前带现象检测方法、分析方法、前带现象检测装置和分析装置

摘要

本发明提供前带现象检测方法，所述前带现象检测方法即使使用现有的待测物分析用具也能够简易地检测前带现象的产生，能够高效进行使用免疫色谱法等的检查。该方法特征在于，使用含有与试样中的分析对象成分特异性结合的物质的待测物分析用具，所述待测物分析用具为在多孔基材上从所述试样的移动方向的上游向下游配置有试样供给部、试剂部和检测部的待测物分析用具，所述试剂部含有与所述分析对象成分特异性结合的标记化物质，所述检测部含有与所述分析对象成分特异性结合的固定化物质，通过在所述检测部对所述分析对象成分、所述标记化物质和所述固定化物质的复合物检测所述标记化物质的所述标记，从而所述分析对象成分得以检测，所述方法包含下述A法和B法中的至少一种。A法：在所述检测部，沿着所述试样的移动方向对检测结果作图，由所述图的峰的位置检测前带现象的产生的方法；B法：在所述检测部，改变时间而实施2次以上所述标记的检测，由获得的2个以上检测结果的大小关系检测前带现象的产生的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及前带现象检测方法、分析方法、前带现象检测 装置和分析装置。

背景技术

近年来，在医疗领域的诊断中，用于检测细菌、病毒等病 原体以及用于判断是否怀孕的待测物分析用具已经得到普及。 所述待测物分析用具中，利用免疫色谱法的待测物分析用具由 于能够简便且迅速地检测，因此获得广泛应用。所述利用免疫 色谱法的待测物分析用具的检测原理例如如下所述。即，首先 准备由多孔基材形成且在所述多孔基材的检测部固定有固定化 抗体的待测物分析用具。向其中加入试样(待测物)和用着色 颗粒标记的标记化抗体。当所述试样中存在作为分析对象成分 的抗原时，所述标记化抗体和所述固定化抗体介由所述抗原而 形成复合物，多孔基材上的检测部通过所述着色颗粒而着色。 作为所述标记，除了着色颗粒外，还包括酶和通过酶反应而着 色的底物的组合等。所述检测部通常为线状。确认到着色的情 况下，判定试样中存在分析对象成分从而判定为阳性，若未着 色则判定试样中不存在分析对象成分而判定为阴性。在所述免 疫色谱法中，还进行了如下尝试：通过设定多个所述检测部或 者通过确认阶段性的着色，对试样中的分析对象成分进行半定 量检测(例如参照专利文献1)。

在使用免疫色谱法的分析对象成分的检测中，分析对象成 分的浓度高时所产生的前带现象成为问题。前带现象是指，虽 然实际试样中的分析对象成分为高浓度但表观上被判断为不存 在或低浓度的现象。图5为表示免疫色谱法中抗原浓度和检测部 的吸光度(着色程度)的关系的图。吸光度随着抗原浓度升高 而上升，但当达到一定浓度以上时产生得不到吸光度(不着色) 这样的现象。因此，例如抗原浓度为Z1时检测到吸光度X，但 在高浓度区域的浓度Z2下由于产生前带现象而仅仅检测到相同 程度的吸光度。该现象是起因于当试样中的分析对象成分过量 存在时，所述固定化抗体被与标记化抗体不反应的分析对象成 分包埋，与标记化抗体反应的分析对象成分无法被所述固定化 抗体捕捉到。因此分析中在高浓度区域有时表观上为阴性(假 阴性)，与真正阴性的情况难以区别。在怀疑为前带现象所致的 假阴性时，需要将试样适当稀释重新进行检查。另一方面，为 了检测前带现象的产生，提出了如下尝试：作为待测物分析用 具的固定化抗体，使用亲和性不同的多种抗体(例如参照专利 文献2)、或者在多个检测部中阶段性改变抗体的量(例如参照 专利文献3)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平8-278305号公报

专利文献2：WO2003/014740

专利文献3：日本专利第3644780号公报。

发明内容

发明要解决的问题

然而，所述的方法中必然使待测物分析用具的结构变复杂。 此外，在多个检测部的最下游的区域中结束反应之前无法检知 前带现象的产生，检查效率可能降低。这些问题并非仅仅存在 于利用了与待测物中所含的分析对象成分即抗原进行特异性结 合的抗体的免疫反应的免疫分析方法中，在使用与待测物中所 含的分析对象成分特异性结合的物质(特异性结合物质)的所 有分析方法中均可能发生。

因此本发明的目的在于提供前带现象检测方法、分析方法、 前带现象检测装置和分析装置，所述前带现象检测方法即使使 用现有的待测物分析用具也能够简易地检测前带现象的产生， 并能够高效进行使用免疫色谱法等的检查。

