一种氯喹在制备提高黄颡鱼精子质量药物中的应用

摘要

本发明公开了一种氯喹在制备提高黄颡鱼精子质量药物中的应用，应用过程包括向雄性黄颡鱼腹腔中注射一定浓度的氯喹。对于成年雄性黄颡鱼，催产前腹腔注射氯喹剂量为0.05‑1µmol/100g。将药物氯喹应用到黄颡鱼中，用于提高黄颡鱼的精子活力，黄颡鱼属于我国重要的淡水名优水产品，年养殖量达几十万吨，提高其精子活力，进而提高受精率，具有十分重要的前景和意义。选用的氯喹药物属于一种治疗人类多种寄生虫病的常用药物，副作用小。将氯喹应用到黄颡鱼中，对生物体影响很小，有利于推广发展。

说明书

技术领域

本发明涉及黄颡鱼养殖领域，更具体涉及一种氯喹在制备提高黄颡鱼精子质量药物中的应用，它能用于促进黄颡鱼精子质量(如精子活力、精子受精率等)的提高，为黄颡鱼的遗传育种和资源可持续发展提供帮助。

背景技术

黄颡鱼是我国江河、湖泊中的一种重要的经济鱼类，对生态环境适应性较强，广泛分布于我国淡水水体中。因其具有肉质细嫩，营养丰富，含肉率高，除脊刺外没有肌间刺等优点，颇受广大消费者欢迎(黄峰等，1999)。近年来，由于商品黄颡鱼主要靠天然捕捞，滥捕现象日益严重。加之湖泊河流受农药、工业废水等污染程度加剧之因素，黄颡鱼自然受到一定程度的破坏，保护黄颡鱼资源及相关的研究势在必行(杨彩根等，2003)。黄颡鱼繁殖亲本配子(精子和卵子)的质量是影响繁殖性能的关键因素之一。它们与胚胎的发育及仔、稚、幼鱼的成活率和生长都有直接关系。因此，在黄颡鱼的繁殖过程中精子与卵子质量受到越来越多的关注。

在过去数十年来，虽然两种配子(精子和卵子)的质量对于受精成功、发育、后代的存活率都有着重要联系，但是相对于精子质量，水产养殖业更关注于卵子和仔鱼质量。在性别选择和精子竞争存在的情况下，精子质量研究已经引起了人们在其提高生殖成功率和维持谱系的基因多样性上广泛兴趣。目前，尚未见到氯喹(chloroquine)应用于鱼类包括黄颡鱼的精子质量的研究中。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种氯喹在制备提高黄颡鱼精子质量药物中的应用。方法易行，操作简便，氯喹(chloroquine)有效的提高了黄颡鱼精子活力和受精率，进一步提高了黄颡鱼的繁殖能力。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种氯喹在制备提高黄颡鱼精子质量药物中的应用，应用过程包括向雄性黄颡鱼腹腔中注射一定浓度的氯喹。

具体的，对于成年雄性黄颡鱼，催产前腹腔注射氯喹剂量为0.05-1μmol/100g，优选剂量为0.1μmol/100g体重。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和效果：

1、这是首次将药物氯喹应用到黄颡鱼中，用于提高黄颡鱼的精子活力，黄颡鱼属于我国重要的淡水名优水产品，年养殖量达几十万吨，提高其精子活力，进而提高受精率，具有十分重要的前景和意义。

2、本发明选用的氯喹药物属于一种治疗人类多种寄生虫病的常用药物，副作用小。将氯喹应用到黄颡鱼中，对生物体影响很小，有利于推广发展。

3、本发明第一次具体阐述了黄颡鱼精卵比例对于黄颡鱼受精率的影响，明确了在高受精率下，准确的精子和卵子数目比例，这在黄颡鱼生产上具有十分重要的意义。

具体实施方式

下面实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。在不违背本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

实施例1：

一种氯喹在制备提高黄颡鱼精子质量药物中的应用：其应用过程是：

本例以成年雄性黄颡鱼为研究对象，说明本发明。

选取二龄性成熟雄性黄颡鱼20尾随机分为5组，其中1组为对照组，四组为实验组，实验组进行不同剂量氯喹(chloroquine)胸腔注射，每条鱼每次注射1ml，具体如表1所示。

组别1234对照组剂量(μmol)0.050.10.51/

注:氯喹稀释在生理盐水溶液，对照组只进行生理盐水溶液注射

24h后收集各组精子样本，在每一组中，用精子保存液(63mM NaCl,19mM KCl,1.3m M CaCl2,4.7mM MgSO4·7H2O,2.5mM NaHCO3,pH 7.4)对精子进行稀释并达到6.0×10⁸sperms/mL浓度。通过倍增精子浓度和样本体积对每个样本的总精子数量进行计算。借助计算机辅助精子分析(CASA>

精子活力指标：直线性系数(LIN＝VSL/VCL×100)；平均路径速度(VAP)；曲线速度(VCL)，也称为轨迹速度；直线前进速度(VSL)；鞭打频率(BCF)。

选择10×相差显微镜目镜来分析每一样本的精子，精子运动，并记录下至少三处随机选择区域的数据。

结果显示，随着氯喹剂量提高，BCF逐渐上升并在0.5μmol浓度组达到最大值，随后在1000μM实验组下降。与对照组相比，0.05μmol、0.1μmol和0.5μmol浓度实验组显著提高L IN百分率。在精子活动过程中，选择7个时间点并计算来评估精子活动。随着时间和浓度的变化，精子活力相关的动力学参数先上升之后逐渐下降。当检测0.1μmol实验组时，平均路径速度(VAP)，直线前进速度(VSL)和曲线速度(VCL)分别在6，4和4秒达到最大值。20秒后，VAP,VSL和VCL逐渐下降并直到精子死亡(见表1-4)。

注：BCF为鞭打频率，LIN为直线性系数(VSL/VCL)，VAP为平均路径速度，VSL为直线前进速度，VCL为曲线速度。

试验表明，腹腔注射氯喹(chloroquine)的4个黄颡鱼实验组(0.05μmol,0.1μmol,0.5μmol,1μmol)中，与对照组相比，0.05μmol,0,1μmol,0.5μmol三个实验组精子活力提高明显，其中0.1μmol升高最显著。

精子的受精能力也是评估精子质量的一项重要实验。通过预备实验对精/卵比值进行优化来分析实验组(0.1μmol氯喹)和对照组的精子孵化率。尤其，包含2.5g卵子(大约600粒/g)的每一小组分别与约为6.0×10⁸sperms/ml浓度的精子体积梯度(10,20,30,40,50μl)进行人工受精。室温条件下胚胎在曝气水中进行孵化。受精后大约16h对受精率进行记录和评估(见表5)。

试验结果表明氯喹处理组的受精率明显比对照组高。

因此，综合看来，腹腔注射氯喹(chloroquine)剂量0.1μmol/100g和精/卵比值为1.8×10⁷sperms:1500eggs，可以较好的提高黄颡鱼精子活力和受精率。

通过实验对精/卵比值进行优化来分析实验组(0.1μmol)和对照组的精子孵化率，发现明显提高，有利于提高黄颡鱼的繁殖能力。

表1精子的动力学参数(LIN和BCF)

注：BCF为鞭打频率，LIN为直线性系数(VSL/VCL)。

表2精子的动力学参数(VAP)。

注：VAP为平均路径速度。

表3精子动力学参数(VSL)。

注：VSL为直线前进速度。

表4精子动力学参数(VCL)

注：VCL为曲线速度。

表5黄颡鱼的受精率统计