一种茄果蔬菜种质资源活体保存方法

摘要

本发明公开了一种茄果蔬菜种质资源活体保存方法，包括砧木、接穗准备，插接法嫁接，接后保湿、炼苗、脱袋，越冬管理等步骤。选优质种子，经消毒、催芽、培养，以0.4‑0.6cm野生托鲁巴姆幼嫩枝条为砧木，以0.3‑0.4cm待保存资源幼嫩侧枝做接穗，采用插接法嫁接，接口用嫁接夹固定，用厚度为0.08mm自封袋(8*12cm)封口培养，伤口愈合后可适时炼苗去袋，常规管理即可完成资源活体保存。本发明解决了茄子抗性差的资源易丢失、生育期长茄子资源坐果难、野生砧培育周期长、砧穗亲和评价工作量大或鉴定环境差异影响评价等问题；操作简便、有利于后期果实离体抗病评价、品质测定等综合评估，从而加快茄子资源评鉴及利用进程。

说明书

技术领域

本发明涉及农业领域，具体涉及一种茄果蔬菜种质资源活体保存方法。

背景技术

茄子在我国广泛栽培，而青枯病(Ralstonia solanacearum)是危害茄科植物的一种毁灭性土传病害，病原为茄科劳尔氏菌。青枯病在世界各地均有发生，该病发生时，植株茎叶持绿，始发顶叶萎蔫，最后整株枯死，其危害大，造成损失重。我国北至甘肃，南到海南均有发生。在长江流域，发病可造成减产20％-30％，严重时达50％-60％。随着蔬菜集约化生产增强，茄子青枯病根治成为难点。

早期研究多集中在青枯病遗传规律、抗性品种筛选及病害的综合防控上。目前，对茄子青枯病仍无有效化学防控药剂，选育抗青枯病茄子品种成为病害防控最有效途径。茄子青枯病抗性遗传表现有隐性、不完全显性和单基因显性调控等模式，又受反交效应影响。因此茄子青枯病抗性遗传复杂，选育难度大，研究进展缓慢。

鉴于长江流域青枯病严重，在茄子资源鉴定筛选时往往会造成大量感病茄子优异资源丢失。当前生产中多采用抗病砧木嫁接栽培来防控青枯病，最常用的砧木是托鲁巴姆。然而，生产上托鲁巴姆等野生类型的茄子资源其种子萌发及幼苗初期生长速度极慢。

发明内容

本发明提供一种茄果蔬菜种质资源活体保存方法，利用周年生抗病茄子砧木高位嫁接，能够最大限度保存未知抗性和部分生育期长坐果难茄子种质资源，实现育种目标多样性需求，为加快育种进程奠定基础。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案实现：

一种茄果蔬菜种质资源活体保存方法，包括以下步骤：

S1、砧木、接穗准备：高位嫁接，砧木为野生托鲁巴姆，常规法育苗、移栽后打顶，保证侧枝生长，以0.4-0.6cm幼嫩侧枝或主枝为砧木嫁接；以0.3-0.4cm地方品种或商品种幼嫩侧枝做接穗。

S2、嫁接方法：插接法，将削好的接穗插入砧木纵切口，确保砧穗中心密接便于成活；

S3、接后管理：接穗插好后用平口或圆口嫁接夹夹牢固定，最后用厚度为0.08mm自封袋封好嫁接夹及接穗，袋内水汽充足，接口容易愈合；

S4、炼苗、脱袋：伤口愈合后，半开自封袋，适度炼苗，待接穗有新叶萌动，可全部打开自封袋，随着新叶生长，去掉自封袋，嫁接苗能健康生长；砧木生长旺盛，嫁接后注意整枝修剪和肥水管理，确保接穗生长；接穗生长初期，注意疏花疏果，做好固定支撑，防止高位嫁接枝条承重过大或因风而折断；

S5、越冬管理：气温低于15℃后将茄子整株修剪，修剪时高位嫁接接穗留5-10cm，砧木新生侧枝短截即可，待伤口干燥后带土坨移入大棚，假植后常规病虫害管理，冬季低温下根据情况多层覆盖越冬保存。

作为上述方案的优选，在步骤S1中，还包括种子处理及催芽：将抗病性尤其是青枯病抗性未知的接穗及砧木茄子种子，分别经55℃温汤浸种20min，用200mg/L的赤霉素浸泡种子24h，然后用4层纱布包好清水洗干净，将种子捞出后放置在全黑暗人工气候箱中，白天温度保持在28-32℃，夜间18-20℃，每天翻动一次，用清水投洗一次，4-5d开始出芽，50％种子露白后拌上适量细沙开始撒播，然后将穴盘置于昼夜温光周期条件下进行培养。

作为上述方案的优选，昼夜温光周期条件为：相对湿度50％～70％，光照3000～4000lx，白天温度25-30℃，16h，夜间温度17-18℃，8h，培养期间浇Hoagland's营养液。

