药物组合物及其在制备治疗肺炎或/和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物中的应用

摘要

本发明涉及生物医药技术领域，是一种药物组合物及其在制备治疗肺炎或/和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物中的应用；本发明药物组合物可用于制备治疗肺炎和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物；本发明药物组合物不仅对流感病毒引起的小鼠肺炎模型具有治疗作用，与常规抗病毒药物利巴韦林相当，而且本发明药物组合物能够增强流感病毒引起的小鼠肺脏降低的NK细胞活性，作用与现有药物银翘散相当；且本发明药物组合物对模型小鼠体重的维持作用大大好于利巴韦林和银翘散，说明本发明药物组合物具有显著提高小鼠免疫系统功能的作用；同时本发明药物组合物较现有药物银翘散大大降低了服用量，降低了生产成本，且药效成分明确，具有很好的应用前景。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，是一种药物组合物及其在制备治疗肺炎或/和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物中的应用。

背景技术

急性上呼吸道感染多由病毒引起，传染性强，发病率高，容易引起暴发流行或大流行。其主要通过含有病毒的飞沫进行传播。病毒易发生基因重组重排，产生突变体，使得临床药物的应用滞后于病毒变异的速度，出现药物治疗疗效低或无效的现象。

免疫系统在对抗病原微生物过程中发挥着重要作用。研究表明提高机体免疫功能能够增强机体的抗病毒能力。自然杀伤（NK）细胞是抗病毒感染免疫防御的第一道防线。因为NK细胞无需预先致敏，可直接杀伤病毒及被病毒感染的靶细胞。因此，在发生病毒感染时，NK细胞总是先于T、B等免疫细胞，最早发挥抗病毒免疫应答效应。通过药物治疗增强NK细胞活性，提高免疫细胞的监视作用，进而增强机体的抗病毒能力，这对于病毒变异引起的治疗无效有重要的意义。

银翘散出自清代吴瑭所著《温病条辨》，为辛凉解表的代表方剂，其主要功用为辛凉透表，清热解毒，是临床上治疗流行性感冒的常用中医方剂。但现有银翘散方剂中药味较多，服用量大，生产成本高。

发明内容

本发明提供了一种药物组合物及其在制备治疗肺炎或/和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物中的应用，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有银翘散方剂中药味较多，服用量大，化学成分不明确，生产成本高的问题。

本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种药物组合物，原料按重量份数由牛蒡苷4份至6份、大豆素8份至12份、甘草酸4份至6份、甘草苷1.6份至2.4份组成。

下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：

上述药物组合物原料按重量份数由牛蒡苷5份、大豆素10份、甘草酸5份、甘草苷2份组成。

上述药物组合物为颗粒剂或胶囊剂或丸剂或片剂或散剂或口服剂。

本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种药物组合物在制备治疗肺炎或/和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物中的应用。

本发明药物组合物可用于制备治疗肺炎和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物；本发明药物组合物不仅对流感病毒引起的小鼠肺炎模型具有治疗作用，与常规抗病毒药物利巴韦林相当，而且本发明药物组合物能够增强流感病毒引起的小鼠肺脏降低的NK细胞活性，作用与现有药物银翘散相当；且本发明药物组合物对模型小鼠体重的维持作用大大好于利巴韦林和银翘散，说明本发明药物组合物具有显著提高小鼠免疫系统功能的作用；同时本发明药物组合物较现有药物银翘散大大降低了服用量，降低了生产成本，且药效成分明确，具有很好的应用前景。

附图说明

附图1为本发明药物组合物和现有药物对流感病毒感染小鼠肺脏NK细胞活性的影响对比图。

具体实施方式

本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。

实施例1，该药物组合物原料按重量份数由牛蒡苷4份至6份、大豆素8份至12份、甘草酸4份至6份、甘草苷1.6份至2.4份组成。

实施例2，该药物组合物原料按重量份数由牛蒡苷4份或6份、大豆素8份或12份、甘草酸4份或6份、甘草苷1.6份或2.4份组成。

实施例3，作为上述实施例的优化，该药物组合物原料按重量份数由牛蒡苷5份、大豆素10份、甘草酸5份、甘草苷2份组成。

实施例4，作为上述实施例的优化，该药物组合物为颗粒剂或胶囊剂或丸剂或片剂或散剂或口服剂。本发明药物组合物可按常规方法制成各种剂型。

实施例5，该药物组合物在制备治疗肺炎或/和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物中的应用。

上述实施例得到的药物组合物在制备治疗肺炎或/和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物中的应用如下：

