGGGAGAAAGCACAGATTCTGAAGAGGAGACTAGTGCCACCTCTGGTCACCCTGCAGAGCTCTCCCCAAGACCCAAGCAGCCCCTTCTCTCCAGCGGGCTATACAGCTCTGGGAGCCACAGTTCCAGCCACGAACGCTGTTCCCTGTCCCAGTCCAGCACAGCCCAGTCACTCGAAGACCCCCCTCCATTTGTGGAACCCTCATCTGAGCACCCCCTGAGCCATAAACCTGAAGACACCCACACGATTAAGCAGAAGCTGGCCCTCCGCTTAAGCGAGAGGAAGAAGGTGATCGATGAGCAGGCGTTTCTGAGCCCAGGCAGCAAAGGGAGTACTGAGTCTGGGTATTTCTCTCGCTCCGAGAGTGCAGAGCAGCAGGTCAGCCCCCCAAACACCAACGCCAAGTCCTACGCTGAGATCATCTTTGGCAAGTGTGGGCGAATAGGACAGCGGACCGCCATGCTGACAGCCACCTCCACCCAGCCCCTCCTGCCCCTGTCCACCGAAGACAAGCCCAGCCTGGTGCCTTTGTCTGTACCCCGGACGCAGGTGATCGAGCACATCACGAAGCTCATCACCATCAACGAGGCCGTGGTGGACACCAGCGAGATCGACAGCGTGAAGCCAAGGCGGAGCTCACTGTCCAGGCGCAGCAGCATGGAGTCCCCAAAATCCAGCCTCTACCGGGAGCCCCTGTCATCCCACAGTGAGAAAACCAAGCCTGAACAATCACTGCTGAGCCTCCAGCACCCGCCCAGTACCGCCCCCCCTGTGCCTCTCCTGAGAAGCCACTCAATGCCTTCTGCCGCCTGCACTATCAGCACCCCCCACCACCCCTTCCGAGGTAGCTACTCCTTCGATGACCATATCACCGACTCCGAAGCCCTGAGCCACAGCAGTCACGTGTTTACCTCCCACCCCCGGATGCTGAAGCGCCAGCCGGCAATCGAATTACCTTTGGGAGGGGAATACAGTTCTGAGGAGCCTGGCCCAAGCAGCAAAGACACAGCCTCCAAGCCCTCGGACGAAGTGGAACCCAAGGAAAGCGAGCTTACCAAAAAGACCAAGAAGGGTTTGAAAACAAAAGGGGTGATCTACGAATGTAACATATGTGGTGCTCGGTACAAGAAAAGGGATAACTACGAAGCCCACAAAAAATACTACTGCTCAGAGCTTCAGATCGCAAAGCCCATCTCTGCAGGCACCCACACATCTCCAGAAGCTGAAAAGAGTCAGATTGAGCATGAGCCGTGGTCCCAAATGATGCATTACAAACTGGGAACCACCCTGGAACTCACTCCACTGAGGAAGAGGAGGAAAGAGAAGAGCCTTGGGGACGAGGAAGAGCCACCTGCCTTTGAGTCCACAAAAAGTCAGTTTGGCAGCCCCGGGCCATCTGATGCTGCTCGGAACCTTCCCCTGGAGTCCACCAAGTCACCAGCAGAACCAAGTAAATCAGTGCCCTCCTTGGAGGGACCCACGGGCTTCCAGCCAAGGACTCCCAAGCCAGGGTCCGGTTCAGAATCAGGGAAGGAGAGGAGAACAACGTCCAAAGAAATTTCTGTCATCCAGCACACCAGCTCCTTTGAGAAATCTGATTCTCTCGAGCAGCCGAGTGGCTTGGAAGGGGAAGACAAACCTCTGGCCCAGTTCCCATCACCCCCACCTGCCCCACACGGACGCTCTGCTCACTCCCTGCAGCCTAAGTTGGTCCGCCAGCCCAACATTCAGGTTCCTGAGATCCTAGTAACTGAGGAGCCTGACCGGCCGGACACAGAGCCAGAGCCGCCCCCTAAGGAACCTGAGAAGACTGAGGAGTTCCAATGGCCCCAGCGCAGCCAGACACTTGCCCAGCTCCCAGCTGAGAAGCTGCCACCCAAAAAGAAGAGGTTGCGCCTGGCAGAGATGGCCCAATCATCAGGGGAGTCCAGCTTCGAGTCCTCTGTGCCTCTGTCTCGCAGCCCGAGCCAGGAAAGCAATGTCTCTTTGAGTGGGTCCAGCCGCTCAGCCTCGTTTGAGAGGGATGACCATGGGAAAGCCGAGGCCCCCAGTCCCTCATCTGACATGCGCCCCAAACCCCTGGGCACCCACATGTTGACTGTCCCCAGCCACCACCCACATGCCCGAGAGATGCGGAGGTCAGCCTCAGAGCAGAGCCCCAACGTTTCCCATTCTGCCCACATGACCGAGACACGCAGCAAATCCTTTGACTATGGCAGCTTGTCCTTGACAGGCCCTTCTGCTCCAGCCCCAGTGGCTCCACCAGCGCGGGTGGCCCCGCCAGAGAGAAGAAAATGCTTCTTGGTGAGACAGGCCTCTCTGAGCAGGCCTCCAGAATCTGAGTTGGAGGTTGCCCCCAAGGGAAGACAGGAGAGCGAAGAACCACAGCCCTCATCCAGTAAACCCTCTGCCAAAAGCTCATTGTCCCAGATTTCCTCTGCGGCCACCTCACATGGTGGACCCCCGGGAGGCAAGGGCCCAGGGCAGGACAGGCCCCCATTGGGGCCCACTGTGCCCTACACAGAAGCACTGCAAGTGTTCCACCACCCCGTTGCCCAGACACCCCTGCATGAGAAGCCATACCTGCCCCCACCAGTCTCCCTTTTCTCCTTCCAGCATCTCGTGCAGCATGAGCCAGGACAGTCTCCAGAATTCTTCTCCACCCAGGCCATGTCCAGCCTCCTGTCCTCACCATACTCCATGCCCCCACTTCCTCCCTCCTTATTTCAAGCCCCACCGCTTCCTCTCCAGCCTACTGTTCTGCACCCAGGCCAACTCCATCTCCCCCAGCTCATGCCTCACCCAGCCAACATCCCCTTCAGGCAGCCCCCTTCCTTCCTCCCCATGCCATACCCGACCTCCTCAGCACTGTCTTCTGGGTTTTTCCTGCCTCTGCAATCCCAGTTTGCACTTCAGCTCCCTGGTGATGTGGAAAGCCATCTGCCCCAGATCAAAACCAGCCTGGCCCCACTGGCAACAGGAAGTGCTGGCCTCTCCCCCAGCACAGAGTACAGCAGTGACATCCGGCTACCCCCTGTGGCTCCCCCAGCCAGCTCCTCAGCACCTACATCAGCTCCTCCACTGGCCCTGCCTGCCTGTCCAGACACCATGGTGTCCCTGGTTGTGCCTGTCCGTGTTCAGACCAATATGCCGTCCTATGGGAGCGCAATGTACACCACCCTTTCCCAGATCTTGGTCACCCAGTCCCAAGGCAGCTCAGCAACTGTGGCACTTCCCAAGTTTGAGGAACCCCCATCAAAGGGGACGACTGTATGTGGTGCAGATGTGCATGAGGTTGGGCCCGGCCCTTCTGGGTTAAGTGAAGAGCAAAGCAGAGCTTTCCCAACTCCATACCTGAGAGTGCCTGTGACATTACCTGAAAGAAAAGGCACTTCCCTGTCATCAGAGAGTATCTTGAGCCTGGAGGGGAGTTCATCAACAGCAGGGGGAAGCAAACGTGTCCTTTCACCAGCTGGCAGCCTTGAACTTACCATGGAAACCCAGCAGCAAAAAAGAGTGAAGGAGGAGGAGGCTTCCAAGGCAGATGAAAAACTTGAGCTGGTAAAACCATGCAGTGTGGTCCTACCAGCACCGAGGATGGGAAGAGGCCAGAGAAATCCCACTTAGGCAACCAGGGCCAAGGCAGGAGGGAGCTAGAAATGCTGTCCAGCCTGTCCTCAGATCCATCTGACACAAAGGAAATTCCTCCCCTCCCTCACCCTGCATTGTCCCATGGGACAGCCCCAGGCTCAGAAGCTTTGAAGGAATATCCCCAGCCATCTGGCAAACCTCACCGAAGAGGGTTGACCCCACTGAGCGTGAAGAAAGAAGATTCCAAGGAACAACCTGATCTCCCCTCCTTGGCACCTCCGAGCTCTCTGCCTCTGTCAGAAACGTCCTCCAGACCAGCCAAGTCACAAGAAGGTACGGACTCAAAGAAGGTACTGCAGTTCCCCAGCCTCCACACAACCACTAATGTCAGTTGGTGCTATTTAAACTACATTAAGCCAAATCACATCCAGCATGCAGATAGGAGGTCCTCTGTTTACGCTGGTTGGTGCATAAGTTTGTACAACCCCAACCTTCCGGGGGTTTCCACTAAAGCTGCTTTGTCCCTCCTGAGGTCTAAGCAGAAAGTGAGCAAAGAGACATACACCATGGCCACAGCTCCGCATCCTGAGGCAGGAAGGCTTGTGCCATCCAGCTCCCGCAAGCCCCGCATGACAGAGGTTCACCTCCCTTCACTGGTTTCCCCGGAAGGCCAGAAAGATCTAGCTAGAGTGGAGAAGGAAGAAGAGAGGAGAGGGGAGCCGGAGGAGGATGCTCCTGCCTCCCAGAGAGGGGAGCCGGCGAGGATCAAAATCTTCGAAGGAGGGTACAAATCAAACGAAGAGTATGTATATGTGCGAGGCCGCGGCCGAGGGAAATATGTTTGTGAGGAGTGTGGAATTCGCTGCAAGAAGCCCAGCATGCTGAAGAAACACATCCGCACCCACACTGACGTCCGGCCCTATGTGTGCAAGCACTGTCACTTTGCTTTTAAAACCAAAGGGAATCTGACTAAGCACATGAAGTCGAAGGCCCACAGCAAAAAGTGCCAAGAGACAGGGGTGCTGGAGGAGCTGGAAGCCGAAGAAGGAACCAGTGACGACCTGTTCCAGGACTCGGAAGGACGAGAGGGTTCAGAGGCTGTGGAGGAGCACCAGTTTTCGGACCTGGAGGACTCGGACTCAGACTCAGACCTGGACGAAGACGAGGATGAGGATGAGGAGGAGAGCCAGGATGAGCTGTCCAGACCATCCTCAGAGGCGCCCCCGCCTGGCCCACCACATGCACTGCGGGCAGACTCCTCACCCATCCTGGGCCCTCAGCCCCCAGATGCCCCCGCCTCTGGCACGGAGGCTACACGAGGCAGCTCGGTCTCGGAAGCTGAGCGCCTGACAGCCAGCAGCTGCTCCATGTCCAGCCAGAGCATGCCGGGCCTCCCCTGGCTGGGACCGGCCCCTCTGGGCTCTGTGGAGAAAGACACAGGCTCAGCCTTGAGCTACAAGCCTGTGTCCCCAAGAAGACCGTGGTCCCCAAGCAAAGAAGCAGGCAGCCGTCCACCACTAGCCCGCAAACACTCGCTAACCAAAAACGACTCATCTCCCCAGCGATGCTCCCCGGCCCGAGAACCACAGGCCTCAGCCCCAAGCCCACCTGGCCTGCACGTGGACCCAGGAAGGGGCATGGGCGCTCTCCCTTGTGGGTCTCCAAGACTTCAGCTGTCTCCTCTCACCCTCTGCCCCCTGGGAAGAGAACTGGCCCCTCGAGCACATGTGCTCTCCAAACTCGAGGGTACCACCGACCCAGGCCTCCCCAGATACTCGCCCACCAGGAGATGGTCTCCAGGTCAGGCCGAGTCACCACCACGGTCAGCGCCGCCAGGGAAGTGGGCCTTGGCTGGGCCGGGCAGCCCCTCAGCGGGGGAGCATGGCCCAGGCTTGGGGCTGGACCCACGGGTTCTCTTCCCGCCCGCGCCTCTACCTCACAAGCTCCTCAGCAGAAGCCCAGAGACCTGCGCCTCCCCGTGGAAGGCCGAGTCCCGAAGTCCCTCCTGCTCACCCGGCCCTGCTCATCCTCTCTCCTCCCGACCCTTCTCCGCCCTCCATGACTTCCACGGCCACATCCTGGCCCGGACAGAGGAGAACATCTTCAGCCACCTGCCTCTGCACTCCCAGCACTTGACCCGTGCCCCATGTCCCTTGATTCCCATCGGTGGGATCCAGATGGTGCAGGCCCGGCCAGGAGCCCACCCCACCCTGCTGCCAGGGCCCACCGCAGCCTGGGTCAGTGGCTTCTCCGGGGGTGGCAGCGACCTGACAGGGGCCCGGGAGGCCCAGGAGCGAGGCCGCTGGAGTCCCACTGAGAGCTCGTCAGCCTCCGTGTCGCCTGTGGCTAAGGTCTCCAAATTCACACTCTCCTCAGAGCTGGAGGGCGGGGACTACCCCAAGGAGAGGGAGAGGACCGGCGGAGGCCCGGGCAGGCCTCCTGACTGGACACCCCATGGGACCGGGGCACCTGCAGAGCCCACACCCACGCACAGCCCCTGCACCCCACCCGACACCTTGCCCCGGCCGCCCCAGGGACGCCGGGCAGCGCAGTCCTGGAGCCCCCGCTTGGGTCCCCGCGTGCACCGACCAACCCCGAGCCTTCTGCCACCCCGCCGCTGGACCGCAGCAGCTCTGTGGGCTGCCTGGCAGAGGCCTCTGCCCGCTTCCCAGCCCGGACGAGGAACCTCTCCGGGGAACCCAGGACCAGGCAGGACTCCCCCAAGCCCTCAGGAAGTGGGGAGCCCAGGGCACATCCACATCAGCCTGAGGACAGGGTTCCCCCCAACGCTTAGCCTCTCTCCAACTGCTTCAGCATCTGGCTTCCAGTGTCCAGCAACAGACGTTTCCAGCCACTTTCCTCGAATCATCCCACTTCCTCAGCCCCATCTGTCCCTCCGTCCAGGAGCTCTCACGGCCCCATCTGTTGTACCTTCCCATGTATGCAGTTACCTGTGCCTTTTTCTACACCTTTTGTTGCTTAAAAAGAAACAAAACAAATCACATACATACATTTAAAAAAAAAACAACAACCCACGAGGAGTCTGAGGCTGTGAATAGTTTATGGTTTTGGGGAAAGGCTGATGGTGAAGCCTCCTGACCCTCCCCGCTGTGGTTGGCAGCCACCCACCCCAGAGGCTGGCAGAGGGAAAGGGGTACACTGAGGGAGAAAGGAAAAGGAAACTTCAAACAATATAGAATTAAATGTAAAAGGAAGCACTCCTGTGTACAGATGCGATCAAGGTTCCTGTTTATTGCCACTTCACCCCCCTGCCCAGCTCGTAGCCACCCCTCTCTGCCAGCAGAAAGGCCAGTGTCCCCAGGCAGAGGGGCACAAACACAGGCAGGTGACCCCCACCCAGGCCCCAGCAGGCAGGCCCAGAAAAACTAATCTTTTCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCAAGAAAATAAAATGATACTTTTCCTAGGATTTCAACACAAAATAATAGGTGCAGGTAGAAGGAGGAGGGCTGGCTCCCCAAGGGCTCCTGGATACTCTGGTAGTCTGAGTCATGGGCCCATCCTGGCACTCCACAGGTGGGCAGGCCACCCCACCCACGCACCCCCACTCCAGACACCTCCCTTCTGCACCCCACCCTGGCCCCCTGGGCTGGGGAAGGAGCCCTGACTGTCCGTCCCTGGCTCCCAAGCCCCTGACCGAGGCCTCACTCTCCTGTTGCCTCCTCTGTTCTAAAACCACCAAACCACCCACAAAGGCAGAAGTGGCAGGGCCCGAGCCCTAGCGGCCGTTCCTGAGACTGGGTTTTGGGTTTTGTTTCATCTTGGTCCCTGGGGTACAAGGGAGCCTGTTCCCCTCATGGCTGGGTTTTTCCAGTTCTCCACAGCAGAGGTTTGCGGGGAACTGTTTCAGGACCACTTTGCCACAGGACCGTTTCCCCCCGTCCCTGCCCCTGTCTCCACTACCCCAAGGAAATACCCACAACTGTGGCTGGTGGATACGGCCTGGACCTGTTTGCTGTCTTACACCTCTTTTTTAAAAAGAGAGAGGATGGTGTTTGATACTTCACCCAGCCACCACAGATTCTTTTGACCTAGAGGATTTTTGAATTGTCCTAACTCGTTGGAATTCTCCAAAGCAATCAGTGTGAGCCAGTGCCTCTTCCTTACCCACATCTCTACTTTCAAGAAGCTGCCCTGCATTTCCTGGGGCAAAACTCTACTTTGTAAGAAAAATAATAGGACCAGAAATTTAAATCCCAAATTGAACTATGGAACTTGAACTCTAGCGTGTTCGCCCCAACTGGGAGAGGTGAGCTTTTTCCCAGTGTTTCAGAACTGATTTTCTTTACTTTCTACAAGGGAGGGCAGCACAGGGACTACGGTTGAGGCCCGTGAAGGCTGGGTTTGATGCCACCCTATACAGAGCAGGGACCTCTCTGGCTAATCCCCAGTCCTCAGCCAGGCTGTGTGAATCAAGTGCCTGCCCCAGGGCTCTTGAGCTATTGAAGCTGCTTGGGTACAGGACACAGTAGGTGGGGAGGGTTAAGACCCTTCTGTGAGTTCCCTGTGCGGGGCTGTACTTGCCTCTTCCAATTCGTGGCCTTTCCCTGCTTGGTCCCTACTAGACAGACAAACCAGCCACAGTCCAGCCTGCAGCCAGACCACCTTGTTCACTCATTCTCCTTTGCCTCAGAGCTAAGACAAAAATGAGACAGAAGGCAGGGCTCCCTGGGAGTCCACTGTGCTCCAGGGTTCTGGGGAATCAGGGTTAGCCAGCAGCTCCTGGCTGCTTCCCTCAGAGACTAGGGCTCTCATCCTCCCCAAGAGAAGCAGCAAGCCCAGCCTGGACCACACTGTCCATATTGCTGGACAGTGGCCTGACAGAAAGTGACTCCTCCAAGTCCCAGGAGGCCAGGGCTTTTCTCATCCTTGCCTTTCAGCCCTAACCCATGGGACTGCCCACGGATTGGAGACTTCAAGGGCTGAGGTCTGGGAGCTGCATAAAGGGCATTGCTTCAGCCCAGGTTAGAAATCTGCCTGGGCAAGCTCTTCCTGCCCCAGACCTACAAAGCAGCAGACCGGGGGCTCTGGTGGACTAGCCCCTGACATTGGTGGGGGGCCCCACACCACTCCACCCCACCCTGCCTTCCAGCTCTCCTGGGCATTTTTCTCCCTGTACTCAAACAGCCTACCCACCCAAGGTTTCCTCCCTGGGCAGCCTAGCAATGAACAGTGCAGCCGGCAGGGCAGAGGCCCGGCAGTCACCGGGCCCGTCAGGCTCAGGCAGAGAAGCCACAGGGGCCAGGAGTCACTGGAGACTATTTCTAAATGATGGGGGTAAATGCACAAATAGAATCTCACCAAAGGGCTGCCTCCACATTGATGCCGTGCCCAGAGGGACAGAACCAATGCCACCAGCCTGGGTATATGTCACTGGGCACAGCTCTAACCCCCTCCTCCGGACTCTAGTCCCGCTCCTCTGCGCACAGAGCCCCCAGCCCACAGGTACACCTTCATGATTTGGAGAAAGACGCTCGCCCCATGCACGCCCTCCTCTGGGCCTTCTGCCCTGCTCCCAGTCACTTCCAAGCTTCCTGTTTGCCTGTGATGTTATTGTGCCTGTTGAGGGAAGCAGCAGAGGAGGCAGTGGCTGACTTGGCACAGATGCCTGCTACGTGCTCTGTTGAAATGCGCGGGGTGGCCATTCCTCGGTACAGACTAGTCCTGGTCCTTGGGTGTGGGCAGTGGGGGAGGAACCAACTGGTCGAGGTTTCAGAGCCAAACCTTGCCTTTGGTTGGTGAGTCCTTGCCCCCCAGGCCTGCGCTCCACGATGCCTTTCACCCTTGGCAATCTCAGGGCCATCCTGGGTAGTAACCCCACTCCTCTCTGCTCCCGCCCGCACCTGTGGCTCTCACTCTGGGCTCAACCCCTGCAACCCTCCAGGAGCCCGACAGCAGCCAGCTGCCTGCACTGTCGCCTCCGTAAGCTCCAACTTCCAGACCCAGAAGTCCCTCTGCTTCCCTCTGTTGGAAAAAGCCTAAAAGAATTAGCTTCCAGATTCCTCTAGCCCCTGCTCCATTCCCACCCAGTCCTTCTGAAGAGGAATGAGCAATACATCTGAGCTGGATTTCTCTCTAGTCCTTTCTCCAGACAAATCCTTCTTAAAGCAAAAGTCCTGGCTGAGCACCTGTCCTTGGGGACCGATCTGCCGTGTGACCAGGGGAAGAAAGTTCCCGAAAGCCTGTTCCACCAATTCTGCTTCTGTGTTGTGAATCCAGTCTGCTTTCCATTAGAAAACCGCTTCGGCACTTATGGTCACTTTAATAAATCTAGTATGTAAAAAAAGAAAGAAAGAAAAGAAACAGAAAAAAGAAACGTGCAGGCAAATGTAAAATACAATGCTCTCTGTAAGATAAATATTTGCCTTTTTTTCTAAAAGGTGTACGTATTCTGTATGTGAAATTGTCTGTAGAAAGTTTCTATGTTCTTAAATGGCAATACATTCCAAAAATTGTACTGTAGATATGTACAGCAACCGCACTGGGATGGGGTAGTTTTGCCTGTAATTTTATTTAAACTCCAGTTTCCACACTTGCTCTTGCAATGTTGGTATGGTATATATCAGTGCAAAAGAAAAAACAAAACAGAAACAAACAAAAAAAAAAAACAAAAATCCACGCAGGTCTAAAGCACAGAGTCTGACGTACAAAAGGAAAAATGCTCAGTATTGATGTGTGTGACCTTTGTTGTAAATTACATCTGTACTGTGAATGAGAAGTTTTTACAAGTATAATAATTGCCTTTATTACAGCTCTGGCTGAGTGTTCAGCCTGAGGATATTTTTTAAAAAAAAAAGAATTAGCATGTTGGAATAAATTTGAAAATCCCAACATAAAAAAA

