益生生物和/或治疗剂的靶向胃肠道递送

摘要

本发明涉及用于各种不同适应症的益生菌或治疗剂的口服递送的靶向递送系统的开发，所述适应症包括但不限于艰难梭状芽胞杆菌(Clostridium？difficile)感染、抗生素相关腹泻、肠易激综合征、克隆病的主动和预防性治疗，肠道菌群替代，服用抗生素的患者的菌群补充治疗，以及在进行代谢综合征表象、特别是糖尿病、胰岛素抗性、肥胖症、高脂血症和高血压治疗的患者中肠道微生物组与肠道细胞之间的平衡和信号传导的恢复。此外，本发明恢复所述疾病特征性的被改变的益生生物失衡，并定义了被开发用于益生生物在哺乳动物的GI道、最具体为人类对象的回肠和/或右结肠中的位点特异性递送的平台技术。

说明书

与相关申请的交叉引用

本申请和发明要求2013年3月14日提交的美国临时申请号 61/781,810和2013年10月30日提交的美国临时申请号61/897,378的 优先权，所述临时申请的内容为所有目的通过参考并入本文。

技术领域

本发明涉及用于各种不同适应症，包括例如艰难梭状芽胞杆菌 (Clostridiumdifficile)感染、代谢综合征和2型糖尿病的主动和预防 性治疗的口服增强益生菌的靶向受控递送的平台技术的开发。

背景技术

下文中包含了可能在理解本发明中有用的信息。并不承认本文中 提供的任何信息是现在描述或宣称的发明的先有技术或与其相关，活 着具体或暗示参考的任何出版物或文献是先有技术。

最近的研究突出了人类微生物组在健康和疾病中的重要性。然而， 在很大程度上，对微生物组介导疾病或针对疾病提供保护的机制仍了 解很少。Hajishengallis和同事已在发展楔石-病原体 (Keystone-pathogen)假说，其强调正常存在于健康人类中的菌群之间 的重要相互作用，与这些菌群的变化相关的疾病，以及宿主炎性系统 在健康与疾病状态之间的转变中的作用(1)。楔石-病原体假说坚持， 某些低丰度微生物病原体，可以通过将通常良性的肠道菌群重塑成微 生态失调的肠道菌群，精心策划炎性疾病。Hajishengallis和同事对可 获得的支持楔石假说的文献进行了严格评价，所述假说可能为复杂的 微生态失调疾病的靶向诊断和治疗技术的开发提供新的概念基础。这 项工作为本发明的主题，即递送到胃肠道中特定位点的特定微生物的 用途，提供基础性的背景理解。

正如目前所理解的，益生菌是活的、无毒性的微生物食品添加剂， 其可以通过改善宿主的肠道微生物平衡有益地影响宿主而不引起疾 病。由于益生生物可能被抗生素治疗或出于其他原因而改变，因此它 们不永久定植在体内。因此，为了使它们的健康促进效果持久，重要 的是定期摄入它们。在摄入后，益生菌通常粘附于宿主的组织，例如 肠道或阴道的壁。一旦附着后，所需细菌能够繁殖和定植，由此增强 最适微生物菌群平衡。它们被用于促进下GI道中的健康微生物菌群 (“有益细菌”或共生体)平衡(良好或微生态平衡)和口腔、大肠 和阴道中的健康pH平衡(酵母真菌)，并使微生物失衡或微生态失调 降至最低。益生菌的特征如下：(1)来自于人类来源；(2)稳定且 活的，对胃酸和胆汁酸有抗性；(3)有效粘附于并定植在作用位点处； (4)与病原体竞争粘附位点；以及(5)产生病原体抑制物质例如杀 细菌素和有机酸。

益生菌提供：(1)微生物菌群的正常化(例如抑制PPM，提供 肠粘膜完整性，肠蠕动的调节，IBS等)；(2)免疫调节(例如强化 免疫力，减轻食物过敏症状，IBD的控制等)；(3)代谢效应(例如 产生维生素以改善消化，使乳糖不耐受降至最低，降低胆固醇，促进 胆汁酸解共轭等)，以及许多其他益处。益生菌有时与益生元组合(组 合被称为共生)，所述益生元是各种不可消化的膳食增补剂，其改变 肠道微生物菌群的平衡，刺激有益微生物的生长和/或活性并抑制潜在 有害的微生物。所述增补剂包括寡糖(寡聚果糖，寡聚半乳糖)、菊 糖、乳果糖、乳糖醇和产生双歧营养物的几种选定的细菌菌株。具体 来说，益生元促进双歧杆菌在结肠中的增殖，并在一定程度上也促进 乳杆菌在小肠中的增殖。

存在许多目前可获得的营养性益生菌产品，并作为具有非常温和 的DSHEA类型的“支持健康”益处宣传的膳食增补剂销售。益生菌产 品以所有不同类型的剂型销售，例如用于口服给药的液体、胶囊、肠 溶片剂和基质持续释放配制物。它们使用不同的细菌混合物，有时被 肠溶包衣，并且是常规释放到十二指肠靶点中并且不能活着通过以到 达潜在靶器官例如结肠的类型。GI道的正常pH分布情况从胃到结肠 变化(上下变化)，例如，胃、十二指肠、回肠和结肠的pH分别在 1-4、5.5-6、7.3-8.0和5.5-6.5的范围内。在某些疾病状况下，GI道的 pH可能改变，例如，回肠的pH正常为7.5至8.2，而在代谢综合征、 2型糖尿病和肥胖对象中回肠的pH为7.3至7.5，正如在健康和患病对 象中使用SmartPill检查远端肠道pH值所发现的。

到目前为止，假定不存在任何类型的支持任何特定USFDA批准 的临床效能或安全性要求，或益生菌向任何特定区域的递送或特定益 处的已发表的报道。所有当前的证据从不同的系统产生，并且在我们 在Roux-en-Y胃绕道(RYGB)患者中的基础性发现(3)之前，尚未 被用于针对菌群替换策略的实际治疗方案。同样地，目前不存在在pH 5.5-6.2的结肠目标特定pH下特异性递送益生生物的产品。大多数肠溶 产品将益生菌释放到pH5.5-6.2下的十二指肠，并且由于在近端肠中的 降解，释放出的微生物可能永远不能真正到达回肠或右侧结肠。因此， 开发用于特异性靶向以在回肠和结肠的pH环境中释放的口服增强益 生菌的受控递送配制物，用于各种不同疾病的治疗/治愈的平台技术(药 丸套药丸概念)，将是有利的。这包括艰难梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)感染的主动和预防性治疗，以及在糖尿病患者中可能的代谢 综合征的治疗。

发明概述

第一方面，本发明提供了在对象中具有双阶段释放模式的微包封 的活益生生物的一种或多种物种。本文中提供的微包封的活益生生物 的一种或多种物种可以采取配制物的形式(例如采取片剂、胶囊等的 形式)，其中所述配制物包含一种或超过一种正常存在于对象肠中的 细菌物种。

在某些优选实施方式中，这种双阶段释放模式在对象中具有下述 释放情况，即活微生物在约7.0至8.0之间的pH值下首次释放在对象 中，并且在首次释放之后，活微生物随后在约5.5至6.0之间的pH值 下释放。

另一方面，本发明提供了微包封的活益生生物，其具有靶向哺乳 动物胃肠道内预定位置处的一种或多种活细菌物种的替换或修改的释 放情况。正如将在下文中更详细描述的，提供了其中胃肠道内的预定 位置是回肠或结肠的某些实施方式，以及其中所提供的配制物在哺乳 动物的肠道中具有益生生物的pH依赖性偏好释放和位点特异性释放 的其他实施方式。做出所述益生生物替换可能是为了特异性改变代谢 综合征相关疾病例如肥胖症、2型糖尿病等的过程。在本发明的其他优 选实施方式中，做出所述益生生物替换也可能是为了修复肠道微生态 失调相关疾病，例如抗生素相关腹泻(AAD)、艰难梭状芽胞杆菌 (Clostridiumdifficile)相关腹泻(CDAD)、代谢综合征等。正如将 在本文中公开的，这些病症各自需要特定的微生物组替换或恢复。

在本文中提供的一种优选实施方式中，所述微包封的活益生生物 具有下述释放情况，即其中一种或多种活益生生物物种被释放到对象 的回肠内具有约7至8的pH的区域中。

另一方面，在某些实施方式中提供的益生生物是反映出源自于正 常人类回肠的菌株的混合物的细菌菌属的混合物，其量能够替换这些 反映出正常肠道平衡的菌属。通常，释放出的所述生物体的数量大于 10⁵并小于10¹²，其中所述益生生物是反映出源自于正常人类粪便的菌 株的混合物的细菌菌属的混合物，但是应该认识到，这些数量是非限 制性的，给药的任何活微生物的下限或上限量可能低于或高于这些量。

另一方面，提供了组合物和方法以在患有艰难梭状芽胞杆菌 (Clostridiumdifficile)失衡的对象中改善这样的失衡。因此，在某些 实施方式中，具有双阶段释放模式的一种或多种微包封的活益生生物 物种导致将这些活的益生生物释放到对象胃肠道的远端区段、包括回 肠和结肠中，以便在患有艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)失 衡的对象中改善这样的失衡。

另一方面，本文中提供了用于保护活的益生生物以抵抗胃、十二 指肠和肠的空肠的消化作用的配制物。因此，某些实施方式将一种或 多种微包封的活益生生物物种作为配制物提供，所述配制物为活的益 生生物提供保护以抵抗胃、十二指肠和肠的空肠的消化作用，以便所 需数量的生物体被给药到对象的回肠。

在某些实施方式中，本文中提供的配制物包含被包封的活的益生 生物，一种或多种益生细菌从其分散，所述被包封的益生生物包含含 有“聚合物”的包衣。在某些实施方式中，提供包括来自于乳杆菌属 (Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)中的一个或两个属 的物种的活细菌悬液。在可替选的实施方式中，提供了包括来自于乳 杆菌属(Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)中的一个或 两个属的物种并且还包含Faecalibacteriumprausnitzii生物体的活细菌 悬液。在又一种可替选的实施方式中，提供了包括来自于乳杆菌属 (Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)中的一个或两个属 的物种并且还包含多形拟杆菌(Bacteroidesthetaiotaomicron)生物体 的活细菌悬液。

另一方面，提供了一种或多种微包封的活益生生物物种，其中所 述微包封的活益生生物具有三阶段释放模式。因此，在本发明的这一 方面的基础实施方式中，提供了一种或多种微包封的活益生生物物种， 其中所述微包封的活益生生物在对象中具有三阶段释放模式，其中活 生物体在对象中i)在约5.5-6.2之间的pH值下释放，使得所述活的 益生生物被释放到十二指肠中，ii)约7.2-7.5在之间的pH值下释放， 使得所述活的益生生物被释放到回肠中，并且iii)在约5.6-6.2之间 的pH值下释放，使得所述活的益生生物被释放到结肠中。

在上面提供的实施方式的某些优选变化形式中，还希望细菌生物 体不被释放到pH值低于6.9或高于8.1的小肠中。因此，释放区域将 在包含高水平派伊尔结的肠道内，即回肠。

在上面提供的基础实施方式的另一种变化形式中，存在i)微包封 的益生生物的外层，其具有7.0至8.0之间的pH值的释放特征，以及 ii)微包封的益生生物的受保护的内部核心，其在低于6.9的pH值下 释放。这将允许益生生物被释放到对象的回肠和结肠中。

在某些实施方式中，提供了一种或多种微包封的活益生生物物种， 其中所述益生生物特异性刺激L-细胞的蛋白质、激素或L-细胞作用的 生物标志物从其表达。在其他实施方式中，提供了一种或多种微包封 的活益生生物物种，其中所述益生生物特异性代谢哺乳动物远端肠道 中的胆汁酸，并且其中所述配制物对哺乳动物中的胆固醇和甘油三酯 浓度具有有益作用。

在本发明的另一方面，提供了治疗对象(例如哺乳动物或人)的 方法。因此，在某些实施方式中，提供了在对象中治疗艰难梭状芽胞 杆菌(Clostridiumdifficile)相关肠道障碍的方法，其中所述方法包括 以足以在对象中缓解待治疗障碍的量给药在本文中被要求保护或以其 他方式提供的配制物。通过本文中提供的配制物和方法治疗的艰难梭 状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)相关障碍可能与艰难梭状芽胞杆菌 (Clostridiumdifficile)感染、所述对象的回肠或结肠中的艰难梭状芽 胞杆菌(Clostridiumdifficile)失衡、腹泻、炎症、结肠炎发热等中的 一种或多种相关。通过本文中提供的方法给药所述配制物，缓解了艰 难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)感染的一种或多种前期征兆和 症状。优选地，这样的治疗导致艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile) 感染的预防或防止。

另一方面，本文中提供了包含一种或多种包封的微生物物种及其 配制物的试剂盒。因此，本发明的某些实施方式涉及一种试剂盒，其 包含采取片剂、丸剂、胶囊或微颗粒袋剂形式的在本文中被要求保护 或以其他方式提供的包封的微生物和配制物，并与将所述配制物给药 到对象用于障碍治疗的说明书相组合。所述试剂盒的某些优选实施方 式被设计成用于在患有艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)相关 障碍的对象中治疗这样的障碍。

另一方面，提供了含有一种或多种包封的微生物物种及其配制物 以及用于需要被称为“粪便移植”程序的患者的说明书，其中本发明 的微颗粒和配制物在本文中以片剂、丸剂或胶囊的形式提供，并与用 于将所述配制物给药到需要粪便移植的对象的说明书相组合。所述试 剂盒的某些优选实施方式被设计成用于在患有艰难梭状芽胞杆菌 (Clostridiumdifficile)相关障碍的对象中治疗这样的障碍。

微包封的活益生生物及其配制物在本文中被提供成各种不同剂 型，并且它们可以以足以在对象中缓解所述障碍的量，与在pH值在 7.0至8.0之间的远端小肠中释放的药物、食品、营养物、维生素、其 他有益物质、益生元和其他治疗剂例如pH包封的葡萄糖、脂类或蛋白 质共同给药。优选地，至少两个包衣被用于覆盖包含所述益生生物的 片剂或胶囊样形式，其中外部包衣在5至6的pH环境中降解，内部包 衣在约7的pH环境中降解，从而使所述益生菌掉落在回肠区域中和派 伊尔结附近。

在某些实施方式中，微包封的活益生生物及其配制物与一种或多 种抗生素联合给药。在这些实施方式中，剂量配制物被设计成将抗生 素与细菌完全分离开，并进行试验以验证长期完全分离。适合的抗生 素包括但不限于万古霉素、甲硝哒唑、庆大霉素、多粘菌素E、非达霉 素、特拉万星、奥利万星、达巴万星、达托霉素。示例性实施方式涉 及本文中被要求保护或以其他方式提供的一种或多种微包封的活益生 生物物种，其剂量在10⁵至10¹²CFU之间，其中所述配制物的剂量单 位含有剂量在约125mg至约4000mg之间的万古霉素，其中所述抗生 素在约pH1.0至约pH6.0之间从每个剂量单位配制物释放。在某些实 施方式中，微包封的活益生生物及其配制物以有益治疗艰难梭状芽胞 杆菌(Clostridiumdifficile)感染或其并发症的有效量，与万古霉素共 同给药。

另一方面，本文中被要求保护或以其他方式提供的微包封的活益 生生物被用于其他障碍的治疗。在本文中描述的非限制性但优选的实 施方式中，抗生素不被包含在所述配制物中。

一种实施方式涉及在对象中治疗肥胖症相关的肠道障碍的方法， 其中所述方法包括以足以在所述对象中缓解所述障碍的量给药本文中 被要求保护或以其他方式提供的靶向回肠和右结肠的益生菌配制物。 另一种实施方式涉及治疗2型糖尿病相关的代谢综合征的方法，其中 所述方法包括以足以在所述对象中缓解所述障碍的量给药本文中被要 求保护或以其他方式提供的靶向回肠和右结肠的益生菌配制物。在这 种实施方式的变化形式中，所使用的微生物能够产生从肠中的L-细胞 靶位点释放GLP-1、PYY、GLP-2或其他有益肽的信号，由此有益地改 善所述疾病或病症或代谢综合征。这种修改方式的实例是使用所述益 生菌配制物与在回肠闸处有活性的回肠闸激素释放物质相组合治疗2 型糖尿病，其中两种活性组成部分起到刺激L-细胞激素释放和修正激 素的信号传导的作用。在靶向的回肠和结肠中益生生物的数目和特定 物种的替换，产生了L-细胞激素从回肠和右侧结肠释放的自我平衡且 有益的调控。这些新的治疗手段在本文的特定实例中公开。

另一种优选实施方式包括使用抗糖尿病药物、回肠闸激素释放物 质和益生生物的治疗，其中所述益生生物替换或修正涉及在本文中被 要求保护或以其他方式提供的一种或多种微包封的活益生生物物种， 其剂量在10⁵至10¹²CFU之间，其中所述配制物的剂量单位含有剂量 在约250mg至约1000mg之间的二甲双胍，其中二甲双胍在约pH1.0 至约pH6.0之间从每个剂量单位配制物释放。在某些实施方式中，微 包封的活益生生物及其配制物与有效量的二甲双胍共同给药，并且如 US20110268795中所公开的，与约5.0gm至约10.0克的右旋糖和营养 物质的微颗粒共同给药，所述配制物被包封以在7.0至7.5之间的肠道 pH下释放，本文中公开的所述组合已知在2型糖尿病、代谢综合征或 其并发症的治疗中有益。

另一种实施方式涉及在本文中被要求保护或以其他方式提供的一 种或多种微包封的活益生生物物种，其剂量在10⁵至10¹²CFU之间， 其中所述配制物的剂量单位含有剂量在约10mg至约80mg之间的阿 托伐他汀，其中阿托伐他汀在约pH1.0至约pH6.0之间从每个剂量单 位配制物释放。在某些实施方式中，微包封的活益生生物及其配制物 与有效量的阿托伐他汀共同给药，并且如US20110268795中所公开的， 与约5.0克至约10.0克的右旋糖和营养物质的微颗粒共同给药，所述 配制物被包封以在7.0至7.5之间的肠道pH下释放，本文中公开的所 述组合已知在2型糖尿病、高脂血症、代谢综合征或其并发症的治疗 中有益。