用于解决问题的方案

为了实现上述目的，本发明的前带现象的检测方法，其特 征在于，

使用含有与试样中的分析对象成分特异性结合的物质的待 测物分析用具，

所述待测物分析用具为在多孔基材上从所述试样的移动方 向的上游向下游配置有试样供给部、试剂部和检测部的待测物 分析用具，

所述试剂部含有与所述分析对象成分特异性结合的标记化 物质，

所述检测部含有与所述分析对象成分特异性结合的固定化 物质，

通过在所述检测部对所述分析对象成分、所述标记化物质 和所述固定化物质的复合物检测所述标记化物质的所述标记， 从而所述分析对象成分得以检测，

所述方法包含下述A法和B法中的至少一种，

A法：在所述检测部，沿着所述试样的移动方向对检测结 果作图，由所述图的峰的位置检测前带现象的产生；

B法：在所述检测部，改变时间而实施2次以上所述标记 的检测，由获得的2个以上检测结果的大小关系检测前带现象 的产生。

本发明的分析方法，其特征在于，包含分析工序和前带现 象检测工序，

所述分析工序使用待测物分析用具而实施，

所述待测物分析用具为在多孔基材上从所述试样的移动方 向的上游向下游配置有试样供给部、试剂部和检测部的待测物 分析用具，

所述试剂部含有与所述分析对象成分特异性结合的标记化 物质，

所述检测部含有与所述分析对象成分特异性结合的固定化 物质，通过在所述检测部对所述分析对象成分、所述标记化物 质和所述固定化物质的复合物检测所述标记化物质的所述标 记，从而所述分析对象成分得以检测，

所述前带现象检测工序通过所述本发明的前带现象检测方 法而实施。

本发明的前带现象检测装置，其特征在于，其用于所述本 发明的前带现象检测方法中，

包含用于取得所述检测部的检测结果的取得单元、以及

下述A单元和B单元中的至少一种，

A单元：由沿着所述试样的移动方向作图而得的、所述检 测结果的峰的位置检测前带现象的产生的检测单元，

B单元：改变时间而实施2次以上所述标记的检测，由获 得的2个以上检测结果的大小关系检测前带现象的产生的检测 单元。

本发明的分析装置，其特征在于，其用于所述本发明的分 析方法中，

包含分析单元和前带现象检测单元，

所述分析单元通过在所述待测物分析用具的所述检测部对 所述分析对象成分、所述标记化物质和所述固定化物质的复合 物检测所述标记化物质的所述标记，从而检测所述分析对象成 分，

所述前带现象检测单元为所述本发明的前带现象检测装 置。

发明的效果

根据本发明，即使使用现有的待测物分析用具也能够简易 地检测前带现象的产生，并能够高效进行使用了利用特异性结 合物质进行分析的免疫色谱法等的检查。因此，可以说本发明 在分析、临床领域等中极其有用。

附图说明

图1是实施例1中的检测试样的反射光而得的检测图。图1 的(A)为CRP浓度是60mg/100mL的试样的结果，图1的(B) 为CRP浓度是6.5mg/100mL的试样的结果。

图2是表示实施例1中的第2检测部的下游侧区域的、10 分钟后的反射率(R₁₀)和反射率的差(ΔR_5-10)的关系的图表。

图3的(A)是表示本发明中使用的待测物分析用具的一 个例子的平面图，图3的(B)是表示本发明的前带现象检测 方法的一个例子的流程图。

图4的(A)为表示本发明中使用的待测物分析用具的其 它例子的平面图。图4的(B)是表示图4的(A)所示的待测 物分析用具的I-I方向剖视图。图4的(C)是在壳体中收纳有 所述待测物分析用具的待测物分析芯片的平面图。

图5是用于说明前带现象的说明图。

附图标记说明

1试样供给部

2试剂部

10、20待测物分析用具

11多孔基材

21下基板

22检测用多孔体

23、24样品用多孔体

25标记化抗体用多孔体

26吸收用多孔体

27检测部

30待测物分析芯片

31壳体

L1第1检测部

L2第2检测部

C对照用检测部

具体实施方式

在本发明中，“前带现象”是指，虽然实际试样中的分析对 象成分为高浓度但表观上被判断为不存在或低浓度的现象，包 括抗原抗体反应的前带现象和抗原抗体反应以外的生物化学领 域等所有反应中可看到的前带现象样的现象。

在本发明中，在包含所述B法的前带现象检测方法中，优选 参照预先作成的、将所述2个以上检测结果的大小关系与所述前 带现象的产生的关系进行了关联的判断基准，检测所述前带现 象的产生。

进而，所述检测结果的大小关系优选为2个以上检测结果的 差和2个以上检测结果的比中的至少一种。

在本发明的前带现象检测方法和分析方法中包含所述A法 时、以及在前带现象检测装置和分析装置中包含所述A单元时， 所述图的峰位置位于所述试样的移动方向的下游侧的情况下， 可判断为产生了前带现象。

在本发明的前带现象检测方法、分析方法、前带现象检测 装置和分析装置中通过所述A法无法判断为产生了前带现象的 情况下，进而优选进行所述B法。

在本发明的前带现象检测方法、分析方法、前带现象检测 装置和分析装置中，所述检测部为沿着试样的移动方向而配置 的2个以上检测部，在所述2个以上检测部中，优选试样的移动 方向的上游侧的检测部为用于检测分析对象成分的检测部，下 游侧的检测部为用于检测前带现象的检测部。