>SEQ ID NO:70人Schnurri-3氨基酸序列

MDPEQSVKGTKKAEGSPRKRLTKGEAIQTSVSSSVPYPGSGTAATQESPAQELLAPQPFPGPSSVLREGSQEKTGQQQKPPKRPPIEASVHISQLPQHPLTPAFMSPGKPEHLLEGSTWQLVDPMRPGPSGSFVAPGLHPQSQLLPSHASIIPPEDLPGVPKVFVPRPSQVSLKPTEEAHKKERKPQKPGKYICQYCSRPCAKPSVLQKHIRSHTGERPYPCGPCGFSFKTKSNLYKHRKSHAHRIKAGLASGMGGEMYPHGLEMERIPGEEFEEPTEGESTDSEEETSATSGHPAELSPRPKQPLLSSGLYSSGSHSSSHERCSLSQSSTAQSLEDPPPFVEPSSEHPLSHKPEDTHTIKQKLALRLSERKKVIDEQAFLSPGSKGSTESGYFSRSESAEQQVSPPNTNAKSYAEIIFGKCGRIGQRTAMLTATSTQPLLPLSTEDKPSLVPLSVPRTQVIEHITKLITINEAVVDTSEIDSVKPRRSSLSRRSSMESPKSSLYREPLSSHSEKTKPEQSLLSLQHPPSTAPPVPLLRSHSMPSAACTISTPHHPFRGSYSFDDHITDSEALSHSSHVFTSHPRMLKRQPAIELPLGGEYSSEEPGPSSKDTASKPSDEVEPKESELTKKTKKGLKTKGVIYECNICGARYKKRDNYEAHKKYYCSELQIAKPISAGTHTSPEAEKSQIEHEPWSQMMHYKLGTTLELTPLRKRRKEKSLGDEEEPPAFESTKSQFGSPGPSDAARNLPLESTKSPAEPSKSVPSLEGPTGFQPRTPKPGSGSESGKERRTTSKEISVIQHTSSFEKSDSLEQPSGLEGEDKPLAQFPSPPPAPHGRSAHSLQPKLVRQPNIQVPEILVTEEPDRPDTEPEPPPKEPEKTEEFQWPQRSQTLAQLPAEKLPPKKKRLRLAEMAQSSGESSFESSVPLSRSPSQESNVSLSGSSRSASFERDDHGKAEAPSPSSDMRPKPLGTHMLTVPSHHPHAREMRRSASEQSPNVSHSAHMTETRSKSFDYGSLSLTGPSAPAPVAPPARVAPPERRKCFLVRQASLSRPPESELEVAPKGRQESEEPQPSSSKPSAKSSLSQISSAATSHGGPPGGKGPGQDRPPLGPTVPYTEALQVFHHPVAQTPLHEKPYLPPPVSLFSFQHLVQHEPGQSPEFFSTQAMSSLLSSPYSMPPLPPSLFQAPPLPLQPTVLHPGQLHLPQLMPHPANIPFRQPPSFLPMPYPTSSALSSGFFLPLQSQFALQLPGDVESHLPQIKTSLAPLATGSAGLSPSTEYSSDIRLPPVAPPASSSAPTSAPPLALPACPDTMVSLVVPVRVQTNMPSYGSAMYTTLSQILVTQSQGSSATVALPKFEEPPSKGTTVCGADVHEVGPGPSGLSEEQSRAFPTPYLRVPVTLPERKGTSLSSESILSLEGSSSTAGGSKRVLSPAGSLELTMETQQQKRVKEEEASKADEKLELVKPCSVVLTSTEDGKRPEKSHLGNQGQGRRELEMLSSLSSDPSDTKEIPPLPHPALSHGTAPGSEALKEYPQPSGKPHRRGLTPLSVKKEDSKEQPDLPSLAPPSSLPLSETSSRPAKSQEGTDSKKVLQFPSLHTTTNVSWCYLNYIKPNHIQHADRRSSVYAGWCISLYNPNLPGVSTKAALSLLRSKQKVSKETYTMATAPHPEAGRLVPSSSRKPRMTEVHLPSLVSPEGQKDLARVEKEEERRGEPEEDAPASQRGEPARIKIFEGGYKSNEEYVYVRGRGRGKYVCEECGIRCKKPSMLKKHIRTHTDVRPYVCKHCHFAFKTKGNLTKHMKSKAHSKKCQETGVLEELEAEEGTSDDLFQDSEGREGSEAVEEHQFSDLEDSDSDSDLDEDEDEDEEESQDELSRPSSEAPPPGPPHALRADSSPILGPQPPDAPASGTEATRGSSVSEAERLTASSCSMSSQSMPGLPWLGPAPLGSVEKDTGSALSYKPVSPRRPWSPSKEAGSRPPLARKHSLTKNDSSPQRCSPAREPQASAPSPPGLHVDPGRGMGALPCGSPRLQLSPLTLCPLGRELAPRAHVLSKLEGTTDPGLPRYSPTRRWSPGQAESPPRSAPPGKWALAGPGSPSAGEHGPGLGLDPRVLFPPAPLPHKLLSRSPETCASPWKAESRSPSCSPGPAHPLSSRPFSALHDFHGHILARTEENIFSHLPLHSQHLTRAPCPLIPIGGIQMVQARPGAHPTLLPGPTAAWVSGFSGGGSDLTGAREAQERGRWSPTESSSASVSPVAKVSKFTLSSELEGGDYPKERERTGGGPGRPPDWTPHGTGAPAEPTPTHSPCTPPDTLPRPPQGRRAAQSWSPRLESPRAPTNPEPSATPPLDRSSSVGCLAEASARFPARTRNLSGEPRTRQDSPKPSGSGEPRAHPHQPEDRVPPNA

