奥普托欣敏感试验培养基及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种奥普托欣敏感试验培养基及其制备方法和应用，所述培养基包括MH肉汤、葡萄糖、蒸馏水、奥普托欣、血粉和酸碱指示剂；相应地，其制备方法中选用的药品包括酸碱指示剂；该培养基可用于鉴定肺炎链球菌，可省去测量纸片抑菌圈直径工作，根据颜色变化直接读取结果；可将奥普托欣敏感试验加入细菌生化鉴定板中，增加生化鉴定板鉴定细菌的能力，给半自动、自动仪器读取奥普托欣反应结果提供方便。

说明书

技术领域

本发明涉及一种奥普托欣敏感试验培养基及其制备方法和应用。

背景技术

Optochin(奥普托欣)是盐酸乙基氢化羟基奎宁的商品名，对肺炎链球菌有特异抑制作用，几乎所有肺炎链球菌对Optochin敏感，而对其它链球菌则无此作用。奥普托欣敏感试验是鉴别肺炎链球菌常用的一种试验，在临床检验中具有重要的意义。传统的奥普托欣敏感试验用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴上一张含5μg/片奥普托欣纸片，35℃孵育18-24h，观察结果。当抑菌环直径大于14mm为敏感，推断为肺炎链球菌。

公开号为CN101698876A的中国发明专利申请公开了一种肺炎链球菌敏感试验纸片，其主要成分奥普托欣、蒸馏水、滤纸片（直径6mm）按比例混合经一定工艺而成一种肺炎链球菌敏感试验纸片。使用时，将被检菌的肉汤培养物用无菌棉棒均匀涂布于血琼脂平板上，取奥普托欣纸片贴于平板上，于35℃～37℃培养18～24h，观察结果，抑菌圈在18mm以上为敏感，无抑菌圈或其抑菌圈小于10mm为耐药。并规定其判定的最低标准：敏感，抑菌环直径一般为15-16mm或更大，若小于15mm，应加做胆汁溶解试验来确定。

传统的奥普托欣敏感试验是通过抑菌圈直径推断被检菌落是否为肺炎链球菌，此方法不便于应用自动、半自动细菌鉴定系统。

发明内容

为了克服以上现有技术中的技术缺陷，本发明提供一种奥普托欣敏感试验培养基，包括MH肉汤、葡萄糖、奥普托欣、血粉和酸碱指示剂。

优选的是，所述奥普托欣敏感试验培养基由质量百分数含量如下的组分制成：

MH肉汤培养基25-35%；

葡萄糖63-73%；

奥普托欣0.25-0.4%；

血粉1.6-2.5%；

酸碱指示剂0.14%-0.67%。

上述任一方案中，优选的是，所述奥普托欣敏感试验培养基由质量百分数含量如下的组分制成：

MH肉汤28.64%；

葡萄糖68.56%；

奥普托欣0.33%；

血粉2.06%；

酸碱指示剂0.21%。

在培养基里添加酸碱指示剂，可以使得培养基的颜色会随着pH的变化而呈现不同的颜色，从而便于识别。

上述任一方案中，优选的是，所述培养基的pH为7.2-7.5。由于细菌在适当的pH范围内生长迅速，细菌在繁殖过程中，葡萄糖经利用、分解后，会伴随着酸性产物产生；培养基的pH采用上述范围，细菌生长、繁殖迅速，便于识别颜色的变化；如果培养基的pH采用碱性，则可能会影响细菌的生长，影响葡萄糖的利用分解，而不能使培养基变色，无法识别颜色的变化。

上述任一方案中，优选的是，所述酸碱指示剂为苯酚红与溴甲酚紫混合指示剂。采用酚红和溴甲酚紫混合指示剂作为酸碱指示剂，可以扩大了指示剂的变色范围。

上述任一方案中，优选的是，所述酸碱指示剂指示剂中苯酚红与溴甲酚紫的质量百分比4:3-2:1，优选为2:1。苯酚红和溴甲酚紫的质量百分比也可以是3:2和4:3。两种指示剂混合后作为酸碱指示剂，变色范围扩大，效果比单独的酚红或溴甲酚紫效果好。

