卢帕他定在制备治疗慢性阻塞性肺病药物组合物中的应用

摘要

本发明公开了卢帕他定在制备预防或治疗慢性阻塞性支气管炎、阻塞性肺气肿或慢性阻塞性肺病的药物组合物中的应用。本发明新的治疗慢性阻塞性肺病的药物——卢帕他定，在治疗慢性阻塞性支气管炎、阻塞性肺气肿或慢性阻塞性肺病方面，疗效显著，毒副作用少，使用安全。

说明书

技术领域

本发明涉及卢帕他定在制备治疗慢性阻塞性肺病药物组合物中的应用。

背景技术

慢性阻塞性肺病(COPD)是一种以气流受限为特征的疾病，通常呈进 行性发展，不完全可逆，多与肺部对有害颗粒物或有害气体的异常炎症反应 有关，表现特征为呼气气流减少和肺用力排空缓慢。COPD的临床特征包括 气喘，咳嗽和咳痰，并伴有慢性气道阻塞及肺部过度膨胀，发病时同时出现 慢性支气管炎、肺气肿。COPD中的气道重塑可导致气道的功能性改变，包 括持续不可逆的气道变窄及粘液的过度分泌。COPD主要由吸烟所致，具有 较高的发病率和死亡率，现有方法治疗效果十分有限。世界卫生组织统计显 示，COPD在1990年是世界性第六位的致死疾病，并预测到2020年将上升 为第三位。

吸烟是导致COPD的首要因素，绝大多数CODP患者均有长期的吸烟 史，而年龄是COPD发病的另一要素。COPD的发病时期长，发病征兆并不 明显，支气管炎的急性发作通常不会被诊断为COPD，并且临床患者会显示 出不同的疾病特征，在疾病的早期一般难以作出精确的诊断，大多数患者直 到有明显肺功能降低或其他症状如呼吸困难、持续咳嗽咳痰才去寻求医疗求 助，因此，一般COPD的诊断都在中度至重度阶段作出。由于COPD通常 伴随肺气肿和慢性支气管炎，进一步使得治疗更为困难，目前临床用药大多 属于保守治疗，并不能从根本解决其病理改变。

卢帕他定，CAS号158876-82-5；分子式C₂₆H₂₆ClN₃；分子量415.958； 蛋白结合率98％-99％；半衰期5.9小时。化学结构式如式I所示。

式I

卢帕他定是由西班牙Uriach制药公司研制的新型、强效抗过敏药，于2003 年3月15日首次在西班牙上市，用于治疗季节性和常年性过敏性鼻炎。商 品名Rupafin和Dupafin，剂量为10mg，一日一次。

卢帕他定具有抗组胺和拮抗血小板活化因子(PAF)双重作用。研究表明， 过敏和炎症性疾病是由多种不同介质的生成和释放产生的多因素复杂过程。 组胺即是在变态反应早期和这类疾病症状出现时含有的最多炎性介质，存在 于肥大细胞和嗜碱性粒细胞颗粒中，被过敏原激活的肥大细胞和嗜碱细胞会 释放而产生，可发挥促平滑肌收缩、血管扩张、增强毛细血管通透性和黏膜 腺体分泌等效应，介导I型超敏反应发生。其中，这类疾病症状如打喷嚏、 鼻痒、含泪和流涕大多数都是由组胺H1受体所导致的。而PAF则是气道炎 症中又一重要炎性介质。与组胺类似，PAF也可以引起支气管的收缩和血管 通透性的增强，从而导致流涕和鼻充血；同时，它还能引起诱发哮喘的主要 原因——支气管敏感度的上升。有研究表明66％的哮喘因鼻炎诱发，而鼻部 疾病是哮喘、慢性肺阻塞、支气管扩张等气管疾病的起始点。新的有关PAF 的作用机制认为，PAF间接作用于气道，使之阻塞以及高敏亢进，继而引发 白三烯释放。通常PAF和组胺的作用是互补的，组胺是从肥大细胞贮藏器中 释放出的早期应答介质，而PAF则是从头合成的。但是目前，临床上使用的 抗过敏药均只有抗组胺活性，而没有PAF拮抗作用。很显然，同时阻断组胺 和PAF的药物将会比仅阻断其中一种具有更好的临床效果。卢帕他定是目前 唯一上市的既具有抗组胺作用又拮抗PAF活性的抗过敏药，具有较好的临床 应用前景。