在本发明的前带现象检测方法、分析方法、前带现象检测 装置和分析装置中，在用于检测前带现象的检测部中，优选通 过所述试样的移动方向的下游侧的区域的检测结果检测前带现 象。

在本发明的前带现象检测方法、分析方法、前带现象检测 装置和分析装置中，所述检测结果优选为光学信号。

在本发明的分析方法中，当检测到所述前带现象的产生时 优选判定为假阴性。

在本发明的前带现象检测方法、分析方法和分析装置中， 在所述分析对象成分为抗原的情况下，所述标记化物质和所述 固定化物质为标记化抗体和固定化抗体即可。此外，在所述分 析对象成分为抗体的情况下，所述标记化物质和所述固定化物 质为标记化抗体和固定化抗原即可。在分析对象成分为抗体时， 分析对象成分的抗体与固定化抗原连接，标记化抗体的Fab的前 端与分析对象成分的抗体的Fc区域连接。

下面举例对本发明详细进行说明。

在本发明中，作为含有分析对象成分的试样(待测物)，优 选为液状试样，但并不限于此。在本发明中，所述试样为固体 状时，例如可以溶解或分散于缓冲液等液体中制成溶液。所述 缓冲液没有特别限定，可列举出例如Tris缓冲液、磷酸缓冲液、 醋酸缓冲液、硼酸缓冲液等。在本发明中，所述试样可列举出 例如鼻腔抽吸液、鼻腔洗涤液、鼻腔擦拭液、鼻涕、咽部擦拭 液、含漱液、唾液、全血、血清、血浆、便、尿、髓液等生物 体试样，动物和植物等食物、加工食品等食品，环境检查中的 河水等，没有特别限定。在本发明中，分析对象成分为抗原或 抗体(以下有时称为“抗原等”)时，例如可以使用通过提取液 等由所述试样提取抗原或抗体而制备的试样进行分析。所述提 取液没有特别限定，可列举出例如所述缓冲液等。此外，所述 提取液中可以适当添加表面活性剂、稳定化剂、抗菌剂等。

在本发明中，对分析对象成分、应用的试样没有任何限定。 本发明优选用于下述物质的检测中，所述物质例如为血液中的C 反应性蛋白质(CRP)、HbA1c、TSH、FT3、FT4、hCG、HBs 抗原、HBc抗体、HCV抗体、TY抗原、抗链球菌溶血素O(ASO)、 IV型胶原、基质金属蛋白酶(MMP-3)、PIVAK-II、α1微球蛋白、 β1微球蛋白、淀粉样蛋白A(SAA)、弹性蛋白酶1、碱性甲胎蛋 白(BFP)、念珠菌抗原、子宫颈粘液中粒细胞弹性蛋白酶、地 高辛、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、第XIII因子、尿中转铁蛋白、 梅毒、透明质酸、纤维蛋白单体复合物(SFMC)、假性血友病 因子(第VIII因子样抗原)、蛋白S、类风湿因子(RF)、IgD、α1 酸性糖蛋白(α1AG)、α1抗胰蛋白酶(α1AT)、α2巨球蛋白、白 蛋白(Alb)、铜蓝蛋白(Cp)、触珠蛋白(Hp)、前白蛋白、视 黄醇结合蛋白(RBP)、β1C/β1A球蛋白(C3)、β1E球蛋白(C4)、 IgA、IgG、IgM、β脂蛋白(β-LP)、载脂蛋白A-I、载脂蛋白A-II、 载脂蛋白B、载脂蛋白C-II、载脂蛋白C-III、载脂蛋白E、转铁 蛋白(Tf)、尿白蛋白、纤溶酶原(PLG)、脂蛋白(a)(LP(a)) 等。

在本发明中，使用所述标记化抗体作为所述标记化物质时， 所述标记化抗体没有特别限定。所述标记化抗体例如可以是结 合有着色不溶性载体颗粒的抗体，也可以是结合有酶的抗体。

在本发明中，所述着色不溶性载体颗粒没有特别限定，可 列举出例如着色胶乳颗粒、金属胶体颗粒、着色聚甲基丙烯酸 甲酯颗粒、着色聚乳酸颗粒、着色多孔性玻璃颗粒、着色二氧 化硅颗粒、着色琼脂糖颗粒、着色葡聚糖颗粒等。所述着色胶 乳颗粒没有特别限定，例如可列举出蓝色胶乳颗粒、红色胶乳 颗粒等。所述金属胶体颗粒没有特别限定，例如可列举出金胶 体颗粒、铂胶体颗粒等。所述着色不溶性载体颗粒的平均粒径 没有特别限定，所述着色胶乳颗粒的情况下，粒径例如在 0.05μm～5μm的范围，优选0.1μm～1μm的范围，在所述金属胶 体颗粒的情况下，粒径例如在2nm～100nm的范围，优选10nm～ 50nm的范围。

