铁钉菜提取物在制备海藻源护肤品中的应用

摘要

本发明公开一种铁钉菜提取物在制备海藻源护肤品中的应用，研究表明，铁钉菜提取物具有较强的抗氧化、抗酪氨酸酶活性，有望使之成为开发海藻源抗氧化型、美白型护肤品的良好基料。

说明书

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及的是铁钉菜提取物在制备海藻源护肤品中的应用。

背景技术

近年来，各种具有美白、保湿、抗衰老、祛斑等功效的护肤品层出不穷，制备上述功效护肤品的其中一种技术是使用作为添加剂的植物提取物，有研究指出海藻由于生境的特殊性使其具有与陆岸植物差异较大的化学组成，存在着多糖、多酚等各种抗氧化活性成分，是天然抗氧化护肤品开发的潜在资源。

分布在我国东南沿海中、高潮带岩礁的褐藻铁钉菜(Ishige okamurae)系北太平洋西部特有的可食海藻，水提醇沉法(水醇法)系指在样品的水提浓缩液中加入乙醇使达不同含醇量，使得某些化学成分在醇溶液中溶解度降低而析出沉淀，固液分离后分别获得水提醇沉物与水提醇沉上清部分，该法可避免毒性较大有机溶剂的应用，降低后续处理的成本，是精制水提液的简单方法。通过该法可由铁钉菜得到铁钉菜水提醇沉物(EWEAPI)与水提醇沉上清部分(SWEAPI)的提取物，而铁钉菜提取物作为海藻源抗氧化型、美白型护肤品开发的相关研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种铁钉菜提取物在制备海藻源护肤品中的应用。

为了达成上述目的，本发明的解决方案是：

铁钉菜提取物在制备海藻源护肤品中的应用。

所述铁钉菜提取物是由下列方法制备的：

(1)先取去杂的新鲜铁钉菜洗净沥干后，经组织粉碎机粉碎成铁钉菜粉末；

(2)然后取粉碎后的铁钉菜粉末，按照铁钉菜粉末:蒸馏水＝1g:30mL的比例混匀，90～100℃下水浴提取两次，每次1～2h，抽滤取滤液；

(3)然后将所得滤液减压浓缩至滤液原体积的23％～43％，加入无水乙醇使混合体系中无水乙醇的体积分数为75％，在4℃下醇沉24h后，离心，得上清液与醇沉物；

(4)取上清液减压浓缩后，经真空冷冻干燥，得铁钉菜水提醇沉上清部分，即本发明所述铁钉菜提取物。

所述减压浓缩在65℃、–0.09MPa的条件下进行。

所述离心的转速为4000r/min，所述离心的时间为5min。

所述真空冷冻干燥的温度为–80℃。

采用上述技术方案后，本发明铁钉菜提取物在制备海藻源护肤品中的应用，研究表明，铁钉菜提取物具有较强的抗氧化、抗酪氨酸酶活性，有望使之成为开发海藻源抗氧化型、美白型护肤品的良好基料。

附图说明

图1为铁钉菜水提醇沉上清部分对DPPH自由基的清除作用示意图；

图2为铁钉菜水提醇沉上清部分对羟基自由基的清除作用示意图；

图3为铁钉菜水提醇沉上清部分对酪氨酸酶活性的抑制作用示意图。

具体实施方式

为了进一步解释本发明的技术方案，下面通过具体实施例来对本发明进行详细阐述。

实施例

1、铁钉菜提取物的制备

(1)先取去杂的新鲜铁钉菜洗净沥干后，经组织粉碎机粉碎成铁钉菜粉末；

(2)然后取粉碎后的铁钉菜粉末，按照铁钉菜粉末:蒸馏水＝1g:30mL的比例混匀，90～100℃下水浴提取两次，每次1～2h，抽滤取滤液；

(3)然后在65℃、–0.09MPa下，将所得滤液减压浓缩至滤液原体积的33％，加入无水乙醇使混合体系中无水乙醇的体积分数为75％，在4℃下醇沉24h后，然后以4000r/min的转速离心5min，得上清液与醇沉物；

(4)在65℃、–0.09MPa下，取上清液减压浓缩后，经–80℃真空冷冻干燥，得铁钉菜水提醇沉上清部分，即本发明的铁钉菜提取物。

2、铁钉菜水提醇沉上清部分的抗氧化活性

2.1测定方法

参照刘冬冬等[刘冬冬,田亚平.酶解条斑紫菜制备抗氧化肽及综合利用[J].食品与生物技术学报,2016,35(2):166-172.]的方法测定DPPH自由基清除活性，以维生素C作阳性对照；参照黄晓冬等[黄晓冬,蔡建秀,许丽璇,等.桦褐孔菌总黄酮体内外抗氧化作用[J].食品与生物技术学报,2012,31(10):1062-1068.]的方法测定羟基自由基清除活性，以2,6-二叔丁基对甲酚BHT为阳性对照。以样液浓度对清除率拟合回归方程，求得半数效应浓度EC₅₀。