>SEQ ID NO:55；amiR-33-mRANKi-1:

AGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGAATGGTCCACATTTCAGGGACTGTTCTGGCAATACCTGGTCCCTGATTTATGGACCATTCACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCC

>SEQ ID NO:56；amiR-33-mRANKi-2:

AGGGCTCTGCGTTTGCTCCAGGTAGTCCGCTGCTCCCTTGGGCCTGGGCCCACTGACAGCCCTGGTGCCTCTGGCCGGCTGCACACCTCCTGGCGGGCAGCTGTGACAAATTAGCTGTCAGCGCTGTTCTGGCAATACCTGGCGCTGACTGCAAATTTGTCACGGAGGCCTGCCCTGACTGCCCACGGTGCCGTGGCCAAAGAGGATCTAAGGGCACCGCTGAGGGCCTACCTAACCATCGTGGGGAATAAGGACAGTGTCACCC

>SEQ ID NO:57；骨吸收肽(8-mer)

DDDDDDDD

>SEQ ID NO:58；骨吸收肽(9-mer)

DDDDDDDDD

>SEQ ID NO:59；骨吸收肽(10-mer)

DDDDDDDDDD

>SEQ ID NO:60；骨吸收肽(11-mer)

DDDDDDDDDDD

>SEQ ID NO:61；骨吸收肽(12-mer)

DDDDDDDDDDDD

>SEQ ID NO:62；骨吸收肽(13-mer)

DDDDDDDDDDDDD

>SEQ ID NO:63；骨吸收肽(14-mer)

DDDDDDDDDDDDDD

序列表

<110> 马萨诸塞大学（沃斯特）（University of Massachusetts at Worcester）

<120> 用于治疗骨病的基因治疗剂

<130> U0120.70099WO00

<140> 尚未指定

<141> 同上

<150> US 62/799,843

<151> 2019-02-01

<150> US 62/647,595

<151> 2018-03-23

<160> 70

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 1

tttgtctttt atttcaggtc ccagatctag ggctctgcgt ttgctccagg tagtccgctg 60

ctcccttggg cctgggccca ctgacagccc tggtgcctct ggccggctgc acacctcctg 120

gcgggcagct gtgtacaaac tacttgagag caggtgttct ggcaatacct gcctgctctg 180

taatagtttg tacacggagg cctgccctga ctgcccacgg tgccgtggcc aaagaggatc 240

taagggcacc gctgagggcc tacctaacca tcgtggggaa taaggacagt gtcacccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaatca 327

<210> 2

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 2

tttgtctttt atttcaggtc ccagatctag ggctctgcgt ttgctccagg tagtccgctg 60

ctcccttggg cctgggccca ctgacagccc tggtgcctct ggccggctgc acacctcctg 120

gcgggcagct gtgactacag gtactcacaa gctctgttct ggcaatacct ggagcttgtc 180

tgcacctgta gtcacggagg cctgccctga ctgcccacgg tgccgtggcc aaagaggatc 240

taagggcacc gctgagggcc tacctaacca tcgtggggaa taaggacagt gtcacccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaatca 327

<210> 3

<211> 325

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 3

gtcttttatt tcaggtccca gatcttaggg ctctgcgttt gctccaggta gtccgctgct 60

cccttgggcc tgggcccact gacagccctg gtgcctctgg ccggctgcac acctcctggc 120

gggcagctgt gtttccatgg taagttcaag gctgttctgg caatacctgg ccttgaagat 180

gccatggaaa cacggaggcc tgccctgact gcccacggtg ccgtggccaa agaggatcta 240

agggcaccgc tgagggccta cctaaccatc gtggggaata aggacagtgt cacccccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaat 325

<210> 4

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 4

tttgtctttt atttcaggtc ccagatctag ggctctgcgt ttgctccagg tagtccgctg 60

ctcccttggg cctgggccca ctgacagccc tggtgcctct ggccggctgc acacctcctg 120

gcgggcagct gtgtttcatc atagtacaca cctctgttct ggcaatacct ggaggtgtga 180

tccatgatga aacacggagg cctgccctga ctgcccacgg tgccgtggcc aaagaggatc 240

taagggcacc gctgagggcc tacctaacca tcgtggggaa taaggacagt gtcacccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaatca 327

<210> 5

<211> 285

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 5

tttgtctttt atttcaggtc ccagatctag ggctctgcgt ttgctccagg tagtccgctg 60

ctcccttggg cctgggccca ctgacagccc tggtgcctct ggccggctgc acacctcctg 120

gcgggcagct gtgttactgt aggatcgaga gggatgttct ggcaatacct gtccctctcc 180

ttactacagt aacacggagg cctgccctga ctgcccacgg tgccgtggcc aaagaggatc 240

taagggcacc gctgagggcc tacctaacca tcgtggggaa taagg 285

<210> 6

<211> 325

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 6

gtcttttatt tcaggtccca gatcttaggg ctctgcgttt gctccaggta gtccgctgct 60

cccttgggcc tgggcccact gacagccctg gtgcctctgg ccggctgcac acctcctggc 120

gggcagctgt gattatcgct attgcagctt tctgttctgg caatacctgg aaagctggta 180

cagcgataat cacggaggcc tgccctgact gcccacggtg ccgtggccaa agaggatcta 240

agggcaccgc tgagggccta cctaaccatc gtggggaata aggacagtgt cacccccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaat 325

<210> 7

<211> 325

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 7

gtcttttatt tcaggtccca gatcttaggg ctctgcgttt gctccaggta gtccgctgct 60

cccttgggcc tgggcccact gacagccctg gtgcctctgg ccggctgcac acctcctggc 120

gggcagctgt gtcagattat cgctattgca gctgttctgg caatacctgg ctgcaattcc 180

aataatctga cacggaggcc tgccctgact gcccacggtg ccgtggccaa agaggatcta 240

agggcaccgc tgagggccta cctaaccatc gtggggaata aggacagtgt cacccccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaat 325

<210> 8

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 8

tttgtctttt atttcaggtc ccagatctag ggctctgcgt ttgctccagg tagtccgctg 60

ctcccttggg cctgggccca ctgacagccc tggtgcctct ggccggctgc acacctcctg 120

gcgggcagct gtgacaagta ggcagatgag gcactgttct ggcaatacct ggtgcctcaa 180

gtacctactt gtcacggagg cctgccctga ctgcccacgg tgccgtggcc aaagaggatc 240

taagggcacc gctgagggcc tacctaacca tcgtggggaa taaggacagt gtcacccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaatca 327

<210> 9

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 9

tttgtctttt atttcaggtc ccagatctag ggctctgcgt ttgctccagg tagtccgctg 60

ctcccttggg cctgggccca ctgacagccc tggtgcctct ggccggctgc acacctcctg 120

gcgggcagct gtgtgacctc tgtggcatca ttcctgttct ggcaatacct gggaatgatc 180

gcgcagaggt cacacggagg cctgccctga ctgcccacgg tgccgtggcc aaagaggatc 240

taagggcacc gctgagggcc tacctaacca tcgtggggaa taaggacagt gtcacccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaatca 327

<210> 10

<211> 325

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 10

gtcttttatt tcaggtccca gatcttaggg ctctgcgttt gctccaggta gtccgctgct 60

cccttgggcc tgggcccact gacagccctg gtgcctctgg ccggctgcac acctcctggc 120

gggcagctgt gatggtcttg ttgttctcca gctgttctgg caatacctgg ctggagatga 180

gcaagaccat cacggaggcc tgccctgact gcccacggtg ccgtggccaa agaggatcta 240

agggcaccgc tgagggccta cctaaccatc gtggggaata aggacagtgt cacccccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaat 325

<210> 11

<211> 325

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 11

gtcttttatt tcaggtccca gatcttaggg ctctgcgttt gctccaggta gtccgctgct 60

cccttgggcc tgggcccact gacagccctg gtgcctctgg ccggctgcac acctcctggc 120

gggcagctgt gacgtctttg gtctcaaagg ggtgttctgg caatacctgc ccctttgtca 180

tcaaagacgt cacggaggcc tgccctgact gcccacggtg ccgtggccaa agaggatcta 240

agggcaccgc tgagggccta cctaaccatc gtggggaata aggacagtgt cacccccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaat 325

<210> 12

<211> 411

<212> DNA

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 12

ggaattgtac ccgcggccga tccaccggtg ccaccatgat acctgcaaaa gacatggcta 60

aagttatgat tgtcatgttg gcaatttgtt ttcttacaaa atcggatggg aaatctgtta 120

agaagagatc tgtgagtgaa atacagctta tgcataacct gggaaaacat ctgaactcga 180

tggagagagt agaatggctg cgtaagaagc tgcaggatgt gcacaatttt gttgcccttg 240

gagctcctct agctcccaga gatgctggtt cccagaggcc ccgaaaaaag gaagacaatg 300

tcttggttga gagccatgaa aaaagtcttg gagaggcaga caaagctgat gtgaatgtat 360

taactaaagc taaatcccag tgaagcttat cgataccgtc gactagagct c 411

<210> 13

<211> 591

<212> DNA

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 13

ggaattgtac ccgcggccga tccaccggtg ccaccatgca gcggagactg gttcagcagt 60

ggagcgtcgc ggtgttcctg ctgagctacg cggtgccctc ctgcgggcgc tcggtggagg 120

gtctcagccg ccgcctcaaa agagctgtgt ctgaacatca gctcctccat gacaagggga 180

agtccatcca agatttacgg cgacgattct tccttcacca tctgatcgca gaaatccaca 240

cagctgaaat cagagctacc tcggaggtgt cccctaactc caagccctct cccaacacaa 300

agaaccaccc cgtccgattt gggtctgatg atgagggcag atacctaact caggaaacta 360

acaaggtgga gacgtacaaa gagcagccgc tcaagacacc tgggaagaaa aagaaaggca 420

agcccgggaa acgcaaggag caggaaaaga aaaaacggcg aactcgctct gcctggttag 480

actctggagt gactgggagt gggctagaag gggaccacct gtctgacacc tccacaacgt 540

cgctggagct cgattcacgg taaagcttat cgataccgtc gactagagct c 591

<210> 14

<211> 696

<212> DNA

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 14

ggaattgtac ccgcggccga tccaccggtc gccaccatgg gatggagctg tattatcctg 60

tttctcgtcg ctactgccac cggagctcat tccgcttcca aaagagctct ggtcatcctg 120

gccaaaggag cagaggagat ggagacagtg attcctgtgg atgtcatgcg gcgagccggg 180

atcaaagtca ctgttgcagg cttggctggg aaggaccccg tgcagtgtag ccgtgatgta 240

atgatttgtc cagataccag tctggaagat gcaaaaacgc agggaccata cgatgtggtg 300

gttcttccag gaggaaatct gggtgcacag aatttatctg agtcgcctat ggtgaaggag 360

atcctcaagg agcaggagag caggaagggc ctcatagctg ccatctgtgc aggtcctacg 420

gctctgttgg ctcacgaagt aggttttgga tgcaaggtca caacacaccc actggctaag 480

gacaaaatga tgaatggcag tcactacagc tactcagaga gccgcgtgga gaaggacggc 540

ctgatcctca ccagccgcgg gccggggacc agctttgagt ttgcactagc cattgtggag 600

gcactcgtgg ggaaagacat ggccaaccaa gtgaaggcac cgcttgttct caaagactag 660

taaaagctta tcgataccgt cgactagagc tcgctg 696

<210> 15

<211> 696

<212> DNA

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 15

ggaattgtac ccgcggccga tccaccggtc gccaccatgg gatggagctg tattatcctg 60

tttctcgtcg ctactgccac cggagctcat tccgcttcca aaagagctct ggtcatcctg 120

gctaaaggag cagaggaaat ggagacggtc atccctgtag atgtcatgag gcgagctggg 180

attaaggtca ccgttgcagg cctggctgga aaagacccag tacagtgtag ccgtgatgtg 240

gtcatttgtc ctgatgccag ccttgaagat gcaaaaaaag agggaccata tgatgtggtg 300

gttctaccag gaggtaatct gggcgcacag aatttatctg agtctgctgc tgtgaaggag 360

atactgaagg agcaggaaaa ccggaagggc ctgatagccg ccatctgtgc aggtcctact 420

gctctgttgg ctcatgaaat aggttttgga agtaaagtta caacacaccc tcttgctaaa 480

gacaaaatga tgaatggagg tcattacacc tactctgaga atcgtgtgga aaaagacggc 540

ctgattctta caagccgggg gcctgggacc agcttcgagt ttgcgcttgc aattgttgaa 600

gccctgaatg gcaaggaggt ggcggctcaa gtgaaggctc cacttgttct taaagactag 660

taaaagctta tcgataccgt cgactagagc tcgctg 696

<210> 16

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 16

Asp Ser Ser Asp Ser Ser Asp Ser Ser Asp Ser Ser Asp Ser Ser Asp

1 5 10 15

Ser Ser

<210> 17

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> 是γ-羧化谷氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (6)..(6)