在本发明中，所述酶使用的是例如进行反应而使底物着色 的酶，可列举出例如过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-D-半乳糖苷 酶等。

在本发明中，所述底物只要与所述酶反应并着色即可，没 有特别限定。所述底物可列举出例如2，2′-连氮基-双(3-乙基苯并 噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)、3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)、二 氨基联苯胺(DAB)、5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸(BCIP)、4-甲基伞 形酮基-β-D-半乳糖苷(4MUG)、3-(2’-螺旋金刚烷)-4-甲氧 基-4-(3”-β-D-吡喃半乳糖基)苯基-1，2-二氧杂环丁烷(AMGPD) 等。

在本发明中，所述标记化抗体的抗体只要与作为分析对象 成分的抗原或抗体特异性结合即可，没有特别限定，可列举出 例如针对所述各种抗原等的抗体。所述抗体例如可以是来自于 生物体的抗体，也可以是人工合成的抗体。所述来自于生物体 的抗体可列举出例如免疫球蛋白(Ig)、抗体片段、嵌合抗体等。 所述免疫球蛋白可列举出例如IgG、IgA、IgM、IgD、IgE和IgY 等。所述抗体片段可列举出Fab、Fab’、F(ab’)2等。所述嵌 合抗体可列举出例如人化抗体等。此外，在本发明中，所述抗 体例如可以由来自于小鼠、兔子、山羊、绵羊、鸡等的血清通 过现有公知的方法而制备，或者也可以利用市售的各种抗体， 没有特别限制。进而，在本发明中，所述抗体可以使用多克隆 抗体和单克隆抗体中的任意一种，可根据所述抗原等适当设定。 所述人工合成的抗体可列举出例如亲和体(affibody)等。亲和 体(affibody)是人工抗体的一种，是为了能够与靶标物质特异 性结合而从库中筛选而取得的。Affibody与抗体相比尺寸更小， 此外对热、碱等具有耐性。在本发明中，所述固定化抗体的抗 体是针对所述作为分析对象成分的抗原的特异性抗体，例如可 以是与所述标记化抗体相同的、能够与抗原结合的抗体。所述 固定化抗体的种类、制备方法与例如所述标记化抗体的制备方 法相同。

在本发明中，所述固定化抗原的抗原没有特别限定，为针 对所述作为分析对象成分的抗体的特异性抗原，可列举出例如 上述的各种抗原等。在本发明中，所述固定化抗原的制备方法 可以列举出例如现有公知的方法等，没有特别限制。下面有时 将所述固定化抗体或所述固定化抗原称为“固定化抗体等”。

接下来，列举免疫分析方法作为例子，对本发明的前带现 象检测方法进行说明。但本发明的前带现象检测方法并不限于 下述例子。

在图3的(A)的平面图中，示意出免疫分析方法中使用的 所述待测物分析用具的一个例子。如图所示，该待测物分析用 具10中，在多孔基材11上从所述试样的移动方向(箭头)的上 游向下游具有试样供给部1、试剂部2、第1检测部(L1)、第2 检测部(L2)和对照用检测部(C)。在该待测物分析用具10中 包含所述第1检测部(L1)、所述第2检测部(L2)和所述对照 用检测部(C)的区域为所述检测部。所述试剂部2负载有标记 化抗体(例如蓝色胶乳标记抗CRP抗体)。所述第1检测部(L1) 为用于检测作为分析对象成分的抗原(例如CRP)的检测部， 固定有抗CRP抗体。所述第2检测部(L2)是用于检测前带现象 的检测部，固定有例如抗CRP抗体。所述L1和L2中固定有相同 量的相同抗体。所述对照用检测部(C)为固定有例如抗IgG抗 体的对照检测部。

在本发明中，所述多孔基材11只要具有发挥毛细管作用的 多孔结构即可，没有特别限定。所述多孔基材11可以列举出例 如纤维素膜、醋酸纤维素、硝基纤维素等纤维素衍生物膜，玻 璃滤器、滤纸等。在本发明中，所述多孔基材的形状没有特别 限定，可以列举出例如长方形、圆形等。在本发明中，所述多 孔基材大小没有特别限制，例如可根据分析装置的规格等适当 设定。

本例的待测物分析用具中形成有在所述多孔基材的宽度方 向延伸的三根线状的检测部，但本发明并非仅限于此。所述检 测部的个数可在1～10个的范围内自由设定，此外检测部的形状 除线状以外还可以列举出例如矩形、圆形等。

接下来，基于图3的(A)和(B)，对使用本例的待测物分 析用具的免疫分析方法中的前带现象检测方法的一个例子进行 说明。

(A法的前带现象检测)

首先采集血清(试样)(步骤S1)。接下来，将所述试样滴 加到所述试样供给部1(步骤S2)。通过所述滴加，所述试样 被供给至所述试剂部2，并溶解所述试剂部2所负载的所述标 记化抗体。所述试样中含有作为分析对象成分的抗原时，通过 抗原抗体反应所述标记化抗体和所述抗原结合，形成抗原-标记 化抗体结合体。然后所述抗原-标记化抗体结合体在所述多孔性 基材中展开，与所述检测部的所述固定化抗体结合而形成复合 物。由于形成所述复合物，所述第1检测部(L1)、所述第2 检测部(L2)和所述对照用检测部(C)通过所述标记而显色。