在某些优选实施方式中，微包封的活益生生物及其配制物与有效 量的肿瘤坏死因子(TNF)拮抗剂共同给药，所述拮抗剂被包封以在 7.0至7.5之间的肠道pH下释放，本文中公开的所述组合已知在克隆 病、溃疡性结肠炎、炎性肠病等或其并发症的治疗中有益。

另一种实施方式涉及治疗与微生态失调相关的肠易激疾病的方 法，其中所述方法包括以足以在所述对象中缓解所述障碍的量，给药 在本文中被要求保护或以其他方式提供的靶向回肠和右结肠的益生菌 配制物。在某些实施方式中，所述微包封的活益生生物及其配制物与 被批准用于肠易激疾病的治疗的药物治疗例如利那洛肽共同给药。肠 易激疾病及其治疗的非限制性实例被包含在这些实施方式中。

本发明的另一方面是递送靶向到对象的回肠和右结肠的益生菌配 制物的口服递送系统，所述系统包含：

核心，其包含益生菌配制物；以及

包衣，其包封所述益生菌配制物，并在低于约7.0至约8.0之间的 范围的pH下基本上不溶，在约7.0至约8.0的pH范围内可溶，并且 其中所述益生菌配制物在pH约为7之前不被释放，并且在所述递送系 统到达回肠之前，所述益生菌配制物基本上无损失地通过消化道。

优选地，所述包衣包含选自下列的一种或多种组合物：聚(dl-丙交 酯-共聚-乙交酯)，用PVA(聚乙烯醇)稳定化的脱乙酰壳多糖(Chi)， 脂类，藻酸盐，羧甲基乙基纤维素(CMEC)，纤维素乙酸苯三酸酯 (CAT)，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)，羟丙基甲基 纤维素，乙基纤维素，colorcon，食品釉，羟丙基甲基纤维素与乙基纤 维素的混合物，聚乙烯乙酸邻苯二甲酸酯(PVAP)，纤维素乙酸邻苯 二甲酸酯(CAP)，虫胶，甲基丙烯酸与丙烯酸乙酯的共聚物，以及在 聚合期间已添加甲基丙烯酸酯单体的甲基丙烯酸与丙烯酸乙酯的共聚 物。

另一方面，本发明提供了一种用于递送靶向到对象的回肠和近端 结肠的益生菌配制物的口服递送系统，所述系统包含：

核心，其包含益生菌配制物，其中所述益生菌配制物被包含在用 第一肠溶包衣包被的生物降解型的第一胶囊中，所述第一肠溶包衣包 封所述含有益生菌配制物的第一胶囊，并且其中所述第一肠溶包衣在 约6.2至约6.5的pH下溶解；以及

第二胶囊，其尺寸能包含所述被包衣的第一胶囊，其中所述第二 胶囊由生物降解型材料制成，并且其中所述第二胶囊用在约7至8的 pH下溶解的第二肠溶包衣包被，其中所述第二胶囊在回肠中释放所述 第一胶囊，并且一旦释放后，所述第一胶囊在pH为约6.2至约6.5的 近端结肠中溶解，并释放出包含在其中的所述所需细菌。

重要的是，所述第二肠溶包衣在低于约7.0至约8.0之间的范围的 pH下基本上不溶，在约7.0至约8.0的pH范围中可溶。所述第一和第 二肠溶包衣包含选自下列的组合物：甲基丙烯酸与丙烯酸乙酯的共聚 物，以及在聚合期间已添加有甲基丙烯酸酯单体的甲基丙烯酸与丙烯 酸乙酯的共聚物。尤其是，所述第二胶囊在回肠中释放所述第一胶囊， 并且一旦释放后，所述第一胶囊在pH为约6.2至约6.5的近端结肠中 溶解，并释放出所述益生菌配制物。

所述益生菌配制物包含正常存在于对象胃肠道内预定位置中的至 少一种细菌菌种，优选为1至30种、更优选地约10至25种不同的细 菌菌种或菌株，所述预定位置优选为回肠或结肠。所述细菌菌种可能 是不同的，或仅仅是包含不同菌株。所述益生菌配制物包含反映出源 自于正常人类回肠的菌株的混合物的细菌菌属的混合物，并且释放出 的所述生物体的数量大于10⁶并小于10¹²。优选地，所述益生菌配制物 释放在对象胃肠道远端区段包括回肠和结肠中，并改善患有艰难梭状 芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)失衡的对象中的这种失衡。有效的益 生菌配制物包含选自乳杆菌属(Lactobacillus)和双歧杆菌属 (Bifidobacterium)的活细菌悬液。这样的配制物可以进一步包含 Faecalibacteriumprausnitzii生物体。

益生菌配制物可以合并有与所述益生菌组合释放或在约1至6的 pH下并在所述益生菌释放之前释放的药物、对乙酰氨基酚、食品、营 养品、维生素、有益物质、益生元、pH包封的葡萄糖、脂类或蛋白质。 所述益生菌配制物也可以与选自万古霉素、甲硝哒唑、庆大霉素、多 粘菌素E、非达霉素、特拉万星、奥利万星、达巴万星和达托霉素的抗 生素共同给药。此外，所述益生菌配制物还可以合并有在回肠闸处有 活性的回肠闸激素释放物质，以刺激L-细胞激素释放并修正激素的信 号传导。

所述益生菌配制物可用于改变选自肥胖症和2型糖尿病的代谢综 合征相关疾病的过程；或用于修复选自抗生素相关腹泻(AAD)、艰 难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)相关腹泻(CDAD)和代谢综 合征的肠道微生态失调相关疾病。

所述益生菌配制物还可以合并有抗糖尿病药物例如二甲双胍、他 汀类药物例如阿托伐他汀或消炎药物例如肿瘤坏死因子(TNF)拮抗剂。

本发明的另一方面提供了将所需益生菌或治疗剂递送到回肠和/ 或近端结肠的胶囊包胶囊型口服递送系统，所述系统包含：

第一胶囊，其含有所述所需益生菌或治疗剂，其中所述第一胶囊 由生物降解型材料制成，并且其中所述第一胶囊用在约6.2至约6.5的 pH下溶解的第一肠溶包衣包被；以及

第二胶囊，其尺寸能在其维度内包含所述被包衣的第一胶囊，其 中所述第二胶囊由生物降解型材料制成，并且其中所述第二胶囊用在 约7至8的pH下溶解的第二肠溶包衣包被，其中所述第二胶囊在回肠 中释放所述第一胶囊，并且一旦释放后，所述第一胶囊在pH为约6.2 至约6.5的近端结肠中溶解，并释放出所述所需益生菌或治疗剂。

尤其是，所述第二胶囊还可以包含用于在回肠中释放的所需益生 菌。重要的是，所述胶囊系统内的所需益生菌或治疗剂被递送到回肠 和/或近端结肠，而不将这样的益生菌或治疗剂泄漏在位于所述回肠和/ 或近端结肠之前的胃肠道的近端区域中。所述系统提供至少90％、优 选地至少95％、更优选地至少97％的所述所需益生菌或治疗剂到达回 肠和/或右结肠。

所述胶囊包胶囊型口服递送系统的第一和第二肠溶包衣优选地选 自甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物以及甲基丙烯酸、丙烯酸甲酯和 甲基丙烯酸甲酯的共聚物。

所述胶囊包胶囊型口服递送系统提供了一种系统，提供所述在外 部且首先暴露的第二胶囊在回肠中释放所述第一胶囊，并且一旦释放 后，所述第一胶囊在pH约6.2至约6.5的近端结肠中溶解，并释放出 所需益生菌或治疗剂。如果内含物是所需益生菌，那么这样的益生菌 包含正常存在于对象胃肠道内预定位置中的至少1至30种细菌菌种、 更优选地约10至25种不同的菌种或这些菌种的菌株，所述预定位置 优选为回肠或结肠。所述所需益生菌可以包含反映出源自于正常人类 回肠的菌株的混合物的细菌菌属的混合物，并且释放出的所述生物体 的数量大于10⁵并小于10¹²，并且优选地，所述释放在对象胃肠道远端 区段包括回肠和结肠中，并改善患有艰难梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)失衡的对象中的这种失衡。这样的益生菌包含选自乳杆菌属 (Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)的活细菌悬液，并 且可以进一步包含Faecalibacteriumprausnitzii生物体。

用于所述胶囊包胶囊型口服递送系统的包衣的非常有效的组合包 括：所述第一胶囊用约10mg/cm²的EudragitEPO(第一肠溶包衣)包 被，所述第二胶囊用约5mg/cm²的EudragitL100/S100的75/25混合物 (第二肠溶包衣)包被，其中所述胶囊由羟丙基甲基纤维素制成。

本发明的另一方面提供了一种治疗胃肠障碍发作的方法，所述方 法包括向需要这种治疗的对象给药药学有效量的口服配制物，所述配 制物包含：

第一胶囊，其含有对胃肠障碍具有有益效果的所需益生菌，其中 所述第一胶囊由生物降解型材料制成，并且其中所述第一胶囊用在约 6.2至约6.5的pH下溶解的第一肠溶包衣包被；以及

第二胶囊，其尺寸能在其维度内包含所述被包衣的第一胶囊，其 中所述第二胶囊由生物降解型材料制成，并且其中所述第二胶囊用在 约7至8的pH下溶解的第二肠溶包衣包被，其中所述第二胶囊在回肠 中释放所述第一胶囊，并且一旦释放后，所述第一胶囊在pH为约6.2 至约6.5的近端结肠中溶解，并释放出所述所需益生菌。

所述胃肠障碍包括艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)障碍， 其与艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)感染、所述对象的回肠 或结肠中的艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)失衡、腹泻、炎 症、结肠炎发热中的一种或多种相关，并且其中所述口服配制物采取 足以在所述对象中缓解所述胃肠障碍的量，并包含选自乳杆菌属 (Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)的活细菌悬液。

另一方面，本发明提供了口服配制物用于制备胃肠障碍治疗药物的 用途，其中所述口服配制物包含：

第一胶囊，其含有有效对抗胃肠障碍的所需细菌，其中所述第一 胶囊由生物降解型材料制成，并且其中所述第一胶囊用在约6.2至约 6.5的pH下溶解的肠溶包衣包被；以及

第二胶囊，其尺寸能在其维度内包含所述被包衣的第一胶囊，其 中所述第二胶囊由生物降解型材料制成，并且其中所述第二胶囊用在 约7至8的pH下溶解的肠溶包衣包被，其中所述第二胶囊在回肠中释 放所述第一胶囊，并且一旦释放后，所述第一胶囊在pH为约6.2至约 6.5的近端结肠中溶解，并释放出所述所需细菌。

本发明的另一方面提供了一种口服递送系统，用于递送直接靶向到对 象的回肠和/或结肠的口服配制物，并且在到达至少回肠之前基本上不 损失所述口服配制物，所述系统包含：

核心，其包含所述口服配制物，其中所述口服配制物包含益生菌 或治疗剂；

第一肠溶包衣，其包封所述核心，其中所述第一包衣在约6.2至 约6.5的溶解pH下溶解；

第二肠溶包衣，其包封所述第一包衣，其中所述第二包衣在约7 至8的溶解pH下溶解。

优选地，这种口服递送系统含包含位于所述核心与第一包衣之间 的第一生物降解型薄膜层，以及位于所述第一包衣与所述第二包衣之 间的第二生物降解型薄膜层，其中所述生物降解型薄膜是羟丙基甲基 纤维素。

从下面的详细描述、图和权利要求书，本发明的其他特点和优点 将显而易见。

附图说明

图1示出了MetaSensor的远端肠道调控组分和相关的宿主代谢组 学——L-细胞与益生细菌之间的相互作用。

图2示出了MetaSensor通过停止信号GLP-1、PYY和其他L-细胞 来源的调控激素的正常运行。

图3示出了当致糖尿病食品例如糖增甜的饮料改变微生物组并因 此改变MetaSensor的激素运行时的情形。

图4示出了当存在通过作用于L-细胞产生MetaSensor的异常调控 的微生物组微生态失调时的情形。

图5示出了Roux-en-Y胃绕道(RYGB)手术对MetaSensor的影 响。

图6示出了RYGB的口服模拟物、一种被称为Brake的回肠闸激 素释放物质对MetaSensor的影响。

图7考虑了与Brake组合的常见糖尿病药物二甲双胍对 MetaSensory过程的运行的影响，说明了药物与RYGB手术的模拟物之 间的协同相互作用。

图8示出了对乙酰氨基酚(APAP)325mg核心片剂在pH6.5下 的溶出(USP溶出装置：篮子以50rpm运行；n＝3)。

图9示出了用4mg/cm²密封物(HPMC)密封并用Eudragit-EPO18 cm²包被的325mgAPAP片剂在pH6.0、pH6.5、pH6.8、pH7.0和pH 7.4下的溶出情况(USP溶出装置：篮子以50rpm运行；n＝3)。

图10示出了325mgAPAP核心片剂在pH7.0下的溶出(USP溶 出装置：篮子以50rpm运行；n＝3)。

图11示出了用不同比率的FS30D&L30D55包被的325mg包衣 APAP片剂在pH1.2、pH5.5&pH7.0下的溶出情况(USP溶出装置： 篮子以50rpm运行；n＝3)。

图12示出了未包衣的APAP(～91mg)胶囊(尺寸为#3)在pH6.5 下的溶出情况的比较(使用两个USP溶出装置：篮子以75rpm并且桨 叶以50rpm运行；n＝3)。

图13示出了用10mg/cm²Eudragit-EPO包被的包衣APAP(～91 mg)胶囊(尺寸为#3)在pH6.5下的溶出情况的比较(使用两个USP 溶出装置：篮子以75rpm并且桨叶以50rpm运行；n＝3)。

图14示出了用Eudragit-EPO(10mg/cm²)包被的包衣APAP(～91 mg)胶囊(尺寸为#3)在pH6.8下的溶出情况(USP溶出装置：桨叶 以100rpm运行；n＝3).

图15示出了用6mg/cm²HPMC密封的未包衣APAP(～335mg) 胶囊(尺寸为#0)在pH6.5下的溶出情况(USP溶出装置：桨叶以100 rpm运行；n＝3)。

图16示出了用HPMC-6mg/cm²密封并用EudragitL100& Eudragit-L100/S100(50/50)-7.5mg/cm²包被的APAP(～335mg)胶 囊(尺寸为#0)在多种介质中的溶出情况(USP溶出装置：桨叶以100 rpm运行)。

图17示出了用HPMC-6mg/cm²密封并用Eudragit-L100/S100 (75/25)5mg/cm²和7.5mg/cm²包被的APAP(～335mg)胶囊(尺寸 为#0)在多种介质中的溶出情况(USP溶出装置：桨叶以100rpm运 行)。

图18示出了APAP胶囊包胶囊型(CIC)[内部胶囊(尺寸为#3) 带密封并用10mg/cm²Eudragit-EPO包被，外部胶囊(尺寸为#0)带密 封并用5mg/cm²Eudragit-L100/S100(75/25)包被]在多种介质中的溶 出情况(USP溶出装置——桨叶以100rpm运行；n＝6)。

发明详述

本发明的实践可能用到本领域技术范围之内的分子生物学(包括 重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学、核酸化学和免疫学 的各种常规技术。除非另有指明，否则下面的术语当在本文中以及随 附的权利要求书中使用时具有下述的意义。没有在下面或本说明书中 别处定义的术语应该具有它们在本领域中公认的意义。

“稳定的”配制物或组合物是在储存后其中的生物活性物质基本 上保留其物理稳定性、化学稳定性和/或生物学稳定性的配制物或组合 物。稳定性可以在所选的温度和湿度条件下在所选的时间长度内测量。 可以使用趋势分析来估算预期储存期限，然后将材料实际储存历时该 时间长度。例如，对于活细菌来说，稳定性可以被定义为在预定的温 度、湿度和时间长度条件下，失去1log的CFU/g干配制物所花费的时 间。

对于细菌来说，“生活力”是指在适合于所述细菌生长的营养培 养基上形成菌落的能力(CFU或菌落形成单位)。

对于病毒来说，生活力是指在适合的宿主细胞中感染并繁殖，导 致在宿主细胞的菌苔上形成噬斑的能力。

“降低(reduce)”或该词的其他形式(reducing或reduction)在某些 情况下可能是指事件或特征(例如微生物生长或存活)的降低。应该 理解，这通常与某些标准或预期值相关，换句话说，它是相对的，但 是不总是需要参比于某些标准或预期值。例如，“降低细菌种群数量” 在某些情况下可能是指相对于标准品或对照降低细菌的数量。

“治疗(treat)”或该词的其他形式(treated或treatment)在某些情况 下可能意味着给药组合物或执行方法以便降低、组织、抑制、瓦解或 消除特定特征或事件(例如微生物生长或存活)。

术语“活细胞”在某些情况下可能意味着尽管处于营养体、冷冻、 保存或重构状态，但仍活着并能够再生和/或繁殖的微生物。

术语“活细胞得率”或“活细胞浓度”在某些情况下可能是指每 单位度量例如升、毫升、千克、克或毫克的液体培养物、浓缩或保存 状态中的活细胞数目。

术语“细胞保存”在某些情况下可能是指获取营养体细胞并将其 保存在随时间保留生活力的代谢惰性状态下的过程。当在本文中使用 时，术语“产品”在某些情况下可能是指可以与其他组分掺混并含有 指定浓度的活细胞，可以被销售和使用的微生物组合物。

术语“微生物”在某些情况下可能是指尺寸微小的生物体、单细 胞生物体和/或任何病毒粒子。本文中使用的微生物的定义包括细菌、 古菌、单细胞真核生物(原生生物、真菌和纤毛虫)和病毒性病原体。

术语“微生物的”在某些情况下可能是指微生物的过程或组合物， 因此“基于微生物的产品”是包含微生物、微生物的细胞组分和/或由 微生物产生的代谢物的组合物。微生物可以以各种不同状态存在，并 以营养体、休眠或孢子状态出现。微生物也可以表现为运动型或非运 动型，并且可能作为浮游细胞(未附着)、附着于基质的细胞、菌落 内的细胞或生物膜内的细胞存在。

术语“益生元”在某些情况下可能是指不容易被内源宿主酶消化， 并通过选择性刺激与肠道相关的有限范围的有益微生物的生长和/或活 性而对消费它们的生物体提供有益效应的食品成分或细菌产生的成 分。该术语还包括对宿主生物体提供有益效应的一种或多种活的微生 物。由益生生物在消化道内的建立所产生的益处包括降低病原体负荷、 改善微生物代谢模式、改善营养物吸收、改善免疫功能、改进肠激素 信号传导和代谢调控、辅助消化和肠易激疾病和结肠炎症状的缓解。

