无根藤在制备治疗和/或预防高脂血症药物方面的新用途

摘要

本发明涉及无根藤的新用途，即无根藤在制备治疗和/或预防高脂血症药物方面的新用途，特别是无根藤水提物及无根藤生物碱在制备治疗和/或预防高脂血症药物方面的新用途。

说明书

技术领域

本发明涉及无根藤的新用途，特别是无根藤水提取物及无根藤生物碱的新用途，即在制备治疗和/或预防高脂血症药物方面的新用途。

背景技术

高脂血症，是各种心血管疾病的主要诱因，该病对身体的损害是隐匿、逐渐、进行性和全身性的。随着血脂的升高及血脂异常时间的延长，它会引发动脉粥样硬化、冠心病、高血压、糖尿病、中风、脂肪肝等多种疾病。这些心脑血管疾病的发病率高，危害大，病情进展凶险，其死亡率约占人类总死亡率的半数左右。根据流行病学统计资料显示，患高脂血症人群发病的可能性要比同年龄别组的正常人群高，其发病率要高出4倍。

随着人们生活水平的不断提高，血脂异常还将呈现明显的增长趋势。高脂血症在中老年人当中发病率高，随着我国步入老龄化社会，高脂血症的发病率日益增高，逐渐成为我国全民保健中一个中药内容。高脂血症人群的不断增加，以及人们对其危害性认识的提高，对降血脂药物的需求不断扩大，令人瞩目的是，降血脂药物保持着每年9％的快速增长态势。因此，研究和开发新型降血脂药物具有重大的社会效益和经济效益。

目前，临床上用于治疗血脂异常的药物包括：他汀类、贝特类、烟酸类、树脂类、胆固醇吸收抑制剂和抗氧化剂。他汀类药物具有确切的疗效，已成为大多数临床医生的首选药物。但临床结果显示，5％服用他汀类或贝特类的患者以及30％服用烟酸的患者由于出现严重的不良反应而中断治疗，影响了血脂的正常治疗。

然而，中药治疗疾病副作用小，不良反应少，比起西药更为国人所接受。高脂血症是现代医学的名词，中医学并无高脂血症的名称，根据其临床表现归入“眩晕”、“胸痹”、“中风”、“血瘀”、“痰湿”等病证范畴。现代多数学者认为高脂血症的基本病理变化属本虚标实，本虚属肝、脾、肾气虚，标实为痰浊、血瘀。属气血津液病变范畴，与痰浊、瘀血等证相似，可对此辨证施治。

无根藤常用于治疗感冒发热,疟疾,急性黄疸型肝炎、咯血、尿血、泌尿系结石、肾炎水肿等多种疾病。无根藤的化学成分主要为生物碱、木质素、黄酮类、芳香族醛类、甘油酯类、甾醇类、氨基酸等。无根藤生物碱具有抗肿瘤、抗病毒、抗寄生虫、降血压、抗血小板凝集等多种生物活性。

目前没有文献资料提到樟科无根藤或无根藤生物碱可用于治疗和/或预防高脂血症。

发明内容

本发明的目的是提供无根藤在制备治疗和/或预防高脂血症药物方面的新用途；

本发明的目的是提供无根藤水提物在制备治疗和/或预防高脂血症药物方面的新用途；

本发明的另一目的是提供无根藤生物碱在制备治疗和/或预防高脂血症药物方面的新用途；

本发明的另一目的是提供无根藤水提物的制备方法；

本发明的另一目的是提供无根藤生物碱的制备方法。

本发明的目的是通过下列的技术方案实现的：

本发明原料来源：

无根藤：为樟科植物无根藤CassythafiliformisLinn.的干燥全草。收载于《广西壮族自治区壮药质量标准》第二卷，中医味淡，性凉，归肝、肾经，功能清热利湿，凉血解毒。用于结膜炎，黄疸型肝炎，小儿疳积，水肿，咯血，疮痈，烫伤。壮医味甜、苦，性寒。功能清热毒，除湿毒，通龙路。用于结膜炎，咳嗽，黄疸，痢疾，疳积，鼻出血，尿血，水肿，痈疮，疥疮，烫伤。