卢帕他定对组胺H1受体有很强的亲和性。通过卢帕他定拮抗组胺能够诱 发的离体臀鼠回肠收缩的作用，现有技术有比较卢帕他定与第一、二代抗组 胺药物的抗组胺活性的实验证明：卢帕他定比特非那定、氯雷他定、西替利 嗪、羟嗪以及苯海拉明具有更强的抗组胺活性。其中，卢帕他定 (IC50＝0.0035μm)比氯雷他定(IC50＝0.29μm)抗组胺活性强80倍；比其 它的抗组胺药抗组胺活性强100倍以上。卢帕他定和地氯雷他定体外抗组胺 活性相当。另外，体外实验也显示卢帕他定的某些代谢物也具有抗组胺活性， 个别代谢物的活性与氯雷他定的代谢物地氯雷他定(desloratadine)相当。

现有技术中，卢帕他定的PAF拮抗活性评价研究是在几个种属动物如小 鼠、家兔、豚鼠和犬等体内和体外模型上进行的。在家兔的富血小板血浆、 血清、及犬的全血中进行的拮抗PAF诱导的血小板聚集实验中，卢帕他定的 IC50分别是2.9，0.2，和0.29μm。这一实验说明卢帕他定具有很好的PAF 拮抗作用。而已知第二代抗组胺药在富血小板的家兔血浆中拮抗PAF诱导的 血小板聚集实验中，氯雷他定、西替利嗪、咪唑斯汀和非索非那定IC50值 分别是7142、7200、7200和7200μm，可以说几乎没有或仅有微弱的PAF 拮抗作用。在犬皮下给药组胺或PAF诱导的水疱模型中，卢帕他定 (0.3-10mg/kg，口服)能有效抑制水疱，而氯雷他定和西替利嗪仅能抑制组 胺诱导的水疱。卢帕他定单剂量给药的最佳药效在给药后4小时，有效性可 持续24小时，提示该药为一长效药物。卢帕他定也能抑制豚鼠由组胺或PAF 导致的结子膜炎，氯雷他定则不能抑制PAF所致的结膜炎，将卢帕他定应用 于滴眼液，疗效是氯雷他定的10倍。

另外，卢帕他定与其它抗组胺药相比，在非组胺依赖性药理模型上，显 示具有更广谱的药理活性。它既具有抑制肥大细胞的脱粒作用，又具有抑制 嗜曙红细胞的趋化作用。可以说，肥大细胞脱粒是过敏反应过程中，特别是 早期起着非常重要的作用，而嗜曙红细胞是变态反应后期关键性的效应细 胞。卢帕他定口服吸收速度快，一般片剂给药后1小时可达血药浓度峰值， 胶囊给药后1.5小时达血药浓度峰值，半衰期为12小时；其在体内主要通过 肝胆代谢，其某些代谢物亦具有抗组胺作用，这也可能是卢帕他定具有全身 抗过敏作用和长效作用的原因。

卢帕他定的II期和III期临床试验是在西班牙、法国、南非和英国10个 临床试验中心进行的，参加试验的患者超过了2900人，年龄范围12-82岁 的季节性或长年性过敏性鼻炎患者。实验卢帕他定的安全性和有效性得到了 肯定。一项与安慰剂对照，剂量范围研究评估卢帕他定剂量2.5，5，10和 20mg/天给药，在2周内的有效性和安全性实验，结果表明：卢帕他定较安 慰剂组能更有效的减轻患者症状；其中，20mg/天的剂量症状改善得分最高， 而10mg/天剂量组综合疗效效果最好。在另一项与安慰剂组对照剂量范围研 究评估卢帕他定剂量10mg/天和20mg/天，对于季节性鼻炎患者的有效性和 安全性实验：患者被随机分为三组即10mg、20mg和安慰剂组，每天给药， 连续2周，结果显示：卢帕他定20mg和10mg/天对季节性过敏性鼻炎患者 鼻和眼部症状改善较安慰剂组要好得多；其中，10mg和20mg/天剂量组之 间没有显著性差异，但20mg/天给药第一周后都显示有较好的减缓症状趋势。

进一步地，卢帕他定与其它抗组胺药相比：显示10mg/天卢帕他定与相 同剂量的西替利嗪疗效相当，但前者的中枢神经系统副作用小；在相同剂量 下卢帕他定比氯雷他定和依巴斯汀更能缓解季节性过敏性鼻炎症状。

在一项随机、双盲、安慰剂对照、多中心平行给药研究中，比较了卢帕 他定10mg或20mg/天、氯雷他定10mg/天或安慰剂，治疗季节性过敏性鼻 炎患者，连续2周的实验，结果显示，卢帕他定10mg或20mg/天比氯雷他 定10mg/天具有更好的治疗效果，尤其是在打喷嚏和鼻痒症状改善方面前者 比后者要好。