作为上述方案的优选，在步骤S1中，还包括分苗：待幼苗长至2-3片真叶时，及时采用塑料钵或营养土方等分苗，以利于护根保苗。

作为上述方案的优选，在步骤S1中，移栽及砧木管理具体包括：高位嫁接砧木苗龄60d后即可进行桶栽，常规法培育砧木，砧木生育期间常规管理，注意整枝和防病虫，保证侧枝数量。

作为上述方案的优选，在步骤S1中，接穗标准为：接穗长2.0-3.5cm；幼嫩侧枝做接穗，茎粗0.3-0.4cm，嫁接时去除接穗叶片，保留叶柄及生长点；自根苗做接穗，要求自根苗真叶8-9片，叶片肥厚色浓，须根多，色白粗壮，现花蕾，生活力强。

作为上述方案的优选，在步骤S2中，插接法嫁接具体包括以下步骤：

S21、砧木准备：先用75％酒精消毒双面刀片，左手拇指和食指捏砧木侧枝生长点下1.0-2.0cm处，在砧木比接穗粗0.1-0.2cm幼嫩组织下方横断侧枝，最后左手拇指和食指捏砧木断口下1.0-1.5cm处，右手持双面刀沿侧枝断口中心纵切深度0.5-0.8cm；

S22、接穗准备：食指和拇指夹住其靠近生长点下2.5-3.5cm处，右手持刀片在手茎交接以下1.0cm处横切，然后在叶腋上1.0-1.5cm处去掉多余叶片，留侧枝或自根苗生长点。然后在接穗断口上0.6-1.0cm处呈30°角向前斜切，切口长度0.5-0.8cm，接着从背面再切一刀，角度与前者对称，切口成楔形、斜切面平整，切削接穗时速度要快，刀口要平、直，并且切口方向与子叶伸展方向平行；

S23、插接穗：将削好的接穗插入砧木纵切口，使砧穗中心密接，砧穗叶柄伸展方向对生，利于见光。

作为上述方案的优选，在步骤S3中，自封袋封口时确保接穗第一叶柄与自封袋封口平行。

作为上述方案的优选，在步骤S4中，嫁接后前2d应保证自封袋内水汽充足，以内表面有水滴而不滴下为宜，气温宜在15-30℃。

由于具有上述结构，本发明的有益效果在于：

本发明有效解决了茄子抗逆/病性差资源易丢失、生育期长茄子资源坐果难、野生砧培育周期长、砧穗亲和评价工作量大和鉴定环境差异大影响评价结果等问题；

本发明操作简便、便于资源保护利用、有利于果实离体抗病评价、生育期农艺性状动态观测、产量统计及果实品质等综合分析，从而加快茄子资源评鉴及利用进程。

具体实施方式

下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一：

以保存野生托鲁巴姆侧枝为砧木，以紫长茄或汉宝三号等商品种幼嫩侧枝为接穗嫁接。

1)种子处理及催芽：将抗病性尤其是青枯病抗性未知的紫长茄或汉宝三号接穗种子及砧木茄子种子，分别经55℃温汤浸种20min，用200mg/L的赤霉素浸泡种子24h，然后用4层纱布包好清水洗干净，将种子捞出后放置在全黑暗人工气候箱中，白天温度保持在28-32℃，夜间18-20℃，每天翻动一次，用清水投洗一次，4-5d开始出芽，50％种子露白后拌上适量细沙开始撒播。然后将穴盘置于昼夜温光周期条件下进行培养，所述的昼夜温光周期条件为：相对湿度50％～70％，光照3000～4000lx，白天温度25-30℃，16h，夜间温度17-18℃，8h，培养期间浇Hoagland's营养液；

2)分苗：待幼苗长至2-3片真叶时，及时采用塑料钵或营养土方等分苗，有利于护根保苗；

3)移栽及砧木管理：托鲁巴姆田间砧木，苗龄约60d后即可进行桶栽，常规法培育砧木，砧木生育期间常规管理，注意整枝和防病虫，保证侧枝数量，0.4-0.6cm的茄子幼嫩侧枝或主枝都均可用来做砧木嫁接；

4)接穗标准：紫长茄或汉宝三号幼嫩侧枝做接穗，接穗长2.0-3.5cm，茎粗0.3-0.4cm，嫁接时去除商品茄子接穗叶片，留叶柄及生长点。

5)插接法嫁接：托鲁巴姆砧木准备，先用75％酒精消毒双面刀片，左手拇指和食指捏托鲁巴姆侧枝生长点下方1.0-2.0cm处，在砧木0.4-0.6cm幼嫩组织下方横断侧枝，最后左手拇指和食指捏砧木断口下1.0-1.5cm处，右手持双面刀沿侧枝断口中心纵切深度0.5-0.8cm。接穗准备，食指和拇指夹住接穗靠近生长点下2.5-3.5cm处，右手持刀片在手茎交接以下1.0cm处横切，然后在叶腋上1.0-1.5cm处去掉多余叶片，留侧枝或自根苗生长点。然后在接穗断口上0.6-1.0cm处呈30°角向前斜切，切口长度0.5-0.8cm，接着从背面再切一刀，角度与前者对称，切口成楔形、斜切面平整。切削接穗时速度要快，刀口要平、直，并且切口方向与子叶伸展方向平行。将削好的接穗插入砧木纵切口，使砧穗中心密接。砧穗叶柄伸展方向对生，利于见光。接穗插入后用平口或圆口嫁接夹夹牢固定，最后用厚度为0.08mm自封袋(8*12cm)封好嫁接夹及接穗，确保接穗第一叶柄与自封袋封口平行。