高脂血症是一种常见的心血管疾病，临床表现为高胆固醇血症(TC升高)和高甘油三脂血症(TG升高)，或二者兼高。流行病学研究表明，每降低1％的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)就能够降低1％的心血管疾病的发生，每增加1％的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)就能够降低3％的发病。发明人在研究高脂血症的治疗过程中发现，无根藤具有降低TC、TG和LDL并同时升高HDL的作用，从而能有效治疗高脂血症。

本发明专利临床应用的安全性较高，在治疗高脂血症的药物治疗中不失为一种好药，其拓宽了治疗高脂血症的新方法，同时为患者解决了现有技术治疗高脂血症时出现的不良反应。

因此，申请人提供无根藤、无根藤水提取物及无根藤生物碱用于治疗治疗和/或预防高脂血症药物方面的新用途。

本发明公开了无根藤水提物在制备治疗和/或预防高脂血症药物的应用，所述无根藤水提物的制备包括以下步骤：

取无根藤，加药材重量5-7倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳调药液pH为8-9，保持微沸20-60min，抽滤，残渣再加药材重量3-5倍水煎提1-3次，每次煎煮1-3小时，趁热抽滤，合并提取液，在60-70℃条件下，用30％-40％的酸性溶液调pH至5.0-5.5，搅匀后静置16-30h，抽滤，沉淀物水洗至pH为6.5-7.5，55℃-75℃真空干燥，得无根藤水提物。

本发明公开了无根藤水提物在制备治疗和/或预防高脂血症药物的应用，所述无根藤水提物的制备优选的包括以下步骤：

取无根藤，加药材重量6倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8.5，在pH8.5的条件下，保持微沸30min，趁热抽滤，残渣再加药材重量4倍水煎提2次，每次煎煮1.5小时，趁热抽滤，合并两次提取液，在65℃条件下，用37％盐酸调pH至5.3，搅匀后静置24h,抽滤，沉淀物水洗至pH为7.0，60℃真空干燥，得无根藤水提物。

本发明还公开了无根藤生物碱在制备治疗和/或预防高脂血症药物的应用，所述无根藤生物碱的制备包括以下步骤：

取无根藤，加体积百分比浓度为30％-95％的乙醇浸泡30分钟后加热回流提取1-3次，每次加入药材重量6-10倍的乙醇，每次提取时间为1-3小时，滤过，合并滤液，滤液加浓度为1％的稀酸，静置，过滤，弃去沉淀，滤液用有机溶剂萃取3次，收集酸水层，酸水层用2％氨水或者10％碳酸钠溶液调pH至11，氯仿萃取，收集氯仿层，回收氯仿，无水硫酸钠干燥，得无根藤生物碱。

所述1％稀酸是由醋酸、盐酸、硫酸中的一种或者是几种配制而得。所述有机溶剂是氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或者是几种。

本发明还公开了无根藤生物碱在制备治疗和/或预防高脂血症药物的应用，所述无根藤生物碱的制备优选的包括以下步骤：

取无根藤，加浓度为70％的乙醇浸泡30分钟后加热回流提取2次，每次加药材重量8倍的70％乙醇，每次提取2小时，滤过，合并滤液，滤液加1％盐酸溶液，静置，过滤，弃去沉淀，取酸水溶液，用氯仿萃取3次，收集酸水层，加氨水调pH至11，用氯仿萃取3次，合并氯仿液，回收氯仿，无水硫酸钠干燥，得无根藤生物碱。

本发明提供的无根藤、无根藤水提取物、无根藤生物碱用于治疗和/或预防高脂血症药物方面的新用途具有以下优点：

1、无根藤、无根藤水提取物及无根藤生物碱从樟科植物无根藤中而得，安全无毒，可长期服用。

2、用无根藤制备的无根藤生物碱降脂疗效显著，工艺简单，提取溶剂乙醇可以回收重复利用，综合成本低，是一种可用于长期降脂治疗的新型降脂药。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数，v/v表示溶液的体积比。

实施例1：

取10kg无根藤，加浓度为30％的乙醇浸泡30分钟后加热回流提取2次，每次加药材重量7倍的30％乙醇，每次提取2小时，滤过，合并滤液，滤液加1％醋酸溶液，静置，过滤，弃去沉淀，取酸水溶液，用乙酸乙酯萃取3次，收集酸水层，10％碳酸钠溶液调pH至11，氯仿萃取3次，合并氯仿液，回收氯仿，无水硫酸钠干燥，得无根藤生物碱。