<223> 是γ-羧化谷氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> 是γ-羧化谷氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (11)..(11)

<223> 是γ-羧化谷氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (15)..(15)

<223> 是γ-羧化谷氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (18)..(18)

<223> 是γ-羧化谷氨酸

<400> 17

Cys Glu Pro Arg Arg Glu Val Ala Glu Leu Glu Pro Arg Arg Glu Val

1 5 10 15

Ala Glu Leu

<210> 18

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 18

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His

260 265 270

Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe

275 280 285

His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn

290 295 300

Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln

305 310 315 320

Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn

325 330 335

Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro

340 345 350

Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala

355 360 365

Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly

370 375 380

Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro

385 390 395 400

Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe

405 410 415

Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp

420 425 430

Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg

435 440 445

Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Glu Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg

565 570 575

Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Phe Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala

580 585 590

Thr Gly Asp Val His Ala Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys Asn Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu

705 710 715 720

Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725 730 735

<210> 19

<211> 735

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 19

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr

435 440 445

Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln

450 455 460

Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly

465 470 475 480

Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ser Ala Asp Asn Asn

485 490 495

Asn Ser Glu Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly

500 505 510

Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp

515 520 525

Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys

530 535 540

Gln Gly Ser Glu Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr

545 550 555 560

Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr

565 570 575

Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Arg Gly Asn Arg Gln Ala Ala Thr

580 585 590

Ala Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp

595 600 605

Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr

610 615 620

Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys

625 630 635 640

His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn

645 650 655

Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln

660 665 670

Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys

675 680 685

Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr

690 695 700

Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr

705 710 715 720

Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 20

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 20

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Val Pro Gln Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Arg Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Ile Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Asp Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Lys Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg Thr

435 440 445

Gln Gly Thr Thr Ser Gly Thr Thr Asn Gln Ser Arg Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Gln Ala Gly Pro Gln Ser Met Ser Leu Gln Ala Arg Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Leu Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Pro Trp Thr Ala Ala Ser Lys Tyr His Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Gly Thr Thr Ala Ser Asn Ala Glu Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln

565 570 575

Tyr Gly Thr Val Ala Asn Asn Leu Gln Ser Ser Asn Thr Ala Pro Thr

580 585 590

Thr Arg Thr Val Asn Asp Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Met Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Thr Thr Phe Ser Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val

705 710 715 720

Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 21

<211> 734

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 21

Met Thr Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser Glu

1 5 10 15

Gly Val Arg Glu Trp Trp Ala Leu Gln Pro Gly Ala Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly

35 40 45

Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro Val

50 55 60

Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp Gln

65 70 75 80

Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp

85 90 95

Ala Glu Phe Gln Gln Arg Leu Gln Gly Asp Thr Ser Phe Gly Gly Asn

100 105 110

Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro Leu

115 120 125

Gly Leu Val Glu Gln Ala Gly Glu Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg Pro

130 135 140

Leu Ile Glu Ser Pro Gln Gln Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys

145 150 155 160

Lys Gly Lys Gln Pro Ala Lys Lys Lys Leu Val Phe Glu Asp Glu Thr

165 170 175

Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Thr Ser Gly Ala Met Ser

180 185 190

Asp Asp Ser Glu Met Arg Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala Val Glu Gly

195 200 205

Gly Gln Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys

210 215 220

Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly His Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr

225 230 235 240

Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu Gly Glu

245 250 255

Ser Leu Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr

260 265 270

Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln

275 280 285

Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Met Arg Pro Lys Ala Met Arg Val

290 295 300

Lys Ile Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu

305 310 315 320

Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Ile Phe Ala Asp

325 330 335

Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gln Glu Gly Ser

340 345 350

Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr

355 360 365

Cys Gly Leu Val Thr Gly Asn Thr Ser Gln Gln Gln Thr Asp Arg Asn

370 375 380

Ala Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly

385 390 395 400

Asn Asn Phe Glu Ile Thr Tyr Ser Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser

405 410 415

Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile

420 425 430

Asp Gln Tyr Leu Trp Gly Leu Gln Ser Thr Thr Thr Gly Thr Thr Leu

435 440 445

Asn Ala Gly Thr Ala Thr Thr Asn Phe Thr Lys Leu Arg Pro Thr Asn

450 455 460

Phe Ser Asn Phe Lys Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Ser Ile Lys Gln

465 470 475 480

Gln Gly Phe Ser Lys Thr Ala Asn Gln Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Thr

485 490 495

Gly Ser Asp Ser Leu Ile Lys Tyr Glu Thr His Ser Thr Leu Asp Gly

500 505 510

Arg Trp Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro

515 520 525

Ala Asp Ser Lys Phe Ser Asn Ser Gln Leu Ile Phe Ala Gly Pro Lys

530 535 540

Gln Asn Gly Asn Thr Ala Thr Val Pro Gly Thr Leu Ile Phe Thr Ser

545 550 555 560

Glu Glu Glu Leu Ala Ala Thr Asn Ala Thr Asp Thr Asp Met Trp Gly

565 570 575

Asn Leu Pro Gly Gly Asp Gln Ser Asn Ser Asn Leu Pro Thr Val Asp

580 585 590

Arg Leu Thr Ala Leu Gly Ala Val Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg

595 600 605

Asp Ile Tyr Tyr Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp

610 615 620

Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His

625 630 635 640

Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro

645 650 655

Ala Thr Thr Phe Ser Ser Thr Pro Val Asn Ser Phe Ile Thr Gln Tyr

660 665 670

Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Gln Ile Asp Trp Glu Ile Gln Lys Glu

675 680 685

Arg Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Tyr Gly

690 695 700

Gln Gln Asn Ser Leu Leu Trp Ala Pro Asp Ala Ala Gly Lys Tyr Thr

705 710 715 720

Glu Pro Arg Ala Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr His His Leu

725 730

<210> 22

<211> 724

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 22

Met Ser Phe Val Asp His Pro Pro Asp Trp Leu Glu Glu Val Gly Glu

1 5 10 15

Gly Leu Arg Glu Phe Leu Gly Leu Glu Ala Gly Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Pro Asn Gln Gln His Gln Asp Gln Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly

35 40 45

Tyr Asn Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Arg Gly Glu Pro Val

50 55 60

Asn Arg Ala Asp Glu Val Ala Arg Glu His Asp Ile Ser Tyr Asn Glu

65 70 75 80

Gln Leu Glu Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp

85 90 95

Ala Glu Phe Gln Glu Lys Leu Ala Asp Asp Thr Ser Phe Gly Gly Asn

100 105 110

Leu Gly Lys Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro Phe

115 120 125

Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Thr Gly Lys Arg Ile

130 135 140

Asp Asp His Phe Pro Lys Arg Lys Lys Ala Arg Thr Glu Glu Asp Ser

145 150 155 160

Lys Pro Ser Thr Ser Ser Asp Ala Glu Ala Gly Pro Ser Gly Ser Gln

165 170 175

Gln Leu Gln Ile Pro Ala Gln Pro Ala Ser Ser Leu Gly Ala Asp Thr

180 185 190

Met Ser Ala Gly Gly Gly Gly Pro Leu Gly Asp Asn Asn Gln Gly Ala

195 200 205

Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys Asp Ser Thr Trp

210 215 220

Met Gly Asp Arg Val Val Thr Lys Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro

225 230 235 240

Ser Tyr Asn Asn His Gln Tyr Arg Glu Ile Lys Ser Gly Ser Val Asp

245 250 255

Gly Ser Asn Ala Asn Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr

260 265 270

Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Ser His Trp Ser Pro Arg Asp Trp Gln

275 280 285

Arg Leu Ile Asn Asn Tyr Trp Gly Phe Arg Pro Arg Ser Leu Arg Val

290 295 300

Lys Ile Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Val Gln Asp Ser Thr

305 310 315 320

Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp

325 330 335

Asp Asp Tyr Gln Leu Pro Tyr Val Val Gly Asn Gly Thr Glu Gly Cys

340 345 350

Leu Pro Ala Phe Pro Pro Gln Val Phe Thr Leu Pro Gln Tyr Gly Tyr

355 360 365

Ala Thr Leu Asn Arg Asp Asn Thr Glu Asn Pro Thr Glu Arg Ser Ser

370 375 380

Phe Phe Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Lys Met Leu Arg Thr Gly Asn

385 390 395 400

Asn Phe Glu Phe Thr Tyr Asn Phe Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser

405 410 415

Phe Ala Pro Ser Gln Asn Leu Phe Lys Leu Ala Asn Pro Leu Val Asp

420 425 430

Gln Tyr Leu Tyr Arg Phe Val Ser Thr Asn Asn Thr Gly Gly Val Gln

435 440 445

Phe Asn Lys Asn Leu Ala Gly Arg Tyr Ala Asn Thr Tyr Lys Asn Trp

450 455 460

Phe Pro Gly Pro Met Gly Arg Thr Gln Gly Trp Asn Leu Gly Ser Gly

465 470 475 480

Val Asn Arg Ala Ser Val Ser Ala Phe Ala Thr Thr Asn Arg Met Glu

485 490 495

Leu Glu Gly Ala Ser Tyr Gln Val Pro Pro Gln Pro Asn Gly Met Thr

500 505 510

Asn Asn Leu Gln Gly Ser Asn Thr Tyr Ala Leu Glu Asn Thr Met Ile

515 520 525

Phe Asn Ser Gln Pro Ala Asn Pro Gly Thr Thr Ala Thr Tyr Leu Glu

530 535 540

Gly Asn Met Leu Ile Thr Ser Glu Ser Glu Thr Gln Pro Val Asn Arg

545 550 555 560

Val Ala Tyr Asn Val Gly Gly Gln Met Ala Thr Asn Asn Gln Ser Ser

565 570 575

Thr Thr Ala Pro Ala Thr Gly Thr Tyr Asn Leu Gln Glu Ile Val Pro

580 585 590

Gly Ser Val Trp Met Glu Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp

595 600 605

Ala Lys Ile Pro Glu Thr Gly Ala His Phe His Pro Ser Pro Ala Met

610 615 620

Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Met Met Leu Ile Lys Asn

625 630 635 640

Thr Pro Val Pro Gly Asn Ile Thr Ser Phe Ser Asp Val Pro Val Ser

645 650 655

Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Glu Met Glu

660 665 670

Trp Glu Leu Lys Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln

675 680 685

Tyr Thr Asn Asn Tyr Asn Asp Pro Gln Phe Val Asp Phe Ala Pro Asp

690 695 700

Ser Thr Gly Glu Tyr Arg Thr Thr Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu

705 710 715 720

Thr Arg Pro Leu

<210> 23

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 23

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Phe Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His

260 265 270

Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe

275 280 285

His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn

290 295 300

Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln

305 310 315 320

Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn

325 330 335

Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro

340 345 350

Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala

355 360 365

Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly

370 375 380

Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro

385 390 395 400

Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe

405 410 415

Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp

420 425 430

Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg

435 440 445

Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Lys Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg

565 570 575

Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Leu Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala

580 585 590

Thr Gly Asp Val His Val Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu

705 710 715 720

Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725 730 735

<210> 24

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 24

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His

260 265 270

Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe

275 280 285

His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn

290 295 300

Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln

305 310 315 320

Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn

325 330 335

Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro

340 345 350

Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala

355 360 365

Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly

370 375 380

Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro

385 390 395 400

Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe

405 410 415

Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp

420 425 430

Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg

435 440 445

Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Lys Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg

565 570 575

Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Leu Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala

580 585 590

Thr Gly Asp Val His Val Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu

705 710 715 720

Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725 730 735

<210> 25

<211> 737

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 25

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Ala Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Ala Pro Ser Ser Val Gly Ser Gly Thr Val Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn

210 215 220

Ala Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Glu Thr Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn

260 265 270

Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg

275 280 285

Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn

290 295 300

Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile

305 310 315 320

Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn

325 330 335

Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu

340 345 350

Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro

355 360 365

Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn

370 375 380

Gly Ser Gln Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe

385 390 395 400

Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Ser

405 410 415

Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu

420 425 430

Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala

435 440 445

Arg Thr Gln Ser Asn Pro Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gln

450 455 460

Phe Tyr Gln Gly Gly Pro Ser Thr Met Ala Glu Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Leu Asp

