重组酶硫酸乙酰肝素3‑O磺基转移酶的表达方法及其在合成硫酸乙酰肝素中的应用

摘要

本发明公开了重组酶硫酸乙酰肝素3‑O磺基转移酶的表达方法及其在合成硫酸乙酰肝素中的应用。利用Wistar大鼠脑组织来源的RNA为模板进行反转录，得到3‑O‑硫酸转移酶‑1的互补脱氧核糖核酸序列，进行密码子优化并切除信号肽；优化后的片段与pET‑28a质粒连接，导入宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。得到表达后，使用镍亲和柱进行纯化去除杂蛋白；并利用透析法对包涵体进行复性；通过3’‑磷酸腺苷‑5’‑磷酰硫酸再生系统，对复性后蛋白进行酶活检测，并应用于底物N‑脱乙酰/硫酸化的heparosan(NSNAH)的硫酸化修饰中。本发明可有效地获得重组酶硫酸乙酰肝素3‑O磺基转移酶的表达，并成功用于合成硫酸乙酰肝素。