中药组合物制剂中红景天、甘草含量测定方法

摘要

本发明公开了一种中药组合物制剂中红景天、甘草含量测定方法，属于医药技术领域。本发明使用一个色谱条件同时对含有红景天和甘草的中药组合物制剂中的红景天及甘草进行了质量控制，操作简便，分析数据准确。既节省了分析人员的分析时间，提高了工作效率，延长了色谱柱的使用寿命，降低了成本，同时保证了制剂的稳定性，提高了可控性。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药复方制剂的含量测定方法，特别涉及一种中药组合物制剂中红景 天、甘草含量测定方法，属于医药技术领域。

背景技术

景天清肺胶囊收载于中成药地方标准上升国家标准部分，标准编号：WS-10866 (ZD-0866)-2002。景天清肺胶囊是由如下重量配比的药材制成的：红景天150g、石灰华 150g、桔梗100g、甘草100g，以上四味，粉碎成细粉，混匀，装入胶囊，即得。具有清热 利肺，祛痰止咳等作用。用于痰热阻肺所致咳嗽痰多，及慢性支气管炎有很好的疗效，现 已广泛应用于临床。现在市面销售产品主要为景天清肺胶囊(青海金诃格萨尔王藏药制药 有限责任公司)及景天清肺丸(青海金诃格萨尔王藏药制药有限责任公司)两种。

景天清肺胶囊的药物疗效已经得到临床的肯定，但药物的疗效只有在质量可控的前提 下才能得到保证，药物原有的质量控制方法极其简单粗糙，根本不能全面准确的反映和控 制该复方制剂的质量。原质量标准中对红景天中红景天苷进行了控制，但仅对其中一味药 材进行了质量控制，难以保证药物的安全性及有效性。如果再增加甘草的含量测定，但需 繁琐操作，影响分析速度。

专利炮天红养身酒中葛根素和红景天苷的含量检测方法(CN101441201)提供了炮天红 养身酒中红景天苷的含量检测方法。专利一种通脉养心丸的质量控制方法(CN101396519) 公开了通脉养心丸的质量控制方法，所述方法包括：对内容物制何首乌、五味子进行鉴别， 根据药典的方法对内容物进行检查，同时对含有的甘草进行含量测定。目前没有对制剂中 红景天和甘草的同时进行含量测定的方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种中药组合物制剂中红景天、甘草含量 测定方法。

发明概述

本发明使用一个色谱条件同时对含有红景天和甘草的中药组合物制剂中红景天、甘草 进行了质量控制，操作简便，分析数据准确。既节省了分析人员的分析时间，提高了工作 效率，同时又提高了制剂的安全性、有效性及可控性。

术语说明：

景天清肺胶囊是国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分)记载的药 品名称。标准编号：WS-10866(ZD-0866)-2002。

景天清肺丸是国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分)记载的药品 名称。标准编号：YBZ03012006。

利舒康胶囊是国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分)记载的药品 名称。标准编号：WS-10677(ZD-0677)-2002。

本发明的技术方案如下：

一种中药组合物制剂中红景天、甘草含量测定方法，步骤如下：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以 体积份数比0.2％磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→40min→ 45min，乙腈：8％→8％→50％→100％→8％；体积份数比0.2％磷酸溶液：92％→92％→50％→0％→92％， 检测波长为215nm-235nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取红景天苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加体积百分 比60％-70％乙醇制成每1ml含红景天苷、甘草酸铵各80μg的混合溶液，即得；

供试品溶液的制备：将含有红景天和甘草的中药组合物制剂研细后，取粉末0.5g，置具 塞的锥形瓶中，加入体积百分比60-70％乙醇50ml，称定重量，密塞，超声处理30min-40min， 放冷，再称定重量，用60％-70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

所述的含有红景天和甘草的中药组合物制剂是指含有红景天和甘草的组合物原料药， 按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括胶囊剂、丸剂、微丸、 滴丸、片剂、软胶囊、颗粒、口服液。