另一随机、双盲、安慰剂对照、多中心平行给药研究中，250名季节性 过敏性鼻炎患者，每天服用卢帕他定10mg，依巴斯汀10mg或者安慰剂， 连续2周的实验，结果显示，卢帕他定比依巴斯汀有更好的治疗效果，尤其 是在打喷嚏和流泪症状改善方面，前者要比后者效果好得多。

卢帕他定对外周神经H1受体具有高度选择性，作用强度大，作用时间长， 而对中枢神经系统H1受体的亲和性低，血脑屏障通透性小，因而没有镇静 副作用。实验表明，即使分别给小鼠和猕猴卢帕他定1000mg/kg和10mg/kg， 也不会延长QTC和QRS间期，也不会导致大鼠、豚鼠和犬产生心律不齐； 另外，卢帕他定在体内主要代谢物3-羟基地氯雷他定也不影响心脏活动，分 析原因是由于卢帕他定在心脏中的浓度极低，通常情况下，很难检出，故使 用卢帕他定不会产生心脏毒性，连续服用没有蓄积反应，对酒精无作用，安 全剂量较广，耐受性好。

最新研究发现，卢帕他定具有良好的抗肺纤维化作用，能够很好的逆转 博来霉素所诱导肺纤维化，降低博莱霉素所致肺纤维化哺乳动物死亡率，降 低纤维化肺部炎症和组织局部EMT的产生，减少胶原沉积有效改善肺功能。

与肺纤维化不同，COPD有着自己特殊的发病原因和发病过程，因此应 用于肺纤维化的药物并不一定能有效治疗COPD。尽管吸烟和老化是COPD 发病的最常见原因，但仍有实例证明非吸烟人群或非中老年人群也可患病， 因此COPD的发病机制十分复杂，并不能用基本的肺部炎症理论或其他学术 理论代替。

然而，目前对于慢性阻塞性肺病还缺乏有效的治疗方法，因此，本领域 迫切需要开发新的疗效好的药物，用于减轻或者治疗慢性阻塞性肺病。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是针对的缺乏有效的预防或治疗慢性阻塞 性肺病的药物的不足，提供一种卢帕他定的新用途，卢帕他定可以用于有效 的预防或治疗慢性阻塞性支气管炎、阻塞性肺气肿或慢性阻塞性肺病。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：卢帕他定在制备预防或 治疗慢性阻塞性支气管炎、阻塞性肺气肿或慢性阻塞性肺病的药物组合物中 的应用。

本发明中，所述的“慢性阻塞性支气管炎”是指气管、支气管粘膜及其 周围组织的慢性非特异炎症。临床上以咳嗽、咳痰或伴有喘息及反复发作的 慢性过程为特征。

本发明中，所述的“阻塞性肺气肿”由慢性支气管炎或其他原因逐渐引 起的细支气管狭窄，终末细支气管远端气腔过度充气，并伴有气腔壁膨胀、 破裂而产生，临床上多为慢性支气管炎的常见并发症。

本发明中，所述的“慢性阻塞性肺病”(COPD)是指一种以气流受限为 特征的疾病，临床特征包括呼气气流减少、肺用力排空缓慢，气喘，咳嗽和 咯痰，并伴有慢性气道阻塞及肺部过度膨胀，发病时同时出现慢性阻塞性支 气管炎和阻塞性肺气肿。

本发明中，所述的慢性阻塞性肺病，是指人或动物的COPD。

本发明中，所述的“预防”是指在可能的慢性阻塞性支气管炎、阻塞性 肺气肿或COPD因素的存在下，使用后防止或降低慢性阻塞性支气管炎、阻 塞性肺气肿或COPD的产生。

本发明中，所述的“治疗”，是指减轻慢性阻塞性支气管炎、阻塞性肺 气肿或COPD的程度，或者治愈慢性阻塞性支气管炎、阻塞性肺气肿或COPD 使之正常化，或减缓慢性阻塞性支气管炎、阻塞性肺气肿或COPD的进程。 具体为卢帕他定能有效改善肺功能，恢复肺部基本生理结构，减少多种炎性 细胞浸润和表达，减少炎症程度和炎性细胞浸润，在慢性炎性肺疾病中起到 调节机体免疫平衡的作用，平衡Th1和Th2型免疫反应，对抗哮喘逆转 COPD，可以改善肺功能，逆转肺气肿。

