一种提高动物免疫功能的苷肽注射液

摘要

一种提高动物免疫功能的苷肽注射液，属于生物制药技术领域，提供一种将细胞因子胸腺肽和转移因子合到一起作为复方来使用；其制备工艺是：分别采集新鲜的牛胸腺和猪的脾脏，在－20℃低温下保留，制取时整个工艺采用自然强化冻融，低温离心，超滤浓缩透析精制，滤过除菌，将细胞因子胸腺肽和转移因子的超滤液分别稀释、调pH后按比例混合到一起搅拌，加稀释剂，分装；本发明安全稳定无毒副作用，不仅可预防疾病促进动物生长，而且可避免使用化学药品可能造成的肌体耐药性和肉品中残留，减少对环境的污染和对人类健康构成的威胁；作为疫苗的优良佐剂，可大大提高疫苗对使用对象的免疫效果；具有提高机体的免疫力，抗病毒，促生长，无药物残留，高效无毒免疫活性高的优点。

说明书

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及细胞因子胸腺肽和转移因子的合剂注射液，国际专利分类号：C07K14/435、C07K14/47、C07K1/14。

背景技术

在过去的一些年里，动物疾病的治疗绝大部分是采用抗生素及化学合成类药物，其传染性疾病多采用疫苗进行防治，造成动物对一些药物的抗药性增强，并造成大量药物残留，一些疫苗免疫也造成残留，或因多种原因所致疫苗免疫效果不佳。目前，为提高动物的免疫力，出现了很多生物制剂，例如细胞因子胸腺肽、转移因子等，都是单方使用，但是还没有将细胞因子胸腺肽和转移因子合到一起作为复方来使用。

发明内容

本发明的目的是提供一种将细胞因子胸腺肽和转移因子合到一起作为复方来使用，用以增强动物的免疫力，调节动物抗体的免疫功能，一种提高动物免疫功能的苷肽注射液。

胸腺肽是一族具有调节免疫系统功能的多肽，能诱导和促进T淋巴细胞分化、成熟，并能提高自然杀伤细胞(NK)活力；转移因子是种具有免疫活性的小分子物质，具有多方面的非特异性的免疫功能；用胸腺肽和转移因子制备的本发明是免疫调节剂、增强剂和疫苗佐剂。

本发明的技术方案：将细胞因子胸腺肽和转移因子按照5-50∶5-50的比例混合到一起，制成复方注射液；

本发明的最佳比例是：将细胞因子胸腺肽和转移因子按照1∶1比例混合到一起制成复方注射液；

所述的细胞因子胸腺肽的制备方法：

将牛、或者猪的胸腺冷冻，自然融化，摘除脂肪和结缔组织，用自来水、或蒸馏水漂洗，沥水，称重，用铰肉机铰碎，按其0.3-3.0倍量加入0.2％-0.9％的氯化钠溶液，在胶体磨中匀浆15分钟，在-25℃冻存24小时左右，室温自然融化后在2000转/分下甩干离心5-10分钟，收集甩干液倒入搅拌夹层罐中加热到75℃-85℃30分钟后，用5000转/分温控大容量离心机10-15分钟离心取上清夜，祛除沉淀，上清夜收集到无菌容器中进入装有10KD超滤膜的中空纤维超滤装置超滤，超滤液收集无菌容器内，测每毫升多肽含量；

所述的转移因子的制备方法：

将猪、或牛、或犬的脾脏冷冻，自然融化，摘除脂肪和结缔组织，用自来水、或蒸馏水漂洗，沥水，称重，剪成组织小块，加适量生理盐水，利用捣随机捣碎高速匀浆2次，每次3分钟，加生理盐水适量，在-20℃匀浆冻结和自然融化，反复冻融两次，用5000转/分温控大容量离心机30分钟离心取上清夜，在无菌室内进入装有10KD超滤膜的中空纤维超滤装置超滤，收集超滤液，测每毫升多肽含量；

本发明注射液的配制：

将胸腺肽超滤液用注射用水稀释至1mg/ml-10mg/ml，调PH值6.0-7.5；将转移因子超滤液用生理盐水稀释至1mg/ml-10mg/ml，调PH值6.0-7.5；将两种超滤液按1∶1的比例混合于一个无菌容器内，搅匀，加适量稀释剂，分装于安瓶内，每支5毫升。