所述的梯度洗脱方式为梯度性地改变洗脱液的组分(成分、离子强度等)或pH，以期将 层析柱上不同的组分在合理的时间内洗脱出来的方法。

根据本发明优选的，一种原料药组成为红景天150重量份、石灰华150重量份、桔梗100 重量份、甘草100重量份的中药组合物景天清肺胶囊中红景天、甘草含量测定方法，步骤如下：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以 体积份数比0.2％磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→40min→ 45min，乙腈：8％→8％→50％→100％→8％；体积份数比0.2％磷酸溶液：92％→92％→50％→0％→92％； 检测波长为225nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取红景天苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加体积百分 比70％乙醇制成每1ml含红景天苷、甘草酸铵各80μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：将中药组合物景天清肺胶囊内容物研细后，取粉末0.5g，精密称定 置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比70％乙醇50ml，称定重量，密塞，超声处理30min，放冷， 再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

中药组合物景天清肺胶囊中红景天含量以红景天苷计，不得少于0.33mg/g；甘草含量 以甘草酸计，不得少于3.3mg/g。

根据本发明优选的，一种原料药组成为红景天150重量份、石灰华150重量份、桔梗100 重量份、甘草100重量份的中药组合物景天清肺丸中红景天、甘草含量测定方法，步骤如下：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以 体积份数比0.2％磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→40min→ 45min，乙腈：8％→8％→50％→100％→8％；体积份数比0.2％磷酸溶液：92％→92％→50％→0％→92％； 检测波长为225nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取红景天苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加体积百分 比70％乙醇制成每1ml含红景天苷、甘草酸铵各80μg的混合溶液，即得；

供试品溶液的制备：将中药组合物景天清肺丸研细后，取粉末0.5g，精密称定，置具塞 的锥形瓶中，加入体积百分比70％乙醇50ml，称定重量，密塞，超声处理30min，放冷，再称 定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

中药组合物景天清肺丸中红景天含量以红景天苷计，不得少于0.34mg/g；甘草含量以 甘草酸计，不得少于3.4mg/g。

根据本发明优选的，一种原料药组成为手参540重量份、甘青青兰540重量份、红景天256 重量份、烈香杜鹃370重量份、黄柏296重量份、甘草370重量份的中药组合物利舒康胶囊中红 景天、甘草含量测定方法，步骤如下：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以 体积份数比0.2％磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→40min→ 45min，乙腈：8％→8％→50％→100％→8％；体积份数比0.2％磷酸溶液：92％→92％→50％→0％→92％； 检测波长为225nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取红景天苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加体积百分 比70％乙醇制成每1ml含红景天苷、甘草酸铵各80μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：将中药组合物利舒康胶囊内容物研细后，取粉末0.5g，精密称定， 置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比70％乙醇50ml，称定重量，密塞，超声处理30min，放冷， 再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

中药组合物利舒康胶囊中红景天含量以红景天苷计，不得少于0.33mg/g，甘草含量以甘 草酸计，不得少于2.3mg/g。

本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/l。

本发明使用一个色谱条件同时对含有红景天和甘草的中药组合物制剂中的红景天及甘草 进行了质量控制，操作简便，分析数据准确。既节省了分析人员的分析时间，提高了工作效 率，延长了色谱柱的使用寿命，降低了成本，同时保证了制剂的稳定性，提高了可控性。例 如中药组合物景天清肺胶囊原质量标准项下只有红景天的含量测定方法。不能有效的检测其 他主要成分的含量。本发明对现有的景天清肺胶囊质量标准进行了相应提高，使用一个色谱 条件同时对红景天及甘草进行了质量控制，提高了工作效率，同时保证了制剂的稳定性，提 高了可控性，从而确保了其临床疗效和广大患者的身体健康。

