一种研究鸡生殖细胞自噬的方法

摘要

一种研究鸡生殖细胞自噬的方法，属于生物技术领域。在生殖细胞中添加雷帕霉素激活细胞自噬，转染不同MOI值的GFP‑LC3慢病毒载体，在显微镜下观察细胞生长状态，排除MOI值过高导致细胞凋亡的分组。收集各组样品，EdU检测各组细胞的增殖效率，同时通过western‑blot检测游离的GFP蛋白和自噬标志蛋白LC3‑Ⅰ（16 ku）与LC3‑Ⅱ（14 ku）之间的转化和比例及荧光显微镜定位LC3蛋白在细胞中的表达情况综合评判该MOI值在鸡生殖细胞中的适用性。本发明操作简单，切实可行，探讨GFP‑LC3慢病毒载体在鸡生殖细胞中的转染条件是将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。