接下来，在时间(t1)检测用于表示所述检测部有无显色 和显色程度的反射光。具体而言，首先准备如下的图，所述图 为在所述检测部沿着所述试样的移动方向(箭头)对所述反射 光的检测结果作图而得的(步骤S3)。接下来，检测位于所述对 照用检测部(C)的坐标附近的谷型峰。在无法检测该谷型峰的 情况下，可认为所述试样和所述标记化抗体未正常移动，因此 无法对其测定。接下来，在所述第1检测部(L1)和所述第2检 测部(L2)的坐标附近检测2个谷型峰。这里，将位于所述2个 谷型峰的边界的山型峰作为所述第1检测部(L1)和所述第2检 测部(L2)的边界。将该边界的坐标作为所述第2检测部(L2) 的上游侧末端的坐标，另一方面将从该边界的坐标起向下游侧 加上规定值的坐标作为所述第2检测部(L2)的下游侧末端的坐 标。然后，用线段连接所述上游侧末端的坐标的检测值的图、 和所述下游侧末端的坐标的检测值的图，将所述线段和所述谷 型图所包围的区域作为所述第2检测部(L2)整体的峰。在本发 明中，由检测部的图的形状(峰位置)检测前带现象的产生。 优选通过所述峰位置位于所述第2检测部(L2)整体的峰的前半 (上游侧)还是位于后半(下游侧)，来判断是否产生前带现象。 具体而言，首先判断所述峰位置是否位于所述第2检测部(L2) 整体的峰的后半(下游侧)(步骤S4)。不位于下游侧的情况(否) 下，如后述的B法的前带现象检测那样来检测前带现象的产生。 位于下游侧的情况(是)下，判断为产生了前带现象(步骤S5)。 例如在所述第2检测部(L2)中，例如进一步将所述峰用通过所 述线段的中点的基准线分成两部分，将所述峰分成“前半”和“后 半”。接着，求出各个范围内的检测值的图的最小值(前半： L2f-min、后半：L2l-min)。然后若L2f-min≥L2l-min则判断为 产生了前带现象。

在上述中，用通过所述线段的中点的基准线将所述峰分成 两部分来判断所述峰位置是否位于所述第2检测部(L2)整体的 峰的后半(下游侧)，但并非限定于此。也可以以例如通过所述 线段的下游侧三分之一的点的线等作为所述基准线，并以该基 准线为边界来定义上游侧和下游侧。可基于例如分析对象成分 的检测特性、检测部的大小、试样供给部和检测部的距离、测 定所需要的时间等决定将基准线设在什么位置。

此外，存在多个检测部时，在对上游侧的检测部和下游侧 的检测部的峰高进行比较、下游侧的检测部峰高更高的情况下， 也可判断为产生了前带现象。

认为前带现象的原因之一在于，试样中抗原以能够与试剂 部所负载的标记化抗体反应的量以上即过量存在，因此标记化 抗体和未反应的抗原流出至检测部，并与固定在检测部的抗体 反应。这种情况下，标记化抗体和未反应的抗原遮挡固定在检 测部的抗体，因此此后流过来的与标记化抗体反应的抗原不能 与固定在检测部的抗体反应，显色变浅。该现象在检测部的上 游侧比下游侧看起来更显著。因此，检测部的后半如果存在峰 则能够判断为产生了前带现象。

上述中例示出在所述第2检测部(L2)检测前带现象的一个 例子，但也可以在所述第1检测部(L1)进行检测。此外，待测 物分析用具具有3个以上检测部的情况下，也可以在其它任意检 测部进行检测。

(B法的前带现象检测)

在所述A法的前带现象检测中判断为未产生前带现象的情 况，接下来，对在经过时间(t1)前的时刻即时间(t2)预先 取得的检测反射光的结果作图，与时间(t1)时同样该反射光 用于表示在所述检测部有无显色和显色程度(步骤S4-1)。然 后，例如由从所述第2检测部(L2)的反射率的时间(t2)通 过时间(t1)的变化量检测前带现象。此时，可以通过所述第 2检测部(L2)整体的峰检测前带现象，但优选例如再用通过 所述线段的中点的坐标将所述峰分成两部分，并通过所述第2 检测部(L2)的下游侧的区域检测前带现象。首先，在时间(t1)， 对所述第2检测部(L2)的下游侧的区域的检测结果，将计数 值换算成来自所述线段的比率(％)，进行累计求出反射率R_t1(％)。同样地，在时间(t2)，检测所述检测部的反射光，求 出反射率R_t2(％)。从检测开始至所述时间(t1)的时间没有 特别限制，例如在5～20分钟的范围内，优选在5～15分钟的 范围内，更优选8～12分钟的范围。所述时间(t1)和所述时 间(t2)的时间差(t1-t2)也没有特别限制，例如在2～8分钟 的范围，优选3～7分钟的范围，更优选4～6分钟的范围。由 获得的2个反射率的差(ΔR_t2-t1(％)＝R_t2-R_t1)检测前带现象 的产生。所述反射光的检测和所述反射率的算出不限于所述时 间(t1)和所述时间(t2)，也可以进行3次以上。此外，也可 以例如每经过一分钟进行所述反射光的检测，使所述时间(t2) 的检测结果为例如所述时间(t2)-1分钟、所述时间(t2)、所 述时间(t2)+1分钟这3个检测结果的平均值。