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1含量测定实验

1.仪器、试药和供试样品

仪器：日立L-2100泵，日立L-2400紫外检测器，岛津AUW-220D型电子天平。

对照品：红景天苷对照品(中国药品生物制品检定所)批号：110818-200404，甘草酸铵 对照品(中国药品生物制品检定所)批号：110731-200615。

样品：景天清肺胶囊(青海金诃格萨尔王藏药制药有限责任公司)，批号：20100618， 20100619，20100620。

2.检测波长的选择

取红景天苷及甘草酸铵对照品，于200-400nm波长范围内进行紫外扫描，见附图1、附图2。 由图知：红景天苷在225nm处有最大吸收峰；甘草酸铵在250nm处有最大吸收峰，在225nm处有 次最大吸收峰。制剂中红景天苷含量(红景天中红景天苷含量0.5wt％左右)较甘草酸含量(甘 草中甘草酸含量2.0wt％左右)低，故选择红景天苷最大吸收峰225nm为检测波长。由图知 215nm-235nm均可用于测定，以225nm为最优。

3.流动相选择

红景天苷与甘草酸极性相差较大，采用等度洗脱很难对两种成分进行同时测定，故选 择梯度洗脱进行色谱分离。

使用甲醇-水体系进行色谱分离时发现，在225nm下甲醇-水体系易形成较大的梯度峰， 影响测定。

使用乙腈-水进行梯度洗脱时，以上问题得到解决，但甘草酸峰形较差，且不易稳定。 使用乙腈-酸的水溶液时，问题得到解决。研究发现酸的水溶液可以是1％冰醋酸溶液-0.1％ 冰醋酸溶液，也可以是0.5％磷酸溶液-0.05％磷酸溶液，均为体积百分比，其中以0.2％磷酸 溶液最为稳定为最优。故确定流动相A为乙腈，B为体积百分比0.2％磷酸溶液。

4、梯度洗脱时间的选择

乙腈-体积百分比0.2％磷酸溶液在体积份数比6-10∶94-90时，红景天苷峰保留时间及 分离度均合适，当乙腈-体积百分比0.2％磷酸溶液在体积份数比30-50∶70-50时甘草酸开 始洗脱且峰保留时间及分离度合适。通过摸索发现按以下时间进行洗脱时，红景天苷与甘 草酸均能达到很好的检测要求。见表1和附图3、附图4。

表1梯度洗脱表

5.标准曲线的制备和线性关系的考察

精密量取红景天苷对照品贮备液溶液(162.6μg/ml)及甘草酸铵对照品贮备液溶液 (174.8μg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，70％(v/v)乙醇释至 刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)为纵坐标，对照品浓度(C)为横坐标， 进行线性回归，见表2、表3和图5、图6；

表2红景天苷线性关系考察结果

回归方程：A＝5.8819C+114.89

相关系数：R＝0.9991

表3甘草酸铵线性关系考察结果

回归方程：A＝5.269C+94.79

相关系数：R＝0.9996

结果表明：红景天苷在16.26μg/ml-162.6μg/ml范围内，线性关系良好；甘草酸铵在 17.48-174.80μg/ml范围内，线性关系良好。

6.精密度试验

精密吸取红景天苷及甘草酸铵对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次， 记录峰面积并计算相对标准偏差。见表4，表5。

表4红景天苷精密度试验结果

表5甘草酸铵精密度试验结果

结果表明：仪器精密度良好。

7.稳定性试验

供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2 小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差。结果表明：供试品溶液6小时 内测定结果稳定。见表6，表7。

表6样品稳定性红景天苷试验结果

表7样品稳定性甘草酸铵试验结果

8.重复性试验

取本品，重复测定6次，计算样品中含量。表明分析方法重复性良好。

表8红景天苷重复性试验结果

表9甘草酸重复性试验结果

9.回收率试验

精密称取同一批样品6份，精密加入对照品，测定其含量，计算回收率。表明该测定 方法测定结果准确。

表10红景天苷回收率实验结果

表11甘草酸回收率实验结果

10.样品测定

取中药组合物景天清肺胶囊胶囊三批，测定并计算红景天苷及甘草酸含量，结果如下。

表12样品含量测定结果

    批号 红景天苷含量(mg/粒) 甘草酸含量(mg/粒)     20100618     0.215     2.354     20100619     0.226     2.129     20100620     0.208     2.856