本发明中，所述的“卢帕他定”，是指卢帕他定或其药用衍生物，包括 药学上可接受的盐、酯等形式。

本发明中，所述的药物组合物较佳的包括卢帕他定和药用载体。

其中，所述的药物组合物更佳的包括0.1％-99％卢帕他定和0.1％-99％药 用载体，百分比为各成分占药物组合物总量的质量百分比。

其中，所述的卢帕他定可以单独或和其他化合物一起作为活性成分。所 述的“活性成分”是指具有治疗慢性阻塞性支气管炎、阻塞性肺气肿或慢性 阻塞性肺病功能的“活性成分”。

其中，所述的药物组合物较佳的还包括组胺1～4型受体抑制剂和/或PAF 受体抑制剂。

其中，所述的药用载体包括药学上可接受的赋形剂、填充剂、稀释剂等。

其中，所述的药物组合物的剂型没有特别限制，可以是固体、半固体或 液体的形式，可以是水溶液、非水溶液或混悬液，也可以是片剂、胶囊、颗 粒剂、注射剂或输注剂等。可以经口服途径应用，也可以经静脉、肌肉、皮 内或皮下注射途径给药。

本发明的含卢帕他定的药物组合物在治疗时的使用剂量根据患者的年龄 和病情而定，常用每日剂量约为0.0001～1000mg，优选0.01～500mg，更优选 0.1～200mg。给药次数为每天一次或多次。

在预防或治疗COPD时，所述的卢帕他定的药物组合物可以单独使用或 者和其他药物联合使用。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

在符合本领域常识的基础上，本发明中上述的各技术特征的优选条件可 以任意组合得到本发明较佳实例。

本发明的积极进步效果在于：本发明提供了一种新的预防或治疗药物— —卢帕他定，在治疗慢性阻塞性支气管炎、阻塞性肺气肿或慢性阻塞性肺病 方面，疗效显著，毒副作用少，使用安全。

附图说明

图1为实施例1对吸烟所致COPD小鼠的假手术组、模型组、卢帕他定 治疗组的肺泡灌洗液内各种炎性细胞数量对比图。

图2为实施例1对吸烟所致COPD小鼠的假手术组、模型组、卢帕他定 治疗组的肺泡灌洗液内各种炎性细胞因子含量对比图。

图3为实施例1对吸烟所致COPD小鼠的假手术组、模型组、卢帕他定 治疗组的肺组织病理检查照片。

图4为实施例2对TLR4缺失小鼠肺气肿的假手术组、模型组、阳性药 对照组、卢帕他定治疗组的肺组织病理检查照片。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在 所述的实施例范围之中。

下述实施例中，所述溶液涉及％均为质量体积百分比。实验结果用均值 ±标准误差(X±SE)表示，经参数或者非参数方差检验，经比较p＜0.05认 为有显著性差异，p＜0.01认为有极其显著性差异。病理学分级资料的统计使 用卡方检验，经比较p＜0.05认为有显著性差异，p＜0.01认为有极其显著性 差异。实施例中，所用的PBS，即磷酸缓冲液，浓度为0.1M，pH值为7.2。

实施例1

1、制备COPD动物模型

主要试剂及实验动物：实验所用香烟购自美国肯塔基大学烟草研究中 心，型号3R4F；实验所用的SPF级C57BL/6小鼠(雄性，6～8周龄，16～18g)， 均购自中国医学科学院动物所。

COPD动物模型制备：C57BL/6小鼠至于烟箱中，每次吸入5支无过滤 嘴香烟，烟气与空气比例为1∶6，气体总流量为150ml/min。每天4次吸烟实 验，每次30分钟，共24周时间。

2、卢帕他定治疗吸烟小鼠COPD

主要试剂：卢帕他定，生产厂商为浙江赐富医药有限公司，为富马酸卢 帕他定原料药，卢帕他定含量＞99％。

治疗方法：将动物模型进行分组给药，实验分组如下表1所示。

表1

注：A组为假手术组(Sham)；B组为模型组(Model)；C组为卢帕他定治疗组(Rupa)

3、检测COPD小鼠肺泡灌洗液中多种炎性细胞数量

小鼠进行颈部解剖，暴露气管进行插管，PBS灌洗量0.8ml，灌洗次数 3-5次。回收的灌洗液4℃1500r离心10分钟，回收上清置于-20℃待进行细 胞因子检测。

用1ml含有1％BSA的PBS重选细胞沉淀，取10μl重悬液进行细胞计 数，应用血细胞分析仪进行分析，结果见图1，具体数据如表2所示。从图 1可见，与假手术组相比，烟熏COPD小鼠肺泡灌洗液中总白细胞数量(图 1A)、单核细胞数量(图1B)、中性粒细胞数量(图1C)、淋巴细胞数量(图 1D)、嗜碱性粒细胞数量(图1E)、嗜酸性粒细胞数量(图1F)极其显著升 高，由此表明，卢帕他定6mg/kg组与模型组相比可以显著减少COPD小鼠 肺泡灌洗液内各种炎性细胞数量。