实施例2：

取10kg无根藤，加浓度为50％的乙醇浸泡30分钟后加热回流提取3次，每次加药材重量6倍的50％乙醇，每次提取1小时，滤过，合并滤液，滤液加1％盐酸溶液，静置，过滤，弃去沉淀，取酸水溶液，用二氯甲烷萃取3次，收集酸水层，10％碳酸钠溶液调pH至11，氯仿萃取3次，合并氯仿液，回收氯仿，无水硫酸钠干燥，得无根藤生物碱。

实施例3：

取10kg无根藤，取无根藤，加浓度为70％的乙醇浸泡30分钟后加热回流提取2次，每次加药材重量8倍的70％乙醇，每次提取2小时，滤过，合并滤液，滤液加1％盐酸溶液，静置，过滤，弃去沉淀，取酸水溶液，用氯仿萃取3次，收集酸水层，氨水调pH至11，氯仿萃取3次，合并氯仿液，回收氯仿，无水硫酸钠干燥，得无根藤生物碱。

实施例4：

取10kg无根藤粉碎成粗粉，加浓度为95％的乙醇浸泡30分钟后加热回流提取1次，加药材重量10倍的90％乙醇，提取3小时，滤过，合并滤液，滤液加1％硫酸溶液，静置，过滤，弃去沉淀，取酸水溶液，用氯仿萃取3次，收集酸水层，2％氨水调pH至11，氯仿萃取3次，合并氯仿液，回收氯仿，无水硫酸钠干燥，得无根藤生物碱。

实施例5：

取无根藤，加药材重量6倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8.5，在pH8.5的条件下，保持微沸30min，趁热抽滤，残渣再加药材重量4倍水煎提2次，每次煎煮1.5小时，趁热抽滤，合并两次提取液，在65℃条件下，用37％盐酸调滤液pH至5.3，搅匀后静置24h,抽滤，沉淀物水洗pH为7.0，60℃真空干燥，得无根藤水提物。

实施例6：

取无根藤，加药材重量7倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH9，保持微沸60min，趁热抽滤，残渣再加药材重量5倍水煎提1次，煎煮时间为3小时，趁热抽滤，合并两次提取液，在70℃条件下，用40％盐酸调滤液pH至5.5，搅匀后静置30h,抽滤，沉淀物水洗pH为7.5，75℃真空干燥，得无根藤水提物。

实施例7：

取无根藤，加药材重量5倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8，保持微沸20min，趁热抽滤，残渣再加药材重量3倍水煎提3次，每次煎煮1小时，趁热抽滤，合并两次提取液，在60℃条件下，用30％盐酸调滤液pH至5.0，搅匀后静置16h,抽滤，沉淀物水洗pH为6.5，55℃真空干燥，得无根藤水提物。

药效实验：

一、无根藤提取物对急性高脂血症水平的影响

1材料和方法

1.1实验材料

SPF级昆明种小白鼠80只，雄雄各半，体重20±2g，购买自广西医科大学实验动物中心(生产许可证号：SCXK桂2009-0002)。

本发明实施例1-5、0.9％生理盐水(广西南宁百会药业集团有限公司)、非诺贝特(SIGMA公司)、全自动生化分析仪(生产厂家：迈瑞医疗国际有限公司，型号：BS-190)。

1.2实验方法

选用SPF级昆明小鼠80只，雌雄各半，随机分为8组：空白对照组、模型对照组、对比例组(非诺贝特组)、实施例1～5组，每组10只。

各组连续灌胃给予受试物11d，灌胃体积为0.2ml/10g，非诺贝特剂量100mg/kg，实施例1-5给药剂量为100mg/kg，实验第10d除空白组外，其余各组腹腔注射75％蛋黄乳剂(75％蛋黄生理盐水混悬液)0.1mL/10g进行造模。末次灌胃前动物禁食不禁水12h，末次灌胃后1h小鼠摘眼球取血，3000r/min离心4min分离血清测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)值。

2、实验结果

表1各受试物对蛋清乳剂所致高脂模型小鼠血脂水平的影响(n＝10)

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与对比例组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01；与实施例5组比较，^&P＜0.05，^&&P＜0.01。