术语“共生的”在某些情况下可能是指含有益生菌和益生元两者 的组合物。共生组合物是益生元化合物选择性地有利于益生生物的组 合物。

术语“胃肠道”在某些情况下可能是指参与食物和液体的摄入、 消化和排泄的完整的器官系统和区域。该系统一般来说由口、食道、 胃和/或瘤胃、肠(小肠和大肠两者)、盲肠、发酵液囊和肛门构成， 但不限于此。

术语“病原体”在某些情况下可能是指在人类或动物宿主中产生 有害效应和/或疾病状态的任何微生物。

作为任选成分，本文中提供的药物配制物可能还包含可药用载体、 稀释剂、增溶剂或乳化剂，以及在本领域中可用的类型的盐。这些物 质的实例包括常规盐水溶液例如生理缓冲盐水溶液和水。在本发明的 药物配制物中有用的载体和/或稀释剂的具体的非限制性实例包括水和 生理上可接受的缓冲盐水溶液，例如pH7.0-8.0的磷酸盐缓冲的盐水溶 液。适合的药物载体包括但不限于无菌水、盐溶液(例如Ringer's溶液)、 醇、聚乙二醇、明胶、糖例如乳糖、直链淀粉或淀粉、硬脂酸镁、滑 石、硅酸、粘性石蜡、脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。 药物制剂可以与不与活性化合物发生有害反应的辅助剂例如润滑剂、 稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂和/ 或芳香物质等混合。在需要时，它们也可以与其他活性物质例如回肠 闸激素调控物质合并，以改进代谢并改善代谢综合征。

可以将本文中提供的化合物配制在药物组合物中，除了所述化合 物之外，药物组合物还可以包含可药用载体、增稠剂、稀释剂、缓冲 剂、表面活性剂、中性或阳离子性脂质、脂质复合物、脂质体、渗透 增强剂、载体化合物和其他可药用载体或赋形剂等。

药物组合物还可以包括一种或多种活性成分例如抗炎药剂、麻醉 剂等。用于口服或阴道内给药的配制物可以包含缓冲剂、脂质体、稀 释剂和其他适合的添加剂。本文中提供的组合物可以以本领域中已确 立的用量水平另外含有常规存在于药物组合物中的其他辅助组分。因 此，例如，组合物可以含有其他相容的药物活性材料例如他汀类药物、 利那洛肽、回肠闸激素释放物质、抗炎药剂，或者可以含有在物理配 制本发明组合物的各种不同剂型中有用的其他材料，例如颜料、调味 剂、抗氧化剂、遮光剂、增稠剂和稳定剂。取决于具体的活性成分， 配制物可以在同一丸剂或片剂中给药，或者作为共同给药方案的一部 分作为不同的丸剂或片剂给药。然而，这样的材料在添加时，不应过 分地干扰本文中提供的组合物的组分的生物活性。

不论将化合物导入患者的方法如何，可以使用胶体分散体系作为 递送介质以提高化合物的体内稳定性，和/或将化合物靶向特定器官、 组织或细胞类型。胶体分散体系包括但不限于大分子复合物、纳米胶 囊、微球、珠子和基于脂质的系统包括水包油乳液、胶束、混合胶束、 脂质体和结构未表征的脂质：化合物复合物。优选的胶体分散体系是 大量的脂质体。脂质体是微型球体，其具有被由排列成双层构型的脂 质构成的一个或多个外层包围的水性核心(总的来说参见Chonn等， CurrentOp.Biotech.6,698-708(1995))。同样地，微粒或纳粒聚合 珠子剂型可用于本文中提供的组合物。本文中提供的化合物可以与一 种或多种其他活性药剂组合使用，并包封在颗粒剂型中。通过这种方 式，本文中提供的某些化合物单独地或与其他活性药剂组合，在该位 点处随时间释放，以提供持续的治疗益处。活性药剂从本发明的颗粒 剂型的释放，可以作为扩散和颗粒状基质侵蚀两者的结果而发生。生 物降解速率直接影响活性药剂释放动力学。

在优选实施方式中，本发明的药物组合物被口服给药。剂量可以 取决于多种因素，包括待治疗的疾病状态的严重性和响应性，并且治 疗过程持续几天至几个月，或直至实现治愈或获得疾病状态的减退。 本文中提供的化合物的毒性和治疗效能可以通过标准的制药程序，在 细胞培养物或实验动物中确定。例如，用于确定LD₅₀(使50％的群体 死亡的剂量)和ED₅₀(在50％的群体中治疗有效的剂量)。毒性效应 和治疗效应之间的剂量比率是治疗指数，它可以表示成比率LD₅₀/ED₅₀。 表现出大的治疗指数的化合物是优选的。尽管可以使用表现出有毒副 作用的化合物，但应该小心地设计将这样的化合物靶向到受影响组织 的位点的递送系统，以便最小化对未感染细胞的潜在损伤，并由此减 少副作用。

从体外和体内测定法以及动物研究获得的数据，可用于配制在人 类中使用的各种剂量。这样的化合物的剂量优选地在包含ED₅₀并且几 乎没有或没有毒性的暴露浓度的范围之内。在该范围内，剂量可以随 着所使用的剂型和所利用的给药途径而变。对于在本发明的方法中使 用的任何化合物来说，最初可以从细胞培养物测定法估算治疗有效剂 量。可以在动物模型中配制药剂，以获得包括在细胞培养物中确定的 细胞衍生的IC₅₀(即实现症状的半最大抑制的试验化合物的浓度)的局 部暴露范围。这样的信息可用于更准确地确定在人类中的有用剂量。 预计血浆中的水平低至不可测量。给药日程安排可以从药物在患者的 肠道和粪便中的积累的测量值来计算。不相关地，生物体不被吸收。

益生生物的适合的剂量，以在所述患者的回肠中存在的生物体的 数目计，可以例如从约10⁵至10¹²个生物体变化，通常为约10⁶个。同 样地，本文中提供的化合物的递送，将对具体细胞、条件和位置例如 回肠来说是特异性的。一般来说，剂量来自于片剂、胶囊、颗粒和微 颗粒剂、粉剂、液体等，并且可以每日一次或多次、每周、每月或每 年或甚至更低频率给药。在某些病症的治疗或预防中，适合的每日剂 量水平一般如上所述，其可以在单剂或多剂中给药。本发明的活的微 生物或治疗性化合物(例如活的生物体)可以配制成药物组合物，用 于按照已知方法给药，包括例如使用立即释放以及脉冲释放和延迟释 放技术。药物组合物可以例如包含一种或多种构建物，并与可药用载 体、赋形剂或稀释剂相组合。这样的载体在所使用的剂量下对受体是 无毒的。适合的剂量可以近似如上所述，对于口服来说每个物种至少 10⁵至10¹²，并且在这些量之内的各种不同范围对于给药来说仍更为典 型。对于本领域技术人员来说，显然给药的数量和频率将取决于宿主 的反应。用于治疗性用途的“可药用载体”在制药领域中是公知的， 并描述在例如《Remington制药学》(Remington'sPharmaceutical Sciences,MackPublishingCo.)(A.R.Gennaro主编，1985)中。例如， 可以使用盐水和生理pH下的磷酸盐缓冲盐水。稳定剂、颜料和甚至调 味剂，可以提供在药物组合物中。

“可药用盐”是指源自于本发明的化合物与有机或无机酸(酸加 成盐)或有机或无机碱(碱加成盐)的组合的这些化合物的盐。本发 明的化合物可以以游离碱或盐的形式使用，这两种形式都被认为是在 本发明的范围之内。

然而，本文中提供的药物组合物可以采取允许将所述组合物通过 口服途径并且更少见地通过阴道内或直肠途径给药于患者的任何形 式。药物组合物被配制成一旦将组合物给药于患者后，允许其中包含 的活性成分可以在靶向位点处被生物利用。将被给药于患者的组合物 采取一种或多种剂量单位的形式，其中例如片剂可以是单一剂量单位， 采取口服形式的本发明的一种或多种化合物的容器可以容纳多个剂量 单位。

对于口服给药来说，可以存在赋形剂和/或粘合剂。实例是蔗糖、 高岭土、甘油、淀粉糊精、藻酸钠、羧甲基纤维素和乙基纤维素。可 以存在着色和/或调味剂。可以使用包衣壳，其利用用于微包封的常用 膜，并且适合于活的益生生物的微包封的物质包括生物降解型的合成 “聚合物”例如聚丙交酯、聚乙交酯和聚酸酐。用于活生物体包封和 酶包封的已确定的“聚合物”包括藻酸盐-聚赖氨酸-藻酸盐(APA),藻 酸盐-聚甲撑-共聚-胍-藻酸盐(A-PMCG-A)、丙烯酸羟甲基酯-甲基丙 烯酸甲酯(HEMA-MMA)、多层的HEMA-MMA-MAA、聚丙烯腈- 氯乙烯(PAN-PVC)、丙烯腈/甲基烯丙基磺酸钠(AN-69)、聚乙二 醇/聚五甲基环戊硅氧烷/聚二甲基硅氧烷(PEG/PD₅/PDMS)、聚N,N- 二甲基丙烯酰胺(PDMAAm)、硅质包封物和纤维素硫酸酯/藻酸钠/ 聚甲撑-共聚-胍(CS/A/PMCG)。其他有用的材料包括但不限于纤维 素乙酸邻苯二甲酸酯、藻酸钙和k-卡拉胶-刺槐豆胶凝胶珠、结冷胶- 黄原胶珠、聚(丙交酯-共聚-乙交酯)、卡拉胶、淀粉聚酸酐、淀粉聚 甲基丙烯酸酯、聚氨基酸、肠溶包衣聚合物。

当在本文中使用时，液体药物组合物，不论采取溶液、悬液还是 其他类似形式，都可以包含一种或多种下列佐剂：稀释剂例如水，优 选为不挥发油例如合成的甘油单酯或甘油二酯，其可以用作溶剂或悬 浮介质，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其他溶剂；抗氧化剂例如抗坏血 酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸；缓冲剂例如乙酸盐、柠 檬酸盐或磷酸盐，以及用于调整渗涨度的试剂例如氯化钠或右旋糖。

本文中描述的化合物可用于诊断、治疗、预防以及作为研究试剂 和用于试剂盒中。用于检测本发明的化合物的手段的预备，可以常规 实现。这样的预备可以包括酶偶联、放射性标记或任何其他适合的检 测系统。也可以准备用于检测本发明的化合物存在与否的试剂盒。

本发明的化合物也可用于研究目的。因此，化合物表现出的特定 活性或模式可用于测定、纯化、细胞产物制备和本领域普通技术人员 可以认识到的其他方法中。

使用SmartPill来研究肠道的pH，并由此确定用于释放特定益生 生物的回肠和结肠的靶位点的pH。最近，SmartPill，一种无线pH/压 力记录胶囊，已被用于测量整个肠道通过时间。无线胶囊移动，在其 通过胃肠道时，使用SmartPillGI监测系统定期从胶囊取样并发送腔内 pH、压力和温度数据；从这些数据，可以评估胃排空和整个胃肠道的 通过。此外，存在几项关于小肠pH的研究。该研究的目的是使用 SmartPill非侵入性地记录连续图像和pH，来调查小肠疾病与小肠pH 之间的关系。志愿者伴随240mL水吞下SmartPill。SmartPill在约10 小时的对象禁食时间内将获得的图像和pH发送到位于身体外部的记 录单元。SmartPill胶囊作为评估患者的GI通过障碍和研究胃肠道疾病 对pH和GI通过的影响的有用的诊断试验，显示出希望(8)。胃内 pH低，并且在胃排空后，整个小肠中的pH从6.0升高到高达回肠中 的8.1，然后在通过回盲瓣后，右结肠的pH再一次为5.5至6.5。在所 有患者中，从十二指肠到末端回肠pH值升高(p<0.0001)，但是糖尿 病对象和肥胖患者不如正常对象上升得高。这些发现是出人意料得， 并表明与正常对象相比，在糖尿病和肥胖患者的回肠和右结肠中配制 的益生生物的释放靶点不同。显然，在人类肠道中的位点特异性递送 的有效实践需要对局部回肠微环境的不同条件进行调整，令人吃惊的 是，正如使用SmartPill的实验所教示的，疾病的特点与微生物组的变 化相关。因此，益生生物靶向替换和制造信号传导过程变化以治疗疾 病的概念被推向实用。为了应对这些新的发现，益生菌配制物和剂量 以及组成必须被完全改变。

方法

代谢综合征和肥胖症

在肠道菌群中发现存在两种少量生物体，但是它们代表了肥胖症 和相关代谢异常发生中的主要调控平衡生物体，即促进脂肪过多的史 氏甲烷短杆菌(Methanobrevibactersmithii)和下调代谢综合征相关炎 症并因此消除宿主心血管完整性的相关风险的Bacteroides theataiotaomicron(1)。被其他人发现是重要的另一种生物体是 Faecalobacteriumprausnitzii，其不存在似乎与肥胖症和2型糖尿病的恶 化相关(2)。正如本发明中所述，在本发明的实践中，这种生物体是 通过靶向递送到回肠而进行替换的靶。

在本文中公开的本发明的优选实践中，驻留宿主微生物菌群调制 并引发免疫系统。然而，对细菌的系统和粘膜免疫应答可能是趋异的。 几位工作者检查了免疫系统与胃肠道中的微生物组成分之间的关系。 例如，我们的使用具有RYGB手术的患者的工作显示，在手术之前内 毒素升高并具有高水平炎症，随后在手术后伴有修复和炎性过程的降 低(3)。重要的是理解，当前观点显示回肠和回肠闸激素途径是RYGB 手术的有益作用位点，所述手术是用于肥胖症的有效治疗，并且事实 上是治愈代谢综合征相关的2型糖尿病的唯一已知手段。在本文中显 示，所述作用在回肠和回肠闸水平上被介导，并且新的发现是慢性炎 性的降低，其被假定是修正的微生物组和肠L-细胞水平上修正的信号 传导的原因。其他新发现是肠L-细胞、肠细菌和系统性宿主炎症之间 的密切相互作用水平，其可在人类中造成被认为是总体代谢综合征的 一部分的各种不同疾病(3)。O'Mahony和同事研究了参与这一途径 的炎性信号传导过程。他们的目标是是在体外比较来自于肠系膜淋巴 结(MLN)的人类单核和树突状细胞(DC)与外周血单核细胞(PBMC) 在确定的微生物刺激下的细胞因子产生。将从具有活性结肠炎的患者 的MLN(n＝10)和外周血(n＝12)分离的单核细胞和DC，在体外 与益生细菌唾液乳杆菌(Lactobacillussalivarius)UCC118或婴儿双歧 杆菌(Bifidobacteriuminfantis)35624或病原生物体鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonellatyphimurium)UK1温育。通过ELISA定量白介素(IL) -12、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β和IL-10细胞 因子水平。PBMC和PBMC来源的DC对乳杆菌、双歧杆菌和沙门氏 菌菌株作出响应分泌TNF-α，而MLN细胞和MLN来源的DC仅对沙 门氏菌激惹作出响应分泌TNF-α。来自于系统区室的细胞在与沙门氏 菌或乳杆菌共同温育后分泌IL-12，而MLN来源的细胞仅对沙门氏菌 作出响应产生IL-12。PBMC对双歧杆菌菌株作出响应分泌IL-10，但 是不对乳杆菌或沙门氏菌菌株作出响应。然而，MLN细胞对双歧杆菌 和乳杆菌作出响应分泌IL-10，但不对沙门氏菌作出响应。结论是，共 生体细菌诱导MLN细胞的调节性细胞因子生产，而病原性细菌诱导T 细胞辅助细胞1-极化细胞因子。与PBMC相比，共生体-病原体在细胞 因子响应中的趋异在从粘膜免疫系统分离的细胞中更加显著(4)。这 一工作表明，在远端胃肠道中起作用的内源细胞信号传导途径可以区 分它们的响应，因为微生物组中的菌群在共生体与病原体之间变化。

免疫调节途径

白细胞募集是关键的免疫过程。已描述了多种因子促进白细胞浸 润到发炎组织中，但只是在最近才有证据表明出现这种炎性过程的内 源的负调节物。在白细胞渗出的内源抑制剂的新领域中，发现了几种 局部产生的调节物。来自于几种炎性疾病模型的最新发现显示，组织 可以自我调节炎性细胞的募集，表明局部组织可能对免疫应答具有比 以前认识到的更大的“调控发言权”(5)。在肥胖或糖尿病患者中被 靶向进行替换的微生物，可以作为被设计用于协助代谢综合征的管理 以及预防或控制相关炎症表象例如肥胖症和2型糖尿病的口服位点特 异性递送配制物的组分来递送。这种基于在肠L-细胞和树突状细胞的 水平上改变局部信号传导的新的治疗方法，是根据下述观察提出的， 即局部产生的白细胞募集的调节物可能代表了组织和器官为对抗免疫 系统的破坏性潜力提供保护而进化出的局部自我平衡机制(5)。局部 微生物组菌群的参与作为有益于宿主的保护性因素，是本发明的实践 的新的方面，因为这解释了为什么某些用于治疗感染的抗生素的使用 可能引起比通过根除病原体所解决的更多的来自于微生态失调的问 题。

Larsen和同事研究了代谢疾病与肠中细菌种群之间的联系。他们 的研究目的是评估在患有2型糖尿病的人中肠道微生物菌群的组成之 间的差异，并与作为非糖尿病患者的对象进行比较。研究群体包括具 有广范围的年龄和体重指数(BMI)的36位男性成年人，其中18位对 象被诊断患有2型糖尿病。通过实时定量PCR(qPCR)并在对象的亚 组(N＝20)中通过16SrRNA基因的V4区的编码标签的扩增子焦磷 酸测序，调查了粪便细菌组成。与对照组相比，在糖尿病组中厚壁菌 门和梭菌纲的比例显著降低(P＝0.03)。此外，拟杆菌门与厚壁菌门 的比率以及拟杆菌门-普氏菌属组与球状梭菌(C.coccoides)-直肠真杆 菌(E.rectale)组的比率正性并显著地与血浆葡萄糖浓度相关(P＝ 0.04)，但是不与BMI相关。同样地，与非糖尿病人相比，乙型变形 菌纲在糖尿病人中高度富集(P＝0.02)并与血浆葡萄糖正相关(P＝ 0.04)。这项研究的结果表明，在人类中，2型糖尿病与肠道微生物菌 群的组成变化相关。当将微生物菌群与代谢疾病例如肥胖症相联系并 开发通过改变肠道微生物菌群来控制代谢疾病的策略时，应该考虑到 葡萄糖耐受水平(6)。