表2

4、检测COPD小鼠肺泡灌洗液内炎性细胞因子含量

小鼠进行颈部解剖，暴露气管进行插管，PBS灌洗量0.8ml，灌洗次数 3-5次。回收的灌洗液4℃1500r离心10分钟，回收上清置于-20℃待检。

取上清100μl进行ELISA检测，使用商业化ELISA试剂盒进行炎性细 胞因子含量检测，结果见图2，具体数据如表3所示。从图2可见，与假手 术组相比，COPD小鼠肺部IL-2(图2A)、IL-4(图2C)、IL-17(图2D) 含量均明显增加，由此表明，卢帕他定6mg/kg组可以降低COPD小鼠肺部 炎性细胞因子含量，与此同时，卢帕他定并不影响在组织修复中起重要作用 的IFN-γ(图2B)的含量，证明卢帕他定可以方向性调节机体免疫反应。

表3

  组别   IL-2   IFN-γ   IL-4   IL-17   假手术   8.85pg/ml   22.17pg/ml   18.33pg/ml   61.63pg/ml   COPD   46.79pg/ml   19.65pg/ml   45.2pg/ml   92.48pg/ml   卢帕他定   6.71pg/ml   26.28pg/ml   6.54pg/ml   35.53pg/ml

5、吸烟COPD小鼠病理评价

HE染色法，又称苏木精-伊红染色法，苏木素染液为碱性，主要使细胞 核内的染色质与包质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质 和细胞外基质中的成分着色。

取动物右侧下叶肺组织，4wt％多聚甲醛固定后石蜡包埋，在包埋肺组 织的蜡块最大横截面切片，HE染色结果见图3。如图显示，COPD小鼠肺部 (图3B)肺泡面积显著增加，终末细支气管远端气腔扩大，正常肺组织破 坏，同时有肺气肿出现，而卢帕他定(图3C)能有效恢复肺泡部分正常结 构，减小终末支气管远端气腔。

实施例2

1、TLR4突变所致肺气肿模型制备

实验动物：SPF级野生型C3H/HeN小鼠购自北京维通利华实验动物技 术有限公司，TLR4突变C3H/HeJ小鼠购自南京大学模式动物研究所。

方法：取SPF小鼠和TLR4突变小鼠饲养于中国国医学科学院药物研究 所实验动物中心，恒温恒湿，自由饮食。饲养至年龄为第3个月时处死动物。

2、卢帕他定治疗TLR4突变小鼠肺气肿

主要试剂及实验动物：卢帕他定，生产厂商为浙江赐富医药有限公司， 为富马酸卢帕他定原料药，卢帕他定含量＞99％。阳性对照药重组IL-17A购 自R&D公司。

治疗方法：将动物模型进行分组给药，实验分组如下表4所示：

表4

注：A组为假手术组(Sham)；B组为模型组(Model)；C组为IL-17A治疗组(IL-17A)；D组为卢 帕他定治疗组(Rupa)。

3、TLR4缺失小鼠肺气肿病理评价

HE染色法，又称苏木精-伊红染色法，苏木素染液为碱性，主要使细胞 核内的染色质与包质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质 和细胞外基质中的成分着色。

取动物右侧下叶肺组织，4％多聚甲醛固定后石蜡包埋，在包埋肺组织 的蜡块最大横截面切片，HE染色结果见图4。如图显示，肺气肿小鼠(图 4B)肺部肺泡面积显著增加，终末细支气管远端气腔扩大，正常肺组织破坏； 阳性对照药IL-17A(图4C)能有效阻止小鼠肺气肿的发生发展；而卢帕他 定(图4D)能有效恢复肺泡部分正常结构，减小终末支气管远端气腔。

根据实施例1-2分析得到的结论：卢帕他定能有效改善COPD小鼠肺功 能，恢复COPD小鼠肺部基本生理结构，减少多种炎性细胞浸润和表达，在 慢性炎性肺疾病中起到调节机体免疫平衡的作用，平衡Th1和Th2型免疫反 应。

一般说来，稳定期COPD患者存在Th1淋巴细胞功能亢进，而急性加重 期Th1/Th2平衡有向Th2漂移的特点，根据上述实验结果，可以合理判断卢 帕他定能抗炎、调节免疫平衡，对抗哮喘逆转COPD，因此，利用卢帕他定 治疗COPD可以改善肺功能，逆转肺气肿，减少炎症程度和炎性细胞浸润。