1.实验材料及药品

流感病毒鼠肺适应株A/H1N1/Puerto Rico/8/34，简写为PR8，购自中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感室，中国中医科学院生物安全实验室常规鸡胚传代，-80℃冰箱保存。

小鼠及C57BL/6小鼠（SPF/VAF级），雌雄各半，体重为14±1g，由北京金牧阳试验动物技术有限公司提供，动物许可证号SCXK(京)2014-0004。

利巴韦林用于呼吸道病毒感染性疾病的预防和治疗。本实验中作为抗流感病毒的阳性对照药物，小鼠给药剂量为82.5mg/kg/d。

雷利度胺用于多发性骨髓瘤的治疗；其作用机制是增强自然杀伤细胞活性。本实验中作为提高NK细胞活性的阳性对照药物，小鼠给药剂量为100mg/kg/d。

其它药物购自上海将来试剂有限公司，包括L-薄荷醇（左旋薄荷醇，薄荷脑）、咖啡酸、牛蒡苷、胡薄荷酮（(R)-(+)-长叶薄荷酮）、薄荷酮、大豆素、染料木素、甘草酸、甘草苷。

参考文献中各药物的小鼠给药剂量，制定本试验的小鼠剂量。

原料的筛选

原料药物的筛选见表1所示；表1中按照9因素2水平正交设计各组药物；将ICR小鼠按体重随机分为15组，分别为正常对照组、模型组、利巴韦林组、各原料药物组（即表1中的12组药物），每组10只，各组的小鼠给药量为0.2mL/10g。除正常对照组外，其余各组将小鼠麻醉后，以15个LD₅₀流感病毒鼠肺适应株PR8滴鼻感染，每只30μL；于感染后2h开始给药，每次按0.2mL/10g灌胃给药，每天1次，连续5天，正常对照组和模型组给予等体积的蒸馏水；治疗第5天称重后解剖，称取肺重，计算肺指数及肺指数抑制率，结果采用组间比较t检验进行统计学处理。

肺指数=肺湿重(g) /体重（g）

肺指数抑制率=（模型组肺重-受试药物组肺重）/（模型组肺重-正常对照组肺重）×100%

原料筛选中各组对PR8感染小鼠肺炎模型的治疗作用（n=10）见表2所示；表2中的1至12对应表1中的12组药物，表2结果显示，采用甲型H1N1流感病毒PR8感染正常小鼠后，小鼠肺指数明显增高，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.01）；感染当天开始给予受试药物治疗5天，所试的不同药物组合物组肺指数均显著降低，其中第2组、第8组和第11组对流感病毒引起的肺指数增加的抑制率高于其余各受试药物组（P<0.05）；并且小鼠体重也显著高于模型组，同时也高于其余各受试药物组和阳性对照药利巴韦林组。其中第11组（即本发明药物组合物）在所有受试药物中，对小鼠肺炎模型的抑制率最强，其小鼠体重降低也最低，说明本发明药物组合物较其它各组对肺炎的抑制率更强，效果更好，所以确定原料的筛选以第11组为准，即本发明药物组合物（原料组成牛蒡苷、大豆素、甘草酸和甘草苷）继续进行研究。

本发明药物组合物原料组成牛蒡苷、大豆素、甘草酸和甘草苷中各药物配合的进一步研究

将ICR小鼠按体重随机分为10组，分别为正常对照组、模型组、利巴韦林组、本发明药物组合物原料拆分组（将其拆分为7组），每组10只，本发明药物组合物原料拆分组（将其拆分为7组）的配比见表3所示；除正常对照组外，将小鼠麻醉后，以15个LD₅₀流感病毒鼠肺适应株PR8滴鼻感染，每只30μL。于感染后2h开始给药，每次按0.2mL/10g灌胃给药，每天1次，连续5天，正常对照组和模型组给予等体积的蒸馏水。治疗第5天称重后解剖，称取肺重，计算肺指数及肺指数抑制率。结果采用组间比较t检验进行统计学处理。