最近的研究将附加的注意力聚焦于肠道微生物菌群作为提高从饮 食的能量得率、调节外周代谢并因此增加体重的环境因素。肥胖症与 肠道微生物菌群的组成和代谢功能的显著变化相关，但驱动这种双向 关系的病理生理学过程尚未被充分阐明。显然，在肠道微生物菌群的 组成、从饮食提取的能量、参与能量稳态平衡的肠激素的合成、丁酸 的产生和脂肪储存的调控之间存在重要关系(7)。这项工作的最重要 发现来自于我们检查激素对刺激因素例如食物和益生生物作出响应而 从远端肠释放的研究(3)。

宿主代谢组的调控和代谢组MetaSensor的发明

远端肠对通过饮食提呈到它的分子的响应性，在调控摄食的上游 感官驱动器例如饥饿、口味、气味和食欲中是重要的。摄食、选择性 吸收和食欲的反馈调节控制之间的相互作用，一起确保了生物体获得 适合的滋养，并且它的能量需求通过摄入食物作为燃料得到适合的平 衡，当前用于描述这些过程的步骤的术语是代谢组学。在这种情况下， 重要的是将“生物体”考虑为所有细胞的组合，包括细菌、病毒、真 菌和人类细胞，合称为超生物体(MetaOrganism)，其根据细胞数量 来说超过90％为非人类细胞。执行这些复杂过程的生物传感器在非人 类细胞与人类细胞之间是互动的，合称为MetaSensor，并且预期大多 数代谢组学过程受到MetaSensory信号传导，即非人类与人类细胞之间 的互动的控制。同样地，理论上，宿主免疫力以及因此病症例如食物 过敏，受到同样的这些远端肠MetaSensor控制。考虑到在稳态平衡下 主要调控MetaSensor在宿主代谢组学中的中心作用，显然食物摄入受 到确定输入的组合传感器信号(与口味和气味相互作用的脑编程的食 欲)调控，当摄食超过生物体在十二指肠和空肠上游的吸收能力时， 被接收到的远端肠传感器信号例如回肠闸和相关激素调控“终止输入” 信号抵消。短期储存包括腹部脂肪和肝，长期储存是外周脂肪，两者 都与MetaSensory信号传导过程相互作用以平衡能量的供应和需求。对 于主要由食欲和来自于口味和气味的组合感官输入驱动的在摄食与储 存之间产生的平衡，存在良好的理解。革新之处在与将回肠闸及其相 关调控MetaSensor组分鉴定为摄食过程的终止信号，并且我们在这一 领域中在RYGB患者中使用的途径操作的工作是说明性的(参见 WO2012-118712，以其全文并入本文)，在其中我们显示食物物质的 回肠递送产生终止信号，因为MetaSensor检测到吸收不良，并使用从 回肠的L-细胞释放的激素(GLP-1、PYY和许多其他激素)，通过脑 刺激性反馈来关闭摄食和食欲。在突破性发现中，我们现在发展了操 作肠MetaSensor的回肠闸组分及其整体控制器的值得称道的手段。在 体重正常且营养平衡的个体中，MetaSensor的回肠闸组分(终止信号 的控制器)包含与有益的肠微生物相互作用的宿主L-细胞。肠细菌是 超生物体代谢组学的必不可少的组分，并且它们在来自于回肠的终止 信号的操作中具有重要调控作用是符合逻辑的。肠微生物缺乏直接向 宿主大脑发出信号的能力，因此它们利用宿主的信号传导途径来传达 它们的需要。合并的MetaSensor通过与L-细胞的相互作用在远端肠发 挥作用，以调控终止信号来获得共同利益。简单来说，某些肠细菌可 以抑制来自于大脑的食欲信号的停止。它们在渴望营养物、食物或甚 至特定分子时这样做。当肠道深处的微生物饥饿时，宿主饥饿，这是 因为MetaSensor的终止信号被失活。图1至7详细图示了MetaSensor， 并在图1中示出了它在总体上如何构成，并在图2-7中描述了它在回肠 中控制代谢组学和免疫力的操作。回肠中的MetaSensor从肠L-细胞和 肠细菌的组合作用产生调控激素输出。图2示出了MetaSensor通过终 止信号GLP-1、PYY和其他L-细胞来源的调控激素的正常运行。值得 注意的是，当饮食平衡并且因此一些过量饮食到达远端肠时，系统处 于平衡之中。然而，当患者只摄食IR-CHO时，回肠中的细菌不获得营 养。它们通过抑制L-细胞输出作出反应，饥饿接踵而来。另一方面， 如果患者正具有平衡饮食并且一部分到达细菌，则它们没有理由抑制 L-细胞输出，并且正常的进食产生饱足感。图3示出了当致糖尿病食 品例如糖增甜的饮料改变微生物组并因此改变MetaSensor的激素运行 时的情形。图4示出了当存在微生物组微生态失调时的情形，所述微 生态失调通过对L-细胞的作用产生MetaSensor的异常调节控制。参考 我们以前在健康和患病者中使用回肠闸操作的工作，图5示出了RYGB 手术对MetaSensor的影响。值得注意的是，RYGB手术机械地将摄入 的内含物转向通过吸收性(而不是信号传导)区域，并将信号传导区 域向下游进一步轰击到下空肠和回肠中。众多营养物以如此大的数量 到达回肠产生“吸收不良紧急情况”，并通过关闭来自于L-细胞的激 素释放来引发饱足感信号，以在某种程度上使用相同或更少量的所需 食物再生信号传导，从而恢复维持和再生。并且由于它不是个性化的， RYGB手术与信号传导到线下约4年的点相比将触发更多再生，因此 空肠将进化以将吸收恢复到基线水平。图6示出了RYGB的口服模拟 物、即被称为Brake的回肠闸激素释放物质对MetaSensor的影响。Brake 以与RYGB手术相同的方式作用于远端。存在相同的L-细胞激活，其 输出产生再生并使饥饿消失成饱足感。回肠信号的强度不如RYGB强， 但是由于延迟释放剂型，它可能时间更加延长。因此，与手术相比， 使用Brake时刺激的强度将更加温和并且更接近于生理状况，因此再生 以远远更加自然和生理的方式在肝、胰腺、GI肠细胞中进行。并不很 令人吃惊的是，与单独的回肠闸途径相比，使用RYGB时体重减轻更 加快速，因为RYGB手术也在物理上减小了胃的尺寸，以第二种意义 深远的方式限制了摄食。最后，图7考虑了常见糖尿病药物二甲双胍 与Brake的组合对MetaSensory过程的运行的影响，说明了药物与 RYGB手术的模拟物之间的协同相互作用，这个实例是说明性的，并 且存在许多使用在代谢综合征表象例如2型糖尿病的治疗中使用的其 他药物的实例。

简单来说，MetaSensor对它对感受到的吸收不良的检测作出响应， 通过回肠闸激素向大脑给出终止信号。总的来说，由该讨论和这些图 示出的本发明的新方面，是这种MetaSensor对宿主代谢组的作用的本 质，所述效应是来自于食物递送的检测的L-细胞信号和益生生物对L- 细胞的作用的组合作用，以对细菌交流的营养需求作出响应而修改信 号。益生生物控制我们的食欲和对营养物和食物的选择以适合于它们 自身目的得高效率，是引人注目的。我们与我们的益生生物共生体一 起，是一个平衡的生态系统，一个真正的超生物体。在稳态平衡下， 所有参与方成功地满足了它们的需求。所有被松散地描述为代谢综合 征的组分的疾病是失衡的结果，所述失衡可能是细菌起源的，或者源 自于宿主的细胞。无论如何，如果打算恢复稳态平衡，MetaSensor的 两种组分必须受到治疗注意，并且当前提呈的文件提供了重新平衡 MetaSensory输出以恢复稳态平衡并消除疾病的详细手段。所有本文中 描述和正在进行的研究后得到的治疗进展，是由改变本文中描述的 MetaSensor的输入-输出性质的治疗所介导的变革步骤。

对于远端回肠中的MetaSensor来说，存在一些其他有用方面。具 体来说，MetaSensor当在GI道腔内检测到外来侵入物时，提供了快速 的免疫系统介导的应答，并且可以通过用经本文中描述的口服配制物 递送到回肠和结肠的更加有益的微生物替换艰难梭状芽胞杆菌(C. difficile)，重新介导肠道微生态失调例如艰难梭状芽胞杆菌(C.difficile) 感染的快速改善。此外，作为经口服有活性的远端回肠疫苗，存在优 选的可实施性。具体实例存在于PCT/US13/31483中，其全部内容通过 参考并入本文。

与用外来生物体刺激MetaSensor并行地，现在明显看出， MetaSensor对作用于益生细菌的化学物质具有响应性，每种所述益生 细菌具有激发响应的特定分子，然后将所述响应通过L-细胞、派伊尔 结中的淋巴组织或十有八九腔内存在的任何肠细胞，通讯到人类宿主。 当宿主或超生物体的整合肠生物体遇到任何营养组分或必需物质的缺 乏时，这种缺乏的信号从肠中的MetaSensor(如果通过宿主微生物组 通讯的话)并且如果通过宿主细胞通讯的话可能从脑或舌或鼻到达大 脑。宿主获得该缺失的物质的行动被感觉为“渴望”，并且在满足后 MetaSensor停止搜索。因此，当微生物组生物体渴求某些特定物质时， 我们作为超生物体被指令去获得该特定物质。这一新发现立即为通过 聚焦于MetaSensor自身的治疗性策略来调节潜在有害物质例如精制糖 的摄入开辟了机会，并解释了回肠递送的葡萄糖调节糖尿病和被称为 代谢综合征的其他疾病的能力(参见WO2010-027498和WO 2013-063527A1，通过参考并入本文)。尽管这些发明聚焦于宿主通过 调节性MetaSensor作用的需求，但可以容易地看到，通过靶向替换来 调节微生物组也将以有益的方式影响宿主的疾病。利用本文中公开的 提供活生物体向回肠中的MetaSensor位点的靶向口服递送的能力，现 在可以替换与代谢疾病例如肥胖症相关的缺失的微生物，例如 faecalibacteriumprausnitzii。

提供下面的实施例是出于说明而不是限制的目的。

实施例1

实施例1涉及本发明的用于治疗艰难梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)感染的配制物的制造和试验。

生物测定法

用于抗生素相关腹泻(AAD)和艰难梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)相关腹泻(CDAD)的标准疗法具有有限的效能。益生生物预 防是降低AAD和CDAD发生率的有希望的可替选方案。优选的实施方 式是向所述患有艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)感染的患者 给药靶向回肠和升结肠的微颗粒剂，其含有约10⁵至10¹²cfu的一种或 多种益生生物物种。优选的实施方式是反映出正常人类对象、优选为 过去没有暴露于抗生素并且未被艰难梭状芽胞杆菌(C.difficile)感染 的患者的微生物组的平衡和组分的益生生物的混合物。用于试验所述 配制物的效能的临床流程，将所述益生生物配制物以某种方式给药于 患者，然后给药于由于在人类患者中的艰难梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)而试验过益生菌或粪便移植的有效性的其他患者。例如，在 成年住院病人中对这些益生菌之一进行了单中心、随机、双盲、安慰 剂对照的剂量范围研究，所述病人被分派到三个组之一：每天两粒益 生生物胶囊，每天一粒益生生物胶囊和一粒安慰剂胶囊，或每天两粒 安慰剂胶囊。在使用每种益生生物的未受保护的配制物的设计中，每 粒益生生物胶囊含有500亿c.f.u.的活生物体。益生生物预防或治疗在 初始抗生素给药的36h内开始，在最后一剂抗生素后继续5天，并继 续跟踪患者21天。在这项研究中，与Pro-1(28.2％)相比，Pro-2(15.5％) 具有更低的抗生素相关腹泻(AAD)发生率。与安慰剂组(44.1％)相 比，每个益生生物组具有更低的AAD发生率。在获得AAD的患者中， 与安慰剂(6.4天)相比，Pro-2(2.8天)和Pro-1(4.1天)具有更短 的症状持续时间。同样地，与Pro-1(9.4％)相比，Pro-2(1.2％)具有 更低的艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)相关腹泻(CDAD) 发生率。与安慰剂(23.8％)相比，每个治疗组具有更低的CDAD发生 率。在治疗组中与安慰剂组相比，并且在Pro-2中与Pro-1相比，胃肠 症状更加少见。在这项研究中使用的专有的益生生物掺混物在使用抗 生素的住院患者中被良好地耐受，并有效地降低AAD以及尤其是艰难 梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)相关腹泻感染的风险。使用1000 亿c.f.u.示出了剂量范围效应，获得了优越的结果和与500亿c.f.u.相比 更少的胃肠事件(9)。显然，保护性配制物将允许靶向递送更少数量 的这些微生物体，降低了产品的微生物体生产成本。

在上述研究设计的跟踪随访中，Johnson和同事对在接受抗生素的 成年人中使用益生生物的随机、安慰剂对照的效能研究进行了文献搜 索，在所述研究中艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)感染(CDI) 是度量的结果之一。此外，它们对包含在超过一个随机试验中的益生 菌进行了后设分析。识别出11项研究；大多数对于确定益生菌在预防 CDI中的效能来说严重能力不足。两项显示出在益生生物接受者中明 显更低的CDI比率。使用嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)CL1285 和乳酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LBC80R的益生生物组合的三项研 究的后设分析以及这些研究与使用布拉迪酵母(Saccharomyces boulardii)的四项研究的组合分析，显示出与安慰剂接受者相比，在益 生菌的接受者中CDI比率更低(风险比＝0.39；95％置信区间0.19-0.79)。 因此，尽管鉴定到研究设计中的潜在缺陷，但可用文献的综述表明， 使用特定益生生物试剂进行CDI的初始预防可能是可以实现的。需要 具有足够样本量和严格设计的其他研究来验证这些发现(10)。作为 评注，所综述的研究没有将益生生物靶向，因此本发明远远比迄今为 止使用的未保护的配制物更加有效。

材料和方法：

下面描述的是用于在生物测定法中试验而制造和试验的用于靶向 递送的配制物，所述配制物具有用于在胃、十二指肠和回肠中在pH1.0 -6.0下释放的抗生素(万古霉素250mg)(毫米范围)和用于每6小 时在右结肠中在pH5.5-6.2下释放的共生体(益生元：L-亮氨酸；益 生生物：乳杆菌(lactobacillus)和双歧杆菌(bifidobacterium)菌种))。

活性药物成分(API)：

抗生素-万古霉素盐酸盐(微粉化)，由当地普通美国/非美国供 应商例如LGMPharma,USA等供应；

益生元-蛋白质(酪蛋白、水解蛋白等)，肽，氨基酸(L-亮氨 酸)，糖类葡萄糖，乳糖，淀粉，菊糖等，以及某些细菌菌株：由Denisco、 CHRHansen、InstituRisell-Lallemand和其他益生元的高品质全球供应 商提供。

活益生菌菌种：乳杆菌(lactobacillus)和双歧杆菌 (bifidobacterium)，由Denisco、CHRHansen、InstituRisell-Lallemand 和其他高品质全球供应商提供。

无活性成分(赋形剂)：

微晶体淀粉、HPMC或等效的“聚合物”，硬质明胶胶囊，以及 其他填充剂等——从当地美国供应商例如FMC、Capsugel、Colorcon 等购买。

中间配制物/制造过程(在当地CMO)：

“未包衣的抗生素颗粒/球粒”(毫米范围)：

通过在低或高剪切混合机中用抗生素和赋形剂干法成粒来制备， 和/或使用水进行湿法成粒并使用挤出机/滚圆机进一步造粒，然后使用 优化的条件干燥以除去过量的水。

“pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的抗生素颗粒/球粒”(毫米范围)：

成分 量(％) 未包衣的抗生素颗粒/球粒 95％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 1％ “聚合物”(pH 5.0至6.0敏感的包衣) 4％ 如果需要的话，水/溶剂 0％

将未包衣的抗生素颗粒/球粒用HPMC或等效的“聚合物”的水性 或溶剂包衣溶液包衣(屏障包衣)，以便在包衣锅或流化床干燥机/包 衣机中使用优化的条件进行包衣。将屏障包衣的微球粒或颗粒用pH5.0 至6.0敏感的包衣“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化 床干燥机/包衣机中使用优化的条件进一步包衣。将上述pH5.0至6.0 敏感的包衣的微球粒或颗粒，用HPMC或等效的“聚合物”的水性或 溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的田间进 行密封包衣。

“pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒”(100微米)。

通过用赋形剂对益生元/益生生物进行干法成粒来制备，和/或在高 或低剪切混合机中使用水/溶剂湿法成粒并使用挤出机/滚圆机进一步 造粒，然后使用优化的条件干燥以除去水。将上述微球粒或颗粒用 HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化 床干燥机/包衣机中使用优化的条件进一步包衣(屏障包衣)。将上述 屏障包衣的微球粒或颗粒用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包 衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件进一步包衣(pH5.5至 6.2敏感的包衣)。将上述pH5.5至6.2敏感的包衣的微球粒或颗粒， 用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流 化床干燥机/包衣机中使用优化的条件密封包衣。

“pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒”(100微米)

成分 量(％) pH 5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒 88％ HPMC或等效的“聚合物”(密封包衣) 2％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 10％ 如果需要的话，水/溶剂 0％

将上述pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒用“聚 合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使 用优化的条件进行包衣(pH7.2至7.5敏感的包衣)。将上述微球粒或 颗粒，用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣 锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件进一步包衣(密封包衣)。

实例：最终产品-袋剂-配制物/制造过程(在当地CMO，在整个过 程中控制房间和湿度条件)：

将上述未包衣的抗生素颗粒/球粒、pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC) 的抗生素颗粒/球粒和pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/ 球粒中间配制物，以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中 使用优化的条件掺混。使用粉末装填设备将掺混的粉末装填到袋剂中。

实例：最终产品-胶囊(硬质明胶/HPMC)-配制物/制造过程(在当 地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将上述未包衣的抗生素颗粒/球粒、pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC) 的抗生素颗粒/球粒和pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/ 球粒中间配制物，以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中 掺混。使用包封设备将掺混的粉末装填在胶囊中。