2.2结果与分析

2.2.1铁钉菜水提醇沉上清部分(SWEAPI)对DPPH自由基的清除作用

不同质量体积浓度的SWEAPI样液对DPPH自由基的清除作用如图1所示。在浓度0～2.0mg/mL范围内，SWEAPI对DPPH自由基清除的量效关系均随样液浓度的增大而增强，当浓度为2.0mg/mL时，DPPH自由基清除率可达(73.66±1.53)％，剂量-效应呈现极显著的正相关(P＜0.01)，满足线性回归方程y＝36.218x+7.230(R²0.9526，P<0.01)。由此方程可计算出SWEAPI清除DPPH自由基的半效应浓度EC₅₀为1.18mg/mL，与本实验测得的维生素C的半效应浓度0.054mg/mL具有等效作用。

2.2.2铁钉菜水提醇沉上清部分(SWEAPI)对羟基自由基的清除作用

在质量体积浓度为0～8.0mg/mL的范围内，SWEAPI对羟基自由基的清除能力随SWEAPI质量浓度的增大而增强(如图2所示)，量效关系满足logistic方程，经拟合并计算出其半效应浓度EC₅₀为5.08mg/mL，与人工合成抗氧化剂2,6-二叔丁基对甲酚BHT的半效应浓度3.04mg/mL等效。

3、铁钉菜水提醇沉上清部分的抗酪氨酸酶活性

3.1测定方法

参照石嘉怿[石嘉怿.青梅花提取物的酪氨酸酶抑制作用及机理研究[J].食品工业科技,2011,32(10):205-208.]的方法略加修改。

具体步骤为：分别取不同质量浓度的1.0mL样液、0.4mL 100U/mL酪氨酸酶溶液(50mmol/L pH＝6.8的磷酸盐缓冲液PBS配制而成)以及2.8mL 0.5mmol/L多巴(L-DOPA)底物溶液充分混匀后，37℃水浴保温10min，测混合溶液在波长475nm处的吸光度值，实验重复3次，取平均值。酶活性抑制率的公式：I％＝[1-(As-A_b)/(A₀-A₁)]×100﹪；式中As为样液组的吸光度值，A₀为空白对照组(以PBS代替样液)的吸光度值，A₁为空白对照组背景吸光度值(以PBS代替样液与酪氨酸酶溶液)，A_b为样液背景吸光度值(以PBS代替酪氨酸酶溶液)。以样液浓度对抑制率拟合回归方程，求得半数抑制浓度IC₅₀。

3.2铁钉菜水提醇沉上清部分(SWEAPI)的抗酪氨酸酶活性

不同质量浓度的SWEAPI对酪氨酸酶活性的影响如图3所示。由图3看到，SWEAPI具有较强的酪氨酸酶活性抑制作用，在质量浓度为0.25～6.0mg/mL范围内，其酶活抑制率为(24.51±2.04)％～(88.37±5.43)％，酶活抑制率随样液质量浓度的增大而增强，呈现极显著正相关的量效关系(P＜0.01)，经非线性方程拟合并计算出其对酪氨酸酶活性的半抑制浓度IC₅₀为1.27mg/mL。

综上研究表明：采用水醇法制得铁钉菜水提醇沉上清部分(SWEAPI)的提取物，经DPPH自由基清除反应发现SWEAPI具有较强的DPPH自由基清除能力，半效应浓度EC₅₀为1.18mg/mL；清除羟基自由基的EC₅₀为5.08mg/mL，表现出较强的抗氧化活性。研究指出海藻由于生活环境的特殊性使其具有与陆岸植物差异较大的化学组成，存在着多糖、多酚等各种抗氧化活性成分，是天然抗氧化剂开发的潜在资源。SWEAPI的抗氧化活性可能与其含量较高的多酚含量(8.30％)有关。多酚的酚羟基结构往往使其具有较强的还原性和自由基捕捉活性，这种活性以及络合酪氨酸酶分子中Cu²⁺的可能性还可使之具有抑制该酶活力的作用。因此本实验中SWEAPI亦表现出较强的酪氨酸酶抑制活性，半抑制浓度IC₅₀为1.27mg/mL，酪氨酸酶过量表达与人体雀斑、黄褐斑与老年班等色素沉着性疾病有关。因此，SWEAPI的抗氧化、抗酪氨酸酶活性有望使铁钉菜提取物成为开发海藻源抗氧化型、美白护肤品的良好基料。

上述实施例和图式并非限定本发明的产品形态和式样，任何所属技术领域的普通技术人员对其所做的适当变化或修饰，皆应视为不脱离本发明的专利范畴。