附图说明：

图1是红景天苷紫外吸收图；

图2是甘草酸铵紫外吸收图；

图3是红景天苷及甘草酸铵混合对照高效液相色谱图；

图4是中药组合物景天清肺胶囊高效液相色谱图；

图5是红景天苷线性关系图；

图6是甘草酸铵线性关系图；

其中，图1、图2的横坐标是溶液吸光度，单位：AU；纵坐标是吸收波长，单位：nm； 图3、图4的横坐标是时间，单位：分钟(Minutes)；纵坐标是电压，单位：伏特(Volts)。

下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作详细的阐述，但不限于这些具体记载的实施例。所检测的 中药组合物景天清肺胶囊、景天清肺丸均为青海金诃格萨尔王藏药制药有限责任公司产售， 中药组合物利舒康胶囊为青海益欣药业有限责任公司产售。

实施例1：含红景天、甘草的中药组合物景天清肺胶囊中红景天、甘草含量测定方法

一种原料药组成为红景天150重量份、石灰华150重量份、桔梗100重量份、甘草100重量 份的中药组合物景天清肺胶囊中红景天、甘草含量测定方法，步骤如下：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以 体积份数比0.2％磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→40min→ 45min，乙腈：8％→8％→50％→100％→8％；体积份数比0.2％磷酸溶液：92％→92％→50％→0％→92％； 检测波长为225nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取红景天苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加体积百分 比70％乙醇制成每1ml含红景天苷、甘草酸铵各80μg的混合溶液，即得；

供试品溶液的制备：将中药组合物景天清肺胶囊内容物研细后，取粉末0.5g，置具塞的 锥形瓶中，加入体积百分比70％乙醇50ml，密塞，超声处理30min，放冷，用70％乙醇补足减失 的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

中药组合物景天清肺胶囊中红景天含量以红景天苷计0.33mg/g。甘草含量以甘草酸计 3.3mg/g。

实施例2：含红景天、甘草的中药组合物景天清肺丸中红景天、甘草含量测定方法

一种原料药组成为红景天150重量份、石灰华150重量份、桔梗100重量份、甘草100重量 份的中药组合物景天清肺丸中红景天、甘草含量测定方法，步骤如下：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以 体积份数比0.2％磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→40min→ 45min，乙腈：8％→8％→50％→100％→8％；体积份数比0.2％磷酸溶液：92％→92％→50％→0％→92％； 检测波长为225nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取红景天苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加体积百分 比70％乙醇制成每1ml含红景天苷、甘草酸铵各80μg的混合溶液，即得；

供试品溶液的制备：将中药组合物景天清肺丸研细后，取粉末0.5g，精密称定，置具塞 的锥形瓶中，加入体积百分比70％乙醇50ml，称定重量，密塞，超声处理30min，放冷，再称 定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

中药组合物景天清肺丸中红景天含量以红景天苷计，不得少于0.34mg/g；甘草含量以 甘草酸计，不得少于3.4mg/g。

实施例3：含红景天、甘草的中药组合物利舒康胶囊中红景天、甘草含量测定方法

一种原料药组成为手参540重量份、甘青青兰540重量份、红景天256重量份、烈香杜鹃370 重量份、黄柏296重量份、甘草370重量份的中药组合物利舒康胶囊中红景天、甘草含量测定 方法，步骤如下：

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以 体积份数比0.2％磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→10min→35min→40min→ 45min，乙腈：8％→8％→50％→100％→8％；体积份数比0.2％磷酸溶液：92％→92％→50％→0％→92％； 检测波长为225nm；理论板数按红景天苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取红景天苷对照品、甘草酸铵对照品，加体积百分比70％乙醇制成每 1ml含红景天苷、甘草酸铵各80μg的混合溶液，即得；

供试品溶液的制备：将中药组合物利舒康胶囊内容物研细后，取粉末0.5g，置具塞的锥 形瓶中，加入体积百分比70％乙醇50ml，密塞，超声处理30min，放冷，用70％乙醇补足减失的 重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

中药组合物利舒康胶囊中红景天含量以红景天苷计0.33mg/g，甘草含量以甘草酸计 2.3mg/g。