这里，优选参照预先作成的、将所述反射率的差与前带现 象的产生的关系进行了关联的判断基准来检测所述前带现象的 产生。所述判断基准可以列举出例如对所述反射率的差与所述 前带现象的产生的关系作图而得的图表中的基准线、表示所述 反射率的差与所述前带现象的产生的关系的表等。使用对所述 反射率的差与所述前带现象的产生的关系作图而得的图表中的 基准线的情况下，也可以通过最小二乘法作出边界线并将其用 作基准线。具体而言，首先判断所述反射率的差(ΔR_t2-t1)是否 低于基准线(步骤S4-2)。在低于基准线时(是)判断为产生了 前带现象(步骤S5)。在不低于基准线时(否)判断为未产生前 带现象(步骤S6)。

在本发明中，可以由所述反射率的差和所述反射率的比检 测所述前带现象的产生，或者用所述反射率的比代替所述反射 率的差检测所述前带现象的产生；也可以由所述反射率的差和 比以外的所述反射率的大小关系检测所述前带现象的产生。此 外，在本例中，使用作为光学信号的反射率来检测标记，但也 可以使用透射率、吸光度等。

在所述分析对象成分能够被氧化的情况下，在所述前带现 象的产生的检测中，也可以利用上述那样的标记化抗体的显色 所引起的反射率的大小关系和氧化电流值的大小关系进行检 测，或者利用氧化电流值的大小关系代替上述那样的标记化抗 体的显色所引起的反射率的大小关系进行检测。这种情况下， 所述标记化抗体等使用的是结合有氧化还原酶的抗体或抗原， 并在所述检测部配置电子受体和电极(阴极和阳极)。所述氧化 还原酶只要是能够氧化所述分析对象成分的酶即可。使用这样 的氧化还原酶时，例如能够如下所述地检测前带现象的产生。 即，在所述第2检测部(L2)中，通过所述氧化还原酶的催化反 应，所述分析对象成分被氧化，同时所述电子受体被还原。然 后通过电化学方法将所述被还原的电子受体再次氧化。通过该 再次氧化而得的氧化电流值与所述分析对象成分量是相应的， 因此通过测定所述电流能够间接地对所述分析对象成分进行定 量。所述电极没有特别限定，可以列举出例如金电极、炭电极、 银电极等。另外，在所述待测物分析用具中，所述电极为任选 的构成部件。所述电极例如可以在使用所述待测物分析用具时 配置在所述检测部。

上述中，对在所述A法的前带现象检测中判断为未产生前 带现象时进一步实施所述B法的前带现象检测的方式进行了说 明，在本发明中，也可以在所述A法和所述B法中单独采用所述 A法或单独采用所述B法进行前带现象检测。

接下来，对本发明的分析方法进行说明。如前所述，本发 明的分析方法包含分析工序和前带现象检测工序。所述分析工 序使用待测物分析用具来实施。所述待测物分析用具与所述本 发明的前带现象检测方法中所用相同。所述前带现象检测工序 通过所述本发明的前带现象检测方法来实施。

在本发明的分析方法中，所述前带现象检测工序中检测到 前带现象的产生时，试样中的分析对象成分的分析无法准确判 定的情况判定为假阴性是优选的。通过判定为假阴性，从而与 阴性区分开，并能够进行更确切的分析。此外，由于已经检测 到前带现象的产生，因此不必将试样稀释后再次进行分析。

接下来，对本发明的前带现象检测装置进行说明。如前所 述，本发明的前带现象检测装置，其特征在于，其为用于所述 本发明的前带现象检测方法中的前带现象检测装置，该前带现 象检测装置包含用于取得所述检测部的检测结果的取得单元以 及下述A单元和B单元中的至少一种。这里，A单元为：由沿着 所述试样的移动方向作图而得的、所述检测结果的峰的位置检 测前带现象的产生的检测单元，B单元为：改变时间而实施2次 以上所述标记的检测，由获得的2个以上检测结果的大小关系检 测前带现象的产生的检测单元。

在所述本发明的前带现象检测方法中，在如所述那样检测 反射光的情况下，所述取得单元具有例如光源部和受光部。由 所述光源部在包含所述待测物分析用具10的所述第1检测部 (L1)、所述第2检测部(L2)和所述对照用检测部(C)的多 孔基材上照射照射光，并通过所述受光部检测反射光。所述光 源部由例如发光二极管(LED)、半导体激光二极管(LD)等 构成。所述受光部由例如光电二极管、光电增倍管 (Photomultiplier Tube)、CCD(Charge Coupled Device)图像 传感器等构成。

