一种从猪精液中分离纯化精子细胞和外泌体的方法

摘要

本发明提供一种从猪精液中分离纯化精子细胞和外泌体的方法，步骤为：采集公猪精液按比例稀释，经过滤后离心分离沉淀和上清液；沉淀用体细胞裂解液裂解后再经离心沉降精子细胞得到精子细胞沉淀；上清液离心后保留上清，连续过滤除掉其中的细胞碎片，再通过超高速离心沉淀exosome，加入PBS溶液悬浮exosome。抽提精子细胞和exosome悬浮液中的总RNA，反转录mRNA和miRNA，并通过定量标记mRNA和miRNA对细胞和exosome纯度进行检测。本发明方法可提高猪精液精子细胞和exosome的分离准确率，并有效保证分离后的精子细胞和exosome的纯度，操作方法简单易行、杂质少。