上述任一方案中，优选的是，苯酚红0.8g和溴甲酚紫0.4g先后或同时溶于6ml无水乙醇，再加4ml纯水，得到酸碱指示剂溶液。

第二方面，本发明相应地提供一种奥普托欣敏感试验培养基的制备方法，包括依次进行的称量药品、溶解药品、分装、除菌，所述药品包括酸碱指示剂。

优选的是，还包括所述溶解药品后，调节溶液的pH值为中性（7.2-7.5）。如果将pH值调节为7.2以下，制备得到的培养基会泛黄，不便于后续识别颜色的变化。

上述任一方案中，优选的是，调节pH值后，进行过滤除菌，得到除菌溶液。奥普托欣不能采用高压除菌，只能采用过滤除菌，除去药品、溶液中的细菌，从而保证制备得到的培养基在用于后续应用时，结果准确。

上述任一方案中，优选的是，过滤除菌后，取上述除菌溶液50μl加入生化孔中，有利于后续的烘干工艺。

上述任一方案中，优选的是，将生化孔中的除菌溶液进行干燥，具体为在45℃下烘烤四到六个小时。这样的参数下进行干燥，能够有效使生化孔中的溶液干燥，同时避免了过度干燥和干燥不充分。

上述任一方案中，优选的是，将所述除菌溶液干燥后得到的产物进行分装，分装时进行密封、抽真空，有利于长期保存干燥后的产物。

上述任一方案中，优选的是，将分装好的产品进行辐照灭菌。辐射灭菌是利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物质上的微生物的一种有效方法。辐射杀菌的目的不同，采用的辐射剂量也不同，完全杀菌的辐照剂量为25~50kGy，其目的是杀死除芽孢杆菌以外的所有微生物。消毒杀菌的辐射剂量为1~10kGy，其目的是杀死辐照物中不产芽孢的病原体和减少微生物污染。总之，对于不同的微生物，需要控制不同的辐射剂量和电子能量。为了尽可能的消除试剂盒的污染现象，经过长时间的试验验证，生产工艺中选用消毒杀菌的辐照剂量（8kGy），这样，使得所述培养基用于后续应用时，结果准确。

上述任一方案中，优选的是，还包括，称量药品前，对药品进行检验。根据CLSI标准，对药品是否符合要求进行查验，包括检验药品的储存方式、保质期及质量，从而保证培养基用于鉴别菌种的灵敏度。

上述任一方案中，优选的是，所述酸碱指示剂为苯酚红与溴甲酚紫混合指示剂。采用酚红和溴甲酚紫混合指示剂作为酸碱指示剂，扩大了指示剂的变色范围。

上述任一方案中，优选的是，所述酸碱指示剂指示剂中苯酚红与溴甲酚紫的质量百分比为2:1。两种指示剂混合后作为酸碱指示剂，变色范围扩大，效果比单独的酚红或溴甲酚紫效果好。

上述任一方案中，优选的是，所述酸碱指示剂的溶液浓度为0.12g/ml，更加优选的是，苯酚红0.8g和溴甲酚紫0.4g溶于6ml无水乙醇，再加4ml纯水，得到酸碱指示剂溶液。

第三方面，本发明还涉及所述的奥普托欣敏感试验培养基的应用，将所述培养基用于肺炎链球菌的鉴定。

优选的是，所述培养基置于生化鉴定板中，与其他实验联合鉴定菌种。将所述培养基置于生化鉴定板中，可以将其结果与其他实验结果进行结合、对比，能够准确判断多种菌种。

上述任一方案中，优选的是，所述应用包括以下步骤：

（1）配置菌悬液：用前一天接种的链球菌配置浓度为0.5麦氏单位（MCF）的菌悬液；

（2）将菌群接入所述培养基；

（3）将接有菌群的培养基在35℃下有氧培养18-24小时；

（4）根据培养基颜色判断菌群。

上述任一方案中，优选的是，所述步骤（2）中，每个生化孔中加入150微升菌悬液。所述干燥后得到的培养基，加入150微升菌悬液。

上述任一方案中，优选的是，所述步骤（4）中，将所述培养基的颜色结果与其他结果的组合与计算机软件中的信号进行对比，判断菌种。将奥普托欣试验结果与其他试验的结果进行组合，可以准确鉴定待测菌种。

在进行细菌培养的过程中，如果细菌对奥普托欣敏感，则细菌的生长会受到抑制或完全不生长、繁殖，那么对葡萄糖的分解、利用较少甚至不存在，则培养基仍然保持原有的红色；如果在细菌培养过程中，细菌对奥普托欣耐药，则细菌会大量繁殖，大量分解、利用葡萄糖，伴随着乳酸的产生，使得培养基的pH值下降到6.0以下，从而使得培养基从红色变为黄色，因此，当培养基显示黄色时，判断为细菌对奥普托欣耐药；培养基显示红色时，判断细菌对奥普托欣敏感。