实例：最终产品-胶囊(液体填充的硬质或软质明胶)-配制物 /制造过程(在当地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

成分 量(％) 未包衣的抗生素颗粒/球粒 35％ pH 5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的抗生素颗粒/球粒 10％ pH 7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒 10％ 植物油(不混溶液体) 40％ 作为粉末的明胶和硬质明胶胶囊 5％

将上述未包衣的抗生素颗粒/球粒、pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC) 的抗生素颗粒/球粒和pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/ 球粒中间配制物，以所需比例与不混溶液体一起在掺混机中掺混。使 用软质或硬质明胶包封设备，使用优化的条件装填到胶囊中。

实例：最终产品-胶囊包胶囊型(硬质明胶)(1)-配制物/制造过 程(在当地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒中间配制物 以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混。使用包封设 备和优化的条件将掺混物装填在较小的胶囊中。将上述未包衣的抗生 素颗粒/球粒和pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的抗生素颗粒/球粒中间 配制物以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混。使用 特制的胶囊装填设备和优化的条件将掺混的中间配制物与较小的装填 胶囊一起，进一步装填在较大的胶囊中。

实例：最终产品-胶囊包胶囊型(硬质明胶)(2)-配制物/制造过 程(在当地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒中间配制物 以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混。使用包封设 备将掺混物装填到较小的胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣 溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中，使用优化的条件将较小的 装填胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。将上述未包衣的抗 生素颗粒/球粒和pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的抗生素颗粒/球粒中 间配制物，以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混。 使用特制的胶囊装填设备和优化的条件，将较小的pH7.2至7.5包衣 的胶囊和掺混物进一步装填到较大的胶囊中。

实例：最终产品-片剂/微片剂-配制物/制造过程(在当地CMO，在 整个过程中控制房间和湿度条件)：

将未包衣的抗生素颗粒/球粒、pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的 抗生素颗粒/球粒和pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒 中间配制物，以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混， 以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉 末压制成片剂/微片剂。使用水性或溶剂包衣溶液，使用HPMC或等效 的“聚合物”，将片剂在包衣锅或流化床干燥机中进一步薄膜包衣(薄 膜包衣)。

实例：最终产品-口服崩解片剂(ODT)配制物/制造过程(在当地 CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将未包衣的抗生素颗粒/球粒、pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的 抗生素颗粒/球粒和pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒 中间配制物，以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混。 使用制片设备将掺混的粉末压制成软片。

实例：最终产品-片剂包片剂(1)-配制物/制造过程(在当地CMO， 在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒中间配制物 以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、 崩解和润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成小的 片剂/微片剂。将上述未包衣的抗生素颗粒/球粒和pH5.0至6.0的肠溶 包衣(EC)的抗生素颗粒/球粒中间配制物以所需比例与赋形剂一起在 V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。 使用压缩包衣制片机，将掺混的粉末压缩包衣在小的片剂/微片剂上。 使用水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机中使用HPMC或 等效的“聚合物”将片剂进一步薄膜包衣(薄膜包衣)。

最终产品-片剂包片剂(2)-配制物/制造过程(在当地CMO，在整 个过程中控制房间和湿度条件)：

将pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒中间配制物 以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、 崩解和润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成小的 片剂/微片剂。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流 化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将压制的片剂用pH7.2至7.5敏 感的包衣进行包衣(“EC片剂”)。将上述未包衣的抗生素颗粒/球粒 和pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的抗生素颗粒/球粒中间配制物以所 需比例与另外的赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流 动、崩解和润滑(用于制片机)。使用压缩包衣制片机，将掺混的粉 末压缩包衣在小的EC片剂/微片剂上。使用水性或溶剂包衣溶液，在 包衣锅或流化床干燥机中使用HPMC或等效的“聚合物”将片剂进一 步薄膜包衣(薄膜包衣)。

实例：最终产品-胶囊包片剂(硬质明胶)(1)配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将未包衣的抗生素颗粒/球粒、pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的 抗生素颗粒/球粒和pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒 中间配制物以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混， 以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉 末压制成片剂/微片剂。使用特制的包封设备将赋形剂和片剂装填到硬 质明胶胶囊中。

实例：最终产品-胶囊包片剂(硬质明胶)(2)配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒中间配制物 以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、 崩解和润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成小的 片剂/微片剂。将上述未包衣的抗生素颗粒/球粒和pH5.0至6.0的肠溶 包衣(EC)的抗生素颗粒/球粒中间配制物以所需比例与另外的赋形剂 一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用于 制片机)。使用包封设备将掺混的粉末和片剂装填到大的硬质明胶胶 囊中。

实例：最终产品-胶囊包片剂(硬质明胶)(3)配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒中间配制物 以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、 崩解和润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成小的 片剂/微片剂。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流 化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将压制的片剂用pH7.2至7.5敏 感的包衣进行包衣(“EC片剂”)。将上述未包衣的抗生素颗粒/球粒 和pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的抗生素颗粒/球粒中间配制物以所 需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩 解和润滑(用于制片机)。使用包封设备将掺混的粉末和EC片剂装填 到较大的胶囊中。

实例：最终产品-双层片剂-配制物/制造过程(在当地CMO，在整 个过程中控制房间和湿度条件)：

将上述未包衣的抗生素颗粒/球粒和pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC) 的抗生素颗粒/球粒中间配制物以所需比例与赋形剂一起在V型或类似 的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用双 层制片设备将掺混的粉末压制成片剂(“EC片剂”)。将pH7.2至 7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒中间配制物以所需比例与赋 形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用 于制片机)。使用双层制片机将掺混的粉末压制在EC片剂上。使用 HPMC或等效的“聚合物”(薄膜包衣)，在包衣锅或流化床干燥机 中将片剂用水性或溶剂包衣溶液进一步薄膜包衣。

实例：最终产品-三层片剂-配制物/制造过程(在当地CMO，在整 个过程中控制房间和湿度条件)：

将上述未包衣的抗生素颗粒/球粒中间配制物以所需比例与赋形 剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用 于制片机)。使用三层制片设备将掺混的粉末压制成片剂(“EC片剂 -1”)。将上述pH5.0至6.0的肠溶包衣(EC)的抗生素颗粒/球粒中 间配制物以所需比例与另外的赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺 混，以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用三层制片设备将 掺混物压制在片剂的第一层(EC片剂-1)上(“EC片剂-2”)。将 pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒中间配制物以所需 比例与另外的赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、 崩解和润滑(用于制片机)。使用三层制片机将掺混的粉末压制在片 剂的第二层(EC片剂-2)上。使用HPMC或等效的“聚合物”，在包 衣锅或流化床干燥机上使用水性或溶剂包衣溶液将片剂进一步薄膜包 衣(薄膜包衣)。

最终产品包装(在当地CMO，在整个过程中干燥低湿度和低氧(N2 吹扫)条件)：

在低湿度(等于或低于40％RH)和受控的室温条件(在20至25 摄氏度)下，使用感应密封或泡罩，将上述颗粒包装在袋中，并将包 衣片剂、胶囊包装在瓶子中。

质量控制释放试验(活性药物成分(API)和最终药物产品)共生体——

抗生素

试验 方法和评估 鉴定 HPLC等 测定 HPLC等 杂质和相关物质 HPLC等 内含物均匀性 HPLC等

共生体和抗生素

粪便微生物菌群移植(MET).

材料和方法：

下面描述的是用于在生物测定法中试验而制造和试验的用于靶向 递送的配制物，所述配制物具有每24小时在右结肠中在pH5.5-6.2 下释放的健康人类粪便菌群。

活性药物成分(API)：

人类粪便细菌菌群由进行过安全性筛查的健康人类志愿者捐献。

渗透压调节剂：蛋白质(酪蛋白、水解蛋白等)，肽，氨基酸(L- 亮氨酸)，糖类葡萄糖、乳糖、淀粉、菊糖，氯化钠，磷酸缓冲剂等。 Lallemand和其他高品质全球供应商。

无活性成分(赋形剂)：

填充剂和载体：微晶体，淀粉，HPMC或等效的“聚合物”，硬 质HPMC胶囊，软质明胶和其他材料等——购自当地美国供应商例如 FMC、Capsugel、Colorcon，以及预胶化淀粉——崩解剂，二氧化硅—— 流动助剂，硬脂酸盐——润滑剂)——来自于各个著名的赋形剂供应 商。

中间配制物/制造过程(在当地CMO)：“干燥的健康人类粪便细菌菌 群”：

将磷酸盐缓冲剂、氯化钠和/或右旋糖等溶解在水中。向混合物加 入健康人类供体的粪便细菌菌群，并在混合机中搅拌。将悬液通过大 的筛网过滤器以除去不溶性材料(菌群混合物)。将磷酸盐缓冲剂、 泰洛沙泊和/或谷氨酸钠等溶解在水中并稀释菌群混合物。将混合物装 填在小管中并冷冻干燥，或通过喷雾干燥机或泡沫干燥机以除去水分 并产生细粉末。

“干燥的人类粪便细菌菌群颗粒”(75-100微米范围)：

使用干燥的人类粪便细菌菌群和赋形剂在低剪切混合机中制备干 燥颗粒。

实例：最终产品-胶囊(HPMC)-配制物/制造过程(在当地CMO， 在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

成分 量(％) 干燥的人类粪便细菌菌群 15％ “聚合物”(pH 5.5至6.2敏感的包衣) 25％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 25％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 5％ HPMC胶囊 30％

使用包封设备将上述干燥的人类粪便细菌菌群装填到小的胶囊 中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥 机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行包 衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶 囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行屏障包衣。 使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包 衣机中使用优化的条件将薄膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣 进一步包衣。最后在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件， 将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进 行密封包衣。

实例：最终产品-胶囊(HPMC)-配制物/制造过程(在当地CMO， 在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

成分 量(％) 干燥的人类粪便细菌菌群 68％ “聚合物”(pH 5.5至6.2敏感的包衣) 10％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 10％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 2％ HPMC胶囊 10％

使用包封设备将上述干燥的人类粪便细菌菌群颗粒装填到小的胶 囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干 燥机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行 包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的 胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行屏障包 衣。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥 机/包衣机中使用优化的条件将薄膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏感的 包衣进一步包衣。最后在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的 条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣 溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-液体填充的软质明胶/Veggie凝胶胶囊-配制物/制 造过程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述干燥的人类粪便细菌菌群与植物油(不混溶液体)和/或其 他非水性成分(糊剂)在掺混机中使用最适条件进行混合。在包封设 备中将混合物与植物性凝胶混合物或明胶一起装填，用于生产Veggie 或软质明胶胶囊。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅 或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感 的包衣进行包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件， 将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进 行屏障包衣。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流 化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将薄膜包衣的胶囊用pH7.2至 7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使 用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或 溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-液体装填的硬质胶囊(例如HPMC)-配制物/制造 过程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

成分 量(％) 干燥的人类粪便细菌菌群 15％ 植物油(不混溶液体)和/或其他非水性成分(糊剂) 53％ “聚合物”(pH 5.5至6.2敏感的包衣) 10％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 10％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 2％ 硬质明胶/HPMC胶囊 10％

将上述干燥的人类粪便细菌菌群与植物油(不混溶液体)和/或其 他非水性成分(糊剂)在掺混机中使用最适条件进行混合。使用包封 设备将混合物装填到硬质HPMC胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶 剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将胶 囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包 衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物” 的水性或溶剂包衣溶液屏障包衣。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣 溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将薄膜包衣 的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅或流化 床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的 “聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-胶囊包胶囊型(HPMC)(1)-配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

使用包封设备将上述干燥的人类粪便细菌菌群颗粒装填到小的胶 囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干 燥机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行 包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的 胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行屏障包 衣。将上述赋形剂与较小的填充胶囊一起，使用特制的胶囊装填设备 和优化的条件进一步装填到较大的胶囊中。使用“聚合物”的水性或 溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将 较大的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅或 流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等 效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-软凝胶胶囊包胶囊型(例如软明胶)(2)-配制物 /制造过程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

在用于生产veggie或软明胶胶囊的包封设备中，使用最适条件， 将上述干燥的人类粪便细菌菌群与植物性凝胶混合物或明胶一起装 填。使用用于生产较大veggie或软明胶胶囊的另一个包封设备将veggie 或软明胶胶囊与植物油一起包封。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣 溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将较大的胶 囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包 衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物” 的水性或溶剂包衣溶液进行屏障包衣的。使用“聚合物”的水性或溶 剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将薄 膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅 或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或 等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-胶囊包片剂(HPMC)-配制物/制造过程(在当地 CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

成分 量(％) 干燥的人类粪便细菌菌群 68％ “聚合物”(pH 5.5至6.2敏感的包衣) 10％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 10％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 2％ HPMC胶囊 10％

使用压片机和最适条件，将上述干燥的人类粪便细菌菌群颗粒压 制成软的微片剂。然后使用包封设备将微片剂装填到小的胶囊中。使 用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣 机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行包衣。在 包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用 HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行屏障包衣。使 用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣 机中使用优化的条件将薄膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进 一步包衣。最后在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件， 将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进 行密封包衣。

实例：最终产品-胶囊包片剂(液体填充的软质明胶/Veggie凝胶)-配 制物/制造过程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条 件)：

使用压片机和最适条件，将上述干燥的人类粪便细菌菌群颗粒压 制成软的微片剂。在用于生产veggie或软明胶胶囊的包封设备中，将 微片剂和植物油混合物与植物性凝胶混合物或明胶一起装填。使用“聚 合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使 用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行包衣。在包衣锅 或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或 等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行屏障包衣。使用“聚合 物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用 优化的条件将薄膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。 最后在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶 囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行密封包衣。

最终产品包装(在当地CMO在整个过程中干燥低湿度和低氧(N2 吹扫)条件)。在低湿度(等于或低于40％RH)和受控的室温条件(在 20至25摄氏度)下，使用感应密封或泡罩，将上述颗粒包装在袋中， 并将包衣片剂、胶囊包装在瓶子中。

质量控制释放试验(活性药物成分(API)和最终药物产品)

人类粪便细菌菌群

使用艰难梭状芽胞杆菌(C.difficile)抗毒素(CDAT)的粪便微生物 菌群移植(MET)

材料和方法：

下面描述的是用于在生物测定法中试验而制造和试验的用于靶向 递送的配制物，所述配制物具有每24小时在右结肠中在pH5.5-6.2 下释放的健康人类粪便菌群。

活性药物成分(API)：

人类粪便细菌菌群由进行过安全性筛查的健康人类志愿者捐献。

艰难梭状芽胞杆菌(C.difficile)抗毒素(CDAT)由专门的供应 商提供。

渗透压调节剂：蛋白质(酪蛋白、水解蛋白等)，肽，氨基酸(L- 亮氨酸)，糖类葡萄糖、乳糖、淀粉、菊糖，氯化钠，磷酸缓冲剂等。 Lallemand和其他高品质全球供应商。

无活性成分(赋形剂)：

填充剂和载体：微晶体，淀粉，HPMC或等效的“聚合物”，硬 质HPMC胶囊，软质明胶和其他材料等——购自当地美国供应商例如 FMC、Capsugel、Colorcon，以及预胶化淀粉——崩解剂，二氧化硅—— 流动助剂，硬脂酸盐——润滑剂)——来自于各个著名的赋形剂供应 商。

中间配制物/制造过程(在当地CMO)：“干燥的健康人类粪便细菌菌 群”：

将磷酸盐缓冲剂、氯化钠和/或右旋糖等溶解在水中。向混合物加 入健康人类供体的粪便细菌菌群，并在混合机中搅拌。将悬液通过大 的筛网过滤器以除去不溶性材料(菌群混合物)。将磷酸盐缓冲剂、 泰洛沙泊和/或谷氨酸钠等溶解在水中并稀释菌群混合物。将混合物装 填在小管中并冷冻干燥，或通过喷雾干燥机或泡沫干燥机以除去水分 并产生细粉末。

“干燥的人类粪便细菌菌群颗粒”(75-100微米范围)：

使用干燥的人类粪便细菌菌群和赋形剂在低剪切混合机中制备干 燥颗粒。

“CDAT颗粒”(75-100微米范围)：

使用CDAT和赋形剂在低剪切混合机中制备干燥颗粒。

实例：最终产品-胶囊(HPMC)-配制物/制造过程(在当地CMO， 在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

成分 量(％) 干燥的人类粪便细菌菌群 10％ CDAT 5％ “聚合物”(pH 5.5至6.2敏感的包衣) 25％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 25％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 5％ HPMC胶囊 30％

使用包封设备将上述干燥的人类粪便细菌菌群和CDAT装填到小 的胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化 床干燥机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣 进行包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包 衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行屏 障包衣。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床 干燥机/包衣机中使用优化的条件将薄膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏 感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优 化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂 包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-胶囊(HPMC)-配制物/制造过程(在当地CMO， 在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

成分 量(％) 干燥的人类粪便细菌菌群颗粒 34％ CDAT颗粒 34％ “聚合物”(pH 5.5至6.2敏感的包衣) 10％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 10％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 2％ HPMC胶囊 10％

使用包封设备将上述干燥的人类粪便细菌菌群和CDAT颗粒装填 到小的胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或 流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的 包衣进行包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件， 将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进 行屏障包衣。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流 化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将薄膜包衣的胶囊用pH7.2至 7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使 用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或 溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-液体填充的软质明胶/Veggie凝胶胶囊-配制物/制 造过程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述干燥的人类粪便细菌菌群和CDAT与植物油(不混溶液体) 和/或其他非水性成分(糊剂)在掺混机中使用最适条件进行混合。在 包封设备中将混合物与植物性凝胶混合物或明胶一起装填，用于生产 Veggie或软质明胶胶囊。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在 包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至 6.2敏感的包衣进行包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化 的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包 衣溶液进行屏障包衣。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包 衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将薄膜包衣的胶囊用 pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅或流化床干燥机/ 包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物” 的水性或溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-液体装填的硬质胶囊(例如HPMC)-配制物/制造 过程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

成分 量(％) 干燥的人类粪便细菌菌群 10％ CDAT 5％ 植物油(不混溶液体)和/或其他非水性成分(糊剂) 53％ “聚合物”(pH 5.5至6.2敏感的包衣) 10％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 10％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 2％ 硬质明胶/HPMC胶囊 10％