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile

530 535 540

Phe Gly Lys Thr Gly Ala Thr Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu

545 550 555 560

Met Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu

565 570 575

Glu Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gln Ala Ala Asn Thr Ala Ala

580 585 590

Gln Thr Gln Val Val Asn Asn Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp

595 600 605

Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro

610 615 620

His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly

625 630 635 640

Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro

645 650 655

Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile

660 665 670

Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu

675 680 685

Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser

690 695 700

Asn Phe Glu Lys Gln Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gln Gly

705 710 715 720

Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn

725 730 735

Leu

<210> 26

<211> 738

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 26

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Gln Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ala Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Thr Tyr

405 410 415

Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Thr Thr Gly Gly Thr Ala Asn Thr Gln Thr Leu Gly

450 455 460

Phe Ser Gln Gly Gly Pro Asn Thr Met Ala Asn Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Thr Gly

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Ala Gly Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Ala Asn Pro Gly Ile Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Asn Gly Ile Leu Ile

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Asn Ala Ala Arg Asp Asn Ala Asp Tyr Ser Asp Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Glu Tyr Gly Ile Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Thr Ala

580 585 590

Pro Gln Ile Gly Thr Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ser Lys Leu Asn Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Ser Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu

705 710 715 720

Gly Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 27

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 27

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn

260 265 270

Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg

275 280 285

Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn

290 295 300

Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile

305 310 315 320

Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn

325 330 335

Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu

340 345 350

Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro

355 360 365

Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp

370 375 380

Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe

385 390 395 400

Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu

405 410 415

Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu

420 425 430

Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser

435 440 445

Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser

450 455 460

Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro

465 470 475 480

Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser

565 570 575

Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln

580 585 590

Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val

705 710 715 720

Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 28

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 28

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn

260 265 270

Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg

275 280 285

Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn

290 295 300

Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile

305 310 315 320

Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn

325 330 335

Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu

340 345 350

Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro

355 360 365

Ala Asp Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn

370 375 380

Gly Ser Gln Ala Leu Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe

385 390 395 400

Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Thr

405 410 415

Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu

420 425 430

Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Val

435 440 445

Arg Thr Gln Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gln Thr Leu Ala Phe Ser

450 455 460

Gln Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Asn Gln Ala Arg Asn Trp Val Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Thr Asn Gln Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Ala Lys Phe Lys Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Asp Ser Leu Met Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Asp Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Gln Gly Ala Gly Asn Asp Gly Val Asp Tyr Ser Gln Val Leu Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu

565 570 575

Tyr Gly Ala Val Ala Ile Asn Asn Gln Ala Ala Asn Thr Gln Ala Gln

580 585 590

Thr Gly Leu Val His Asn Gln Gly Val Ile Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asp Pro Pro Leu Thr Phe Asn Gln Ala Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val

705 710 715 720

Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 29

<211> 738

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 29

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr

405 410 415

Gln Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu

450 455 460

Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala

580 585 590

Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp

705 710 715 720

Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 30

<211> 738

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 30

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr

405 410 415

Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Gln Gly Thr Gln Gln Leu Leu

450 455 460

Phe Ser Gln Ala Gly Pro Ala Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Arg Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Thr Asn Thr Gly

580 585 590

Pro Ile Val Gly Asn Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu

705 710 715 720

Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 31

<211> 737

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 31

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Glu Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ala Thr Asn Asp Asn

260 265 270

Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg

275 280 285

Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn

290 295 300

Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn Ile

305 310 315 320

Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn

325 330 335

Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu

340 345 350

Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro

355 360 365

Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn

370 375 380

Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe

385 390 395 400

Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Thr Tyr Thr

405 410 415

Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu

420 425 430

Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser

435 440 445

Arg Thr Gln Thr Thr Gly Gly Thr Ala Asn Thr Gln Thr Leu Gly Phe

450 455 460

Ser Gln Gly Gly Pro Asn Thr Met Ala Asn Gln Ala Lys Asn Trp Leu

465 470 475 480

Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Thr Gly Gln

485 490 495

Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Ala Gly Thr Lys Tyr His Leu

500 505 510

Asn Gly Arg Asn Ser Leu Ala Asn Pro Gly Ile Ala Met Ala Thr His

515 520 525

Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Asn Gly Ile Leu Ile Phe

530 535 540

Gly Lys Gln Asn Ala Ala Arg Asp Asn Ala Asp Tyr Ser Asp Val Met

545 550 555 560

Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu

565 570 575

Glu Tyr Gly Ile Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Thr Ala Pro

580 585 590

Gln Ile Gly Thr Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp

595 600 605

Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro

610 615 620

His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly

625 630 635 640

Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro

645 650 655

Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ser Lys Leu Asn Ser Phe Ile

660 665 670

Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu

675 680 685

Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser

690 695 700

Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Ser Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly

705 710 715 720

Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn

725 730 735

Leu

<210> 32

<211> 735

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 32

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Gln Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Lys Thr

435 440 445

Asn Ala Pro Ser Gly Thr Thr Thr Met Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln

450 455 460

Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly

465 470 475 480

Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ala Ala Asp Asn Asn

485 490 495

Asn Ser Asp Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly

500 505 510

Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp

515 520 525

Asp Glu Glu Lys Tyr Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys

530 535 540

Gln Asp Ser Gly Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr

545 550 555 560

Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr

565 570 575

Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Ser Gly Asn Thr Gln Ala Ala Thr

580 585 590

Thr Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp

595 600 605

Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr

610 615 620

Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys

625 630 635 640

His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn

645 650 655

Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln

660 665 670

Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys

675 680 685

Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr

690 695 700

Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr

705 710 715 720

Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 33

<211> 735

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 33

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Gln Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Lys Thr

435 440 445

Asn Ala Pro Ser Gly Thr Thr Thr Met Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln

450 455 460

Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly

465 470 475 480

Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ala Ala Asp Asn Asn

485 490 495

Asn Ser Asp Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly

500 505 510

Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp

515 520 525

Asp Glu Glu Lys Tyr Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys

530 535 540

Gln Asp Ser Gly Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr

545 550 555 560

Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr

565 570 575

Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Ser Gly Asn Thr Gln Ala Ala Thr

580 585 590

Thr Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp

595 600 605

Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr

610 615 620

Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys

625 630 635 640

His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn

645 650 655

Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gln

660 665 670

Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys

675 680 685

Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr

690 695 700

Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr

705 710 715 720

Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 34

<211> 735

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 34

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Ala Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Ser Gly Ser Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Thr Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr

435 440 445

Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser Arg Leu Arg Phe Ser Gln

450 455 460

Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly

465 470 475 480

Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ala Ala Asp Asn Asn

485 490 495

Asn Ser Asp Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly

500 505 510

Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys Asp

515 520 525

Asp Glu Glu Lys Tyr Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys

530 535 540

Gln Asp Ser Gly Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Arg Val Met Ile Thr

545 550 555 560

Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr

565 570 575

Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Ser Gly Asn Thr Gln Ala Ala Thr

580 585 590

Ser Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp

595 600 605

Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr

610 615 620

Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys

625 630 635 640

His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn

645 650 655

Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln

660 665 670

Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys

675 680 685

Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr

690 695 700

Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr

705 710 715 720

Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 35

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 35

agaggccatt cagacgagtg t 21

<210> 36

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 36

ctgcggaagc tgagagatgt 20

<210> 37

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 37

cacaatatca aggatatcga cgtga 25

<210> 38

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 38

acatcagttc tgttcttcgg gtaca 25

<210> 39

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 39

tacaaaccat acccagtccc tgttt 25

<210> 40

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 40

agtgctctaa ccacagtcca tgca 24

<210> 41

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 41

cagggaggca gtgactcttc 20

<210> 42

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 42

agtgtggaaa gtgtggcgtt 20

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 43

atggcgtcct ctctgcttga 20

<210> 44

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 44

gaagggtggg tagtcatttg 20

<210> 45

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 45

gcagcacagg tcctaaatag 20

<210> 46

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 46

gggcaataag gtagtgaaca g 21

<210> 47

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 47

ctgtcccaac ccccaaag 18

<210> 48

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 48

acgtattctt ccgggcagaa 20

<210> 49

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 49

ctggtgaaaa ggacctctcg aag 23

<210> 50

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 50

ccagtttcac taatgacaca aacg 24

<210> 51

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 51

agcaaagacc ccaacgagaa 20

<210> 52

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 52

ggcggcggtc acgaa 15

<210> 53

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 被6FAM修饰

<220>

<221> misc_feature

<222> (22)..(22)

<223> 被TAMRA修饰

<400> 53

cgcgatcaca tggtcctgct gg 22

<210> 54

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 54

tttgtctttt atttcaggtc ccagatctag ggctctgcgt ttgctccagg tagtccgctg 60

ctcccttggg cctgggccca ctgacagccc tggtgcctct ggccggctgc acacctcctg 120

gcgggcagct gtgtacaaac tacttgagag caggtgttct ggcaatacct gcctgctctg 180

taatagtttg tacacggagg cctgccctga ctgcccacgg tgccgtggcc aaagaggatc 240

taagggcacc gctgagggcc tacctaacca tcgtggggaa taaggacagt gtcacccctg 300

caggggatcc ggtggtggtg caaatca 327

<210> 55

<211> 269

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 55

agggctctgc gtttgctcca ggtagtccgc tgctcccttg ggcctgggcc cactgacagc 60

cctggtgcct ctggccggct gcacacctcc tggcgggcag ctgtgaatgg tccacatttc 120

agggactgtt ctggcaatac ctggtccctg atttatggac cattcacgga ggcctgccct 180

gactgcccac ggtgccgtgg ccaaagagga tctaagggca ccgctgaggg cctacctaac 240

catcgtgggg aataaggaca gtgtcaccc 269

<210> 56

<211> 265

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多核苷酸

<400> 56

agggctctgc gtttgctcca ggtagtccgc tgctcccttg ggcctgggcc cactgacagc 60

cctggtgcct ctggccggct gcacacctcc tggcgggcag ctgtgacaaa ttagctgtca 120

gcgctgttct ggcaatacct ggcgctgact gcaaatttgt cacggaggcc tgccctgact 180

gcccacggtg ccgtggccaa agaggatcta agggcaccgc tgagggccta cctaaccatc 240

gtggggaata aggacagtgt caccc 265

<210> 57

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 57

Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

1 5

<210> 58

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 58

Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

1 5

<210> 59

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 59

Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

1 5 10

<210> 60

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 60

Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

1 5 10

<210> 61

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 61

Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

1 5 10

<210> 62

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 62

Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

1 5 10

<210> 63

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 63

Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

1 5 10

<210> 64

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<400> 64

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 65

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(25)

<223> 可不存在

<400> 65

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly

20 25

<210> 66

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(25)

<223> 可不存在

<400> 66

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser

20 25

<210> 67

<211> 50

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(50)

<223> 可不存在

<400> 67

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser

1 5 10 15

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser

20 25 30

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser

35 40 45

Gly Ser

50

<210> 68

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 合成的多肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(100)