肺指数=肺湿重(g) /体重（g）

肺指数抑制率=（模型组肺重-受试药物组肺重）/（模型组肺重-正常对照组肺重）×100%

正常对照组、模型组、利巴韦林组、本发明药物组合物原料拆分组（将其拆分为7组）对PR8感染小鼠肺炎模型的治疗作用（n=10）见表4所示；从表3和表4可以看出，采用甲型H1N1流感病毒PR8感染正常小鼠后，小鼠肺指数明显增高，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.01）。按照正交表设计的试验组，目的是通过拆分，考察本发明药物组合物原料拆分组（将其拆分为7组）中各药物的活性。感染当天开始给予受试药物治疗5天，所试的不同药物组合物组群，除第1组和第2组外，其余各组肺指数均有降低；本发明药物组合物原料拆分组（将其拆分为7组）的抑制率均小于本发明药物组合物（原料组成牛蒡苷、大豆素、甘草酸和甘草苷）的抑制率。

本发明药物组合物对流感病毒感染小鼠肺脏NK细胞活性的影响

将C57BL/6小鼠按体重随机分为5组，分别为正常对照组、模型组、雷利度胺组、利巴韦林组和本发明药物组合物组（即牛蒡苷+大豆素+甘草酸+甘草苷），每组3只。除正常对照组外，将小鼠麻醉后，以15个LD₅₀流感病毒鼠肺适应株PR8滴鼻感染，每只30μL。于感染后2h开始给药，每次按0.2mL/10g灌胃给药，每天1次，连续5天，正常对照组和模型组给予等体积的蒸馏水。治疗第5天称重后解剖，摘取肺脏，制备肺脏单细胞悬液，去除红细胞，将所得白细胞与小鼠Ly49D单克隆抗体和Ly49H单克隆抗体4℃避光孵育30min；同时制备同型对照组，阴性对照组及各单抗对照。PBS缓冲液洗2次，以4%多聚甲醛固定，采用流式细胞仪检测。结果采用组间比较t检验进行统计学处理。

本发明药物组合物和现有药物对流感病毒感染小鼠肺脏NK细胞活性的影响对比图见图1所示，图1中的化合物组合即为本发明药物组合物（牛蒡苷+大豆素+甘草酸+甘草苷）；从图1可以看出，小鼠感染流感病毒后，肺脏Ly49D+单阳性NK细胞、Ly49H+单阳性NK细胞和Ly49D+Ly49H+双阳性NK细胞均显著减低（P<0.01）；经各组药物治疗后，对NK细胞表面Ly49D⁺和Ly49H⁺抗原表达均有显著的促进作用（P<0.01，P<0.05）；对流感病毒模型小鼠肺脏NK细胞活性，本发明药物组合物具有显著的促进活性，作用与银翘散组相当；同时现有银翘散的成人服用量为18g/人/d，本发明药物组合物的成人服用量为1.664g/人/d，从而大大减少了服用量，降低了生产成本。

综上所述，本发明药物组合物可用于制备治疗肺炎和增强上呼吸道感染中自然杀伤细胞活性药物；本发明药物组合物不仅对流感病毒引起的小鼠肺炎模型具有治疗作用，与常规抗病毒药物利巴韦林相当，而且本发明药物组合物能够增强流感病毒引起的小鼠肺脏降低的NK细胞活性，作用与现有药物银翘散相当；且本发明药物组合物对模型小鼠体重的维持作用大大好于利巴韦林和银翘散，说明本发明药物组合物具有显著提高小鼠免疫系统功能的作用；同时本发明药物组合物较现有药物银翘散大大降低了服用量，降低了生产成本，且药效成分明确，具有很好的应用前景。

以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。