将上述干燥的人类粪便细菌菌群和CDAT与植物油(不混溶液体) 和/或其他非水性成分(糊剂)在掺混机中使用最适条件进行混合。使 用包封设备将混合物装填到硬质HPMC胶囊中。使用“聚合物”的水 性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条 件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行包衣。在包衣锅或流化床干 燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚 合物”的水性或溶剂包衣溶液屏障包衣。使用“聚合物”的水性或溶 剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将薄 膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅 或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或 等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-胶囊包胶囊型(HPMC)(1)-配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

使用包封设备将上述干燥的人类粪便细菌菌群和CDAT颗粒装填 到小的胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或 流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的 包衣进行包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件， 将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进 行屏障包衣。将上述赋形剂与较小的填充胶囊一起，使用特制的胶囊 装填设备和优化的条件进一步装填到较大的胶囊中。使用“聚合物” 的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化 的条件将较大的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在 包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用 HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-胶囊包胶囊型(HPMC)(2)-配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

使用包封设备将上述干燥的人类粪便细菌菌群装填到小的胶囊 中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥 机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行包 衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶 囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行屏障包衣。 将上述赋形剂与CDAT和较小的填充胶囊一起，使用特制的胶囊装填 设备和优化的条件进一步装填到较大的胶囊中。使用“聚合物”的水 性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条 件将较大的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在包衣 锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC 或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-软凝胶胶囊包胶囊型(例如软明胶)(3)-配制物 /制造过程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

在用于生产veggie或软明胶胶囊的包封设备中，使用最适条件， 将上述干燥的人类粪便细菌菌群与植物性凝胶混合物或明胶一起装 填。使用用于生产较大veggie或软明胶胶囊的另一个包封设备将veggie 或软明胶胶囊与植物油一起包封。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣 溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将较大的胶 囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包 衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物” 的水性或溶剂包衣溶液进行屏障包衣的。使用“聚合物”的水性或溶 剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将薄 膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅 或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或 等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-胶囊包片剂(HPMC)-配制物/制造过程(在当地 CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

成分 量(％) 干燥的人类粪便细菌菌群颗粒 45.3％ CDAT颗粒 22.7％ “聚合物”(pH 5.5至6.2敏感的包衣) 10％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 10％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 2％ HPMC胶囊 10％

使用压片机和最适条件，将上述干燥的人类粪便细菌菌群颗粒压 制成软的微片剂。然后使用包封设备将微片剂和CDAT颗粒装填到小 的胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化 床干燥机/包衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣 进行包衣。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包 衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行屏 障包衣。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床 干燥机/包衣机中使用优化的条件将薄膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏 感的包衣进一步包衣。最后在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优 化的条件，将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂 包衣溶液进行密封包衣。

实例：最终产品-胶囊包片剂(液体填充的软质明胶/Veggie凝胶)-配 制物/制造过程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条 件)：

使用压片机和最适条件，将上述干燥的人类粪便细菌菌群颗粒压 制成软的微片剂。在用于生产veggie或软明胶胶囊的包封设备中，将 微片剂、CDAT和植物油混合物与植物性凝胶混合物或明胶一起装填。 使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包 衣机中使用优化的条件将胶囊用pH5.5至6.2敏感的包衣进行包衣。 在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将包衣的胶囊用 HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行屏障包衣。使 用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣 机中使用优化的条件将薄膜包衣的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进 一步包衣。最后在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件， 将包衣的胶囊用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进 行密封包衣。

最终产品包装(在当地CMO在整个过程中干燥低湿度和低氧(N2 吹扫)条件)。在低湿度(等于或低于40％RH)和受控的室温条件(在 20至25摄氏度)下，使用感应密封或泡罩，将上述颗粒包装在袋中， 并将包衣片剂、胶囊包装在瓶子中。

质量控制释放试验(活性药物成分(API)和最终药物产品)。人类粪 便细菌菌群——

实施例2：肥胖症、代谢综合征和2型糖尿病

肥胖症由身体的能量摄入、消耗和储存的调控的变化引起。动物 和人类数据证实，在肥胖个体中，在微生物菌群组成中出现系统发生 性变化。此外，来自于动物模型的证据建议，伴随肥胖症的肠微生物 菌群变化引起能量提取和脂质沉积增加，改变肠激素的释放，增加肠 透过性和代谢内毒素血症。用益生元和益生菌治疗可以在肥胖症患者 中逆转许多与微生物菌群改变相关联的代谢效应。因此，肠微生物菌 群是管理肥胖症和肥胖症相关障碍的潜在的营养和药理学靶点(12)。

材料和方法：

下面描述的是用于制造和试验本发明的用于治疗代谢综合征、肥 胖症和2型糖尿病的配制物的方法和材料。

靶向递送：靶向递送：共生体(益生元：L-亮氨酸，益生生物： 乳杆菌、双歧杆菌和Faecalibacteriumprausnitzii的活菌种，用于每24 小时在回肠中在7.2-7.5下释放。

活性药物成分(API)：益生元-蛋白质(酪蛋白、水解蛋白等)， 肽，氨基酸(L-亮氨酸)，糖类葡萄糖、乳糖、淀粉、单水右旋糖、 菊糖等：由Roquette等提供，以及某些细菌菌株：由Denisco、CHR Hansen、InstituRisell-Lallemand和益生元的其他高品质全球供应商提 供。活的益生菌菌种：乳杆菌，双歧杆菌和Faecalibacteriumprausnitzii， 由Denisco、CHRHansen、InstituRisell-Lallemand和其他高品质全球 供应商提供。

无活性成分(赋形剂)：微晶体，预胶化淀粉，聚乙烯吡咯烷酮， 二氧化硅，HPMC或等效的“聚合物”，硬质明胶胶囊和其他填充剂 等——购自美国当地供应商例如FMC、Capsugel、Colorcon、Evonik 等。中间配制物/制造过程(在当地CMO，在整个过程中控制房间和湿 度条件)：

“未包衣的共生体颗粒/球粒”(100微米)

通过将L-亮氨酸、悬液或冷冻干燥的细菌(乳杆菌、双歧杆菌和 Faecalibacteriumprausnitzii菌种)与水混合，并使用优化的条件进一 步喷雾/冷冻干燥以除去水来制备。将益生生物粉末与赋形剂在V型掺 混机或类似的掺混机中混合。

“pH7.2至7.5的肠溶包衣的共生体颗粒/球粒”(100微米)

成分 量(％) 未包衣的共生体颗粒/球粒 95％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 1％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 4％ 如果需要的话，水/溶剂 0％

使用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，将未包 衣的共生体颗粒/球粒在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的 条件进行包衣(屏障包衣)。使用pH7.2至7.5敏感的包衣“聚合物” 的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化 的条件将屏障包衣的微球粒或颗粒进一步包衣。使用HPMC或等效的 “聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机 中使用优化的条件将上述pH7.2至7.5敏感包衣的微球粒或颗粒进行 密封包衣。

“未包衣的单水右旋糖球粒/颗粒”

通过将单水右旋糖与赋形剂在高或低剪切混合机中干法和/或湿 法成粒，并使用挤出机/滚圆机进一步粒化，然后使用优化的条件干燥 以除去水来制备。

“pH7.2至7.5的肠溶包衣的单水右旋糖颗粒/球粒”(100微米)

成分 量(％) 未包衣的单水右旋糖颗粒/球粒 95％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 1％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 4％ 如果需要的话，水/溶剂 0％

使用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，将未包 衣的单水右旋糖颗粒/球粒在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优 化的条件进行包衣(屏障包衣)。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣 溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将上述微球 粒或颗粒进一步包衣(pH7.2至7.5敏感的包衣)。使用HPMC或等 效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包 衣机中使用优化的条件将上述微球粒或颗粒进行密封包衣。

实例：最终产品-袋剂-配制物/制造过程(在当地CMO，在整个过 程中控制房间和湿度条件)：

将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体和单水右旋糖颗 粒/球粒中间配制物以所需比例与辅助流动的赋形剂在V型或类似的掺 混机中掺混。使用粉末装填设备将掺混的粉末装填到袋中。

实例：最终产品-胶囊(硬质明胶/HPMC)-配制物/制造过程(在当 地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将上述未包衣的共生体和单水右旋糖颗粒/球粒中间配制物以所 需比例与辅助流动的赋形剂在V型或类似的掺混机中掺混。使用包封 设备将掺混的粉末装填在胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣 溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将填充的胶 囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。

实例：最终产品-胶囊(硬质明胶/HPMC)-配制物/制造过程(在当 地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体和单水右旋糖颗 粒/球粒中间配制物以所需比例与辅助流动的赋形剂在V型或类似的掺 混机中掺混。使用包封设备将掺混的粉末装填在胶囊中。

实例：最终产品-胶囊(硬质明胶/HPMC)(2)-配制物/制造过程 (在当地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将上述未包衣的共生体和单水右旋糖颗粒/球粒中间配制物以所 需比例与辅助流动的赋形剂在V型或类似的掺混机中掺混。使用包封 设备将掺混的粉末装填在胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣 溶液，在包衣锅或流化床包衣设备中使用优化的条件将填充的胶囊进 行肠溶包衣(pH7.2至7.5敏感的包衣)。

实例：最终产品-胶囊共包装物(2)(硬质明胶/HPMC胶囊)-配 制物/制造过程(在当地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将上述未包衣的共生体颗粒/球粒中间配制物以所需比例与赋形 剂在V型或类似的掺混机中掺混。使用包封设备将掺混的粉末装填在 较小的胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或 流化床包衣设备中使用优化的条件将填充的胶囊进行肠溶包衣(pH7.2 至7.5敏感的包衣)。将上述未包衣的单水右旋糖颗粒/球粒中间配制 物以所需比例与辅助流动的赋形剂在V型或类似的掺混机中掺混。使 用包封设备将掺混的粉末装填在胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶 剂包衣溶液，在包衣锅或流化床包衣设备中使用优化的条件将填充的 胶囊进行肠溶包衣(pH7.2至7.5敏感的包衣)。将两种胶囊产品共同 包装。

实例：最终产品-胶囊-胶囊共包装物(2)(液体填充的硬质或软质 明胶/硬质明胶/HPMC胶囊)-配制物/制造过程(在当地CMO，在整 个过程中控制房间和湿度条件)：

将上述未包衣的共生体颗粒/球粒中间配制物以所需比例与植物 油(不混溶液体)在掺混机中掺混。使用软质或硬质明胶包封设备装 填在胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流 化床包衣设备中使用优化的条件将填充的胶囊进行肠溶包衣(pH7.2 至7.5敏感的包衣)。

将上述未包衣的单水右旋糖颗粒/球粒中间配制物以所需比例与 赋形剂在V型或类似的掺混机中掺混。使用包封设备将掺混物装填在 胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床 干燥机/包衣机使用优化的条件将填充的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包 衣进一步包衣。

实例：最终产品-片剂/微片剂-配制物/制造过程(在当地CMO，在 整个过程中控制房间和湿度条件)：

将未包衣的共生体和单水右旋糖颗粒/球粒中间配制物以所需比 例与辅助流动、崩解和润滑的赋形剂(用于制片机)在V型或类似的 掺混机中掺混。使用制片设备将掺混的粉末压制成片剂/微片剂。使用 HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，将片剂在包衣锅 或流化床干燥机中进一步屏障包衣(屏障包衣)。使用聚合物的水性 或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床包衣设备中使用优化的条件将屏 障包衣的片剂进一步肠溶包衣(pH7.2至7.5敏感的包衣)。

实例：最终产品-口服崩解片剂(ODT)配制物/制造过程(在当地 CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体和单水右旋糖颗粒/ 球粒中间配制物以所需比例与辅助流动的其他赋形剂在V型或类似的 掺混机中掺混。使用制片设备将掺混的粉末压制成软片剂。

实例：最终产品-片剂共包装物(2)(硬质明胶/HPMC胶囊)-配制 物/制造过程(在当地CMO，在整个过程中控制房间和湿度条件)：

将上述未包衣的共生体颗粒/球粒中间配制物以所需比例与赋形 剂在V型或类似的掺混机中掺混。使用制片设备将掺混的粉末压制成 片剂/微片剂。使用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液， 将片剂在包衣锅或流化床干燥机中进一步屏障包衣(屏障包衣)。使 用聚合物的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床包衣设备中使用 优化的条件将屏障包衣的片剂进一步肠溶包衣(pH7.2至7.5敏感的包 衣)。将上述未包衣的单水右旋糖颗粒/球粒中间配制物以所需比例与 赋形剂在V型或类似的掺混机中掺混。使用制片设备将掺混的粉末压 制成片剂/微片剂。使用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣 溶液，将片剂在包衣锅或流化床干燥机中进一步屏障包衣(屏障包衣)。 使用聚合物的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床包衣设备中使 用优化的条件将屏障包衣的片剂进一步肠溶包衣(pH7.2至7.5敏感的 包衣)。将两种片剂产品共同包装。

最终产品包装(在当地CMO，在整个过程中干燥低湿度和低氧(N2 吹扫)条件)。在低湿度(等于或低于40％RH)和受控的室温条件(在 20至25摄氏度)下，使用感应密封或泡罩(共包装物)，将上述颗粒 包装在袋中，并将包衣片剂以及胶囊包装在瓶子中。

质量控制释放试验(活性药物成分(API)和最终药物产品)

共生体-

实施例3

实施例3涉及制造和试验本发明的用于治疗胃肠反流疾病 (GERD)的配制物。GERD是由胃酸从胃上涌到食管中引起的粘膜损 伤的慢性症状。GERD通常由胃与食管之间的阻挡物变化、包括正常 情况下保持胃的顶部关闭的下食道括约肌的异常松弛，从食管逐出胃 反流物受损或食管裂孔疝引起。这些变化可能是永久或暂时的。

治疗通常通过生活方式改变和药物例如质子泵抑制剂、H2受体阻 断剂或抗酸剂并伴有或不伴有藻酸。在没有改善的患者中手术可能是 一个选项。在西方世界，10至20％之间的人口受到影响。益生菌或用 于移植的粪便微生物菌群(FMT)(另一项专利申请的主题)也可以 在使用质子泵抑制剂之前和之后帮助平衡微生物菌群。

材料和方法：

下面描述了为了在化学和生物测定法中试验而制造和试验的用于 靶向递送的配制物，所述配制物具有每24小时用于在回肠中在pH 7.2-7.5下释放的质子泵抑制剂(例如奥美拉唑镁，22.4mg等效于20mg 碱(范围：10-40mg))(毫米范围)和在右结肠中在pH5.5-6.2下 释放的共生体(益生元：L-亮氨酸；益生生物：乳杆菌和双歧杆菌的 菌种)或FMT。

活性药物成分(API)：质子泵抑制剂——例如奥美拉唑，由美国 /非美国当地普通供应商例如ManusAktteva等供应。益生元——蛋白 质(酪蛋白、水解蛋白等)，肽，氨基酸(L-亮氨酸)，糖类葡萄糖、 乳糖、淀粉、菊糖等，和某些细菌菌株：由Denisco、CHRHansen、Institu Risell-Lallemand和益生元的其他高品质全球供应商提供。乳杆菌和双 歧杆菌的活的益生菌菌种由Denisco、CHRHansen、InstituRisell- Lallemand和其他高品质全球供应商提供，或者来自于志愿者的FMT。

无活性成分(赋形剂)：微晶体，淀粉，HPMC或等效的“聚合 物”，硬质HPMC胶囊和其他填充剂等——购自当地美国供应商例如 FMC、Capsugel、Colorcon，以及聚乙烯吡咯烷酮——粘合剂，预胶化 淀粉——崩解剂，二氧化硅——流动助剂，硬脂酸盐——润滑剂，来 自于各个著名的赋形剂供应商。

中间配制物/制造过程(在当地CMO)：“未包衣的质子泵抑制剂颗粒 /球粒”(100微米范围)：

使用质子泵抑制剂和赋形剂在低或高剪切混合机中制备干燥颗 粒，和/或使用水/溶剂进行湿法成粒并使用挤出机/滚圆机进一步球粒 化，然后使用优化的条件干燥以除去过量的水/溶剂。

“pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒”(100 微米范围)：

成分 量(％) 未包衣的质子泵抑制剂颗粒/球粒 88％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 2％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 10％ 如果需要的话，水/溶剂 0％

在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将未包衣的 质子泵抑制剂颗粒/球粒用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包 衣溶液进行包衣(屏障包衣)。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使 用优化的条件，将屏障包衣的微球粒或颗粒用pH7.2至7.5敏感的包 衣“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进一步包衣。在包衣锅或流化床 干燥机/包衣机中使用优化的条件，将上述pH7.2至7.5敏感性包衣的 微球粒或颗粒用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进 行密封包衣。

“未包衣的共生体颗粒/球粒”(100微米范围)：

使用益生元、冷冻干燥的细菌和赋形剂在低或高剪切混合机中制 备干燥掺混物。

“pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒”(100微米)

成分 量(％) 未包衣的共生体颗粒/球粒 88％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 2％ “聚合物”(pH5.5至6.2敏感的包衣) 10％ 如果需要的话，水/溶剂 0％

在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将未包衣的 共生体颗粒/球粒用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液 进行包衣(屏障包衣)。在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化 的条件，将上述屏障包衣的微球粒或颗粒用“聚合物”的水性或溶剂 包衣溶液进一步包衣(pH5.5至6.2敏感的包衣)。在包衣锅或流化床 干燥机/包衣机中使用优化的条件，将上述pH5.5至6.2包衣的微球粒 或颗粒用HPMC或等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进行密封 包衣。

“pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒”(100 微米)。

成分 量(％) pH 5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒 88％ HPMC或等效的“聚合物”(屏障和密封包衣) 2％ “聚合物”(pH 7.2至7.5敏感的包衣) 10％ 如果需要的话，水/溶剂 0％

在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将上述pH 5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒用“聚合物”的水性或 溶剂包衣溶液进行包衣(pH7.2至7.5敏感的包衣)。在包衣锅或流化 床干燥机/包衣机中使用优化的条件，将上述微球粒或颗粒用HPMC或 等效的“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液进一步包衣(密封包衣)。

实例：最终产品-袋剂-配制物/制造过程(在当地CMO，在整个过 程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒 和pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需 比例与赋形剂一起，在V型或类似的掺混机中使用优化的条件掺混。 使用粉末装填设备将掺混的粉末装填到袋中。

实例：最终产品-用于重构的粉剂-配制物/制造过程(在当地CMO， 在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒 和pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需 比例与赋形剂一起，在V型或类似的掺混机中使用优化的条件掺混。 使用粉末装填设备将掺混的粉末装填到瓶子中(感应密封)或装入袋 中(密封)。