<223> 可不存在

<400> 68

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

20 25 30

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

35 40 45

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

50 55 60

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

65 70 75 80

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

85 90 95

Gly Gly Ser Gly

100

<210> 69

<211> 12322

<212> DNA

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 69

ctcacaacca gccgactctc ccattatcca gctgcctagt ttggtgcttc aatgtacatg 60

gctattccgt gtgcatatgt gtgtatacaa acacgcatgc atgcctggat ggacatacgt 120

atgcacaggt tattttttaa ggacaattct ttcaataagg tctttacccc ttacttgaaa 180

caggtgttca tgaaaaaaat gcacaaaatc ctgcctggcc ggaataattc atgaagaagg 240

ggctggatcc gtgggtcaga gaacacagga ccagtttgcc atcccaaggc cgaaggattc 300

gaggcacaaa cccagcagcc tcaacctagt tcatggagga gcctcgcggg gtcctggcca 360

agcaagcccg cccctctggt gggaagagcg gcgcctaggt ggagggtggc tgccgtagga 420

gtggacatga atgctggctt tcagagagaa cagcgtttca gttttggtca tcggaagtgg 480

tgccttcagc acagaagaag agcgtgattt ctcctccaag gccgttgatc tccaacccag 540

aactaaaggg gagaagagcc acccccagca tccagcgtgg catctcttgt gccaggacca 600

gggatgactg ggccatggac acagatgtct ccaaccttca accgtttgca tagcacacgg 660

gggactcgtg ggggccacct gccactgcca gctgaaacaa tacaatggca atactgacat 720

ccttcatgac gttttcccga cagacattca ggcagaaagt gctggtgcgt tttctgtctg 780

caaagtagag ggccatgcct caccaataga atagcgtggg ccctgatgac ctgctccgag 840

tccactcaca gccagtgaca cttgcaaaaa actcccaaag ccgtcttggg tttggctccc 900

acagctcttg accaatgtgg ccaaagctgg acacctcctt gggacactgg gattattcat 960

aaatgcagcc cgccctgact ctccctgaat agcatctgaa gtctttgtga aggtcatgga 1020

tcctgaacaa agtgtcaagg gcaccaagaa ggctgaggga agtccccgga agcggctgac 1080

caaaggagag gccattcaga ccagtgtttc ttccagcgtc ccatacccag gcagcggcac 1140

agctgccacc caagagagcc ccgcccaaga gctcttagcc ccgcagccct tcccgggccc 1200

ctcatcagtt cttagggaag gctctcagga gaaaacgggc cagcagcaga agccccccaa 1260

aaggcccccc atcgaagcat ccgtccacat ctcacagctt ccgcagcacc ctctgacacc 1320

agcattcatg tcgcctggca aacctgagca tctcctggag gggtccacat ggcaactggt 1380

tgaccccatg agacctggac cctctggctc cttcgtggcc cctgggctcc atcctcagag 1440

ccagctcctt ccttcccacg cttccatcat tccccccgag gaccttcctg gagtccccaa 1500

agtcttcgtg cctcgtcctt cccaggtctc cttgaagccc acagaagagg cacacaagaa 1560

ggagaggaag ccccagaagc caggcaagta catctgccag tactgcagcc ggccctgtgc 1620

caagcccagc gtgctccaga agcacattcg ctcacacaca ggtgagaggc cctacccctg 1680

cggcccctgt ggcttctcct tcaagaccaa gagtaatctc tacaagcaca ggaagtccca 1740

tgcccaccgc atcaaagcag gcctggcctc aggcatgggt ggcgagatgt acccacatgg 1800

gctggagatg gagcggatcc ctggggaaga gtttgaggag cccactgagg gagaaagcac 1860

agattctgaa gaggagacta gtgccacctc tggtcaccct gcagagctct ccccaagacc 1920

caagcagccc cttctctcca gcgggctata cagctctggg agccacagtt ccagccacga 1980

acgctgttcc ctgtcccagt ccagcacagc ccagtcactc gaagaccccc ctccatttgt 2040

ggaaccctca tctgagcacc ccctgagcca taaacctgaa gacacccaca cgattaagca 2100

gaagctggcc ctccgcttaa gcgagaggaa gaaggtgatc gatgagcagg cgtttctgag 2160

cccaggcagc aaagggagta ctgagtctgg gtatttctct cgctccgaga gtgcagagca 2220

gcaggtcagc cccccaaaca ccaacgccaa gtcctacgct gagatcatct ttggcaagtg 2280

tgggcgaata ggacagcgga ccgccatgct gacagccacc tccacccagc ccctcctgcc 2340

cctgtccacc gaagacaagc ccagcctggt gcctttgtct gtaccccgga cgcaggtgat 2400

cgagcacatc acgaagctca tcaccatcaa cgaggccgtg gtggacacca gcgagatcga 2460

cagcgtgaag ccaaggcgga gctcactgtc caggcgcagc agcatggagt ccccaaaatc 2520

cagcctctac cgggagcccc tgtcatccca cagtgagaaa accaagcctg aacaatcact 2580

gctgagcctc cagcacccgc ccagtaccgc cccccctgtg cctctcctga gaagccactc 2640

aatgccttct gccgcctgca ctatcagcac cccccaccac cccttccgag gtagctactc 2700

cttcgatgac catatcaccg actccgaagc cctgagccac agcagtcacg tgtttacctc 2760

ccacccccgg atgctgaagc gccagccggc aatcgaatta cctttgggag gggaatacag 2820

ttctgaggag cctggcccaa gcagcaaaga cacagcctcc aagccctcgg acgaagtgga 2880

acccaaggaa agcgagctta ccaaaaagac caagaagggt ttgaaaacaa aaggggtgat 2940

ctacgaatgt aacatatgtg gtgctcggta caagaaaagg gataactacg aagcccacaa 3000

aaaatactac tgctcagagc ttcagatcgc aaagcccatc tctgcaggca cccacacatc 3060

tccagaagct gaaaagagtc agattgagca tgagccgtgg tcccaaatga tgcattacaa 3120

actgggaacc accctggaac tcactccact gaggaagagg aggaaagaga agagccttgg 3180

ggacgaggaa gagccacctg cctttgagtc cacaaaaagt cagtttggca gccccgggcc 3240

atctgatgct gctcggaacc ttcccctgga gtccaccaag tcaccagcag aaccaagtaa 3300

atcagtgccc tccttggagg gacccacggg cttccagcca aggactccca agccagggtc 3360

cggttcagaa tcagggaagg agaggagaac aacgtccaaa gaaatttctg tcatccagca 3420

caccagctcc tttgagaaat ctgattctct cgagcagccg agtggcttgg aaggggaaga 3480

caaacctctg gcccagttcc catcaccccc acctgcccca cacggacgct ctgctcactc 3540

cctgcagcct aagttggtcc gccagcccaa cattcaggtt cctgagatcc tagtaactga 3600

ggagcctgac cggccggaca cagagccaga gccgccccct aaggaacctg agaagactga 3660

ggagttccaa tggccccagc gcagccagac acttgcccag ctcccagctg agaagctgcc 3720

acccaaaaag aagaggttgc gcctggcaga gatggcccaa tcatcagggg agtccagctt 3780

cgagtcctct gtgcctctgt ctcgcagccc gagccaggaa agcaatgtct ctttgagtgg 3840

gtccagccgc tcagcctcgt ttgagaggga tgaccatggg aaagccgagg cccccagtcc 3900

ctcatctgac atgcgcccca aacccctggg cacccacatg ttgactgtcc ccagccacca 3960

cccacatgcc cgagagatgc ggaggtcagc ctcagagcag agccccaacg tttcccattc 4020

tgcccacatg accgagacac gcagcaaatc ctttgactat ggcagcttgt ccttgacagg 4080

cccttctgct ccagccccag tggctccacc agcgcgggtg gccccgccag agagaagaaa 4140

atgcttcttg gtgagacagg cctctctgag caggcctcca gaatctgagt tggaggttgc 4200

ccccaaggga agacaggaga gcgaagaacc acagccctca tccagtaaac cctctgccaa 4260

aagctcattg tcccagattt cctctgcggc cacctcacat ggtggacccc cgggaggcaa 4320

gggcccaggg caggacaggc ccccattggg gcccactgtg ccctacacag aagcactgca 4380

agtgttccac caccccgttg cccagacacc cctgcatgag aagccatacc tgcccccacc 4440

agtctccctt ttctccttcc agcatctcgt gcagcatgag ccaggacagt ctccagaatt 4500

cttctccacc caggccatgt ccagcctcct gtcctcacca tactccatgc ccccacttcc 4560

tccctcctta tttcaagccc caccgcttcc tctccagcct actgttctgc acccaggcca 4620

actccatctc ccccagctca tgcctcaccc agccaacatc cccttcaggc agcccccttc 4680

cttcctcccc atgccatacc cgacctcctc agcactgtct tctgggtttt tcctgcctct 4740

gcaatcccag tttgcacttc agctccctgg tgatgtggaa agccatctgc cccagatcaa 4800

aaccagcctg gccccactgg caacaggaag tgctggcctc tcccccagca cagagtacag 4860

cagtgacatc cggctacccc ctgtggctcc cccagccagc tcctcagcac ctacatcagc 4920

tcctccactg gccctgcctg cctgtccaga caccatggtg tccctggttg tgcctgtccg 4980

tgttcagacc aatatgccgt cctatgggag cgcaatgtac accacccttt cccagatctt 5040

ggtcacccag tcccaaggca gctcagcaac tgtggcactt cccaagtttg aggaaccccc 5100

atcaaagggg acgactgtat gtggtgcaga tgtgcatgag gttgggcccg gcccttctgg 5160

gttaagtgaa gagcaaagca gagctttccc aactccatac ctgagagtgc ctgtgacatt 5220

acctgaaaga aaaggcactt ccctgtcatc agagagtatc ttgagcctgg aggggagttc 5280

atcaacagca gggggaagca aacgtgtcct ttcaccagct ggcagccttg aacttaccat 5340

ggaaacccag cagcaaaaaa gagtgaagga ggaggaggct tccaaggcag atgaaaaact 5400

tgagctggta aaaccatgca gtgtggtcct accagcaccg aggatgggaa gaggccagag 5460

aaatcccact taggcaacca gggccaaggc aggagggagc tagaaatgct gtccagcctg 5520

tcctcagatc catctgacac aaaggaaatt cctcccctcc ctcaccctgc attgtcccat 5580

gggacagccc caggctcaga agctttgaag gaatatcccc agccatctgg caaacctcac 5640

cgaagagggt tgaccccact gagcgtgaag aaagaagatt ccaaggaaca acctgatctc 5700

ccctccttgg cacctccgag ctctctgcct ctgtcagaaa cgtcctccag accagccaag 5760

tcacaagaag gtacggactc aaagaaggta ctgcagttcc ccagcctcca cacaaccact 5820

aatgtcagtt ggtgctattt aaactacatt aagccaaatc acatccagca tgcagatagg 5880

aggtcctctg tttacgctgg ttggtgcata agtttgtaca accccaacct tccgggggtt 5940

tccactaaag ctgctttgtc cctcctgagg tctaagcaga aagtgagcaa agagacatac 6000

accatggcca cagctccgca tcctgaggca ggaaggcttg tgccatccag ctcccgcaag 6060

ccccgcatga cagaggttca cctcccttca ctggtttccc cggaaggcca gaaagatcta 6120

gctagagtgg agaaggaaga agagaggaga ggggagccgg aggaggatgc tcctgcctcc 6180

cagagagggg agccggcgag gatcaaaatc ttcgaaggag ggtacaaatc aaacgaagag 6240

tatgtatatg tgcgaggccg cggccgaggg aaatatgttt gtgaggagtg tggaattcgc 6300

tgcaagaagc ccagcatgct gaagaaacac atccgcaccc acactgacgt ccggccctat 6360

gtgtgcaagc actgtcactt tgcttttaaa accaaaggga atctgactaa gcacatgaag 6420

tcgaaggccc acagcaaaaa gtgccaagag acaggggtgc tggaggagct ggaagccgaa 6480

gaaggaacca gtgacgacct gttccaggac tcggaaggac gagagggttc agaggctgtg 6540

gaggagcacc agttttcgga cctggaggac tcggactcag actcagacct ggacgaagac 6600

gaggatgagg atgaggagga gagccaggat gagctgtcca gaccatcctc agaggcgccc 6660

ccgcctggcc caccacatgc actgcgggca gactcctcac ccatcctggg ccctcagccc 6720