采用本发明的奥普托欣敏感试验培养基，可通过培养基颜色变化来判断被检菌落是否对奥普托欣敏感，准确率达到90%以上。该方法可省去测量纸片抑菌圈直径工作，根据颜色变化直接读取结果；可将奥普托欣敏感试验加入细菌生化鉴定板中，增加生化鉴定板鉴定细菌的能力，给半自动、自动仪器读取奥普托欣反应结果提供方便。

本发明的奥普托欣敏感试验培养基可以单不限于通过本发明的奥普托欣敏感试验培养基的制备方法得到。

具体实施例

为了更加清楚地理解本发明的技术内容，下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明、解释。

以下实施例中所用到的药品、试剂均购买自国药集团，蒸馏水是采用二级反渗透纯水设备自产。

MH肉汤生化试剂；葡萄糖分析纯；血粉生化试剂；奥普托欣：原料药；酚红：指示剂；溴甲酚紫：指示剂。

实施例1

酸碱指示剂溶液的制备：去0.8g苯酚红和0.4g溴甲酚紫，溶于6ml无水乙醇中，然后加入4ml蒸馏水，混合均匀，得到酸碱指示剂溶液。

本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤1.5000g、葡萄糖4.3680g溶解于30mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0240g奥普托欣、0.0960血粉和0.1ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基，其中，辐照灭菌所用辐照计量为8kGy。

本实施例中的奥普托欣培养基可用于肺炎链球菌的鉴定，包括以下步骤：

（1）配置菌悬液：用前一天接种的链球菌配置浓度为0.5麦氏单位的菌悬液；

（2）将菌群接入所述培养基：取150微升菌悬液加入每个生化孔内；

（3）将接有菌群的培养基在35℃下培养18小时；

（4）根据培养基颜色判断菌群：若培养基颜色为黄色，说明加入的菌悬液中的菌群对奥普托欣耐药；若培养基为红色，说明加入的菌群对奥普托欣敏感，即可判断为加入的菌群含有肺炎链球菌。

本实施例中，准确率达到97.3%。

实施例2.1

与实施例1不同的是，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤3.1257g、葡萄糖5.6700g溶解于70mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0225g奥普托欣、0.1575g血粉和0.2ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到98.4%。

实施例2.2

与实施例1不同的是，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤2.3792g、葡萄糖5.3720g溶解于60mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0280g奥普托欣、0.2000g血粉和0.17ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到95.1%。

实施例2.3

与实施例1不同的是，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤2.4693g、葡萄糖5.8876g溶解于50mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0283g奥普托欣、0.1767g血粉和0.15ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到99%。

实施例2.4

与实施例1不同的是，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤2.0111g、葡萄糖4.7691g溶解于40mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0217g奥普托欣、0.1827g血粉和0.13ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到96.3%。

实施例2.5

与实施例1不同的是，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤2.2176g、葡萄糖4.5759g溶解于70mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0231g奥普托欣、0.1610g血粉和0.185ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到93.8%。

实施例2.6

与实施例1不同的是，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤2.1511g、葡萄糖4.6900g溶解于55mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0259g奥普托欣、0.1141g血粉和0.16ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到92.7%。

实施例2.7

与实施例1不同的是，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤2.0433g、葡萄糖4.7446g溶解于65mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0182g奥普托欣、0.1722g血粉和0.18ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到91.7%。

实施例2.8

与实施例1不同的是，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤1.7969g、葡萄糖5.0386g溶解于45mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0189g奥普托欣、0.1225g血粉和0.19ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到94.9%。

实施例2.9

与实施例1不同的是，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤1.8662g、葡萄糖4.9350g溶解于35mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0203g奥普托欣、0.1547g血粉和0.20ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到96.1%。

实施例2.10

与实施例1不同的是，所述酸碱指示剂溶液的制备为：取苯酚红1.6g和溴甲酚紫0.8g，溶于10ml无水乙醇中，然后加入6.77ml蒸馏水，得到酸碱指示剂溶液。

且制备所述奥普托欣敏感试验培养基时，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤1.8662g、葡萄糖4.9119g溶解于35mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0203g奥普托欣、0.1547g血粉和0.20ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到95.9%。