在所述本发明的前带现象检测方法中，如所述那样检测氧 化电流值的情况下，所述取得单元包括例如电源和电流计。首 先，将所述电极(阴极和阳极)连接到所述电源上，在所述电 极和所述电源之间配置所述电流计。接着，对所述电极施加电 压。接下来，在所述试样到达所述第2检测部(L2)后，检测所 述氧化电流值。最后基于所述氧化电流值对所述分析对象成分 进行定量。

所述取得单元可以是本发明的前带现象检测装置的一部 分，也可以是外部仪器。

所述检测单元例如由中央处理器(CPU)、存储器、输入终 端和输出终端构成。所述输入终端可列举出例如键盘、触摸面 板。所述输出终端可以列举出例如显示器、打印机。另外，所 述检测单元可以全部配置在前带现象检测装置本体中，也可以 全部或部分配置在装置本体外部。例如也可以在个人电脑(PC) 内构成检测单元。另外，所述检测单元中使用的所述各种判断 基准可以预先存储在存储器中并在检测时参照，也可以通过所 述输入终端输入到所述CPU中进行参照。所述前带现象检测结 果通过所述输出终端而输出。

接下来，对本发明的分析装置进行说明。如前所述，本发 明的分析装置，其特征在于，其包含分析单元和前带现象检测 单元，所述分析单元通过在所述待测物分析用具的所述检测部 对所述分析对象成分、所述标记化物质和所述固定化物质的复 合物检测所述标记化物质的所述标记，从而检测所述分析对象 成分，所述前带现象检测单元为所述本发明的前带现象检测装 置。

所述分析单元由中央处理器(CPU)、存储器、输入终端和 输出终端构成。所述输入终端可列举出例如键盘、触摸面板。 所述输出终端可以列举出例如显示器、打印机。另外，所述检 测单元既可以全部配置在分析装置本体中，也可以全部或部分 配置在装置本体外部。例如也可以在个人电脑(PC)内构成分 析单元。所述分析对象成分的检测结果通过所述输出终端而输 出。

以下通过实施例对本发明进行更具体的说明，但本发明并 不受这些实施例限定。

实施例

实施例1

以下记载的是，准备以各种浓度含有CRP的试样，在使用 待测物分析用具的免疫色谱中检测前带现象的产生的具体例子 和制作能够在包含所述B法的前带现象检测中使用的判断基准 的具体例子。

(CRP待测物)

将由多个患者和健康者采集的血清作为试样使用。另外， 对各血清，预先通过胶乳免疫比浊法确定了CRP浓度，基于其 CRP浓度而分类为发生正常的抗原抗体反应的试样和产生前带 现象的试样。具体而言，将CRP浓度0.6mg/100mL、 2.5mg/100mL和6.5mg/100mL的各试样作为发生正常的抗原抗 体反应的试样，将CRP浓度25mg/100mL以上的试样作为产生 前带现象的试样。

(待测物分析用具)

使用商品名“SPOTCHEMi-Line CRP”(爱科来(株)制) 作为CRP测定用的待测物分析用具。该待测物分析用具的概况 如图4所示。图4的(A)为待测物分析用具20的平面图，图 4的(B)为所述图4的(A)的I-I方向剖视图，图4的(C) 是在壳体31中收纳有所述待测物分析用具20的待测物分析芯 片30的平面图。该图中与图3相同的部分带有相同的附图标记。 待测物分析用具20具备：上基板(未图示)、下基板21、检测 用多孔体22、2个样品用多孔体23和24、负载有蓝色胶乳标 记抗CRP抗体的标记化抗体用多孔体25、和用于吸收剩余待 测物的吸收用多孔体26。在下基板21上，在其长度方向的中 央层叠有检测用多孔体22。在检测用多孔体22的一端(在该 图中为左侧)层叠有负载了蓝色胶乳标记抗CRP抗体的标记化 抗体用多孔体25。标记化抗体用多孔体25上层叠有两层的样 品用多孔体23、24。在检测用多孔体22的另一端(在该图中 为右侧)层叠有吸收用多孔体26。检测用多孔体22基于试样 的移动方向而以层叠有样品用多孔体23和24的一侧(在该图 中为左侧)为上游、以层叠有吸收用多孔体26的一侧(在该图 中为右侧)为下游，从上游起具有固定有抗CRP抗体的第1检 测部(L1)和第2检测部(L2)、以及固定有抗IgG抗体的对 照用检测部(C)。将包含第1检测部(L1)和第2检测部(L2) 以及对照用检测部(C)的区域称为检测部27。然后，以覆盖 层叠于下基板21上的各种多孔体的方式配置上基板(未图示)。 另外，上基板在与样品用多孔体24的试样供给部对应的位置具 有贯通孔，此外，露出与第1检测部(L1)、第2检测部(L2) 和对照用检测部(C)对应的部位。从所述贯通孔的中心起至 所述第1检测部(L1)的中央部的距离为30mm、至所述第2 检测部(L2)的中央部的距离为33.5mm、至所述对照用检测 部(C)的中央部的距离为38mm。