ccagatgccc ccgcctctgg cacggaggct acacgaggca gctcggtctc ggaagctgag 6780

cgcctgacag ccagcagctg ctccatgtcc agccagagca tgccgggcct cccctggctg 6840

ggaccggccc ctctgggctc tgtggagaaa gacacaggct cagccttgag ctacaagcct 6900

gtgtccccaa gaagaccgtg gtccccaagc aaagaagcag gcagccgtcc accactagcc 6960

cgcaaacact cgctaaccaa aaacgactca tctccccagc gatgctcccc ggcccgagaa 7020

ccacaggcct cagccccaag cccacctggc ctgcacgtgg acccaggaag gggcatgggc 7080

gctctccctt gtgggtctcc aagacttcag ctgtctcctc tcaccctctg ccccctggga 7140

agagaactgg cccctcgagc acatgtgctc tccaaactcg agggtaccac cgacccaggc 7200

ctccccagat actcgcccac caggagatgg tctccaggtc aggccgagtc accaccacgg 7260

tcagcgccgc cagggaagtg ggccttggct gggccgggca gcccctcagc gggggagcat 7320

ggcccaggct tggggctgga cccacgggtt ctcttcccgc ccgcgcctct acctcacaag 7380

ctcctcagca gaagcccaga gacctgcgcc tccccgtgga aggccgagtc ccgaagtccc 7440

tcctgctcac ccggccctgc tcatcctctc tcctcccgac ccttctccgc cctccatgac 7500

ttccacggcc acatcctggc ccggacagag gagaacatct tcagccacct gcctctgcac 7560

tcccagcact tgacccgtgc cccatgtccc ttgattccca tcggtgggat ccagatggtg 7620

caggcccggc caggagccca ccccaccctg ctgccagggc ccaccgcagc ctgggtcagt 7680

ggcttctccg ggggtggcag cgacctgaca ggggcccggg aggcccagga gcgaggccgc 7740

tggagtccca ctgagagctc gtcagcctcc gtgtcgcctg tggctaaggt ctccaaattc 7800

acactctcct cagagctgga gggcggggac taccccaagg agagggagag gaccggcgga 7860

ggcccgggca ggcctcctga ctggacaccc catgggaccg gggcacctgc agagcccaca 7920

cccacgcaca gcccctgcac cccacccgac accttgcccc ggccgcccca gggacgccgg 7980

gcagcgcagt cctggagccc ccgcttgggt ccccgcgtgc accgaccaac cccgagcctt 8040

ctgccacccc gccgctggac cgcagcagct ctgtgggctg cctggcagag gcctctgccc 8100

gcttcccagc ccggacgagg aacctctccg gggaacccag gaccaggcag gactccccca 8160

agccctcagg aagtggggag cccagggcac atccacatca gcctgaggac agggttcccc 8220

ccaacgctta gcctctctcc aactgcttca gcatctggct tccagtgtcc agcaacagac 8280

gtttccagcc actttcctcg aatcatccca cttcctcagc cccatctgtc cctccgtcca 8340

ggagctctca cggccccatc tgttgtacct tcccatgtat gcagttacct gtgccttttt 8400

ctacaccttt tgttgcttaa aaagaaacaa aacaaatcac atacatacat ttaaaaaaaa 8460

aacaacaacc cacgaggagt ctgaggctgt gaatagttta tggttttggg gaaaggctga 8520

tggtgaagcc tcctgaccct ccccgctgtg gttggcagcc acccacccca gaggctggca 8580

gagggaaagg ggtacactga gggagaaagg aaaaggaaac ttcaaacaat atagaattaa 8640

atgtaaaagg aagcactcct gtgtacagat gcgatcaagg ttcctgttta ttgccacttc 8700

acccccctgc ccagctcgta gccacccctc tctgccagca gaaaggccag tgtccccagg 8760

cagaggggca caaacacagg caggtgaccc ccacccaggc cccagcaggc aggcccagaa 8820

aaactaatct tttccttttt tttttttttt tttttttttg caagaaaata aaatgatact 8880

tttcctagga tttcaacaca aaataatagg tgcaggtaga aggaggaggg ctggctcccc 8940

aagggctcct ggatactctg gtagtctgag tcatgggccc atcctggcac tccacaggtg 9000

ggcaggccac cccacccacg cacccccact ccagacacct cccttctgca ccccaccctg 9060

gccccctggg ctggggaagg agccctgact gtccgtccct ggctcccaag cccctgaccg 9120

aggcctcact ctcctgttgc ctcctctgtt ctaaaaccac caaaccaccc acaaaggcag 9180

aagtggcagg gcccgagccc tagcggccgt tcctgagact gggttttggg ttttgtttca 9240

tcttggtccc tggggtacaa gggagcctgt tcccctcatg gctgggtttt tccagttctc 9300

cacagcagag gtttgcgggg aactgtttca ggaccacttt gccacaggac cgtttccccc 9360

cgtccctgcc cctgtctcca ctaccccaag gaaataccca caactgtggc tggtggatac 9420

ggcctggacc tgtttgctgt cttacacctc ttttttaaaa agagagagga tggtgtttga 9480

tacttcaccc agccaccaca gattcttttg acctagagga tttttgaatt gtcctaactc 9540

gttggaattc tccaaagcaa tcagtgtgag ccagtgcctc ttccttaccc acatctctac 9600

tttcaagaag ctgccctgca tttcctgggg caaaactcta ctttgtaaga aaaataatag 9660

gaccagaaat ttaaatccca aattgaacta tggaacttga actctagcgt gttcgcccca 9720

actgggagag gtgagctttt tcccagtgtt tcagaactga ttttctttac tttctacaag 9780

ggagggcagc acagggacta cggttgaggc ccgtgaaggc tgggtttgat gccaccctat 9840

acagagcagg gacctctctg gctaatcccc agtcctcagc caggctgtgt gaatcaagtg 9900

cctgccccag ggctcttgag ctattgaagc tgcttgggta caggacacag taggtgggga 9960

gggttaagac ccttctgtga gttccctgtg cggggctgta cttgcctctt ccaattcgtg 10020

gcctttccct gcttggtccc tactagacag acaaaccagc cacagtccag cctgcagcca 10080

gaccaccttg ttcactcatt ctcctttgcc tcagagctaa gacaaaaatg agacagaagg 10140

cagggctccc tgggagtcca ctgtgctcca gggttctggg gaatcagggt tagccagcag 10200

ctcctggctg cttccctcag agactagggc tctcatcctc cccaagagaa gcagcaagcc 10260

cagcctggac cacactgtcc atattgctgg acagtggcct gacagaaagt gactcctcca 10320

agtcccagga ggccagggct tttctcatcc ttgcctttca gccctaaccc atgggactgc 10380

ccacggattg gagacttcaa gggctgaggt ctgggagctg cataaagggc attgcttcag 10440

cccaggttag aaatctgcct gggcaagctc ttcctgcccc agacctacaa agcagcagac 10500

cgggggctct ggtggactag cccctgacat tggtgggggg ccccacacca ctccacccca 10560

ccctgccttc cagctctcct gggcattttt ctccctgtac tcaaacagcc tacccaccca 10620

aggtttcctc cctgggcagc ctagcaatga acagtgcagc cggcagggca gaggcccggc 10680

agtcaccggg cccgtcaggc tcaggcagag aagccacagg ggccaggagt cactggagac 10740

tatttctaaa tgatgggggt aaatgcacaa atagaatctc accaaagggc tgcctccaca 10800

ttgatgccgt gcccagaggg acagaaccaa tgccaccagc ctgggtatat gtcactgggc 10860

acagctctaa ccccctcctc cggactctag tcccgctcct ctgcgcacag agcccccagc 10920

ccacaggtac accttcatga tttggagaaa gacgctcgcc ccatgcacgc cctcctctgg 10980

gccttctgcc ctgctcccag tcacttccaa gcttcctgtt tgcctgtgat gttattgtgc 11040

ctgttgaggg aagcagcaga ggaggcagtg gctgacttgg cacagatgcc tgctacgtgc 11100

tctgttgaaa tgcgcggggt ggccattcct cggtacagac tagtcctggt ccttgggtgt 11160

gggcagtggg ggaggaacca actggtcgag gtttcagagc caaaccttgc ctttggttgg 11220

tgagtccttg ccccccaggc ctgcgctcca cgatgccttt cacccttggc aatctcaggg 11280

ccatcctggg tagtaacccc actcctctct gctcccgccc gcacctgtgg ctctcactct 11340

gggctcaacc cctgcaaccc tccaggagcc cgacagcagc cagctgcctg cactgtcgcc 11400

tccgtaagct ccaacttcca gacccagaag tccctctgct tccctctgtt ggaaaaagcc 11460

taaaagaatt agcttccaga ttcctctagc ccctgctcca ttcccaccca gtccttctga 11520

agaggaatga gcaatacatc tgagctggat ttctctctag tcctttctcc agacaaatcc 11580

ttcttaaagc aaaagtcctg gctgagcacc tgtccttggg gaccgatctg ccgtgtgacc 11640

aggggaagaa agttcccgaa agcctgttcc accaattctg cttctgtgtt gtgaatccag 11700

tctgctttcc attagaaaac cgcttcggca cttatggtca ctttaataaa tctagtatgt 11760

aaaaaaagaa agaaagaaaa gaaacagaaa aaagaaacgt gcaggcaaat gtaaaataca 11820

atgctctctg taagataaat atttgccttt ttttctaaaa ggtgtacgta ttctgtatgt 11880

gaaattgtct gtagaaagtt tctatgttct taaatggcaa tacattccaa aaattgtact 11940

gtagatatgt acagcaaccg cactgggatg gggtagtttt gcctgtaatt ttatttaaac 12000

tccagtttcc acacttgctc ttgcaatgtt ggtatggtat atatcagtgc aaaagaaaaa 12060

acaaaacaga aacaaacaaa aaaaaaaaac aaaaatccac gcaggtctaa agcacagagt 12120

ctgacgtaca aaaggaaaaa tgctcagtat tgatgtgtgt gacctttgtt gtaaattaca 12180

tctgtactgt gaatgagaag tttttacaag tataataatt gcctttatta cagctctggc 12240

tgagtgttca gcctgaggat attttttaaa aaaaaaagaa ttagcatgtt ggaataaatt 12300

tgaaaatccc aacataaaaa aa 12322

<210> 70

<211> 2405

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 70

Met Asp Pro Glu Gln Ser Val Lys Gly Thr Lys Lys Ala Glu Gly Ser

1 5 10 15

Pro Arg Lys Arg Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile Gln Thr Ser Val Ser

20 25 30

Ser Ser Val Pro Tyr Pro Gly Ser Gly Thr Ala Ala Thr Gln Glu Ser

35 40 45

Pro Ala Gln Glu Leu Leu Ala Pro Gln Pro Phe Pro Gly Pro Ser Ser

50 55 60

Val Leu Arg Glu Gly Ser Gln Glu Lys Thr Gly Gln Gln Gln Lys Pro

65 70 75 80

Pro Lys Arg Pro Pro Ile Glu Ala Ser Val His Ile Ser Gln Leu Pro

85 90 95

Gln His Pro Leu Thr Pro Ala Phe Met Ser Pro Gly Lys Pro Glu His

100 105 110

Leu Leu Glu Gly Ser Thr Trp Gln Leu Val Asp Pro Met Arg Pro Gly

115 120 125

Pro Ser Gly Ser Phe Val Ala Pro Gly Leu His Pro Gln Ser Gln Leu

130 135 140

Leu Pro Ser His Ala Ser Ile Ile Pro Pro Glu Asp Leu Pro Gly Val

145 150 155 160

Pro Lys Val Phe Val Pro Arg Pro Ser Gln Val Ser Leu Lys Pro Thr

165 170 175

Glu Glu Ala His Lys Lys Glu Arg Lys Pro Gln Lys Pro Gly Lys Tyr

180 185 190

Ile Cys Gln Tyr Cys Ser Arg Pro Cys Ala Lys Pro Ser Val Leu Gln

195 200 205

Lys His Ile Arg Ser His Thr Gly Glu Arg Pro Tyr Pro Cys Gly Pro

210 215 220

Cys Gly Phe Ser Phe Lys Thr Lys Ser Asn Leu Tyr Lys His Arg Lys

225 230 235 240

Ser His Ala His Arg Ile Lys Ala Gly Leu Ala Ser Gly Met Gly Gly

245 250 255

Glu Met Tyr Pro His Gly Leu Glu Met Glu Arg Ile Pro Gly Glu Glu

260 265 270

Phe Glu Glu Pro Thr Glu Gly Glu Ser Thr Asp Ser Glu Glu Glu Thr

275 280 285

Ser Ala Thr Ser Gly His Pro Ala Glu Leu Ser Pro Arg Pro Lys Gln

290 295 300

Pro Leu Leu Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Ser Gly Ser His Ser Ser Ser