实例：最终产品-快速分散片剂-配制物/制造过程(在当地CMO， 在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒 和pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需 比例与赋形剂一起，在V型或类似的掺混机中使用优化的条件掺混。 将掺混的粉末压制以产生小的片剂，并带有刻痕以便于儿科应用给药。

实例：最终产品-胶囊(硬质明胶/HPMC)-配制物/制造过程(在当 地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒 和pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需 比例与赋形剂一起，在V型或类似的掺混机中掺混。使用包封设备将 掺混的粉末装填在胶囊中。

实例：最终产品-胶囊(液体填充的硬质或软质明胶)-配制物/制造 过程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒 和pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需 比例与不混溶液体在掺混机中掺混。使用软质或硬质明胶包封设备， 使用优化的条件装填到胶囊中。

实例：最终产品-胶囊包胶囊型(硬质明胶)(1)-配制物/制造过 程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/ 球粒与成比例的赋形剂在V型或类似的掺混机中掺混。使用包封设备 和优化的条件将掺混物装填到较小的胶囊中。将上述pH7.2至7.5的 肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒以所需比例与赋形剂一起在 V型或类似的掺混机中掺混。使用特制的胶囊装填设备和优化的条件， 将掺混的中间配制物与较小的填充胶囊一起进一步装填在较大的胶囊 中。

实例：最终产品-胶囊包胶囊型(硬质明胶)(2)-配制物/制造过 程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需比例 与赋形剂在V型或类似的掺混机中掺混。使用包封设备将掺混物装填 到较小的胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅 或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将较小的填充胶囊用pH7.2 至7.5敏感的包衣进一步包衣。将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC) 的质子泵抑制剂颗粒/球粒以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺 混机中掺混。使用特制的胶囊设备和优化的条件，将较小的pH7.2至 7.5包衣的胶囊和掺混物进一步装填到较大的胶囊中。

实例：最终产品-胶囊包胶囊型(硬质明胶)(3)-配制物/制造过 程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述未包衣的质子泵抑制剂颗粒/球粒和一部分赋形剂在V型 或类似的掺混机中一起掺混。使用包封设备和优化的条件将掺混物装 填到较小的胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣 锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将较小的填充胶囊用pH 7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。将pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包 衣(EC)的共生体颗粒/球粒与所需比例的赋形剂在V型或类似的掺混 机中掺混。使用特制的胶囊装填设备和优化的条件，将掺混的中间配 制物与较小的pH7.2至7.5的EC胶囊一起进一步装填到较大的胶囊 中。

实例：最终产品-胶囊包胶囊型(硬质明胶)(4)-配制物/制造过 程(在当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将未包衣的共生体颗粒/球粒与所需比例的赋形剂在V型或类似 的掺混机中掺混。使用包封设备和优化的条件将掺混物装填到较小的 胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床 干燥机/包衣机中使用优化的条件将较小的填充胶囊用pH5.6to6.2敏 感的包衣进一步包衣。将上述未包衣的质子泵抑制剂颗粒/球粒以所需 比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混。使用特制的胶囊装 填设备和优化的条件，将掺混的中间配制物与较小的pH5.6至6.2的 EC胶囊一起进一步装填到较大的胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶 剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将较 大的胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进一步包衣。

实例：最终产品-口服崩解片剂(ODT)-配制物/制造过程(在当地 CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述未包衣的质子泵抑制剂颗粒/球粒、pH7.2至7.5的肠溶包 衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒和pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包 衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的 掺混机中掺混。使用制片设备将掺混的粉末压制成软片剂。

实例：最终产品-片剂/微片剂-配制物/制造过程(在当地CMO，在 整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒和 pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需比 例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和 润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成片剂/微片剂。 使用HPMC或等效的“聚合物”(薄膜包衣)，在包衣锅或流化床干 燥机中将片剂用水性或溶剂包衣溶液进一步薄膜包衣。

最终产品-片剂(2)-配制物/制造过程(在当地CMO，在整个过程 中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述未包衣的质子泵抑制剂颗粒/球粒和pH5.5至6.2的肠溶包 衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的 掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用制片 设备将掺混的粉末压制成片剂。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶 液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将压缩片剂用 pH7.2至7.5敏感的包衣进行包衣(“EC片剂”)。使用HPMC或等 效的“聚合物”(薄膜包衣)，在包衣锅或流化床干燥机中将片剂用 水性或溶剂包衣溶液进一步薄膜包衣。

实例：最终产品-片剂包片剂(1)-配制物/制造过程(在当地CMO， 在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/ 球粒以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助 流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制 成小的片剂/微片剂。将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵 抑制剂颗粒/球粒以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺 混，以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用压缩包衣制片机， 将掺混的粉末压缩包衣在小的片剂/微片剂上。使用HPMC或等效的“聚 合物”(薄膜包衣)，在包衣锅或流化床干燥机中将片剂用水性或溶 剂包衣溶液进一步薄膜包衣。

最终产品-片剂包片剂(2)-配制物/制造过程(在当地CMO，在整 个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述未包衣的质子泵抑制剂颗粒/球粒以所需比例与其他赋形 剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以辅助流动、崩解和润滑(用 于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成小的片剂/微片剂。将 pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需比例与赋形 剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以辅助流动、崩解和润滑(用 于制片机)。使用压缩包衣制片机将掺混的EC共生体颗粒/球粒压缩 包衣在小的EC片剂/微片剂上。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶 液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将压制的片剂 用pH7.2至7.5敏感的包衣进行包衣(“EC片剂”)。使用HPMC或 等效的“聚合物”(薄膜包衣)，在包衣锅或流化床干燥机中将片剂 用水性或溶剂包衣溶液进一步薄膜包衣。

实例：最终产品-胶囊包片剂(硬质明胶)(1)配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒和 pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需比 例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和 润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成片剂/微片剂。 使用特制的包封设备将赋形剂和压制的片剂装填到硬质明胶胶囊中。

实例：最终产品-胶囊包片剂(硬质明胶)(2)配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒 以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、 崩解和润滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成小的 片剂/微片剂。将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂 颗粒/球粒以所需比例与另外的赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺 混，以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用包封设备将掺混 的粉末和压制片剂装填到大的硬质明胶胶囊中。

实例：最终产品-胶囊包片剂(硬质明胶)(3)配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需比例 与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润 滑(用于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成小的片剂/微片 剂。使用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥 机/包衣机中使用优化的条件将压制的片剂用pH7.2至7.5敏感的包衣 进行包衣(“EC片剂”)。将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的 质子泵抑制剂颗粒/球粒以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混 机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用包封设备 将掺混的粉末和EC片剂装填到较大的胶囊中。

实例：最终产品-胶囊包片剂(硬质明胶)(4)配制物/制造过程(在 当地CMO，在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述未包衣的质子泵抑制剂颗粒/球粒配制物以所需比例与赋 形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用 于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成小的片剂/微片剂。使 用“聚合物”的水性或溶剂包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣 机中使用优化的条件将压制的片剂用pH7.2至7.5敏感的包衣进行包 衣(“EC片剂”)。将pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒 /球粒以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助 流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用包封设备将掺混的粉末和小 的EC片剂装填到较大的胶囊中。

最终产品-胶囊包片剂硬质明胶(5)-配制物/制造过程(在当地CMO， 在整个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述未包衣的质子泵抑制剂颗粒/球粒以所需比例与其他赋形 剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用 于制片机)。使用制片设备将掺混的粉末压制成小的片剂/微片剂。将 pH5.5至6.2的肠溶包衣(EC)的共生体颗粒/球粒以所需比例与赋形 剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用 于制片机)。使用包封机将掺混的EC共生体颗粒/球粒与质子泵抑制 剂小压制片剂一起装填到较大胶囊中。使用“聚合物”的水性或溶剂 包衣溶液，在包衣锅或流化床干燥机/包衣机中使用优化的条件将大的 胶囊用pH7.2至7.5敏感的包衣进行包衣(“EC片剂”)。使用HPMC 或等效的“聚合物”(薄膜包衣)，在包衣锅或流化床干燥机中将胶 囊用水性或溶剂包衣溶液进一步薄膜包衣。

实例：最终产品-双层片剂-配制物/制造过程(在当地CMO，在整 个过程中控制室温、湿度和氧气条件)：

将上述pH7.2至7.5的肠溶包衣(EC)的质子泵抑制剂颗粒/球粒 以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中掺混，以帮助流动、 崩解和润滑(用于制片机)。使用双层制片设备将掺混的粉末压制成 片剂(“EC片剂”)。将pH5.5至6.2/7.2至7.5的肠溶包衣(EC) 的共生体颗粒/球粒以所需比例与赋形剂一起在V型或类似的掺混机中 掺混，以帮助流动、崩解和润滑(用于制片机)。使用双层制片机将 掺混的粉末压制在EC片剂上。使用HPMC或等效的“聚合物”(薄 膜包衣)，在包衣锅或流化床干燥机中将片剂用水性或溶剂包衣溶液 进一步薄膜包衣。

最终产品包装(在当地CMO在整个过程中干燥低湿度和低氧(N2吹 扫)条件)：

在低湿度(等于或低于40％RH)和受控的室温条件(在20至25 摄氏度)下，使用感应密封或泡罩，将上述颗粒包装在袋中，并将包 衣片剂、胶囊包装在瓶子中。

质量控制释放试验(活性药物成分(API)和最终药物产品)共生体。

质子泵抑制剂

试验 方法和评估 鉴定 HPLC等 测定法 HPLC等 杂质和相关物质 HPLC等 含量均匀性 HPLC等 微生物限度 美国药典(USP 31<61>)

共生体和质子泵抑制剂

实施例4

生物和非生物药物向远端回肠和/或结肠的口服递送

取决于设计，将药丸包药丸剂型(例如片剂包片剂或胶囊包胶囊 型等)通过GI道从胃(pH1至4)到十二指肠(pH5.5至6.2)并递 送到远端回肠(pH7.3至8.0)和/或近端结肠(pH5.5至6.2)。从该 药丸包药丸剂型的释放将不需要远端回肠或近端结肠中的任何其他助 剂(例如糖类、淀粉等)或外部条件或能源例如酶或细菌菌群的存在 或不存在。药丸包药丸剂型的另一个优点在于，在各种不同疾病病症 (例如IBD等)中，当远端回肠和近端结肠的pH可能与分别高于pH7.4 和低于pH6.5的正常值具有显著差异时，药物释放是可能的。为了证 实这一概念，最初开发了片剂并随后开发了胶囊包胶囊型剂型(参见 下面的表1)，以在2小时的递送靶窗口内，绕过胃(2小时)和十二 指肠(1小时)以及回肠(2小时)，将小分子或生物制品直接递送到 近端结肠。

表1：胶囊包胶囊型设计

药物在溶出介质中的靶向释放是在2小时内在pH6.5，代表了近 端结肠，并且在pH1.2(胃)下在2小时内、pH5.5(十二指肠)下在 1小时内、pH7.0(回肠)下1小时内和pH7.4(远端回肠)下1小时 内没有释放。将益生生物和对乙酰氨基酚分别用作代表性的生物试剂 (冻干的细菌)和小分子。在释放试验期间对乙酰氨基酚也用作益生 生物的标志物。使用和不使用其他赋形剂分开地制备小分子和益生生 物混合物。使用羟丙基甲基纤维素(HPMC)胶囊作为携带这些药物的 储存容器。HPMC胶囊具有几个优点，因为它们从非动物材料制造， 在化学上稳定，具有低水分含量(保护冻干的细菌)，即使在低湿度 下脆性也较低(越过GI时存活)，溶解快速，没有交联并且适合于自 动胶囊装填机。可以将这些胶囊带密封，这具有下述优点：避免需要 用聚合物密封包衣的其他步骤；避免了对加工所需的过量水分和热的 需要，这对维持生物物质的生活力来说特别重要；并且最小化了对药 物从胶囊的释放的影响。

所评估的聚合物是单独或组合的水基甲基丙烯酸共聚物，并被命 名为逆向肠溶(例如EPO)或常规肠溶(例如FS 30D、S100、L100、L30D-55)。EPO被设计成在pH6.5或更低下溶解，并且也具有良好的水分阻挡性 质，这保护冻干的细菌并且进一步提高稳定性。FS30D、 S100、L100、L30D-55被设计成分别在 高于pH7.0、6.5、6.0、5.5下溶解。这些聚合物可以使用分别低于30 ℃和40％RH的热和湿度施用到片剂和胶囊上，这对于维持生物药物 的生活力来说是重要的。最初是片剂剂型，随后是胶囊包胶囊型剂型。 对这些胶囊进行标准USP溶解实验。值得注意的是，这些相似的原理 适用于递送到单独的远端回肠和与近端结肠的组合。这种技术的应用 广泛包括微生物组生态学疗法(MET)、小分子药物和疫苗等的递送。

最初的开发聚焦于对乙酰氨基酚(APAP)核心片剂的包衣，使用 APAP作为标志物监测生物和非生物小分子药物从剂型的释放。在带有 50rpm的篮子的USP溶出装置中，在pH6.5的磷酸盐缓冲液中，325mg 未包衣的片剂核心相当快速地溶解，在45分钟内超过85％(配制物1， 图8)。当将这些APAP片剂用高达18mg/cm²水平的逆向肠溶材料 (EPO)包衣并在相同条件下进行溶出试验时，在目标pH6.5 下100％的APAP在2小时内释放，模拟了在近端结肠中的药物释放(配 制物2，图9)。由于这种包衣通常被设计成在低于pH6.5下溶解，因 此正如预期，在pH6.0下从片剂配制物释放的速率更快。此外，正如 预期，在pH6.8、pH7.0和pH7.4下没有观察到APAP从片剂释放。

在带有50rpm的篮子的USP溶出装置中，在pH7.0的磷酸盐缓 冲液中，325mg未包衣的片剂核心相当快速地溶解，在45分钟内超过 85％(配制物1，图10)。将这些APAP片剂用高达15mg/cm²水平的 常规肠溶材料(FS30D/L30混合物)包衣，并使用相同装置和 速度进行在pH1.2中2小时、pH5.5中1小时和pH7.0中2小时的溶 出。在pH1.2下2小时和pH5.5下1小时中，配制物通过性能试验。 在pH7下的释放速率较慢，并且未通过2小时试验。然而，正如预期， 使用较低比率的FS30D/L30、例如50/50时，释放速率提高(配 制物3(a-c)，图11)。基于这些结果得出结论，为了在pH7.0中获 得所需的释放情况，需要通透性更高的包衣。对于片剂剂型来说，还 需要其他优化，包括考虑其他配制因素例如包衣厚度、施用的总聚合 物、药物的物理化学性质、装载的剂量、片剂的尺寸和形状等。

正如早些时候指出的，目的是开发一种胶囊包胶囊型剂型，其不 需另外的压缩即可在2小时的递送靶窗口内将小分子或生物制品递送 到近端结肠，并且也用于容易地证实结肠药物递送技术的应用。这里 开发的原理可以容易地改造以适应于其他剂型，例如压缩片剂、球粒、 口服崩解片剂、液体填充胶囊等。

使用75rpm的篮子和50rpm的桨叶，在pH6.5溶出介质中对未 包衣的含有APAP的内部较小胶囊进行USP溶出试验。与片剂相比， 从胶囊的释放慢得多(配制物4，图12)，并且为了使胶囊在篮子中 崩解，需要更高的速度。然而，在篮子或桨叶中胶囊的释放情况之间 基本上不存在差异。基于桨叶方法中胶囊的物理外观，与篮子方法相 比胶囊显得更容易分解，但是仍不完全崩解。将较小的内部APAP胶 囊用10mg/cm²的逆向肠溶包衣EPO进行包衣。使用75rpm 的篮子和100rpm的桨叶，在pH6.5溶出介质中对包衣的胶囊进行USP 溶出试验。当使用100rpm的桨叶方法时，胶囊满足在pH6.5下在2 小时内的释放要求(配制物5，图13)。在物理上，所有胶囊已被分 解并完全崩解。注意，在75rpm的篮子中不存在从胶囊的释放，并且 即使在2小时后篮子中的胶囊也在物理上完整(未被分解或崩解)。 使用100rpm的桨叶，还使包衣水平为10mg/cm²的包衣的胶囊经历pH 6.8的溶出介质2小时。正如预期的，不存在从胶囊的释放(配制物5， 图14)。在物理上，胶囊也没有崩解。100rpm的桨叶速度对于溶出试 验来说是合理的，因为体内释放通常与显著的肠搅动和压迫相关联， 有些事情不能使用体外溶出试验看出。此外，通常对于肠溶包衣的胶 囊来说，通常将具有高湍流的崩解装置(类似于USP溶出装置III)用 于释放的评估。

使用100rpm的桨叶，在pH6.5的溶出介质中，对含有APAP的 较大的外部密封包衣的(非肠溶)胶囊进行USP溶出试验。从这些胶 囊的释放是快速的，并且所有胶囊在1小时内释放出药物(配制物6， 图15)。在物理上，所有胶囊也已经崩解。将较大的外部含APAP胶 囊用7.5mg/cm²的常规肠溶包衣L100和L100/S100的50/50 混合物进行包衣。使用100rpm的桨叶，在pH1.2(2小时)、pH5.5 (1小时)、pH7.0(1小时)和pH7.4(1小时)溶出介质中，对这 些包衣的胶囊进行USP溶出试验。单独含有L100的包衣的胶囊在pH 5.5下，在1小时内由于药物渗透而具有轻微释放，但是可以接受。含 有L100/S10050/50混合物的包衣的胶囊在pH7.0/7.4下在2小时内不 通过释放试验(配制物7(a-b)图16)。因此，将较大的外部含APAP 胶囊用5和7.5mg/cm²的常规肠溶包衣L100/S100的75/25 混合物进行包衣。使用100rpm的桨叶，在pH1.2(2小时)、pH5.5 (1小时)、pH7.0(1小时)和pH7.4(1小时)溶出介质中，对这 些包衣的胶囊进行USP溶出试验。在pH1.2下2小时内，所有胶囊通 过溶出试验。然而，在pH7.0/pH7.4下2小时内，含有7.5mg/cm²的 包衣的胶囊不通过释放试验。含有5mg/cm²L100/S10075/25混合物的 包衣的胶囊在所有pH条件下通过释放试验(配制物8(a-b)，图17)， 例外的是在pH5.5下药物略微渗透。因此，使用略微更高的包衣厚度 将消除靶向远端回肠的药物释放的这个问题。