(光学信号测定)

在所述待测物分析用具中添加各试样5μL，添加后在1分 钟以内设置于反射光测定装置(商品名SPOTCHEM(注册商标) IL、爱科来(株)制)中，检测用于表示有无显色和显色程度 的反射光。反射光是将设置于装置的时刻设为检测开始时(0 秒)并每经过1分钟进行检测。此外，反射光的检测是在试样 的移动方向中对检测部27进行的。

对所述各种试样中CRP浓度为60mg/100mL的1个试样和 CRP浓度为6.5mg/100mL的1个试样检测从检测开始时起至10分 钟后的反射光而得到的检测图分别如图1的(A)和(B)所示。 图1的(A)为CRP浓度60mg/100mL的试样的结果，图1的(B) 为CRP浓度6.5mg/100mL的试样的结果。两图中，X轴表示所述 待测物分析用具的检测部中的从上游向下游方向的坐标，每个 刻度为约0.167mm。两图中，Y轴表示利用所述反射测定装置测 得的检测值(单位为计数)，值越小则表示显色程度越强，也即 反射率越低。

这里，在图1的(A)的检测图中，图的峰位置位于试样的 移动方向的下游侧，在所述A法的前带现象检测中判断为“产生 了前带现象”。在图1的(B)的检测图中，图的峰位置位于试样 的移动方向的上游侧，在所述A法的前带现象检测中未判断为 “产生了前带现象”。

接下来，由各试样的检测结果算出第2检测部的、从检测开 始起5分钟后和10分钟后的反射率，算出从所述5分钟后的反射 率至10分钟后的反射率的增加程度。具体而言，对各试样，准 备如所述图1的(A)和(B)例示的、表示坐标和检测值的关 系的图，首先检测对照用检测部的坐标附近(Y80～Y110)的 谷型峰(C)。在无法检测该谷型峰的情况下，认为试样和蓝色 胶乳标记抗CRP抗体未正常移动，因此无法进行检测，并从评 价对象中去除。接下来，在第1检测部(L1)和第2检测部(L2) 的坐标附近(Y30～Y80)检测到2个谷型峰。将位于所述2个谷 型峰的边界的山型峰确定为第1检测部(L1)和第2检测部(L2) 的边界。将该边界的坐标作为第2检测部(L2)的上游侧末端的 坐标(U)，另一方面，将从所述边界的坐标起向下游侧加上Y20 的坐标确定为第2检测部(L2)的下游侧末端的坐标(D)。然 后，用线段连接所述上游侧末端的坐标(U)的检测值的图和 所述下游侧末端的坐标(D)的检测值的图，将所述线段和谷 型图所包围的区域作为第2检测部(L2)整体的峰。在本实施例 中，进而确定通过所述线段的中点的坐标(M)，并使用了第2 检测部(L2)的下游侧区域的结果(两图的斜线部)。对该第2 检测部(L2)的下游侧区域的结果，将计数值换算成来自所述 线段的比率(％)，进行累计求出反射率(％)。这样地对各试样 求出第2检测部(L2)的下游侧区域的、5分钟后的反射率(R₅) 和10分钟后的反射率(R₁₀)，进而通过下述式算出5分钟后的反 射率(R₅)和10分钟后的反射率(R₁₀)的差(ΔR_5-10)。

ΔR_5-10(％)＝R₅-R₁₀

这里，“5分钟后的反射率”可以使用由检测开始起5分钟后 的检测值算出的值，也可以使用例如“由4分钟、5分钟、6分钟 的检测值算出的值的平均值”。

这些结果如图2所示。该图为表示10分钟后的反射率(R₁₀) 和反射率的差(ΔR_5-10)的关系的图表。在该图中，X轴为反射 率的差(ΔR_5-10)，Y轴为10分钟后的反射率(R₁₀)，○表示能发 生正常的抗原抗体反应的试样，◆表示可能产生前带现象的试 样。如该图所示，可能产生前带现象的试样(◆)的图标密集 存在于图表的左下部，与此相对，能发生正常的抗原抗体反应 的试样(○)的图标密集存在于图表的右上部。进行了用于分离 两组试样的解析，结果如该图所示，获得了Y＝-4.52x+0.75 的式子。通过将该式作为标准曲线，即使是CRP浓度未知的试 样，也能够由10分钟后的反射率(R₁₀)和反射率的差(ΔR_5-10) 判断有无前带现象的产生。

产业利用可能性

如上所述，根据本发明，即使使用现有的待测物分析用具 也能够简易地检测前带现象的产生，能够高效进行例如使用免 疫色谱法等的检查。本发明的前带现象检测方法、分析方法、 前带现象检测装置和分析装置能够应用于临床检查、生化检查、 医学研究等领域中，其用途没有限定，能够应用于广阔的领域 中。