305 310 315 320

His Glu Arg Cys Ser Leu Ser Gln Ser Ser Thr Ala Gln Ser Leu Glu

325 330 335

Asp Pro Pro Pro Phe Val Glu Pro Ser Ser Glu His Pro Leu Ser His

340 345 350

Lys Pro Glu Asp Thr His Thr Ile Lys Gln Lys Leu Ala Leu Arg Leu

355 360 365

Ser Glu Arg Lys Lys Val Ile Asp Glu Gln Ala Phe Leu Ser Pro Gly

370 375 380

Ser Lys Gly Ser Thr Glu Ser Gly Tyr Phe Ser Arg Ser Glu Ser Ala

385 390 395 400

Glu Gln Gln Val Ser Pro Pro Asn Thr Asn Ala Lys Ser Tyr Ala Glu

405 410 415

Ile Ile Phe Gly Lys Cys Gly Arg Ile Gly Gln Arg Thr Ala Met Leu

420 425 430

Thr Ala Thr Ser Thr Gln Pro Leu Leu Pro Leu Ser Thr Glu Asp Lys

435 440 445

Pro Ser Leu Val Pro Leu Ser Val Pro Arg Thr Gln Val Ile Glu His

450 455 460

Ile Thr Lys Leu Ile Thr Ile Asn Glu Ala Val Val Asp Thr Ser Glu

465 470 475 480

Ile Asp Ser Val Lys Pro Arg Arg Ser Ser Leu Ser Arg Arg Ser Ser

485 490 495

Met Glu Ser Pro Lys Ser Ser Leu Tyr Arg Glu Pro Leu Ser Ser His

500 505 510

Ser Glu Lys Thr Lys Pro Glu Gln Ser Leu Leu Ser Leu Gln His Pro

515 520 525

Pro Ser Thr Ala Pro Pro Val Pro Leu Leu Arg Ser His Ser Met Pro

530 535 540

Ser Ala Ala Cys Thr Ile Ser Thr Pro His His Pro Phe Arg Gly Ser

545 550 555 560

Tyr Ser Phe Asp Asp His Ile Thr Asp Ser Glu Ala Leu Ser His Ser

565 570 575

Ser His Val Phe Thr Ser His Pro Arg Met Leu Lys Arg Gln Pro Ala

580 585 590

Ile Glu Leu Pro Leu Gly Gly Glu Tyr Ser Ser Glu Glu Pro Gly Pro

595 600 605

Ser Ser Lys Asp Thr Ala Ser Lys Pro Ser Asp Glu Val Glu Pro Lys

610 615 620

Glu Ser Glu Leu Thr Lys Lys Thr Lys Lys Gly Leu Lys Thr Lys Gly

625 630 635 640

Val Ile Tyr Glu Cys Asn Ile Cys Gly Ala Arg Tyr Lys Lys Arg Asp

645 650 655

Asn Tyr Glu Ala His Lys Lys Tyr Tyr Cys Ser Glu Leu Gln Ile Ala

660 665 670

Lys Pro Ile Ser Ala Gly Thr His Thr Ser Pro Glu Ala Glu Lys Ser

675 680 685

Gln Ile Glu His Glu Pro Trp Ser Gln Met Met His Tyr Lys Leu Gly

690 695 700

Thr Thr Leu Glu Leu Thr Pro Leu Arg Lys Arg Arg Lys Glu Lys Ser

705 710 715 720

Leu Gly Asp Glu Glu Glu Pro Pro Ala Phe Glu Ser Thr Lys Ser Gln

725 730 735

Phe Gly Ser Pro Gly Pro Ser Asp Ala Ala Arg Asn Leu Pro Leu Glu

740 745 750

Ser Thr Lys Ser Pro Ala Glu Pro Ser Lys Ser Val Pro Ser Leu Glu

755 760 765

Gly Pro Thr Gly Phe Gln Pro Arg Thr Pro Lys Pro Gly Ser Gly Ser

770 775 780

Glu Ser Gly Lys Glu Arg Arg Thr Thr Ser Lys Glu Ile Ser Val Ile

785 790 795 800

Gln His Thr Ser Ser Phe Glu Lys Ser Asp Ser Leu Glu Gln Pro Ser

805 810 815

Gly Leu Glu Gly Glu Asp Lys Pro Leu Ala Gln Phe Pro Ser Pro Pro

820 825 830

Pro Ala Pro His Gly Arg Ser Ala His Ser Leu Gln Pro Lys Leu Val

835 840 845

Arg Gln Pro Asn Ile Gln Val Pro Glu Ile Leu Val Thr Glu Glu Pro

850 855 860

Asp Arg Pro Asp Thr Glu Pro Glu Pro Pro Pro Lys Glu Pro Glu Lys

865 870 875 880

Thr Glu Glu Phe Gln Trp Pro Gln Arg Ser Gln Thr Leu Ala Gln Leu

885 890 895

Pro Ala Glu Lys Leu Pro Pro Lys Lys Lys Arg Leu Arg Leu Ala Glu

900 905 910

Met Ala Gln Ser Ser Gly Glu Ser Ser Phe Glu Ser Ser Val Pro Leu

915 920 925

Ser Arg Ser Pro Ser Gln Glu Ser Asn Val Ser Leu Ser Gly Ser Ser

930 935 940

Arg Ser Ala Ser Phe Glu Arg Asp Asp His Gly Lys Ala Glu Ala Pro

945 950 955 960

Ser Pro Ser Ser Asp Met Arg Pro Lys Pro Leu Gly Thr His Met Leu

965 970 975

Thr Val Pro Ser His His Pro His Ala Arg Glu Met Arg Arg Ser Ala

980 985 990

Ser Glu Gln Ser Pro Asn Val Ser His Ser Ala His Met Thr Glu Thr

995 1000 1005

Arg Ser Lys Ser Phe Asp Tyr Gly Ser Leu Ser Leu Thr Gly Pro

1010 1015 1020

Ser Ala Pro Ala Pro Val Ala Pro Pro Ala Arg Val Ala Pro Pro

1025 1030 1035

Glu Arg Arg Lys Cys Phe Leu Val Arg Gln Ala Ser Leu Ser Arg

1040 1045 1050

Pro Pro Glu Ser Glu Leu Glu Val Ala Pro Lys Gly Arg Gln Glu

1055 1060 1065

Ser Glu Glu Pro Gln Pro Ser Ser Ser Lys Pro Ser Ala Lys Ser

1070 1075 1080

Ser Leu Ser Gln Ile Ser Ser Ala Ala Thr Ser His Gly Gly Pro

1085 1090 1095

Pro Gly Gly Lys Gly Pro Gly Gln Asp Arg Pro Pro Leu Gly Pro

1100 1105 1110

Thr Val Pro Tyr Thr Glu Ala Leu Gln Val Phe His His Pro Val

1115 1120 1125

Ala Gln Thr Pro Leu His Glu Lys Pro Tyr Leu Pro Pro Pro Val

1130 1135 1140

Ser Leu Phe Ser Phe Gln His Leu Val Gln His Glu Pro Gly Gln

1145 1150 1155

Ser Pro Glu Phe Phe Ser Thr Gln Ala Met Ser Ser Leu Leu Ser

1160 1165 1170

Ser Pro Tyr Ser Met Pro Pro Leu Pro Pro Ser Leu Phe Gln Ala

1175 1180 1185

Pro Pro Leu Pro Leu Gln Pro Thr Val Leu His Pro Gly Gln Leu

1190 1195 1200

His Leu Pro Gln Leu Met Pro His Pro Ala Asn Ile Pro Phe Arg

1205 1210 1215

Gln Pro Pro Ser Phe Leu Pro Met Pro Tyr Pro Thr Ser Ser Ala

1220 1225 1230

Leu Ser Ser Gly Phe Phe Leu Pro Leu Gln Ser Gln Phe Ala Leu

1235 1240 1245

Gln Leu Pro Gly Asp Val Glu Ser His Leu Pro Gln Ile Lys Thr

1250 1255 1260

Ser Leu Ala Pro Leu Ala Thr Gly Ser Ala Gly Leu Ser Pro Ser

1265 1270 1275

Thr Glu Tyr Ser Ser Asp Ile Arg Leu Pro Pro Val Ala Pro Pro

1280 1285 1290

Ala Ser Ser Ser Ala Pro Thr Ser Ala Pro Pro Leu Ala Leu Pro

1295 1300 1305

Ala Cys Pro Asp Thr Met Val Ser Leu Val Val Pro Val Arg Val

1310 1315 1320

Gln Thr Asn Met Pro Ser Tyr Gly Ser Ala Met Tyr Thr Thr Leu

1325 1330 1335

Ser Gln Ile Leu Val Thr Gln Ser Gln Gly Ser Ser Ala Thr Val

1340 1345 1350

Ala Leu Pro Lys Phe Glu Glu Pro Pro Ser Lys Gly Thr Thr Val

1355 1360 1365

Cys Gly Ala Asp Val His Glu Val Gly Pro Gly Pro Ser Gly Leu

1370 1375 1380

Ser Glu Glu Gln Ser Arg Ala Phe Pro Thr Pro Tyr Leu Arg Val

1385 1390 1395

Pro Val Thr Leu Pro Glu Arg Lys Gly Thr Ser Leu Ser Ser Glu

1400 1405 1410

Ser Ile Leu Ser Leu Glu Gly Ser Ser Ser Thr Ala Gly Gly Ser

1415 1420 1425

Lys Arg Val Leu Ser Pro Ala Gly Ser Leu Glu Leu Thr Met Glu

1430 1435 1440

Thr Gln Gln Gln Lys Arg Val Lys Glu Glu Glu Ala Ser Lys Ala

1445 1450 1455

Asp Glu Lys Leu Glu Leu Val Lys Pro Cys Ser Val Val Leu Thr

1460 1465 1470

Ser Thr Glu Asp Gly Lys Arg Pro Glu Lys Ser His Leu Gly Asn

1475 1480 1485

Gln Gly Gln Gly Arg Arg Glu Leu Glu Met Leu Ser Ser Leu Ser

1490 1495 1500

Ser Asp Pro Ser Asp Thr Lys Glu Ile Pro Pro Leu Pro His Pro

1505 1510 1515

Ala Leu Ser His Gly Thr Ala Pro Gly Ser Glu Ala Leu Lys Glu

1520 1525 1530

Tyr Pro Gln Pro Ser Gly Lys Pro His Arg Arg Gly Leu Thr Pro

1535 1540 1545

Leu Ser Val Lys Lys Glu Asp Ser Lys Glu Gln Pro Asp Leu Pro

1550 1555 1560

Ser Leu Ala Pro Pro Ser Ser Leu Pro Leu Ser Glu Thr Ser Ser

1565 1570 1575

Arg Pro Ala Lys Ser Gln Glu Gly Thr Asp Ser Lys Lys Val Leu

1580 1585 1590

Gln Phe Pro Ser Leu His Thr Thr Thr Asn Val Ser Trp Cys Tyr

1595 1600 1605

Leu Asn Tyr Ile Lys Pro Asn His Ile Gln His Ala Asp Arg Arg

1610 1615 1620

Ser Ser Val Tyr Ala Gly Trp Cys Ile Ser Leu Tyr Asn Pro Asn

1625 1630 1635

Leu Pro Gly Val Ser Thr Lys Ala Ala Leu Ser Leu Leu Arg Ser

1640 1645 1650

Lys Gln Lys Val Ser Lys Glu Thr Tyr Thr Met Ala Thr Ala Pro

1655 1660 1665

His Pro Glu Ala Gly Arg Leu Val Pro Ser Ser Ser Arg Lys Pro

1670 1675 1680

Arg Met Thr Glu Val His Leu Pro Ser Leu Val Ser Pro Glu Gly

1685 1690 1695

Gln Lys Asp Leu Ala Arg Val Glu Lys Glu Glu Glu Arg Arg Gly

1700 1705 1710

Glu Pro Glu Glu Asp Ala Pro Ala Ser Gln Arg Gly Glu Pro Ala

1715 1720 1725

Arg Ile Lys Ile Phe Glu Gly Gly Tyr Lys Ser Asn Glu Glu Tyr

1730 1735 1740

Val Tyr Val Arg Gly Arg Gly Arg Gly Lys Tyr Val Cys Glu Glu

1745 1750 1755

Cys Gly Ile Arg Cys Lys Lys Pro Ser Met Leu Lys Lys His Ile

1760 1765 1770

Arg Thr His Thr Asp Val Arg Pro Tyr Val Cys Lys His Cys His

1775 1780 1785

Phe Ala Phe Lys Thr Lys Gly Asn Leu Thr Lys His Met Lys Ser

1790 1795 1800

Lys Ala His Ser Lys Lys Cys Gln Glu Thr Gly Val Leu Glu Glu

1805 1810 1815

Leu Glu Ala Glu Glu Gly Thr Ser Asp Asp Leu Phe Gln Asp Ser

1820 1825 1830

Glu Gly Arg Glu Gly Ser Glu Ala Val Glu Glu His Gln Phe Ser

1835 1840 1845

Asp Leu Glu Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Leu Asp Glu Asp Glu

1850 1855 1860

Asp Glu Asp Glu Glu Glu Ser Gln Asp Glu Leu Ser Arg Pro Ser

1865 1870 1875

Ser Glu Ala Pro Pro Pro Gly Pro Pro His Ala Leu Arg Ala Asp

1880 1885 1890

Ser Ser Pro Ile Leu Gly Pro Gln Pro Pro Asp Ala Pro Ala Ser

1895 1900 1905

Gly Thr Glu Ala Thr Arg Gly Ser Ser Val Ser Glu Ala Glu Arg

1910 1915 1920

Leu Thr Ala Ser Ser Cys Ser Met Ser Ser Gln Ser Met Pro Gly

1925 1930 1935

Leu Pro Trp Leu Gly Pro Ala Pro Leu Gly Ser Val Glu Lys Asp

1940 1945 1950

Thr Gly Ser Ala Leu Ser Tyr Lys Pro Val Ser Pro Arg Arg Pro

1955 1960 1965

Trp Ser Pro Ser Lys Glu Ala Gly Ser Arg Pro Pro Leu Ala Arg

1970 1975 1980

Lys His Ser Leu Thr Lys Asn Asp Ser Ser Pro Gln Arg Cys Ser

1985 1990 1995

Pro Ala Arg Glu Pro Gln Ala Ser Ala Pro Ser Pro Pro Gly Leu

2000 2005 2010

His Val Asp Pro Gly Arg Gly Met Gly Ala Leu Pro Cys Gly Ser

2015 2020 2025

Pro Arg Leu Gln Leu Ser Pro Leu Thr Leu Cys Pro Leu Gly Arg

2030 2035 2040

Glu Leu Ala Pro Arg Ala His Val Leu Ser Lys Leu Glu Gly Thr

2045 2050 2055

Thr Asp Pro Gly Leu Pro Arg Tyr Ser Pro Thr Arg Arg Trp Ser

2060 2065 2070

Pro Gly Gln Ala Glu Ser Pro Pro Arg Ser Ala Pro Pro Gly Lys

2075 2080 2085

Trp Ala Leu Ala Gly Pro Gly Ser Pro Ser Ala Gly Glu His Gly

2090 2095 2100

Pro Gly Leu Gly Leu Asp Pro Arg Val Leu Phe Pro Pro Ala Pro

2105 2110 2115

Leu Pro His Lys Leu Leu Ser Arg Ser Pro Glu Thr Cys Ala Ser

2120 2125 2130

Pro Trp Lys Ala Glu Ser Arg Ser Pro Ser Cys Ser Pro Gly Pro

2135 2140 2145

Ala His Pro Leu Ser Ser Arg Pro Phe Ser Ala Leu His Asp Phe

2150 2155 2160

His Gly His Ile Leu Ala Arg Thr Glu Glu Asn Ile Phe Ser His

2165 2170 2175

Leu Pro Leu His Ser Gln His Leu Thr Arg Ala Pro Cys Pro Leu

2180 2185 2190

Ile Pro Ile Gly Gly Ile Gln Met Val Gln Ala Arg Pro Gly Ala

2195 2200 2205

His Pro Thr Leu Leu Pro Gly Pro Thr Ala Ala Trp Val Ser Gly

2210 2215 2220

Phe Ser Gly Gly Gly Ser Asp Leu Thr Gly Ala Arg Glu Ala Gln

2225 2230 2235

Glu Arg Gly Arg Trp Ser Pro Thr Glu Ser Ser Ser Ala Ser Val

2240 2245 2250

Ser Pro Val Ala Lys Val Ser Lys Phe Thr Leu Ser Ser Glu Leu

2255 2260 2265

Glu Gly Gly Asp Tyr Pro Lys Glu Arg Glu Arg Thr Gly Gly Gly

2270 2275 2280

Pro Gly Arg Pro Pro Asp Trp Thr Pro His Gly Thr Gly Ala Pro

2285 2290 2295

Ala Glu Pro Thr Pro Thr His Ser Pro Cys Thr Pro Pro Asp Thr

2300 2305 2310

Leu Pro Arg Pro Pro Gln Gly Arg Arg Ala Ala Gln Ser Trp Ser

2315 2320 2325

Pro Arg Leu Glu Ser Pro Arg Ala Pro Thr Asn Pro Glu Pro Ser

2330 2335 2340

Ala Thr Pro Pro Leu Asp Arg Ser Ser Ser Val Gly Cys Leu Ala

2345 2350 2355

Glu Ala Ser Ala Arg Phe Pro Ala Arg Thr Arg Asn Leu Ser Gly

2360 2365 2370

Glu Pro Arg Thr Arg Gln Asp Ser Pro Lys Pro Ser Gly Ser Gly

2375 2380 2385

Glu Pro Arg Ala His Pro His Gln Pro Glu Asp Arg Val Pro Pro

2390 2395 2400

Asn Ala

2405