基于上述结果，带着在近端结肠中释放的目标，将含有APAP、 带密封并用10mg/cm²的EPO肠溶包衣的较小的胶囊装填到 较大的胶囊中，带密封，并在外部用5mg/cm²的L100/S100 的75/25混合物进一步包衣。使用100rpm的桨叶，对这些胶囊包胶囊 型进行体外USP溶出试验，以检查在pH1.2介质中2小时内、pH5.5 下1小时内、pH7.0下1小时内、pH7.4下1小时内、pH6.5(磷酸盐) 下2小时内的APAP释放。结果证实了特别地在pH6.5下2小时内APAP 从内部胶囊完全释放，并且在pH1.2下2小时、pH5.5下1小时、pH7.0 下1小时和pH7.4下1小时中没有释放(配制物9，图18)。在物理 上，在pH1.2下2小时和pH5.5下1小时中，外部胶囊保持完整没有 崩解。然后在暴露于pH7.0下1小时和pH7.4下1小时后外部胶囊完 全崩解，观察到内部胶囊并且它在物理上保持完整。然后当暴露于pH 6.5介质时，内部胶囊在2小时内完全崩解。物理观察与图18中报告 的药物释放数据非常一致。

类似于APAP胶囊包胶囊型，将较小的含有益生生物的胶囊带密 封，并用10mg/cm²的EPO肠溶包衣，装填到较大的胶囊中， 带密封，并在外部用5mg/cm²的L100/S100的75/25混合物 进一步包衣。使用100rpm的桨叶，对这些胶囊包胶囊型进行USP溶 出试验，以检查在pH1.2介质中2小时内、pH5.5下1小时内、pH7.0 下1小时内、pH7.4下1小时内、pH6.5下2小时内(磷酸盐缓冲盐 水)的益生细菌的释放。使用盐水缓冲液来维持溶出介质的等渗性， 并确保冻干的细菌在暴露于水性溶液后的生活力。在物理上，这些益 生生物胶囊的表现极其类似于APAP胶囊。可以推断，细菌以与APAP 从APAP胶囊释放完全相同的方式从益生生物胶囊释放，即在pH6.5 下2小时内从内部胶囊完全释放，并且在pH1.2下2小时、pH5.5下 1小时、pH7.0下1小时和pH7.4下1小时中没有释放。

基于逆向和常规包衣的SEM评估，优选的包衣水平厚度为：

第一胶囊(内部药丸)-EPO，5mg/cm²-10mg/cm²：

对于尺寸为#3的胶囊来说60-180微米(μm)

第二胶囊(外部药丸)-L100/S100(75/25)-5mg/cm²-10mg/cm²

对于尺寸为#0的胶囊来说60-180微米(μm)

对未包衣和包衣的CIC胶囊进行分析，以确定由加工造成的降解 水平。数据表明，并且如表2中所示，通过每个胶囊的总CFU测量的 总菌株计数没有显著变化。因此，操作、带封和包衣施加、储存和运 输的过程对配制物中试验的3种细菌菌株的生活力没有任何显著影响， 所述菌株包括嗜热链球菌(S.thermophilus)和嗜酸乳杆菌(L. acidophilus)好氧菌株和长双歧杆菌(B.longum)厌氧菌株。

材料和方法

对乙酰氨基酚(APAP)：

(接收号RCA31252；GuardianDrugs)MalinckrondtInc.-批号 784513B054-3％PVP粒化的用于制片的粉末。

对乙酰氨基酚(Paracetamol，USP-APC-150)-ALPCo.(China) -批号0908302。对乙酰氨基酚(APAP)325mg核心片剂(批号L0577-215 -GuardianDrugs，NJ)

益生生物胶囊：Azodyl(尺寸#3)(批次号023042-20；批号5241113； KibowBiotech；NewtownSquare，PA19073)

HPMC胶囊：

Qualicaps尺寸#3/S-LOK-批号E1305982-透明VAA(帽和体)

Qualicaps尺寸#3/S-LOK-批号E1205667-Op.白色XAK(帽和体)

Qualicaps尺寸#3/S-LOK-批号E1106719-Op.棕色15XJX(帽和体)

Qualicaps尺寸#0/S-LOK-批号E1101410-Op白色XAK(帽和体)

Qualicaps尺寸#0/S-LOK-批号E1106476-Op.棕色15XJX(帽和体)

用于包衣的甲基丙烯酸共聚物：

EPO-ReadyMix-Evonik-批号H131181012

Eudragit-L30D55-Evonik-批号B130514207

Eudragit-FS30DEvonik-批号B130365004

Eudragit-S100-Evonik-批号B100405198

Eudragit-L100-Evonik-批号B120603009

PlasacrylT20-Evonik-批号PT130705

包衣聚合物：

HPMCE5-Dow-批号YG040124L1

增塑剂：

柠檬酸三乙酯(TEC)-Vertellus-批号3132530

表面活性剂：

聚乙二醇4000-AlfaAesar-批号10167045

聚山梨酸酯80(Tween80)-BASF-批号3158092

其他赋形剂：

滑石-Brenntag-批号410052-43

微晶体纤维素(MCC)-MC-102-Blanver-批号3135002006

单水乳糖(Supertab11SD)-DFEPharma-批号10677724

预胶化淀粉-DFEPharma-批号-10601223

交聚维酮-QJNICo.,-批次号20130115

磷酸二钙-Innophos-批号0701047

胶体二氧化硅(Aerosil-200)-Evonik-批次号1012082200

二氧化硅(AerosilR972)-Degussa-批号3158092923

硬脂酸镁-FACIAsia-批次号MGSP0216

硬脂酸镁-Mallinkrodt-批号-071226.

羟丙基甲基纤维素-Shinogi-批号90936C

化学品：

氢氧化铵-AlfaAesar-批号E302012

乙醇-Fischer-批号M02539

磷酸二氢钾-AlfaAesar-批号1013774

氢氧化钠-MacronChemicals-批次98#0000039706

用于制备核心片剂和压缩的方法

将配制物A中所示的所需量的APAP、MCC、预胶化淀粉、交聚 维酮和胶体二氧化硅通过#20筛网，装载在适合的掺混机中并混合25 分钟。在过程结束时，加入硬脂酸镁并将掺混物混合另外5分钟。在 过程结束时，将材料卸载到干净的多线容器中。将掺混物(100kg)在 KorschXL-10010工位压力机上压制。使用在两侧具有平表面(无标识) 的改良的卵圆形标准凹面工具(16.5mmx7.5mm)。这是根据为功能 性包衣提供适合的基材而选择的设计。将片剂压制到600mg的目标重 量(含有325mgAPAP)，并具有NMT1％的脆性和>24kP的硬度。 在整个批次制造中作为工序内检验，监测片剂重量、厚度、硬度和脆 性。获取片剂样品以确保<5min的崩解时间。

包封和带封

配制物B的包封

将所有成分通过MMCCo-mill以确保在掺混物中不存在团块。使 用8QtV-掺混机将除了硬脂酸镁之外的所有成分混合。在混合所有成 分后，加入硬脂酸镁。将掺混物混合另外2分钟，然后卸载到双重多 线容器中。设置指数K120i(S/N0963-27)以运行来自于Qualicaps的 胶囊(尺寸#3)。为运行适合地设置胶囊抛光机(型号TG-20)和称量 台(MettlerToledoScale)。为运行记录加工的室温和湿度日志。在运 行期间收集工序内重量样品，以确保获得目标重量。将胶囊抛光并收 集在容器中的双线多重袋中。

配制物D的包封：

使用带有振动台的FastLockK200F来装填来自于配制物D的尺寸 #0的胶囊。使用尺寸#0的QualiV胶囊装填3％粒化的APAP粉末。每 次装填约100颗胶囊。记录胶囊的重量。

胶囊的带封：

胶囊的带封在IMA带封机(BD1723)上进行。胶囊的带封通常 引起1-1.5mg的重量增加，这在胶囊的重量变差之内，一次它通常被 视为胶囊重量和相关变差的一部分、

喷雾分散系的制备

Eudragit-EPO即用混合物的制备：

即用混合物是来自于Evonik的标准包衣系统，其具有51％的EPO 聚合物。向约850g水添加约150g这种干燥混合物，以给出约1kg喷 雾悬液。将所述材料使用高剪切混合机混合约30分钟。然后将整个悬 液通过0.5mm筛网。悬液接下来已准备好用于使用典型的标准加工参 数喷雾到基材。

L-30D55的制备：

对于1kg喷雾悬液来说，在较大的混合器容器中添加约570g EudragitL30D55分散系。向混合物加入约145.5gPlasacrylHTP20(抗 粘剂/增塑剂系统)。将悬液用所需量的水稀释，以得到1kg喷雾分散 系。PlasAcryl在转移到任何容器之前需要振摇。使用旋桨式搅拌器将 整个悬液搅拌10分钟。将整个悬液通过0.5mm筛网。悬液接下来已 准备好用于使用典型的标准加工参数喷雾到基材。

FS30D的制备：

对于1kg喷雾悬液来说，在较大的混合器容器中添加约606.1g EudragitFS30D分散系。向混合物加入约90.9gPlasacrylHTP20(抗粘 剂/增塑剂系统)。将悬液用所需量的水稀释，以得到1kg喷雾分散系。 PlasAcryl在转移到任何容器之前需要振摇。使用旋桨式搅拌器将整个 悬液搅拌10分钟。将整个悬液通过0.5mm筛网。悬液接下来已准备 好用于使用典型的标准加工参数喷雾到基材。

L100分散系的制备：

对于1kg喷雾悬液来说，将约99.5gEudragitL100添加到三分之 二的水中，搅拌约5分钟，并确保粉末被完全润湿。将1NNH₃(56g) 缓慢加入到Eudragit悬液中并搅拌约60分钟。加入49.8g柠檬酸三乙 酯(TEC)并继续搅拌60分钟。分开地，使用高剪切混合机将49.8g 滑石粉与剩余量(三分之一)的水匀浆10分钟。将滑石粉悬液倾倒在 Eudragit分散系中，同时使用常规搅拌器搅拌。将整个悬液通过0.5mm 筛网。悬液接下来已准备好用于使用典型的标准加工参数喷雾到基材。

S100分散系的制备：

对于1kg喷雾悬液来说，将约99.4gEudragitA100添加到三分之 二的水中，搅拌约5分钟，并确保粉末被完全润湿。将1NNH₃(67.5g) 缓慢加入到Eudragit悬液中并搅拌约60分钟。加入49.7g柠檬酸三乙 酯(TEC)并继续搅拌60分钟。分开地，使用高剪切混合机将49.7g 滑石粉与剩余量(三分之一)的水匀浆10分钟。将滑石粉悬液倾倒在 Eudragit分散系中，同时使用常规搅拌器搅拌。将整个悬液通过0.5mm 筛网。悬液接下来已准备好用于使用典型的标准加工参数喷雾到基材。

对于两种组分的混合物来说，将它们分开制备，然后按照所需比 例添加。

片剂和胶囊的包衣

所有片剂和胶囊的包衣在ThomasEngineeringAccelaCota Compu-Lab-24-190上进行。将配制物在具有两个挡板的12”包衣锅中 包衣。用于包衣的最低批次量为400g。对于某些配制物来说，处理更 大的批次量700-1500g。取决于批次量和悬液的流速，使用喷嘴尺寸为 0.8-1.2mm的单一Schlick枪(970/7-175S)。加工条件随着批次量和 使用的包衣材料而变。对于每种类型的包衣来说，遵从特定的加工条 件。为了产品的安全性，产品温度总是维持低于30℃。

广泛使用的通用加工参数如下：

入口空气温度：30-40℃

排气温度：25-30℃

产品温度：24-29℃

入口空气流速：100-300CFM

泵速：2.5-20rpm

雾化空气压力：10-30psi

所使用的管路的内径：3.2mm,

包衣锅转速：4-15rpm.

溶出试验：

崩解装置，溶出装置，篮子，桨叶和速度，温度和溶出介质，测 定法，HPLC，益生菌的CFU，取样时间安排。将内部胶囊在pH6.5 或pH6.8磷酸盐缓冲液中进行长达2小时的溶出试验。使外部胶囊经 受溶出介质，在pH1.2下2小时，pH5.5下1小时，pH7.0下1小时， pH7.4下1小时。使组合的胶囊经受溶出介质，pH1.2下2小时，pH5.5 下1小时，pH7.0下1小时，pH7.4下1小时，pH6.5下2小时(使 用盐水作为用于益生生物的等渗剂)。

包衣之前和之后益生生物胶囊的分析

将胶囊的内含物无菌转移到无菌瓶中。将两颗胶囊的内含物溶解 在盐水中。抽取用于计数的样品并在37℃温育。在37℃温育3天后(对 于嗜热链球菌(S.thermophilus)和嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)来说 好氧温育，对于长双歧杆菌(B.longum)来说厌氧温育)，一式三份 对菌落进行计数。

表2：胶囊包衣之前和之后的菌株计数(以10亿为单位的CFU)

*好氧，**厌氧

配制物：

配制物1：325mgAPAP片剂核心

配制物2:APAP片剂325mg-用4mg/cm²密封物(HPMC)密封，用 EPO18cm²包衣

配制物3a：APAP片剂325mg，用4％HPMC密封包衣并用7.5mg/cm²的FS30:L30D55(90:10)肠溶包衣

配制物3b：APAP片剂325mg，用4％HPMC密封包衣并用7.5mg/cm²的FS30:L30D55(75:25)肠溶包衣

配制物3c：APAP片剂325mg，用4％HPMC密封包衣并用7.5mg/cm²的FS30:L30D55(50:50)肠溶包衣

配制物4:未包衣的APAP胶囊(尺寸#3)的组成

配制物5：用10mg/cm²的EPO包衣的APAP胶囊的组成

配制物6：用6mg/cm²的HPMC密封包衣的APAP胶囊(尺寸#0)

配制物7(a)：用6mg/cm²的HPMC密封包衣并用7.5mg/cm²的 L100肠溶包衣的APAP胶囊(尺寸#0)

配制物7(b)：用6mg/cm²的HPMC密封包衣并用7.5mg/cm²的 L100/S100(50/50)肠溶包衣的APAP胶囊(尺寸 #0)

配制物8(a)：用6mg/cm²的HPMC密封包衣并用5mg/cm²的L100/S100(75/25)肠溶包衣的APAP胶囊(尺寸#0)

配制物8(b)：用6mg/cm²的HPMC密封包衣并用7.5mg/cm²的 L100/S100(75/25)肠溶包衣的APAP胶囊(尺寸 #0)

配制物9：APAP胶囊包胶囊型(CIC)[内部胶囊(尺寸#3)用10mg/cm²的EPO肠溶包衣；外部胶囊(尺寸#0)用5mg/cm²的 L100/S10075/25肠溶包衣]

从上述应该认识到，尽管在本文中出于说明的目的已描述了本发 明的特定实施方式，但可以做出各种不同的修改而不背离本发明的精 神和范围。因此，除了权利要求书之外，本发明不受其他限制。

本文中参考或提到的所有专利、专利申请、出版物、科学文章、 网址和其他文献和材料，表明了本发明所属领域的专业技术人员的技 术水平，并且每个这样的参考文献和材料通过参考并入本文，其程度 如同其已被单个地作为整体或被阐明作为整体通过参考并入。此外， 本申请和所有优先权申请中的所有权利要求项，包括但不限于原始权 利要求项，以其整体并入并形成本发明的书面描述的一部分。本申请 人保留将来自于任何这样的专利、专利申请、出版物、科学文章、网 址、电子可用信息和其他参考材料或文献的任何和所有材料和信息在 物理上并入本说明书的权利。本申请人保留将参考上述的权利要求项、 包括但不限于任何原始权利要求项在物理上并入本文件的任何部分、 包括但不限于书面描述的任何部分的权利。

本文中描述的特定方法和组合物代表了优选实施方式，是示例性 的，并且不打算限制本发明的范围。在考虑了本说明书后，其他的目 的、方面和实施方式将出现在本领域技术人员面前，并且被涵盖在权 利要求项的范围所定义的本发明的精神之内。对于本领域技术人员来 说，显然可以对本文公开的发明做出各种替换和修改，而不背离本发 明的范围和精神。在本文中说明性描述的发明，可以适合地在不存在 本文中被具体公开为必需的任何一种或多种要素或一种或多种限制的 情况下实践。因此，例如，在本文中的每种情形中，在本发明的实施 方式或实施例中，本说明书中的术语“包含”、“基本上由……构成” 和“由……构成”中的任一个可以用其他两个术语中的任一个替代。 同样地，术语“包含”、“包括”、“含有”等应该被广义且无限制 地理解。本文中说明性描述的方法和过程可以适合地以不同的步骤顺 序实践，并且它们不必定限于本文中或权利要求书中指明的步骤顺序。 此外，当在本文中和权利要求书中使用时，没有具体数量的指称包括 复数指称物，除非上下文明确阐明不是如此。因此，例如，对“宿主 细胞”的指称包括这样的宿主细胞的复数(例如培养物或群体)等。 在任何情况下本专利都不能被解释为限于在本文中具体公开的特定实 施例或实施方式或方法。在任何情况下本专利都不能被解释为受到由 专利和商标局(PatentandTrademarkOffice)的任何检查员或任何其他 官员或雇员做出的任何陈述的限制，除非这样的陈述在本申请人的书 面答复中被具体并且无限制或保留地明确采纳。

已经使用的术语和表述被用作描述性而不是限制性的术语，并且 在这样的术语和表述的使用中不打算排除所报告和描述的特点或其部 分的任何等效物，但是应该认识到，在所要求的本发明的范围之内的 各种不同修改是可能的。因此，应该理解，尽管本发明已通过优选实 施方式和任选的特点进行了具体公开，当本领域技术人员可以对本文 中公开的概念做出修改和改变，并且这样的修改和改变被视为在权利 要求书所定义的本发明的范围之内。

在本文中已对本发明进行了广泛和普遍意义的描述。落于类属公 开内容之内的每个更狭窄的种类和子属分组，也形成本发明的一部分。 这包括本发明的类属描述，其前提或负限制是从类属中去除任何主题 内容，不论所去除的材料是否在本文中具体叙述。

其他实施方式在下面的权利要求书中。此外，当本发明的特点和 方面根据Markush组进行描述时，本领域技术人员将会认识到，本发 明因而也根据所述Markush组的任何个体成员或成员的亚组进行描述。

参考文献

本文中引用的所有参考文献的内容为所有目的通过参考并入本 文。

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