表1结果表明：与空白对照组比较，急性高脂模型对照组小鼠血清TC、TG显著升高，且差异有统计学意义(P＜0.01)；与模型对照组比较，对比例组、实施例1-5组血脂水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01)；与对比例组比较，实施例2、3组(即50％醇提无根藤生物碱组、70％醇提无根藤生物碱组)小鼠血清TC、TG显著降低(P＜0.05)；与实施例5组(即无根藤水提组)比较，实施例1-4组小鼠血清TC、TG显著降低(P＜0.05或P＜0.01)。说明无根藤生物碱有一定的降血脂作用，其中50％乙醇提取所得的无根藤生物碱、70％乙醇提取所得的无根藤生物碱降脂效果最优。

二、无根藤生物碱对饮食性高脂血症血脂水平的影响。

1材料和方法

1.1实验材料

SD大鼠80只，雄性，体重180～210g，购买自广西医科大学实验动物中心(生产许可证号：SCXK桂2009-0002)。

本发明实施例1-5、0.9％生理盐水(广西南宁百会药业集团有限公司)、血脂康胶囊(北京北大维信生物科技有限公司)、全自动生化分析仪(生产厂家：迈瑞医疗国际有限公司，型号：BS-190)。

1.2实验方法

选用健康SD大鼠80只，雄性，将大鼠随机分为空白对照组(10只)，其余为高脂造模组，空白对照组给予普通饲料，高脂造模组给予高脂饲料(79％基础饲料+1％胆固醇+10％蛋黄粉+10％猪油)。4周后所有动物眼眶取血，分离血清，测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，TC、TG、LDL-C较空白对照组显著升高(P＜0.01)，HDL-C较空白对照组明显降低(P＜0.01)，则大鼠高血脂症模型造模成功。

将造模成功的70只大鼠随机分为：模型对照组、实施例1-5组和对比例组(血脂康组)，每组10只。空白对照组给予普通饲料，其余7组继续饲喂高脂饲料，实施例1-5组和对比例组每天按方案灌胃，连续给药6周，实施例组剂量为100/kg，对比例组剂量为150mg/kg，空白对照组和模型对照组灌胃等体积的蒸馏水，灌胃体积为10ml/kg。大鼠采血前12h禁食不禁水，末次给药1小时后，眼眶取血，分离血清，测定血清血脂的含量。

2实验结果

表2空白对照组和高脂造模组大鼠造模4周血脂检测结果

注：与空白对照组比较，**P＜0.01。

表2结果显示：高脂造模组的TC、TG、LDL-C值明显高于空白对照组，HDL-C较空白对照组明显降低，差异显著(P＜0.01)，说明大鼠高血脂症模型造模成功。

表3各受试物对大鼠血脂的影响(n＝10)

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与对比例组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01；与实施例5组比较，^&P＜0.05，^&&P＜0.01。

表3结果显示：与空白对照组比较，模型对照组的TC、TG、LDL-C值均升高，HDL-C值降低，差异显著(P＜0.01)；与模型对照组相比较，治疗组均明显降低大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平(P＜0.05或P＜0.01)；与对比例组比较，实施例1-4组(无根藤生物碱组)均明显降低大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平(P＜0.05或P＜0.01)，实施例5组(无根藤水提物组)大鼠血清中血脂值差异无统计学意义；与实施例5组(无根藤水提物组)比较，实施例1-4组(无根藤生物碱组)均明显降低大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平(P＜0.05或P＜0.01)。说明无根藤生物碱有一定的降血脂作用，其中50％乙醇提取所得的无根藤生物碱、70％乙醇提取所得的无根藤生物碱降脂效果最优。

实验结果表明：本发明无根藤水提物及无根藤生物碱均可有效降低高脂模型动物的血脂水平，其中50％乙醇提取所得的无根藤生物碱、70％乙醇提取所得的无根藤生物碱降脂效果最优。

3、讨论

血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)偏高均会引发高脂血症，而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)是血脂代谢的基本物质，是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，具有清除血管内多余血脂、清除血垢、清洁血管的作用，俗称“血管清道夫”。本试验数据表明，与模型对照组比较，治疗组明显降低大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平(P＜0.05或P＜0.01)。与对比例组比较，实施例1-4组(无根藤生物碱组)均明显降低大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平(P＜0.05或P＜0.01)；与实施例5组(无根藤水提物组)比较，实施例1-4组(无根藤生物碱组)均明显降低大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平(P＜0.05或P＜0.01)。说明无根藤生物碱具有降血脂作用，其中50％乙醇提取所得的无根藤生物碱、70％乙醇提取所得的无根藤生物碱降脂效果最优。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。