6)嫁接后管理：嫁接后前2d注意观察自封袋内水汽充足，以内表面有水滴而不滴下为宜，气温在15-30℃。第6d，观察接穗有切口的叶柄是否脱落或者黄化，伤口是否愈合，若接口愈合较好，可半开自封袋，适度炼苗，待紫长茄或汉宝三号接穗有新叶萌动，即可完全打开自封袋，随新叶生长，接穗能健康生长，可根据情况去掉自封袋，商品种生长快，注意控制长势和疏花。果实较多时，注意做好支撑等辅助措施。

7)越冬管理：气温低于15℃后将茄子整株进行修剪，带土坨移入大棚，假植后常规病虫害管理，冬季低温多层覆盖进行保存。

8)成活率统计：以嫁接接穗成活数量占嫁接接穗总量的百分比计算成活率。统计结果表明，紫长茄或汉宝三号为接穗时，成活率均为100％，后期坐果正常。

实施例二：

以保存多年生野生托鲁巴姆侧枝为砧木，以白雪公主、咸丰红茄、红安圆茄、非洲引进茄子(生育期长，很难结实)等地方品种自根苗为接穗嫁接。

种子处理及催芽、分苗、移栽及砧木管理等步骤与实施例一相同，故不赘述。

1)高位嫁接砧木：托鲁巴姆田间砧木，0.4-0.6cm的茄子幼嫩侧枝或主枝都可以用来做砧木嫁接；

2)接穗标准：白雪公主、咸丰红茄、红安圆茄、非洲引进茄子自根接穗长2.0-3.5cm。幼嫩侧枝做接穗，茎粗0.3-0.4cm，嫁接时去除接穗叶片，留叶柄及生长点。

3)插接法嫁接：砧木准备同实施例一。接穗准备，食指和拇指夹住白雪公主、咸丰红茄、红安圆茄、非洲茄子接穗靠近生长点下2.5-3.5cm处，右手持刀片在手茎交接以下1.0cm处横切，然后在叶腋上1.0-1.5cm处去掉多余叶片，留侧枝或自根苗生长点。然后在接穗断口上0.6-1.0cm处呈30°角向前斜切，切口长度0.5-0.8cm，接着从背面再切一刀，角度与前者对称，切口成楔形、斜切面平整。切削接穗时速度要快，刀口要平、直，并且切口方向与子叶伸展方向平行。将削好的接穗插入砧木纵切口，使砧穗中心密接。砧穗叶柄伸展方向对生，利于见光。接穗插入后用平口或圆口嫁接夹夹牢，最后用厚度为0.08mm自封袋(8*12cm)封好嫁接夹及接穗，确保接穗第一叶柄与自封袋封口平行。

4)嫁接后管理：嫁接后前两天注意观察自封袋内水汽充足，以内表面有水滴而不滴下为宜。第6d，观察接穗有切口的叶柄是否脱落或者黄化，伤口是否愈合，若接口愈合较好，可半开自封袋，适度炼苗，待白雪公主、咸丰红茄、红安圆茄、非洲茄子接穗有新叶萌动，即可全部打开自封袋，随新叶生长，去掉自封袋，嫁接完成。

5)越冬管理：气温低于15℃后将茄子整株修剪，修剪时高位嫁接接穗留5-10cm，砧木新生侧枝短截即可，待伤口干燥后带土坨移入大棚，假植后常规病虫害管理，冬季低温下根据情况多层覆盖越冬保存。

6)嫁接成活率统计：以嫁接接穗成活数量占嫁接接穗总量的百分比计算成活率。统计结果表明：白雪公主、咸丰红茄、红安圆茄、非洲茄子为接穗时，成活率均为87.5％、100％、100％、95.0％、96.0％，后期坐果或生长正常。

本发明解决茄子抗逆/病性差资源易丢失、生育期长茄子资源坐果难、野生砧培育周期长、砧穗亲和评价工作量大和鉴定环境差异大影响评价结果等问题。

经探索，以托鲁巴姆为对象开展茄子活体高位嫁接研究，利用砧木幼嫩侧枝随时进行插接，接后用圆口或平口嫁接夹固定，自封袋密封接口与接穗，通过透明自封袋随时监测砧穗生长情况，嫁接一周左右松动自封袋炼苗，待伤口愈合、接穗不萎蔫即表示嫁接成功；成活接穗可作为中间砧木使用；结合多层覆盖技术，实现嫁接茄子周年生长和观测不同类型茄子砧穗亲和情况。

本发明操作简便、便于资源保护利用、有利于果实离体抗病评价、生育期农艺性状动态观测、产量统计及果实品质等综合分析，从而加快茄子资源评鉴及利用进程。

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。