实施例2.11

与实施例1不同的是，所述酸碱指示剂溶液的制备为：取苯酚红0.6g和溴甲酚紫0.3g，溶于6ml无水乙醇中，然后加入4.5ml蒸馏水，得到酸碱指示剂溶液。

且制备所述奥普托欣敏感试验培养基时，本实施例中的奥普托欣敏感试验培养基是按照以下方法制备：

步骤一：取MH肉汤1.5036g、葡萄糖4.3680g溶解于30mL蒸馏水中，待以上两种成分完全溶解后，得到基础液；

步骤二：取10mL基础液，加入0.0240g奥普托欣、0.00960g血粉和0.10ml苯酚红和溴甲酚紫的混合物溶液；

步骤三：调节步骤二中得到的混合溶液的pH为7.5左右；

步骤四：将pH为7.5的溶液进行过滤除菌；

步骤五：将过滤除菌后的溶液加入生化杯中，其中每个生化杯中加入除菌后的溶液50微升；

步骤六：将所有生化杯在45℃下进行烤干，时间约五个小时左右，得到干燥的产物；

步骤七：将干燥后的产物进行真空包装、辐照灭菌，即得到本发明的奥普托欣敏感试验培养基。

本实施例中，准确率达到97.9%。

实施例3.1

与上述实施例不同的是，本实施例中，在制备奥普托欣敏感试验培养基的方法中，步骤三在调节混合溶液的pH时，调节至7.7左右。本实施例中，准确率达到91%。

实施例3.2

与上述实施例不同的是，本实施例中，在制备奥普托欣敏感试验培养基的方法中，步骤三在调节混合溶液的pH时，调节至7.6左右。本实施例中，准确率达到90.8%。

实施例3.3

与上述实施例不同的是，本实施例中，在制备奥普托欣敏感试验培养基的方法中，步骤三在调节混合溶液的pH时，调节至7.4左右。本实施例中，准确率达到95%。

实施例3.4

与上述实施例不同的是，本实施例中，在制备奥普托欣敏感试验培养基的方法中，步骤三在调节混合溶液的pH时，调节至7.3左右。本实施例中，准确率达到92.1%。

实施例4

与上述实施例不同的是，本实施例中，在制备奥普托欣敏感试验培养基的方法中，在称量药品前，对药品进行检验，查验所用药品是否符合CLSI标准，检验的项目包括药品的储存条件是否符合规定，药品是否在保质期内，药品的性状等性质是否发生变化，药品的标识内容等等，只有符合标准的才用，原则上，尽量采用相同厂家生产的相同性质的药品。

实施例5

与上述实施例不同的是，本实施例中，在将奥普托欣敏感试验培养基用于菌种的鉴定时，将所述培养基加入生化鉴定孔中，将所述培养基的颜色结果与其他23种结果的组合与计算机软件中的信号进行对比，判断菌种。

实施例6.1

与上述实施例不同的是，本实施例中，所述指示剂中苯酚红与溴甲酚紫的质量百分比为3:2。本实施例中，准确率达到92%。

实施例6.2

与上述实施例不同的是，本实施例中，所述指示剂中苯酚红与溴甲酚紫的质量百分比为4:3。本实施例中，准确率达到90%。

实施例7.1

与上述实施例不同的是，本实施例中，所述奥普托欣培养基用于肺炎链球菌的鉴定时，将接有菌群的培养基在35℃下培养24小时。

实施例7.2

与上述实施例不同的是，本实施例中，所述奥普托欣敏感试验培养基用于肺炎链球菌的鉴定时，将接有菌群的培养基在35℃下培养20小时。

实施例7.3

与上述实施例不同是，本实施例中，接有菌群的培养基CO₂5-10%的浓度下，在35℃下培养20小时。

对比例

将公开号为CN101698876A的中国发明专利申请公开的一种肺炎链球菌敏感试验纸片与本发明中的奥普托欣敏感试验培养基做对比，在肺炎链球菌浓度非常低且公开号为CN101698876A的中国发明专利申请公开的一种肺炎链球菌敏感试验纸片的抑菌圈直径小于10mm时，本发明中的奥普托欣敏感试验培养基的每一种配方仍能明显辨别颜色的变化。

值得注意的是，以上实施例仅仅是本发明的发明内容的优选实施方式，用来解释、说明发明内容，不能用来限制被发明的内容，且，对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的总构思的前提下，还可以做出若干不需创造性劳动的改变，而这个改变也应属于本发明的保护范围。