本发明的质量标准和检测方法：

本发明含多肽以小牛血清白蛋白计，应为标示量的90％-125％；含核苷酸以D-核糖计，应不低于标示量的80％。

性状：为淡黄色透明液体；

鉴别：1、茚三酮反应  溶液应呈蓝紫色；

2、分光光度法  在251±3nm(猪胸腺、猪脾)或260±3nm(牛胸腺、牛脾)处有最大吸收；

检查：1、PH值应为6.0-7.5；

2、蛋白质磺基水杨酸实验，应不发生泻浊或沉淀；

3、高分子物质  高效液相色谱法  大于10000道尔顿的组分不得超过5％；

4、氨基氮  中位(PH计)容量分析法每支应≥2毫克；

5、活力测定  T细胞活性测定脂E受体法差应≥10％；

6、异常毒性  小鼠静注，腹腔注、皮下注，口服给药，48小时内不应有死亡；

7、过敏实验  豚鼠腹腔注射(3次)后，再静注(2次)，15小时内应不出现过敏反应；

8、细菌内毒素  鲎试验法  每毫升，细菌内毒素的量应小于10EU；

9、无菌检验  生物制品无菌检验规程，应无细菌生长；

10、其他  应符合注射剂项下有关的各规定。

含量测定：

1、多肽(以牛血清白蛋白计)应为20mg/支标示量的90％-125％；

2、核苷酸(以D-核糖计)不低于350mg/支标示量的80％；

本发明的规格为5毫升；多肽20毫克，核糖20毫克；

本发明对猪的最佳使用时机是20日龄最好，50日龄次之(对降低发病率和增重而言)；

本发明最佳使用剂量：幼畜0.25mg/kg.bw，成畜0.125mg/kg.bw；

本发明最佳给药途径：肌注为好；

本发明最佳给药次数：幼畜20日龄首次注射，第一次给药后7、14、21再给药3次；成畜每周注射一次，连注4周。

本发明药理学实验研究，试验组除用药第二周白细胞和淋巴细胞百分率比对照组高，差异显著，其余各项生理、生化指标均与对照组相近，差异不显著；

本发明稳定性试验，加速试验和长期试验结果，有效期可暂定1.5年。

本发明急性、毒性试验  小白鼠、大白鼠试验，大白鼠24小时内最大给药量为日临床给药量的1200倍，小白鼠24小时内最大给药量为日临床给药量的4800倍；

本发明慢性、毒性试验  家兔、猪试验，临床剂量100倍、50倍、10倍给药，观察30日，试验组与对照组生理、生化指标，试验未重，总增重，总进食量，总饲料利用率未见不良影响；病理组织学观察，各脏器和甲状腺、胸腺、肠系膜淋巴结、性腺均未见病理改变；

本发明对猪生产性能影响试验

20日龄仔猪，间隔一周，4次用药，0.25ml/kg.bw。至出栏(150日龄)，比对照组多增重10-15kg；50日龄开始用药，4次用药，至出栏(150日龄)，比对照组多增重10kg；仔猪用药后发病率降低(原发病数减少60％)；受试猪2万余头，经济效益显著。

本发明是一种新型动物免疫增强剂、调节剂，安全稳定无毒副作用，不仅可预防疾病促进动物生长，而且可避免使用化学药品可能造成的肌体耐药性和肉品中残留，减少对环境的污染和对人类健康构成的威胁；作为疫苗的优良佐剂，可大大提高疫苗对使用对象的免疫效果；具有提高机体的免疫力，抗病毒，促生长，无药物残留，高效无毒免疫活性高的优点。

具体实施方式

实施例1：

细胞因子胸腺肽的制备方法：

将牛、或者猪的胸腺冷冻，自然融化，摘除脂肪和结缔组织，用自来水、或蒸馏水漂洗，沥水，称重，用铰肉机铰碎，按其1/2倍量加入0.4％的氯化钠溶液，在胶体磨中匀浆15分钟，在-25℃冻存24小时左右，室温自然融化后在2000转/分下甩干离心5分钟，收集甩干液倒入搅拌夹层罐中加热到80℃30分钟后，用5000转/分温控大容量离心机10分钟离心取上清夜，祛除沉淀，上清夜收集到无菌容器中进入装有10KD超滤膜的中空纤维超滤装置超滤，超滤液收集无菌容器内，测每毫升多肽含量；

转移因子的制备方法：

将猪、或牛、或犬的脾脏冷冻，自然融化，摘除脂肪和结缔组织，用自来水、或蒸馏水漂洗，沥水，称重，剪成组织小块，加适量生理盐水，利用捣随机捣碎高速匀浆2次，每次3分钟，加生理盐水适量，在-20℃匀浆冻结和自然融化，反复冻融两次，用5000转/分温控大容量离心机30分钟离心取上清夜，在无菌室内进入装有10KD超滤膜的中空纤维超滤装置超滤，收集超滤液，测每毫升多肽含量；

本发明注射液的配制：

将胸腺肽超滤液用注射用水稀释至4mg/ml，调PH值7.0；将转移因子超滤液用生理盐水稀释至4mg/ml，调PH值7.0；将两种超滤液按1∶1的比例混合于一个无菌容器内，搅匀，加适量稀释剂，分装于安瓶内，每支5毫升；

每支5毫升本发明注射液中，各有胸腺肽10毫克和转移因子10毫克。

实施例2：

细胞因子胸腺肽的制备方法：

将牛、或者猪的胸腺冷冻，自然融化，摘除脂肪和结缔组织，用自来水、或蒸馏水漂洗，沥水，称重，用铰肉机铰碎，按其1倍量加入0.6％的氯化钠溶液，在胶体磨中匀浆15分钟，在-25℃冻存24小时左右，室温自然融化后在2000转/分下甩干离心10分钟，收集甩干液倒入搅拌夹层罐中加热到85℃30分钟后，用5000转/分温控大容量离心机15分钟离心取上清夜，祛除沉淀，上清夜收集到无菌容器中进入装有10KD超滤膜的中空纤维超滤装置超滤，超滤液收集无菌容器内，测每毫升多肽含量；

其它同实施例1。